0;相对保留值：某组分2的调整保留值与组分1的调整保留值之比。1死体积：不被保留的组分通过色谱柱所消耗的流动相的体积。保留时间：从进样开始到色谱峰最大值出现时所需要的时间。发色团：能导致化合物在紫外及可见光区产生吸收的基团。1;最大吸收波长：吸收峰所对应的波长称为最大吸收波长。2;肩峰：在一个峰旁边产生的曲折，称为肩峰。3、末端吸收：在指有机化合物分子中含有能产生∏～∏*或n～∏*跃迁的，能在紫外可见光范围内产生吸收的光团。④助色团（带杂原子的饱和基团）：是含有非键电子对的杂原子饱和色团，当他们与生色团或饱和烃相连时，能使生色团或饱和烃的吸收峰向长波方向移动，并使吸收增加，如－oH,－NH2等。5 红移：指由于化合物的结构改变，如加入助色团，发生共轭作用以及改变溶剂等，使吸收峰向长波方向移动。6蓝移：指当化合物的结构改变或受溶剂影响，使吸收峰向短波方向移动。7 、增色效应：由于化合物结构改变或其他原因，使吸收强度增强，称为增色效应。8、减色效应：由于化合物的结构改变或其他原因，使吸收强度减弱，称减色效应。9、程序升温：指在一个分析周期内柱温随时间由低温向高温作线性或非线性变化，以达到用最短时间获得最佳分离的目的。10 、振动驰豫：激发态分子可能将过剩的振动能量以热的形式传递给周围的分子而自身Sr的
高振动能层失活到该电子能级的最低振动能层上。11 、镜像规则：通常荧光发射光谱与它的吸收光谱成镜像对称系。12 、内转换：相同多重态间的一种无辐射跃迁过程。13 、外转换：激发分子通过与溶剂或溶质间的相互作用和能量转换而使荧光或磷光减弱甚至消失的过程。14 、系间跨越：不同多重态间的一种无辐射跃迁过程，它涉及受电子自旋状态的改变。15 、荧光发射：分子处于单重激发态的最低振动能层时，发射光子返回基态，这一过程称为荧光跃迁。16 、磷光发射：当受激分子降至S1的最低振动能级后，如果经系间跨越至T1态，并经T1态的最低振动能级回S0态的各振动能级，此过程辐射的光称为磷光发射。17 、荧光猝灭：荧光物质分子与溶剂分子或其他溶质分子的相互作用引起荧光强度降低的现象称为荧光猝灭。18 、碰撞猝灭：处于激发单重态的荧光分子与猝灭剂分子碰撞，使前者以无辐射跃迁方式回到基态，产生猝灭作用。19 、静态猝灭：由于部分荧光分子与猝灭剂分子生成非荧光的配合物。20 、自猝灭：单重激发态分子在发射荧光之前和未激发的荧光物质分子碰撞引起自猝灭。21 、锐线光源：发射线半宽度小于吸收线半宽度的光源，且发射线中心频率与吸收线中心频率一致的光源，如空心阴极灯。22 、分配系数：在一定温度和压力下，组分在固定相和流动相之间的分配达到平衡时的浓度之比值。23 、分
配比：又称容量因子，它指在一定温度和压力下，组分在两相间分配达平衡时，分配在固定相和流动相的质量比。24 、分离度R：相邻两组分色谱峰保留值之差与两组分色谱峰底宽总和一半的比值。25 、参比电极：与被测物质无关，电位已知且稳定，提供测量电位参考的电极。26 、梯度淋洗：对组成复杂，含有多种不同极性组分样品进行液相色谱分析时，通过逐渐调节溶剂非极性和极性组分的比例而改变混合溶剂的极性，根据相似相溶的原则，逐渐将不同极性的组分依次洗出色谱柱而获得良好分离的方法技术。27 、多普勒变宽：由于原子在空间作无规则热运动所导致的，又称热变宽。28 、发射光谱：原来处于激发态的粒子回到低能级或基态时，往往会发生电磁辐射。29 、吸收光谱：物质对辐射选择性吸收而得到的原子或分子光谱。30 、梯度洗脱：在分离过程中使流动相的组成随时间的改变而改变。【优点：通过连续改变色谱柱中流动相的极性，离子强度或PH，使被测组分的相对保留值得以改变，提高分离效率。】31 、仪器分析：是通过测量表征物质的某些物理或物理化学性质的参数来确定其化学组成或结构的分析方法。32、紫外可见光吸收光谱：利用某些物质的分子在200～800nm光谱区的辐射来进行分析测量的方法。33;荧光量子产率：荧光物质发射光子数与吸收激发光子数之比。34指示电极：在电位分析中，电极电
