前言

血清蛋白：

血清蛋白是血液中脂肪酸的携带者。当身体需要能量或者需要建造材料时，脂肪细胞就把脂肪酸释放到血液中 ，脂肪酸被血清蛋白获取，并被运送到需要的部位。

牛血清白蛋白的相对分子质量为10的4次方这个级别，它不是一定的，是多聚物，有的地方测的70 000，这就是一个数据了。在做PCR的时候会用到它。

牛血清蛋白是血液的主要成分，分子量68kD。等电点4.8。含氮量16%，含糖量0.08%。仅含已糖和已糖胺，含脂量只有0.2%。白蛋白由581个氨基酸残基组成，其中35个半胱氨酸组成17个二硫键，在肽链的第34位有一自由巯基。白蛋白可与多种阳离子、阴离子和其他小分子物质结合。血液中的白蛋白主要起维持渗透压作用、PH缓冲作用、载体作用和营养作用。在动物细胞无血清培养中，添加白蛋白可起到生理和机械保护作用和载体作用。

醋酸纤维薄膜电泳：

醋酸纤维薄膜电泳以醋酸纤维薄膜为支持物。它是纤维素的醋酸酯，由纤维素的羟基经乙酰化而制成。它溶于丙酮等有机溶液中，即可涂布成均一细密的微孔薄膜，厚度以0.1mm—0.15mm为宜。太厚吸水性差，分离效果不好；太薄则膜片缺少应有的机械强度则易碎。

应用醋酸纤维薄膜电泳操作简单、快速、廉价。已经广泛用于血清蛋白，血红蛋白，球蛋白，脂蛋白，糖蛋 白，甲胎蛋白，类固醇激素及同工酶等的分离分析中，尽管它的分辨力比聚丙酰胺凝胶电泳低，但它具有简单，快速等优点。

特点：

1.（1）醋酸纤维薄膜对蛋白质样品吸附极少，无“拖尾”现象，染色后背景能完全脱色，各种蛋白质染色带分离清晰，因而提高了测定的精确性。

（2）快速省时。由于醋酸纤维薄膜亲水性较滤纸小，薄膜中所容纳的缓冲液也较少，电渗作用小，电泳时大部分电流是由样品传导的，所以分离速度快，电泳时间短，一般电泳45—60min即可，加上染色，脱色，整个电泳完成仅需90min左右。

（3）灵敏度高，样品用量少。 血清蛋白仅需2μl血清，甚至加样体积少至0.1μl，仅含5μg蛋白样品也可得到清晰的分离带。临床医学检验利用这一点，检测在病理情况下微量异常蛋白的改变。

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实验五 醋酸纤维素薄膜电泳法分离血清蛋白

13生物基地 201300140059 刘洋 20##-04-29

同组者：张奕

一、实验目的

掌握醋酸纤维素薄膜电泳法分离血清蛋白的原理和方法。

二、实验原理

蛋白质是两性电解质。在pH值小于其等电点的溶液中，蛋白质为正离子，在电场中向阴极移动；在pH值大于其等电点的溶液中，蛋白质为负离子，在电场中向阳极移动。血清中含有数种蛋白质，它们所具有的可解离基团不同，在同一pH的溶液中，所带净电荷不同，故可利用电泳法将它们分离。

血清中含有清蛋白、α-球蛋白、β-球蛋白、γ-球蛋白等，各种蛋白质由于氨基酸祖坟、立体构象、相对分子质量、等电点及形状不同，在电场中迁移速度不同。由表可知，血清中5种蛋白质的等电点大部分低于pH值7.0，所以在pH8.6的缓冲液中，它们都电离成负离子，在电场中向阳极移动。

在一定范围内，蛋白质的含量与结合的燃染料量成正比，故可将蛋白质区带剪下，分别用0.4mol/L NaOH溶液浸洗下来，进行比色，测定其相对含量。也可以将染色后的薄膜直接用光密度计扫描，测定其相对含量。

肾病、弥漫性肝损害、肝硬化、原发性肝癌、多发性骨髓瘤、慢性炎症、妊娠等都可以使白蛋白下降。肾病时α1、α2、β球蛋白升高，γ-球蛋白降低。肝硬化时α2、β-球蛋白降低，而α1、γ-球蛋白升高。

三、实验器材

1.醋酸纤维薄膜（2cm*8cm）

2.人血清；

3.烧杯及培养皿数只；

4.点样器；

5.镊子；

6.玻璃棒；

7.电吹风；

8.恒温水浴锅；

9.电泳槽；

10.直流稳压电泳仪；

11.剪刀

四、实验试剂

1.巴比妥-巴比妥钠缓冲液

2.染色液（可重复使用，使用后回收）

3.漂洗液（100ml每组）：95%乙醇45ml，冰醋酸5ml，水50ml

4.透明液（20ml每组）：无水乙醇14ml，冰醋酸6ml

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生化实验报告 山东大学实验报告 20xx年

3月27日

姓名 张行润 系年级 2009级生科4班 学号 200900140177 同组者 于潜 科目 生物化学实验 题目 醋酸纤维素薄膜电泳法分离血清蛋白 仪器编号 一、 实验目的

