实验三 猪血中超氧化物歧化酶(SOD)的分离纯化及活力测定
一、 实验原理
超氧化物歧化酶(SOD)是一种能够专一性清除超氧离子自由基
的金属酶。它是一种酸性蛋白，对热、pH和蛋白酶的水解较一般酶稳定。SOD催化下述反应：
.。机体内过量或不足都会对人体产生危害，SOD对过量的及时清除保证含量的相对平衡。
本实验采用有机溶剂沉淀法以新鲜猪血为材料，从中提取SOD并进行纯化。该实验SOD酶活性采用邻苯三酚自氧化法测定，其酶活性单位定义为：每毫升反应液中，每分钟抑制邻苯三酚自氧化速率达50%酶量定义一个酶单位。
样品中蛋白质含量采用考马斯亮蓝
法测定。考马斯亮蓝在游离状态下呈粉红色，与蛋白质结合后呈蓝色。在一定范围内，溶液在595nm波长下的光密度与蛋白质含量成正比，可用比色法测定，测定范围是1-1000ug。 SOD同工酶鉴定采用不连续聚丙烯酰胺凝胶电泳技术分离鉴定。
二、试剂与材料
[1]试剂：ACD抗凝剂、0.9%
、丙酮、05%乙醇、氯仿、50mmol/L pH8.3磷酸缓冲液、10mmol/LEDTA钠盐溶液、3 mmol/L邻苯三酚钠溶液、考马斯亮蓝标准蛋白质溶液、
[2]器材：分光光度计、试管、刻度吸管、离心机、烧杯。
三、操作步骤
1、SOD提取
[1] 取40ml新鲜猪血，5000r/m离心10min，去上层血浆，取下层红血球粘稠液。加入2倍体积的0.9%Nacl 溶液清洗，5000r/m离心10min，弃上层清液。
[2] 向洗净的红血球中加入适量蒸馏水至15ml，剧烈搅拌30min，使其充分溶血。再向溶血溶液中缓慢加入预冷的0.25倍体积的95%的乙醇溶液和0.15倍体积的氯仿，均浆呈红色，再继续搅拌15min，4000r/m离心10min，去变性蛋白质沉淀物，得上层液，留样1ml。将清液在65-70度恒温水浴中进行热处理，15min后取出迅速冷却至室温，5000r/m离心10min除沉淀，得浅黄色粗酶液，留样1ml。
[3] 向粗酶液中加入等体积的丙酮溶液，冰箱中静置过夜，4000r/m离心10min，弃上清液，得沉淀，加3ml蒸馏水溶解，备用。
2、SOD活力测定
[1] 邻苯三酚自氧化法测定
取4.5ml 50mmol/L pH8.3磷酸缓冲液，4.2ml蒸馏水和1ml 10mmol/L EDTA-Na2溶液，混匀后在25℃水浴中20min，取出后立即加入25℃预热过的邻苯三酚0.3ml，迅速摇匀，倒入1cm的比色皿，用10mmol/LHCl作空白，在325nm波长下每隔30秒测定一次光密度值，整个操作在4min内完成，计算出每分钟A325的增值，此即为邻苯三酚自氧化率。要求自化率在0.070/min左右。
[2]酶活力测定
操作与[1]类似，只是在加入邻苯三酚前需加入适量的SOD留样液，并相应减少蒸馏水的体积。计算加酶后邻苯三酚的自化率。
[3] 酶活力单位计算
其中：A0为邻苯三酚自化率，Am为加酶后邻苯三酚自化率。
[4] 蛋白质含量测定（考马斯亮蓝G-250法）
①标准曲线制作。取6支具塞试管，编号，按下表加入试剂：
表1 考马斯亮蓝标准曲线加样表
盖上塞子，摇匀。在595nm下测定吸光度值，须在1h内完成。以标准白蛋白为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。
②样品中蛋白质含量的测定
将待测溶液SOD溶解，取一支试管，准确加入0.1ml样品提取液，加入0.9ml蒸馏水和5ml考马斯亮蓝G-250，其余操作与标准曲线绘制相同。