位随被测电活物质活度变化的电极。35，生色团（－C＝C－,C＝O,－N＝N－）：分子中能吸收紫外或可见光的结构单元.36，选择因子：在定性分析中，通常固定一个色谱峰作为标准，然后再求其它峰对这个峰的相对保留值。37，峰值吸收：原子吸收线中心频率或波长处所对应的吸收系数。38，背景吸收：原子化器中连续的分子吸收，固体颗粒散射等干扰。39，检测限：以特定的分析方法，一适当的置信水平被检出最低浓度或最小量。40，死时间：不同固定相吸附或溶解的物质进入色谱柱时，从进样到出现峰极大值所需的时间.41，正相色谱：流动相极性小雨固定相极性，为正相色谱，适用于急性化合物的分离，极性小的先流出。42：反向色谱：流动相的极性大于固定相的极性，适用于非极性化合物的分离，极性大的限流出。
1 、紫外可见光分光光度计装置图及各部件作用。答：光源→单色器→吸收池 →检测器→信号指示系统【光源：为光度测定提供足够强度稳定的入射光。单色器：将复合光分解成为单色光，使产生光谱纯度高的波长且波长在紫外可见光区域内任意可调。吸收池：用于盛放分析试样（石英池适用于可见光区和紫外光区，玻璃吸收池适用于可见光区）。检测器：利用光电效应将透过吸收池的光信号变成可测的电信号。信号指示系统：光电管或光电倍增管输出电讯号较弱，
需经讯号处理器放大，由显示器把检测结果显示出来。】2 、荧光光谱仪构造以及与紫外可见光光度计相比，有什么不同？答：光源→单色器→吸收池→单色器→检测器→信号显示系统。光源：前者的激发光强度比后者吸收测量中的光源强度大。单色器：前者有两个单色器，分别为激发单色器和发射单色器，后者只有一个。检测器：荧光强度很弱，检测器需有较高的灵敏度。试样池，荧光分析中要求用石英材料，由于荧光强度与透射光强度相比小得多，在测量荧光时必须严格消除透过光的影响，因此，测量中是在与入射光和透射光垂直的方向来测。3 ，原子吸收光谱仪组成及其作用？答：光源→原子化器→单色器→检测器→信号显示系统;光源：提供待测元素的特征光谱，获得较高的灵敏度和准确度。原子化器：将试样中离子转变为原子蒸气。单色器：可测元素的共振吸收曲线与临近谱线分开。检测器：使光信号转变为电信号，以便读出数据。信号显示系统：将讯号经处理器放大，把检测结果显示出来。4 、火焰原子吸收光谱分析中，火焰的类型有哪三种，分别适合哪些元素的测定？答：①化学计量火焰（中性火焰，温度高，稳定，干扰小，背景低。燃气与助燃器之比与化学计量关系相近，适用于大多数元素）②富燃火焰（燃气大于化学计量，具有还原性，温度低干扰多，背景高，适用于易形成难离解氧化物
的元素）③贫燃火焰（燃气小于化学计量，具有氧化性，温度高，适用于易解离，电离的元素）5;石墨炉原子吸收光谱中，石墨炉升温程序包括哪几步，作用分别是什么？答：①干燥：去除溶剂，防止样品溅射。②灰化：使基体和有机物尽量挥发出去。③原子化：待测物化合物分解为基态原子。④净化：样品测定完成，高温去残渣，净化石墨管。6，原子吸收光谱法的干扰有哪些？分别是如何产生的？怎样消除？答：①物理干扰。产生：在试样转移，气溶胶形成，试样热解，灰化和被测元素原子化等过程中，由于试样的物理特性变化而引起原子吸收信号下降的效益。消除：配制与待测液有近似组成的标准溶液，标准加入法，稀释。②化学干扰。产生：由于被测元素原子与共存组分化学反应生成稳定化合物，影响被测元素原子化。消除：加入释放剂，加保护剂，饱和剂，加电离缓冲剂。③电离干扰。产生：高温条件下，原子会电离，使基态原子数减少，吸光度值下降，消除：加入过量消消电离剂。④光谱干扰。产生：吸收线重叠。消除：另选分析线。⑤背景干扰。产生：分子吸收和光散射。消除：背景校正。7，气相色谱定量的方法有几种？各有哪些优缺点？答：a，归一化法：简便准确，即使进样不准确，对结果也无影响，操作条件的变动对结果影响很小。缺点：试样中组分必须全部出峰。b，内标法：定量准确，
进样量和操作条件不要求严格控制，不要求试样中组分全部出峰。缺点：操作麻烦，每次分析都要称取试样和内标物质量，不适用于快速控制分析。c，外表法：优点：计算和操作都简便，不必用校正因子。缺点：要求操作条件稳定，进样量重复性好，否则对分析结果影响很大。8，与气相色谱法相比，高效液相色谱法有何特点？答：①气相色谱法分析对象只限于分析气体和沸点较低的化合物，它们仅占有机物总量的百分之二十，对于百分之八十的高沸点热稳定性差，摩尔质量大的物质，主要采用高效液相色谱法。②气相色谱采用的流动相是惰性气体，它对组分没有亲和力，即不产生相互作用力，仅起运载作用。而高效液相色谱法流动相可选不同极性的液体，选择余地大，对组分可产生一定亲和力，并参与固定相对组分作用的选择竞争，因此流动相对分离器很大作用。为选择最佳分离条件提供了方便。③气相色谱法一般在较高温度下进行，而高效液相色谱法可在低温下进行。9;原子吸收光谱法常用的原子化方法有哪些？各自的特点如何？答：a，火焰原子化法：原理——由化学火焰的燃烧热提供能量，使被测元素原子化。特点：火焰稳定，重现性好，精密度高，应用范围广，但原子化效率低。b，非火焰原子化法。分为两类：石墨炉原子化器和石英管原子化器。石墨炉原理：大电流通过石墨管产生高热高温，使试样原子
化。特点：原子化效率高，绝对灵敏度高，稳定高。但精密度差，测定速度慢，操作不简便，装置复杂。石英管原理：将气态分析物引入石英管内，在较低温度下实现原子化。特点：一般不受试样中存在的基体干扰，进样效率高，选择性好。10，在电位法中，总离子强度调节缓冲剂的作用？答：a，维持溶液中的离子强度足够大且为恒定值。b，维持溶液的ph值为给定值。c，消除干扰离子干扰。d，溶液接电位稳定。11，气相色谱法中选择固定液的要求是什么？答：a，选择性好b，低蒸气压，热稳定好，化学稳定性好。c，有一定溶解度。d，凝固点低，粘度适当。12，原子吸收光谱法操作条件如何选择？答：a，分析线的选择：选择元素的共振线。b，狭缝宽度：不引起吸光度减小的最大狭缝宽度为应选择的合适狭缝宽度。c，灯电流：保证稳定和有适合的光强输出的情况下，尽量选用较低的工作电流。d，原子化条件：影响原子化效率的主要因素，影响测定的灵敏度。e，选择合适的进样量。13;气相色谱检测器主要有哪几种？各自工作原理及如何根据样品选择？答：a，热导检测器（TCD）浓度型，原理：根据物质具有不同的热导系数原理制成。样品选择：几乎对所有物质都有响应，通用性好，如酒中水含量检测。b，氢火焰离子化检测器（FID）原理：利用含碳有机物在氢火焰中燃烧产生离子，在外加的电场作用下，使离子形成电
子流，根据离子流产生的电信号强度，检测被色谱柱分离的组分。样品选择：大多数含碳有机化合物，对无机物，水，永久性气体基本无影响。c，电子捕获检测器（ECD）浓度型，原理：是一种放射性离子化检测器。样品选择：对有电负性物质的检测有很高灵敏度，特别是检测农药残余。d，火焰光度检测器（FPD）原理：根据硫磷在富氢火焰中燃烧生成化学发光物质，并能发射出特征波长的光，记录特征光谱，检测硫与磷。样品选择：对含硫磷化合物具有高灵敏度。14;气相色谱仪由哪几部分组成？各自功能及要求如何？答：a，气路系统【是一个载气连续运行的密闭管路系统，通过该系统可获得纯净，流速稳定的载气】b，进样系统【包括进样器和气化室两部分，气化室的作用是将液体试样瞬间气化的装置】c，分离系统【由色谱柱组成，是色谱仪的核心部件，作用是分离样品】d;温控系统【温度是色谱分离条件的重要选择参数，前三者都需要控制温度】e，检测系统【被色谱柱分离后的组分依次进入检测器，按其浓度或质量随时间的变化转变成电信号，经放大后记录和显示，给出色谱图】15在电分析中，对参比电极通常有哪些要求？答：a，电极反应可逆，符合能斯特方程。b，电势不随时间变化。c，微小电流流过时，能迅速恢复原状。d，温度影响小，虽无完全符合的，但一些可以基本满足要求。对于参比电极应满足三
个条件：可逆性，重现性和稳定性。衡量可逆性的尺度是交换电流，如果电极有较大的交换电流，则使用时如有微量电流通过，其电极电位保持恒定，所以参比电极都是难以极化的。重现性是指当温度或浓度改变时，电极仍能按能斯特公式响应而无滞后现象，以及用标准方法制备的电极具有相似的电位值。稳定性是指在测量时随稳定等环境因素影响较小。16，气相色谱固定相的选择依据是什么？如何更具样品性质选择固定相？答：气象色谱固定相由载体和固定液构成。A固定液要求1，热稳定好，蒸汽压低，流失少。2，化学稳定性好，不与其他物质反应。3试样的各组分由合适的溶解能力。4，对各组分具有良好的选择性。B，载体的要求：1，有足够大的表面积和良好的孔穴结构。2，形状规则，具有一定的机械强度。