③蛋白质含量的测定
根据所得样品提取液的光密度，在标准曲线上查得相应的蛋白质含量，计算其浓度。
[5] 结果处理
利用考马斯亮蓝G-250法测定每毫升酶原液蛋白质毫克数。
四、实验结果
1、邻苯三酚自氧化率
表2 邻苯三酚吸光值随时间的变化
计算得邻苯三酚自氧化率：A0I=0.065/min，A0II=0.066/min；则A0=0.0655/min。
2、酶活力测定
表3 酶活力计算参数表
从上表可知，实验得3个样品Am值为：Am1=0.0525/min；Am2=0.04675/min；Am3=0.033/min。
根据公式计算得3个样品的单位活性依次为：79.4 (U/ml)、114.5(U/ml)、99.2(U/ml)；总活性依次为：1389.3(U)、1545.8(U)、297.7(U)。
3、蛋白质含量测定
表4 标准蛋白含量与吸光值记录表
图1 标准蛋白含量-吸光值标准曲线
实验测得三个样品的蛋白质吸光值分别为：0.029、0.036、0.042。根据标准曲线y = 0.0074x计算得蛋白质含量分别为：0.0392ug、0.0487ug、0.0568mg/ml。
4、结果汇总
表5 试验结果汇总表
五、分析与讨论
[1] 考马斯亮蓝G-250标准曲线的相关系数R2不够高，这和实验操作、仪器的精度等有关。不过曲线足以用来计算蛋白质的含量。
[2] 本实验SOD酶原液用蒸馏水定容至15ml，而不是10ml，这点和其他实验组有所不同，不过其他操作和结果计算都一样。
[3] 经过3个步骤的提纯，酶液总体积应该越来越小、溶液蛋白质含量越来越高、酶活性越来越高、纯化倍数越来越高，但是本实验丙酮沉淀后酶活性降低，纯化倍数也较第二步低，猜测是操作过程引起SOD酶的活性丧失了部分。
[4] 本实验使用的度量仪器精密度不高，且未设置重复，误差较大。
第二篇：瓜果实中超氧化物歧化酶方法的比较
第２０卷
２００８经
第４期
８月
Ｊｏｕｒｎａｌ
ｏｆ
黑龙江八一农垦大学学报Ｈｅｉｌｏｎｇｊｉａｎｇ
Ａｕｇｕｓｔ
Ｆｉｒｓｔｌａｎｄ
Ｒｅｃｌａｍａｔｉｏｎ
Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ
２０（４）：６１～６３
Ａｕｇ．２００８
文章编号：１００２—２０９０（２００８）０４－００６１－－０３
几种提取黄瓜果实中超氧化物歧化酶方法的比较
王桂华１。唐彦君２，李辉１
（１．黑龙江八一农垦大学生命科学技术学院，大庆１６３３１９；２．黑龙江八一农垦大学食品学院）
摘要：为了探索简便的黄瓜果实中超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）的提取方法，本研究采用机械法、化学法和微波加热法对黄瓜果实中ＳＯＤ进行提取，并对黄瓜ＳＯＤ酶的活性和含量进行测定。试验结果表明：微波加热法与化学法、机械提取法相比，处理时间短、步骤简单、酶的比活性高。
关键词：黄瓜；超氧化物歧化酶；微波加热法；提取中图分类号：０６５８
文献标识码：Ａ
ＣｏｍｐａｒｉｓｏｎｏｆＥｘｔｒａｃｔｉｎｇＳＯＤｆｒｏｍＣｕｃｕｍｂｅｒ
ＷａｎｇＧｕｉｈｕ＃，ＴａｎｇＹａａｊｉＪｌｎ２，Ｌｉ
（１．ＣｏＵｅｇｅ
ｏｆＬｉｆｅＳｃｉｅｎｃｅａｎｄ
２．Ｃｏｌｌｅｇｅｏｆ
Ｈｕｉｌ
ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，ＨｅｉｌｏｎｇｊｉａｎｇＡｕｇｕｓｔＦｉｍｔＬａｎｄＲｅｃｌａｍａｔｉｏｎＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙＤａｑｉｎｇ１６３３１９；
Ｆｏｏｄｓｔｕｆｆ，ＨｅｉｌｏｎｇｊｉａｎｇＡｕｇｕｓｔ
Ｆｉｒｓｔ
ＬａｎｄＲｅｃｌａｍａｔｉｏｎＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｉｎｏｒｄｅｒ
ｗｅｒｅ
ｔｏ
ｔａｋｅｒｅｓｅａｌ＇ｃｈ
ｏｎ
ｔｈｅｓｉｍｐｌｅｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｏｆＳＯＤ，ｍｅｃｈａｎｉｃａｌ，ｃｈｅｍｉｃａｌｅｘｔｒａｃｔｉｏｎａｎｄｍｉｃｒｏｗａｖｅｈｅａｔｉｎｇｍｅｔｈｏｄ
ｏｆＳＤＳ
ｗｅｒｅ
ｃａｒｒｉｅｄ
ｏｕｔ．Ｔｈｅａｃｔｉｖｉｔｙａｎｄ
ｃｏｎｔｅｎｔ
ｄｅｔｅｃｔｅｄ．Ｔｈｅｒｅｓｕｌｔｓｈｏｗｅｄｔｈａｔｍｉｃｒｏｗａｖｅｈｅａｔｉｎｇｍｅｔｈｏｄ
ｃｈｅｍｉｃａｌ
ＷａＳａ
ｔｉｍｅ－ｓｈｏｒｔ，
ｓｉｍｐｌｅｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇ
ａｎｄｈｉｓｈｅｎｚｙｍｅａｃｔｉｖｉｔｙ
ｃｏｎｔｒａｓｔｔｏ
ｍｅｔｈｏｄ
ａｎｄｍｅｃｈａｎｉｃａｌｍｅｔｈｏｄ．
Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：Ｃｕｃｕｍｂｅｒ；，ｓｕｐｅｍｘｉｄｅｄｉｓｍｕｔａｓｅ；ｍｉｃｒｏｗａｖｅｈｅａｔｉｎｇ
ｍｅｔｈｏｄ；ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ
超氧化物歧化酶（ｓｕｐｅｒｏｘｉｄｅｄｉｓｍｕｔａｓｅ，简称ＳＯＤ）是一类广泛存在于动物、植物、微生物中的金属酶，是生物体防御氧化损伤的一种十分重要的生物酶，能催化超氧化物自由基的歧化反应，具有清除超氧化物阴离子（０２－）的能力【１１。因此，ＳＯＤ能治疗由自由基引发的疾病，能延缓衰老和提高免疫能力。当黄瓜果实处于受冷害的临界低温时，ＳＯＤ活性会受低温影响而降低，而适宜的低温（１３℃）可诱导ＳＯＤ活性明显升高，抗冷能力增强１２１。因此，根据黄瓜果实中ＳＯＤ的理化性质，试验采用几种不同的方法提取黄瓜果实中超氧化物歧化酶，以选择出一种快速、高效、经济、简单的提取方法。
丙酮、邻苯三酚。
１．２试验方法
机械法：用组织捣碎机将黄瓜打碎，以１：１．５按质量／体积（黄瓜细胞／缓冲溶液）比加入磷酸缓冲溶液（ｐＨ７．８）提取５ｈ，用４层纱布过滤，收集上清液，得ＳＯＤ提取液。
异丙醇法：根据文献［３］方法，用组织捣碎机将
黄瓜打碎，按每克黄瓜细胞加入９ｍＬ异丙醇，浸泡
１２０
ｍｉｎ离心除去溶剂，加入３倍体积５０
ｍｍｏｌ?Ｌｄ
磷酸钾缓冲液（ｐＨ７．０），搅拌１２０ｍｉｎ，离心，收集上
清液，得ＳＯＤ提取液。
微波加热法：根据文献［４３方法，用组织捣碎机将黄瓜打碎，取一定质量的黄瓜细胞液分别微波加热５、ｌＯ、１５、２０、２５ｓ后，加入等体积去离子水，混匀。再缓慢的加入０．２５倍体积的９５％乙醇（４℃）和０．１５
１材料与方法
１．１材料与试剂
新鲜黄瓜；磷酸缓冲溶液、异丙醇、乙醇、氯仿、
收稿日期：２００８－０７－－０８
作者简介：王桂华（１９７５一），女，讲师，东北农业大学硕士研究生毕业，现主要从事基因工程（制药）的教学与科研工作。
６２
黑龙江八一农垦大学学报第２０卷