1，按分离机理分类，色谱法可分为吸收色谱，分配色谱，凝胶色谱，离子交换色谱，亲和色谱。按两相状态分类：气相色谱，液相色谱，超临届流体色谱。按固定相分类：柱色谱和平面色谱。2;荧光化合物都有两个特征光谱：激发光谱和发射光谱。3，溶剂效应：紫外可见光光谱分析中，由于溶剂极性的不同会引起某些化合物吸收光谱的红移或蓝移的现象。4，19xx年物理学家提出，用峰值吸收来代替积分吸收，从而解决了原子吸收的困难。5，荧光素和酚酞的结构十分相似，但荧光素在溶液中有很强的荧光，
而酚酞没有，原因是荧光分子具有刚性平面结构。7，气相色谱中，控制温度主要是对色谱柱炉，气化室和检测器三处的温度控制。8，对固定相的选择并不是没有规律可循，一般可按相似相溶原则来选择。9，高效液相色谱仪由高压输液系统，进样系统，分离系统和检测系统四部分。10，仪器分析所涉及的定量分析中常用的校正方法：标准曲线法，内标法和标准加入法。11，色谱定量分析中常用的方法有外标法，内标法，归一化法。12，多普勒变宽的影响因素：波长，温度，相对原子质量。13，自吸变宽：由自吸现象而引起的现象（同种原子）14，理论塔板数反映了柱效能。15，气相色谱分析中，采用程序升温的目的是改善分离度。16，压力变宽：分为洛伦兹变宽和共振变宽。17，原子化器分为火焰原子化器和电热原子化器。18，影响紫外可见吸收光谱的因素有立体化学效应，共轭效应，溶剂的影响【选择溶剂时应考虑：a，溶剂在使用波段有无吸收b，物质的溶解度c，是否影响光谱的精细结构d，是否改变吸收峰的波长】，ph的影响。19，紫外光源：氢灯，氘灯。可见光源：卤钨灯和钨丝灯。20、石英池适用于可见光区和紫外光区，玻璃吸收池只适用于可见光区。（荧光）21，吸光系数的影响因素吸光物质的性质，温度，溶液性质，入射光波长。22，荧光强度的影响因素：随温度升高荧光物质溶液的荧光量子产率及
荧光强度将降低。极性增强，荧光效率增加，粘度增加，荧光效率增加。介质酸度的影响。23，提高气相色谱柱效的方法：a，采用合适的载气，控制载气流速于最佳流速，b，减小固定相颗粒直径。c，色谱柱填充均匀。d，减小固定相液膜厚度。24，提高液相色谱柱效的方法：a，采用合适的流动相，控制相对较低的流动相流速。b，减小固定相颗粒直径。c，色谱柱填充均匀。d，减小固定相液膜厚度。25，浓度型检测器有热导检测器和电子检测器，质量型检测器有火焰离子化检测器和火焰光度检测器。26，固定相与组分分子间的作用力有定向力，诱导力，色散力，氢键力。27，气路系统常用载气：氦气，氢气，氮气，氩气。当载气流速小于最佳流速时，为提高柱效应选氩气。28，影响谱线变宽的因素：自然变宽，多普勒变宽，压力变宽，自吸变宽。29，用气相色谱法定性的依据是保留时间。用气相色谱法定量的依据是色谱峰面积。30，气相色谱的分离原理是利用不同组分在两相间具有不同的分离度。
第二篇：药物分析知识点总结
国家药品标准是《中国药典》（缩写Ch.P）和局颁标准。
药品质量标准：是药品现代化生产和质量管理的重要组成部分，是药品生产、经营、使用和行政、技术监督管理各部门应共同遵循的法定技术依据。
药典内容分：凡例、正文、附录、索引。
药品质量管理规范（5个G）《药品非临床研究质量管理规定GLP》《药品生产质量管理规范GMP》《药品经营质量管理规范GSP》《药品临床试验质量管理规范GCP》《中药材生产质量管理规范GAP》。
标准品：用于生物检定、抗生素或生化药品中含量或效价测定的标准物质，按效价单位计，以国际标准品进行标定。
对照品除另有规定外，均按干燥品（或无水物质）进行计算后使用。
药品检验工作的基本程序一般为取样、鉴别、检查、含量测定、写出检验报告。 杂质两个来源：一是由生产过程中引入，二是贮藏过程中引入。
杂质按照来源分：一般杂质和特殊杂质；按毒性分：毒性杂质和信号杂质；按理化性质分：有机杂质、无机杂质和残留杂质。
杂质限量：药物中含杂质的最大允许量。
杂质限量%=杂质最大允许量/供试品量*100%
杂质限量%=标准溶液的浓度*标准溶液的体积/供试品量*100%即L=CV/S*100%
1.氯化物检查，在硝酸酸性条件下与硝酸银反应，生成氯化银胶体微粒而显白色浑浊，与一定量的标准氯化钠溶液在相同条件下产生的氯化银浑浊程度比较，浊度不得更大。加硝酸目的：避免弱酸银盐如碳酸银、磷酸银及氧化银沉淀的干扰，且可加速氯化银沉淀的生产并产生较好的乳浊，酸度以50ml供试溶液中含稀硝酸10ml为宜。
2.硫酸盐检查，在稀盐酸酸性条件下与氯化钡反应，与一定量标准硫酸钾溶液在相同条件下产生的硫酸钡浑浊程度比较。
3.铁盐检查，硫氰酸盐法，铁盐在盐酸酸性与硫氰酸盐作用生产红色可溶性硫氰酸铁配离子
4.重金属检查，硫代乙酰胺法适用于溶于水、稀酸和乙醇的药物；炽灼后的硫代乙酰胺法适用于含芳环、杂环以及难溶于水、稀酸及乙醇的有机药物；硫化钠法适用于溶于碱性水溶液而难溶于稀酸或在稀酸中即生成沉淀的药物；微孔滤膜法适用于重金属限量低的药物。 常用热分析法有：热重分析、差热分析和差示扫描热分析。
中国药典规定残留溶剂检查方法为GC（气相色谱法）
特殊杂质检查一薄层色谱法1.杂质对照品法 适用于已知杂质并能制备得到杂质对照品2供试品溶液自身稀释对照法 适用杂质接受不确定或无杂质对照品
二高效液相色谱法1.内标法加校正因子测定法 适用于有对照品并能够测定杂质校正因子2.外标法测定法 适用于有对照品且进样量能够精确控制3.加校正因子的主成分自身对照测定法 适用不用杂质对照品4.不加校正因子的主成分自身对照测定法 适用没有杂质对照品5.面积归一化法 适用粗略测量供试品中杂质含量。
比旋度反映药物纯度，限定杂质含量。
不经有机破坏的分析：直接测定法、经水解测定法、经还原分解测定法。
经有机破坏分析：湿法破坏、干法破坏。
湿法破坏适用于含氮有机合成药物分析前处理，在生物制品中用于氮、磷、硫柳汞即氯化钠测定法的前处理—凯氏定氮法。
干法破坏分1.高温炽灼法2.氧瓶燃烧法，含F药物选用水做吸收液，用银量法测含CL用水—氢氧化钠做吸收液，用银量法测含Br用水—氢氧化钠做吸收液，测定含碘可用水—氢氧化钠—二氧化硫做吸收液，含硫浓过氧化氢与水混合液做吸收液。
容量分析应用于化学原料药的含量测定。
滴定度：每1ml规定浓度的滴定液多相当的被测药物的质量，mg，T(mg/ml)=m×a/b×M，m为滴定液的摩尔浓度（mol/L）a为被测药物的摩尔数，b为滴定剂的摩尔数M为被测药物的毫摩尔质量（mg）。
片剂的分析：
1.容量分析法
标示量%=V*T*F*D*平均片重/（W*标示量）*100% F=实际摩尔浓度/规定摩尔浓度
2.分光光度法
A=ECL 标示量%=（A/EL）*（1/1000）*D*平均片重/（W*标示量）*100%
3.高效液相色谱法
标示量%=A样*C对*D*平均片重/（A对*W*标示量）*100%
注射剂的分析：标示量%=V*T*F*D/（Vs*标示量）*100%
分光光度法：1.百分吸光系数法 标示量%=A*D/(Vs*E*100*标示量)*100%
2.对照品比较法 标示量%=A样*C对*D/（A对*Vs*标示量）*100%
色谱分析之高效液相色谱法，常用色谱柱填充剂有硅胶和十八烷基烷键键合硅胶，除另有规定外柱温为室温，检测器为紫外检测器，检测器不允许使用含不挥发盐组分的流动相，以十八烷基硅烷键合硅胶为固定相，常用甲醇-水，间或加有乙腈、缓冲液、反离子物质等为流动相。
色谱系统适应性试验通常包括理论板数、分离度（R＞1.5）、重复性（5次）、拖尾因子（0.95-1.05之间）四项指标。
药品验证分析内容八条：准确度、精密度、专属性、检测限、定量限、线性、范围、耐用性。 准确度：用该方法测定的结果与真实值或参考值接近的程度，一般用回收率%表示。
精密度：在规定测试条件下，同一个均匀供试品，经多次取样测定所得结果之间的接近程度。包括重复性、中间精密度、重现性。
生物样品包括各种体液和组织，血样包括血浆、血清和全血，将血液置含抗凝剂的试管中，以2500~3000r/min离心5分钟时血浆与血细胞分离，短期保存可4℃冷藏，长期保存需-20℃或-80℃下冷冻贮藏。唾液以3000r/min离心10分钟，在4℃一下保存。采集的尿是自然排尿，包括随时尿、晨尿、白天尿、夜间尿和时间尿五种。
去除蛋白质常用方法：1.加入与水混溶的有机溶剂（常用水溶性溶剂：乙腈、甲醇、丙酮、四氢呋喃等，比例1:1-3高速10000r/min离心1-2分钟可沉淀）2.加入中性盐（常用中性盐：饱和硫酸铵、硫酸钠、镁盐、磷酸盐、枸橼酸盐等，比例1:2,同上高速离心）3.加入强酸（PH低于蛋白质等电点，常用强酸：10%三氯醋酸、65%高氯酸、5%偏磷酸等，比例1:0.6同上）