倍体积氯仿（４℃）搅拌均匀，静置２０ｒａｉｎ，收集上清液，得ＳＯＤ提取液。
１．３
ＳＯＤ的纯化及制取
根据文献［５］方法，取机械法和异丙醇法提取的
ＳＯＤ，加热６０℃，１０ｍｉｎ，离心去沉渣，收集上清液；用
磷酸调整溶液ｐＨ至５．０，加入丙酮的量为１．０％，１３
℃、１２０００ｒ?ｍｉｎ一离心，去除大部分杂蛋白，用磷酸调
溶液ｐＨ至４．０，在所得上清液中加入１．２％一１．４％体积分数的丙酮，使ＳＯＤ全部沉淀下来；将沉淀溶解在少量的缓冲液中，在１３℃环境中透析１０
ｈ。
１．４相关参数的测定
ＳＯＤ活性的测定：ＳＯＤ酶活用邻苯三酚自氧法测定。ＳＯＤ酶活性单位定义为：以ｌｍＬ反应液中，每分钟抑制邻苯三酚自氧化速率５０％时的酶量为一个活性单位。用ｓＰｓｓ１２．０软件对数据进行统计分析，并用ＬＳＤ法进行多重比较。
ＳＯＤ含量测定：采用紫外分光光度法测定蛋白质浓度。用ＳＰＳＳ１２．０软件对数据进行统计分析，并用ＬＳＤ法进行多重比较。
２结果与分析
２．１不同方法提取的ＳＯＤ活性
龚围强ｔ４１认为在非冷害低温下（１３℃），黄瓜果实中ＳＯＤ活性随着时间的延长逐渐升高，在第４ｄ后
ＳＯＤ活性升高最为显著。因此按其方法采用改进的
邻苯三酚自氧化法对所提取的酶液进行活性测定，结果见表ｌ。
表１不同处理提取ＳＯＤ活性值的多重比较
Ｔａｂｌｅ１
ＭｕｌｔｉｐｌｅＣｏｍｐａｒｉｓｏｎｓ
ｏｎ
ｄｉｆｆｒｅｎｔ
ｔｒｅａｔｍｅｎｔｏｆＳＯＤａｃｔｉｖｉｔｙｖａｌｕｅ
由试验结果得出，微波加热法提取ＳＯＤ比其他两种方法提取ＳＯＤ的活性要高，尤其是微波加热法处理５８极显著地优于其它方法。微波加热法处理的
时间对ＳＯＤ活性有一定的影响，增加微波加热法处理的时间会增大细胞破碎的程度，随着细胞破碎的程度可加大对细胞内含物的释放。可是随着处理时间的增长，会导致部分酶由于温度的升高而失活。
２．２不同方法提取的ＳＯＤ含量
为了进一步考察提取ＳＯＤ的最优方法，将不同
方法提取的ＳＯＤ含量进行测定。结果见表２。
表２不同处理提取ＳＯＤ含量的多重比较
Ｔａｂｌｅ２
ＭｕｌｔｉｐｌｅＣｏｍｐａｒｉｓｏｎｓｏｎ
ｄｉｆｆｒｅｎｔ
ｔｒｅａｔｍｅｎｔｏｆＳＯＤ
ｃｏｎｔｅｎｔ
结果表明：机械法和微波加热法（２５ｓ）提取的ＳＯＤ含量显著的高于异丙醇法和微波加热法（１０
ｓ，５
ｓ）。
由于机械法破碎细胞完全，细胞内含物释放的完全，因此提取的ＳＯＤ含量最高。
３讨论与结论
在提取过程中，机械法与异丙醇法使用的试剂多而且操作过程比较复杂，提取时间长。微波具有穿
透力强、选择性高、加热效率高等特点，因此，微波加
热可导致细胞胞内的极性物质，尤其是水分子吸收微波能，产生大量的热能，使胞内的温度迅速上升，液态水汽化产生的压力将细胞膜和细胞壁冲破，形成孔洞，从而释放胞内产物１６１。增加微波加热法处理的时间会增大细胞破碎的程度，随着细胞破碎的程度可加大对细胞内含物的释放，然而随着处理时间
的增长，会导致部分酶由于温度的升高而失活。
本文通过机械法、化学法和微波加热法对黄瓜果实中ＳＯＤ进行提取，并对黄瓜ＳＯＤ酶的活性和含
第４期王桂华等：几种提取黄瓜果实中超氧化物歧化酶方法的比较６３量进行测定。研究表明：微波加热法与化学法、机械
法提取相比，处理时间短、步骤简单、酶的比活性高，
是一种快速、高效、经济、简单的提取ＳＯＤ的方法。
参考文献：
［１］Ｆｒｉｄｏｖｉｅｈ１．Ｓｕｐｅｒｏｘｉｄｅｒａｄｉｃａｌａｌｌｅｎｄｏｇｅｎｏｕｓｔｏｘｉｃａｎｔ．Ａｎｎ．
Ｒｅｖ［Ｊ］－ＰｈａｒｍａｃｏｌＴｏｘｉｃｏｌ１９８３，２３：２３９—２５７．