4.加入含锌盐及铜盐的沉淀剂（PH高于等电点，常用：CuSO4-NaWO4、ZnSO4-NaOH等，比例1:2同上）5.酶解法。
液固粹取法LSE:一种柱色谱分离方法，将具有吸附、分配及离子交换性质的、表面积大的担体作为粹取剂填入小柱，以溶剂淋洗后，将生物样品通过，使其药物或内源性干扰物保留在担体上，用适当溶剂洗去干扰物后，再用适当溶剂将药物洗脱下来。
填充柱分两类：1亲水性硅藻土2疏水性活性炭、聚苯乙烯或C18化学键合硅胶。
粹取5步骤：(1)用有机溶剂如甲醇，预先湿润微型柱，使增加填料与待测物相互作用的表面积，并可除去可能干扰的填料残留物(2)用水或合适的缓冲液冲洗，除去残余的甲醇(3)进样，通过微型柱，废液弃去(4)用水或合适的缓冲液冲洗，选择性地除去将会干扰后面色谱分析的内源性杂质(5)用合适的溶剂如甲醇、乙腈等洗脱样品，收集，洗脱液用于后面的分析测定或进一步研究。
【巴比妥类药物基本结构】分两部分，一母核巴比妥酸的环状丙二酰脲结构，此结构是巴比妥类药物的共同部分，决定巴比妥类药物共性;二取代基部分。微溶或极微溶水易溶于乙醇等有机溶剂，含1，3-二酰亚胺基团显弱酸性，能发生酮式-烯醇式互变异构，在水中发生二级电离。含酰亚胺结构，与碱液共沸水解放出氨气使红石蕊变蓝。与重金属离子反应：1>与银盐反应银量法：在碳酸钠碱性溶液中，生成钠盐溶解，再与硝酸银溶液反应，先生成可溶性一银盐，加入过量硝酸银则生成难溶性二银盐白色沉淀。2>与铜盐反应：与铜吡啶试液反应形成稳定配位化合物，巴比妥类药物紫色沉淀，含硫巴比妥类药物绿色。3>与钴盐反应4>与香草醛反应生成棕红色物质
司可巴比妥专属实验：与碘反应显棕黄色5分内消失，溴量法司可巴比妥与溴仅应使其褪色。巴比妥类与高锰酸钾反应在碱性中紫色还原为棕色二氧化锰。苯巴比妥专属鉴别反应：硝化反应、硫酸-亚硝酸钠反应、甲醛-硫酸反应。硫代巴比妥与铅白色沉淀。【巴比妥含量测定】
1.银量法原理，先形成可溶性一银盐，过量滴加硝酸银形成难溶性二银盐；注意事项一，无水碳酸钠溶液要临用新配，二硝酸银滴定应新配制，三银电极在临用前需用硝酸浸洗。 芳酸鉴别：水杨酸及盐在中性或弱酸性与三氯化铁缶成紫色配合物（反应适宜PH为4~6）（五种直接用FeCl3检测：双水杨酯、水杨酸、对乙酰氨基酚、二氟尼柳、对氨基水杨酸钠；两种间接：阿司匹林、贝诺酯）。苯甲酸盐中性或碱性与三氯化铁毛成碱式苯甲酸铁盐的赭色沉淀【重氮化-偶合反应】具潜在芳伯胺基加酸水解产生游离芳伯胺基结构，在酸性与亚硝酸重氮化反应（四种直接反应：对氨基水杨酸钠、盐酸普鲁卡因、苯佐卡因、盐酸普鲁卡因胺；三种间接：对乙氨基酚、醋氨苯砜、贝诺酯）。阿司匹林与碳酸钠加热水解，再加过量稀硫酸酸化生成白色水杨酸沉淀并有醋酸臭气。阿司匹林特殊杂质检查：溶液澄清度、水杨酸（主要检查杂质）；对氨基水杨酸钠毛要检查杂质是间氨基酚。
【芳胺类】（苯佐卡因、普鲁卡因、丁卡因等）具有对氨基苯甲酸酯的母体。【鉴别反应】重氮化偶合反应：分子结构具芳伯氨基或潜在芳伯氨基药物都可发生，生成的重氮盐可与碱性萘酚偶合成有色偶氮染料，苯佐卡因、盐酸普鲁卡因、盐酸氯普卡因、盐酸：普鲁卡因胺在盐酸条件下可直接与亚硝酸钠重氮反应；对乙酰氨基酚、醋氨苯砜在盐酸或硫酸中加热水解后才可与亚硝酸钠重氮反应；丁卡因不具芳伯氨基，无重氮反应，伹在酸性下与亚硝钠反应生成乳白色沉淀。对乙酰氨基酚与三氯化铁反应显蓝紫色。盐酸利多卡因在NaCO3中与CuSO4反应生成蓝紫色配合物，溶入三氯甲烷显黄色；苯佐卡因、盐酸普鲁卡因、盐酸氯普卡因、盐酸丁卡因无此反应。盐酸利多卡因在酸性下与氯化钴生成亮绿色钴盐沉淀【盐酸普鲁卡因鉴别】溶解后加氢氧化钠生成白色沉淀（普鲁卡因）加热变为油状物，继续加热产生蒸气使湿红石蕊变蓝。盐酸普鲁胺加过氧化氢再加三氯化铁显紫红色随后变棕。苯佐卡因加氢氧化钠加碘生成黄色沉淀放碘仿臭气【对乙酰氨基酚特殊杂质】检查对氨基酚，盐酸普鲁卡因注射液中检查对氨基苯甲酸。
【芳胺类含量测定】亚硝酸钠滴定法、非水溶液滴定法、分光光度法、高效液相色谱法。 含量测定之【亚硝酸钠滴定法原理】芳伯氨基或水解后生成放伯氨基的药物在酸性溶液中与亚硝酸钠发生重氮化反应，生产重氮盐，用永停滴定法指示终点，主要条件：1.加入适量溴化钾加快反应速度2.溴化钾与盐酸作用产生溴化氢与亚硝酸钠反应生成NOBr（目的）3.加过量盐酸加速反应（加入过量盐酸有利于：重氮化反应速度加快、重氮盐在酸性稳定、防止生成偶氮氨基化合物影响测定）可在室温（10℃-30℃）下进行，其中15℃下结果较准确。 指示终点方法：电位法、永停滴定法、外指示剂法、内指示剂法。中国药典芳胺类药物亚硝酸钠滴定法采用永停滴定法指示终点。
【芳胺类苯乙胺类鉴别试验】三氯化铁、甲醛-硫酸、氧化、亚硝基铁氰化钠（脂肪族伯胺专属反应）。特殊杂质检查：肾上腺素、盐酸异丙肾上腺素、重酒石酸去甲肾上腺素、盐酸去氧肾上腺素、盐酸甲氧明检查酮体。
【杂环吡啶类药物弱碱性】尼可刹米分子除吡啶环上N原子外，吡啶环β位被酰基取代，遇碱水解后释放碱性二乙胺【还原性】异烟肼分子中吡啶环γ位被酰肼取代，可被氧化也可与含羰基的缩合【杂环吡啶类鉴别试验】一、吡啶环开环反应适用于吡啶环的β或γ被羧基衍生物取代的尼可刹米和异烟肼1.戊稀二醛反应（与苯胺缩合黄色至黄棕色，与异烟肼需显用高锰酸钾或溴水氧化为异烟酸再反应）2.二硝基氯苯反应（无水条件下与2,4-二硝基氯苯）。
二、异烟肼与氨制硝酸银反应产生银镜，异烟肼的酰肼基与芳醛缩合成腙有固定熔点可鉴定。
三、尼可刹米与硫酸铜及硫氰酸铵生成草绿色配合物沉淀，异烟肼、尼可刹米与氯化汞生成白色沉淀。四、尼可刹米与氢氧化钠加热有二乙胺臭味逸出，是湿红石蕊变蓝。异烟肼检查游离肼（在供试品主斑点前方与硫酸肼斑点不得显黄色斑点）尼可刹米检查N-乙基烟酰胺
【杂环喹啉碱性】季铵碱＞脂肪胺＞芳胺、N-芳杂环＞酰胺。硫酸奎宁为左旋体，硫酸奎尼丁为右旋体，两者在稀硫酸中显蓝色荧光【绿奎宁反应】奎宁和奎尼丁经氯水氧化氯化再氨水处理成绿色二醌基亚胺铵盐，显翠绿色【Vitaili反应】杂环托烷类生物碱鉴别显深紫色
【吩噻类】专属与钯离子配合显红色，其氧化产物砜和亚砜无此反应。苯并二氮杂卓类在硫酸下显不同荧光：地西泮为黄绿色，氯氮卓为黄色。
【杂环含量测定之非水溶液滴定法】非水溶剂四种（酸性溶剂、碱性、两性、惰性如甲苯三氯甲烷丙酮）当杂环类药物pKb为8~10时适用冰醋酸为溶剂，碱性更弱pKb为10~12时逘用冰醋酸与醋酐混合液，pKb>12用醋酐。消除氢卤酸干扰是加入过量醋酸汞冰醋酸溶液，使生成在醋酸中难解离的卤化汞，再用高氯酸滴定。硫酸盐类在冰醋酸中只能滴定至硫酸氢盐可用高氯酸直接滴定。非水溶液滴定法常用电位滴定法（用玻璃电极为指示电极，饱和甘汞电极）和指示剂法（结晶紫酸式为黄色，碱式为紫色）。消除干扰：改用中性溶剂、电位法指示终点、加抗坏血酸。硝酸盐用电位法指示终点。磷酸与有机酸在冰醋酸中可直接滴定。 杂环含量测定之氧伦还原滴定法：铈量法、溴酸钾法、碘量法、溴量法。铈量法（二氢吡啶类、吩噻嗪类）硫酸铈滴定先失去一电子形成红色自由基，达终点吩噻嗪失两电子红色消褪。溴酸钾法专属异烟肼【杂环含量测定之分光光度法】钯离子比色法-吩噻嗪在pH2缓冲液与钯离子Pd2+形成红色配合物在500nm波长最大吸收。
【维生素A】溶解于三氯甲烷、乙醚、环己烷、异丙醇。【维生素A鉴别】三氯化锑反应原理：维生素A在饱和无水三氯化锑的无醇三氯甲烷溶液中显蓝色，渐变成紫红色，，机制为维生素A和三氯化锑中的亲电试剂绿化高锑作用形成不稳定的蓝色碳正离子。【维生素A含量测定】紫外分光光度法（三点校正法）：第一法（等波长差法）入1=328nm入2=316nm
入3=340nm△入=12nm，第二法（等吸收比法）入1=325nm入2=310nm入3=334nm。第一法（直接测定法，适用于纯度高等维生素A醋酸酯）在300、316、328、340、360五个波长点出测定吸光度，确定最大吸收波长应为328nm。第二法（皂化法，适用于维生素A醇）在300、310、325、334nm四个波长点测定吸光度，去顶最大吸收波长为325nm。