［２］龚围强，于梁．低温对黄瓜果实超氧化物歧化酶ｆＳＯＤ）的
影响［Ｊ］．园艺学报，１９９６，２３（１）：９７—９８．
［３］吴思方，方尚玲，童振球．蹿酒废酵母提取ＳＯＤ研究［Ｊ］．食品科学，２００４，２１（３）：２２—２４．［４］修志龙，王威，陆美卿．微波加热破膜提取猪血超氧化物歧化酶的研究［Ｊ］．中国生化药物杂志，２００１，２２（３）：１３９－１４１．［５］金绍黑．植物超氧化物歧化酶的提取、修饰制备工艺及其应用研究［Ｊ］．成都航空职业技术学院学报，２００５，（１）：４｝—４７．［６］刘国诠．生物工程下游技术［Ｍ］．北京：化学工业出版社，２００３．
几种提取黄瓜果实中超氧化物歧化酶方法的比较
作者：
作者单位：
刊名：
英文刊名：
年，卷(期)：
被引用次数：王桂华， 唐彦君， 李辉， Wang Guihua， Tang Yanjun， Li Hui王桂华,李辉,Wang Guihua,Li Hui(黑龙江八一农垦大学生命科学技术学院,大庆,163319)， 唐彦君,Tang Yanjun(黑龙江八一农垦大学食品学院)黑龙江八一农垦大学学报JOURNAL OF HEILONGJIANG AUGUST FIRST LAND RECLAMATION UNIVERSITY2008，20(4)0次
参考文献(6条)
1.Fridovich I Superoxide radical an endogenous toxicant 1983
2.龚国强.于梁 低温对黄瓜果实超氧化物歧化酶(SOD)的影响 1996(01)
3.吴思方.方尚玲.童振球 啤酒废酵母提取SOD研究[期刊论文]-食品科学 2004(03)
4.修志龙.王威.陆美卿 微波加热破膜提取猪血超氧化物歧化酶的研究[期刊论文]-中国生化药物杂志 2001(03)
5.金绍黑 植物超氧化物歧化酶的提取、修饰制备工艺及其应用研究[期刊论文]-成都航空职业技术学院学报2005(01)
6.刘国诠 生物工程下游技术 2003
相似文献(10条)
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4.学位论文 赵艳 黄瓜植株机械损伤效应及防御酶应答的研究 2009
本试验在对黄瓜植株子叶期（子叶充分展开）和真叶期（第1真叶横宽5cm）进行不同程度的机械损伤处理下，研究机械损伤对黄瓜植株生长的直观损伤效应和黄瓜叶片内的几种关键防御酶活性的变化，探索出黄瓜植株损伤后体内生理生化变化的应答机制，为机械伤害刺激信号转导作用的机理提供新的认识，为黄瓜病害机械损伤诱导抗性及黄瓜生长过程中的整枝，打权等损伤处理提供重要的理论依据和实践价值。研究结果表明：
1.子时期机械损伤和真叶期机械损伤均对黄瓜植株的生长有抑制作用。子叶期机械损伤处理后第15d起黄瓜植株的最大叶叶面积和叶数与对照达到了显著、极显著差异，损伤后第20d起黄瓜植株的茎粗与对照达到了显著、极显著差异。真叶期机械损伤处理后第15d起黄瓜植株的株高、茎粗、最大叶叶面积和叶数与对照达到了显著、极显著差异。
2.子叶期或真叶期机械损伤后，损伤叶内的几丁质酶、β-1，3—葡聚糖酶、苯丙氨酸解氨酶（PAL）和超氧化物歧化酶（SOD）活性均高于对照。子叶期机械损伤后，损伤叶内的羧甲基纤维素酶和β—葡萄糖苷酶活性均低于对照，各处理的防御酶活性在损伤后36h-168h内出现峰值。机械损伤第1真叶48h后，损伤叶内的羧甲基纤维素酶和β—葡萄糖苷酶活性均低于对照，各处理的防御酶活性在损伤后6h-144h内出现峰值。
3.机械损伤黄瓜子叶或者第1真叶后，均能显著诱导上部叶片内各种防御酶的活性。几丁质酶、β-1，3—葡聚糖酶、苯丙氨酸解氨酶（PAL）和超氧化物歧化酶（SOD）的活性较对照有不同程度的提高。在第1真叶损伤后，羧甲基纤维素酶和β—葡萄糖苷酶活性较对照有不同程度的降低，子叶期损伤后，羧甲基纤维素酶和β—葡萄糖苷酶活性在第4，5真叶中显著低于对照。
由此可见，机械损伤可以显著诱导黄瓜体内各种防御酶的活性，表明机械损伤可以有效的诱导黄瓜体内伤害防御反应的产生，并做出相应的损伤修复反应，因而使黄瓜植株产生较强的抗性。机械损伤后，上部叶片内也有防御酶的产生和积累，表明机械损伤可以诱导黄瓜体内的伤信号转导，激活受伤诱导基因的表达，从而使植株产生各种防御酶来抵御外来伤害。
5.期刊论文 逯明辉.宋慧.李晓明.陈劲枫.LU Ming-hui.SONG Hui.LI Xiao-ming.CHEN Jin-feng 冷害过程中黄瓜
叶片SOD、CAT和POD活性的变化 -西北植物学报2005,25(8)
实验选用3个耐冷力不同的黄瓜品种研究其叶片超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)和过氧化物酶(POD)等3种抗氧化酶活性在冷害过程中的变化.结果表明:低温胁迫期间的CAT和POD活性与黄瓜叶片的耐冷力表现一致,SOD活性则与其耐冷力表现相反.低温胁迫后,3个品种的所有3种抗氧化酶活性均降低,叶片表现出明显的冷害症状,但耐冷力较高的津优10号仍然具有相对较高的CAT活性.恢复期的SOD活性无显著性变化;耐冷力最弱的津研4号和耐冷力中等的津绿3号的CAT活性上升而津优10号的CAT活性降低;3个品种的POD活性都增高,但津研4号的上升幅度明显高于其它2个品种,可能与POD能催化活性氧(ROS)产生有关.
6.学位论文 冯建鹏 硅对黄瓜幼苗镉、锰毒害的缓解效应研究 2009
镉、锰在我国很多地方土壤中含量超标，导致作物生长受抑，影响产量。黄瓜(Cucumis sativus L.)是我国主要的蔬菜作物之一，在设施和露地中均广泛种植，具有喜肥又不耐肥的特点，容易发生各种生理障碍，也易发生镉、锰毒害。因此探讨黄瓜镉、锰毒害及其解毒途径，对指导黄瓜生产和提高我国园艺设施的利用效率具有重要的理论和实践意义。本试验采用水培的方法，研究了镉毒害对黄瓜幼苗的伤害机理，并探讨了硅对黄瓜镉、锰毒害的缓解效应。取得了以下主要研究结果：
1.随着Cd处理浓度的增加，黄瓜植株生长受到明显抑制，叶绿素a、叶绿素b、类萝卜素含量显著降低；Cd处理使净光合速率(Pn)和气孔导度(Gs)下降，而细胞间CO2升高。高浓度Cd处理显著降低了黄瓜的原初光能转换效率(Fv/Fm)。10和100μmol·L-1的Cd处理使抗氧化酶过氧化氢酶(CAT、)愈创木酚过氧化物酶(POD)、超氧化物歧化酶(SOD)、抗坏血酸过氧化物酶(APX)活性均有不同程度的提高，而当Cd浓度达到200μmol·L-1，抗氧化酶的活性均受到显著抑制。随着Cd处理浓度的增加，硝酸还原酶(NR)、谷氨酰氨合成酶(GS)、谷氨酸合成酶(GOGAT)活性均受到明显抑制。
2.加硅处理明显缓解了镉对黄瓜植株生长的抑制，这首先归因于硅降低了镉在黄瓜植株中的积累；其次，硅处理使镉毒害下黄瓜的叶绿素含量、光合电子传递效率和光合能力显著提高，超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)愈创木酚过氧化物酶(POD)、抗坏血酸过氧化物酶(APX)等抗氧化酶活性也显著增加，降低了膜脂过氧化程度，保护了叶绿体、线粒体的完整结构；另外，加硅处理提高了镉毒害下黄瓜硝酸还原酶(NR)、谷氨酰氨合成酶(GS)、谷氨酸合成酶(GOGAT)活性促进了氮代谢的进行。