【维生素B鉴别】维生素B1在碱性溶液中被铁氰化钾氧化生成硫色素溶于正丁醇中显蓝色荧光，地西泮显黄绿色荧光，加酸荧光消失，加碱又有荧光。与生物碱沉淀试剂反应生成恒定沉淀。【维生素B含量测定】【非水滴定】原理：维生素B1分子中含两个碱性成盐等伯胺和季铵基团，中非水溶液中（醋酸汞存在下）可于高氯酸作用，根据高氯酸量可计算维生素B1含量。有机碱等氢卤酸盐中用高氯酸滴定前需加入醋酸汞。【紫外分光光度法】原理：维生素B1分子中具有共轭双键结构，中紫外区有吸收，根据其最大吸收波长处吸光度可计算含量。
维生素C一般表现为一元酸，有4个光学异构体，其中L（+）-抗坏血酸活性最强，右旋【维生素C鉴别】与【2，6-二氯靛酚反应】原理：氧化性在酸性介质中为玫瑰红，在碱性介质中为蓝色，与维生素C作用后生成还原型无色酚亚胺【维生素C含量】碘量法、2，6-二氯靛酚滴定法。
【维生素E鉴别】【硝酸反应】原理：维生素E中硝酸酸性条件下水解生成生育酚，生育酚被硝酸氧化为邻醌结构等生育红而显橙红色【维生素E杂志检查】酸度、未酯化的生育酚（铈量法，吩噻嗪类、二氢吡啶类，指示剂为二苯胺，亮黄-灰紫，还原-氧化）【维生素E含量】【气相色谱法】测定时采用内标法。内标物为正三十二烷。系统适应性实验：理论板数（n）按维生素E峰计算不应低于500（填充柱）或5000（毛细管柱），维生素E峰与内标物质峰等分离度R≥2。
【甾体结构性质】肾上腺激素21C（12）雄性19C(13)孕21C(14)雌18C(567)，（1）△4-3-酮，紫外吸收、与羰基试剂反应(2)C1-α-醇酮基，还原性（3）C17-β-羟基，可成酯（4）C17-甲酮基，与亚硝基铁氢化钠反应，专属性（5）C17-羟基，可成酯（6）C17-乙炔基，与硝酸银反应（7）A环为3-OH苯环，紫外吸收、与重氮苯磺酸盐反应。【甾体鉴别】（一）与强酸呈色反应（二）官能团反应，皮质激素类，…松之类如氢化可的松C17-α-醇酮基的四氮唑比色法【甾体特殊杂志检查】（一）有关物质检查，薄层色谱法用自身稀释对照法，高效液相色谱法用主成分自身对照法（二）硒的检查，用二氨基萘比色法（三）残留溶剂检查，甲醇和丙酮，气相色谱法用内标法加校正因子测定（四）游离磷酸盐的检查【甾体含量】
【四氮唑比色法】用于皮质激素药物含量测定，C17-α醇酮基还原性，还原四氮唑盐味有色甲赞。氯化三苯四氮唑TTC、红四氮唑RT、蓝四氮唑BT。反应条件：无水乙醇溶解，干燥具塞试管、氢氧化四甲基铵试液、暗处放置。测定影响因素：集团、溶剂和水分、碱种类及加入顺序、空气中氧及光纤、温度时间【异烟肼比色法】中酸性条件无水甲醇和无水乙醇溶剂。反应专属性（具有△4-3-酮基的载体激素中室温下不到1h可定量与异烟肼反应，其他甾酮需长时间放置或加热才可反应，如，C20-酮化合物黄体酮、可的松等，C17-酮化合物可反应成腙，C11-酮无此反应【柯柏反应比色法】雌激素类药物比色测定。
【抗生素类含量】微生物检定（少量）、高效液相色谱法（量多）β-内酰胺抗生素具旋光性:青霉素汗3个手性碳C356、头孢菌素汗2个手性碳C67。β-内酰胺抗生素鉴别：羟肟酸铁反应（地西泮-茚三酮）。氨基糖苷类抗生素链霉素结构为一分子链霉胍和一分子双糖胺结合
成的碱性苷，具3个碱性中心；庆大霉素有绛红糖胺、脱氧链霉胺和加罗糖胺缩合成苷，具5个碱性中心。链霉素中230nm有紫外吸收，庆大霉素、奈替米星等无紫外吸收。【氨基糖苷抗生素鉴别】（一）茚三酮反应，羟基胺类和α-氨基酸性质可与茚三酮缩合成蓝紫色化合物（二）Molisch试验（三）N-甲基葡萄糖胺反应，链霉素、庆大霉素最后生成樱桃红色缩合物（四）麦芽酚反应，紫红色配位化合物（五）坂口反应，链霉素水解产物链霉胍特有反应。【氨基糖苷抗生素特殊杂志检查】组分测定，用高效液相色谱法测定庆大霉素C各组分含量，需进行衍生化处理，采用归一化法测定庆大霉素含量，用峰高归一化法计算【氨基糖苷抗生素含量】微生物检定法和HPLC法。【四环素TC差向异构化】四环素累抗生素在弱酸性（Ph2.0-6.0）中发生差向异构化，四环素、金霉素产生差向四环素ETC和差向金霉素（具蓝色荧光）；土霉素、多西霉素、美他环素不发生。四环素在碱性产生异四环素。【四环素降解】在酸性条件下（PH＜2）四环素、金霉素生成脱水四环素ATC和脱水金霉素。脱水四环素可形成差向异构体称差向脱水四环素。