3.加硅处理显著提高了锰毒害下黄瓜叶绿体中SOD、CAT、POD、APX、DHAR和GR的活性，降低了叶绿体中H2O2的积累，从而保证了叶绿体正常功能的发挥。并且加硅处理显著缓解了锰诱导的黄瓜叶片失绿症状，使叶绿素含量显著提高，从而缓解了高锰对黄瓜叶片PSII反应中心的活性(Fv/Fm)和PSII电子传递效率的抑制，促进了光合作用的进行和黄瓜植株的生长。
7.期刊论文 何长征.艾辛.匡逢春 不同性型黄瓜植株保护酶类活性的差异 -湖南农业大学学报(自然科学版)2001,27(4)
为探讨黄瓜植株性别表现与保护酶活性的关系,以雌性系和雌雄同株系黄瓜为试材,测定二片真叶期植株茎尖和真叶的过氧化物酶、过氧化氢酶和超氧化物歧化酶的活性.结果发现:黄瓜植株茎尖中保护酶活性与性型关系密切,过氧化物酶活性在雌性系中较高,而在雌雄同株系中则较低.过氧化氢酶和超氧化物歧化酶的活性在雌性系中较低,在雌雄同株系中较高;真叶中保护酶类活性性型间不表现出差异或者差异不显著.
8.期刊论文 李新.司龙亭.LI Xin.SI Long-ting 黄瓜不同品种苗期感染枯萎病菌后几种酶活性的变化 -华北农学报2007,22(z1)
分析了黄瓜不同抗性品种受枯萎病菌侵染后,叶片组织内过氧化物酶(POD)、多酚氧化酶(PPO)、苯丙氨酸解氨酶(PAL)和超氧化物歧化酶(SOD)活性的变化.结果表明,无论是抗病品种还是感病品种,在接种枯萎病菌后,随着接种天数的增加,4种酶活性与对照相比均有一定程度的升高,但抗病品种的酶活性增加幅度高于感病品种.说明这4种酶在黄瓜对枯萎病的抗性机制中起了重要作用.
9.学位论文 樊怀福 外源NO缓解黄瓜幼苗盐胁迫伤害的生理基础研究 2007
盐害是目前影响植物生产的主要限制因素之一。据报道，在世界范围内，近2.3×10<'9>hm<'2>灌溉土地的1/3受到盐分胁迫，温室土壤的次生盐渍化也已成为国内外设施栽培中普遍存在的难题。NO是生物体中一种重要的氧化还原信号分子和毒性分子，也是一种活性氮(RNs)。研究表明，NO广泛存在于植物组织中，并参与植物呼吸作用、光形态建成、种子萌发、衰老、对胁迫的响应、细胞程序性死亡(PCD)以及抗病防御反应等过程，NO与植物抗逆性特别是与植物盐胁迫间的联系是近年来的研究热点。但到目前为止，人们对NO在NaCl胁迫生理过程中的作用机理还了解不多，特别在园艺作物上的研究报道甚少。
本文以黄瓜品种‘津春2号’为材料，采用水培法，通过在营养液中添加外源NO供体硝普钠(sNP)，结合添加NC)信号传递途径关键酶鸟苷酸环化酶(cGc)抑制剂亚甲基蓝(MB-1)，研究了外源NO与Nacl胁迫下黄瓜幼苗植株生长、光合特性、氮代谢、抗氧化系统间的关系及Ca<'2+>在NO信号传导中的地位和作用，探讨了NaCl胁迫下外源NO在黄瓜幼苗植株中的生理调节功能。主要研究结果如下：
1．10～400μmol·L<'-1>NO供体SNP均能缓解50mmol·L<'-1>NaCl胁迫对黄瓜植株造成的伤害，100μmol·L<'-1>SNP缓解效果最好，显著提高了幼苗的生长量；NO的信号传递途径关键酶cGC抑制剂MB-1抑制了NO的缓解效应。
2．盐胁迫下添加外源NO提高了幼苗光合色素含量、光合速率、气孔导度、蒸腾速率，增加了渗透调节物质可溶性糖和可溶性蛋白的含量，而胞间二氧化碳浓度下降，添加NO的同时添加NO信号传递途径关键酶cGC抑制剂MB-1抑制了NO对NaCl胁迫下幼苗植株的这些作用。
3．50mmol·L<'-1>NaCl胁迫下，添加100μmol·L<'-1>SNP明显降低了幼苗植株叶片和根系中腐胺(Putrescine，Put)、亚精胺
(Spermidine，spd)、多胺总量及多胺氧化酶(Polyamine oxidase，PAO)活性，调节了3类游离态多胺(腐胺、精胺和亚精胺)在植株内的比例，提高了精胺(Spermine，Spm)的含量和(Spd+Spm)/Put比值。
4．添加100μmol·L>'-1>SNP能显著提高NaCl胁迫下黄瓜植株叶片和根系吡咯啉-5-羧酸合成酶(P5CS)活性，而脯氨酸脱氢酶(ProDH)活性显著下降，脯氨酸(Pro)的含量显著增加，增强了黄瓜幼苗对盐胁迫的渗透调节能力。
5．100μmol·L<'-1>SNP能明显提高NaCl胁迫下黄瓜幼苗叶片和根系内NR的活性，缓解由于盐胁迫造成的NO<,3><'->-N吸收量的下降，减少了NH<,4><'+>-N在植株体内的过量积累。
6．外源NO提高了Nacl胁迫下幼苗抗氧化保护酶超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化物酶(POD)、过氧化氢酶(CAT)和抗坏血酸过氧化物酶(APX)的活性；抗氧化物质抗坏血酸(ASA)和还原型谷胱甘肽(GSH)含量增加，抗氧化物质代谢相关的谷胱甘肽还原酶(GR)、脱氢抗坏血酸还原酶(DHAR)活性提高，MB-1抑制了NO对抗氧化物质代谢的调节作用。同时，外源NO降低了NaCl胁迫下幼苗丙二醛(MDA)和过氧化氢(H<,2>O<,2>)的含量、超氧阴离子(O<,2><'->的产生速率及质膜透性。
7．Ca<'2+>可显著缓解NaCl胁迫对黄瓜幼苗生长的抑制，叶片和根系超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化物酶(POD)、过氧化氢酶(CAT)活性较单独NaCl胁迫处理显著提高，丙二醛(MDA)和过氧化氢(H<,2>O<,2>)的含量、超氧阴离子(O<,2><'->)产生速率明显下降；添加NO的同时添加ca<'2+>通道抑制剂La<'3+>抑制了NO的调节作用。表明Ca<'2+>对NO诱导的NaCl胁迫下黄瓜幼苗植株活性氧清除能力的提高起关键性的辅助作用，NO的作用可能依赖于胞浆Ca<'2+>。
10.期刊论文 余纪柱.毛光志.李建吾.安红伟.张丽.金海军.Yu Jizhu.Mao Guangzhi.Li Jianwu.An Hongwei.Zhang Li.JIN Haijun 低温弱光逆境下黄瓜苗期SOD活性及MDA含量的遗传分析 -华中农业大学学报2004,""(z2) 以6份黄瓜自交系为试材,采用完全双列杂交设计轮配法(不含反交)配制15个组合,研究了黄瓜苗期超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量的遗传规律.结果表明,SOD活性的遗传存在上位性效应;MDA含量的遗传以加性效应为主,表现为部分显性,显性基因表现为增效;MDA含量的广义遗传力为66.78%,狭义遗传力为56.27%.
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