掌握醋酸纤维素薄膜电泳法分离血清蛋白的原理和方法。

二、 实验原理

蛋白质是两性电解质。在pH值小于其等电点的溶液中，蛋白

质为正离子，在电场中向阴极移动；在pH值大于其等电点的溶液

中，蛋白质为负离子，在电场中向阳极移动。血清中含有数种蛋白

质，它们所具有的可解离基团不同，在同一pH的溶液中，所带净

电荷不同，故可利用电泳法将它们分离。

血清中含有清蛋白、α-球蛋白、β-球蛋白、γ-球蛋白等，各

种蛋白质由于氨基酸祖坟、立体构象、相对分子质量、等电点及形

状不同，在电场中迁移速度不同。由表可知，血清中5种蛋白质的

等电点大部分低于pH值7.0，所以在pH8.6的缓冲液中，它们都电

离成负离子，在电场中向阳极移动。

1

生化实验报告

在一定范围内，蛋白质的含量与结合的燃染料量成正比，故可将蛋白质区带剪下，分别用0.4mol/L NaOH溶液浸洗下来，进行比色，测定其相对含量。也可以将染色后的薄膜直接用光密度计扫描，测定其相对含量。

肾病、弥漫性肝损害、肝硬化、原发性肝癌、多发性骨髓瘤、慢性炎症、妊娠等都可以使白蛋白下降。肾病时α1、α2、β球蛋白升高，γ-球蛋白降低。肝硬化时α2、β-球蛋白降低，而α1、γ-球蛋白升高。

三、 实验器材

1、醋酸纤维薄膜（2cm*8cm，厚度120μm） 2、人血清；

3、烧杯及培养皿 数只； 4、点样器； 5、竹镊子； 6、玻璃棒；

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7、电吹风； 8、试管 六只； 9、恒温水浴锅； 10、电泳槽；

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姓名：郭沈杰年级专业：2012级生物科学同组者：蔡萍萍

学号：12050011012

实验五醋酸纤维薄膜电泳法分离牛血清蛋白

   

一、实验目的

掌握醋酸纤维薄膜电泳法分离蛋白质的原理和方法。

二、实验原理

蛋白质是两性电解质。当PH>PI时，蛋白质为负离子，在电场中向阳极移动；当PH<PI时，蛋白质为正离子，在电场中向阴极移动。血清中含有数种蛋白质，它们所具有的可解离集团不同，在同一PH值时，因所带电荷不同，而在电场中的移动速度也不相同，故可用电泳法将其分离。

       本试验以牛血清为材料，醋酸纤维薄膜为支持物，通过点样、电泳、染色、脱色从而得到血清中蛋白质的分离图谱，再进行观察和定量分析。

       血清中含白蛋白、α-球蛋白、β-球蛋白、γ-球蛋白等。其等电点低于pH7.0，在缓冲液中（pH8.6）中，电离成负离子，在电场中向阳极移动。

三、实验仪器

1、  牛血清

       2、  醋酸纤维薄膜

       3、  镊子

       4、  电泳仪

       5、  电泳槽

       6、  盖玻片

四、实验试剂

1、巴比妥—巴比妥钠缓冲液（离子强度，PH8.6）：称取巴比妥1.66g和巴比妥钠12.76g，溶于蒸馏水并稀释至1000ml。用pH计较正后使用。

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醋酸纤维薄膜电泳法分离血清蛋白

【目的】

1 ．掌握醋酸纤维薄膜电泳法分离血清蛋白的操作技术与原理。

2 ． 熟悉醋酸纤维薄膜电泳法分离血清蛋白的临床意义。

【原理】

带电粒子在电场中向着与其电荷相反的电极方向移动的现象称为电泳 (Electrophoresis) 。蛋白质为两性电解质。在不同 PH 下，其带电情况不同。在等电点时，蛋白质为兼性离子，其实效电荷为零，不发生泳动。蛋白分子在 pH 小于其等电点的溶液中，呈碱式解离带正电向负极泳动。在 pH 大于其等电点溶液中， 呈酸式解离带负电，泳向正极。带电粒子在电场中的泳动速度常用迁移率 (Mobility) 来表示。它除与电场强度、溶液的性质等有关外，主要决定于分子颗粒的电荷量以及其分子的大小与形状等。电荷较多，分子较小的球状蛋白质泳动较快。

血清中的各种蛋白质的等电点均低于 7 ，故在 PH8.6 缓冲液中，均带负电荷。由于各种蛋白质的等电点不同，带电荷量不等，加之分子量不同，导致在电场中泳动速度不同，从而加以分离。清蛋白泳动最快，其次为 α 1 、α 2 、β及γ 球蛋白。将蛋白质固定染色后，洗去多余染料，可看到清晰的色带（图 3-3 ）。将各色带剪开，分别溶于碱性液中，可进行比色分析，计算出各种蛋白质的百分含量，或用吸光度计进行扫描定量。

图 3-3 正常人血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳示意图谱

【器材】

1 ．电泳仪 ( 稳压器、电泳槽 )

2 ．分光光度计

3 ．点样器 (1.4× 1.8cm 的 X 光片 )

4 ．血清 ( 放置于载玻片上 )

5 ．醋酸纤维薄膜 (2× 8cm )

【试剂】

1 ． pH8.6 0.06M 巴比妥缓冲液

取巴比妥 1.62g ，巴比妥钠 12.38g ，用蒸馏水加热溶解冷却后加至 1000ml 。测试 pH 值，若 pH 偏离 8.6 ，可用 1mol/LHCl 或 NaOH 校正。

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1 引言

SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）是目前分离蛋白质亚基并测定其分子量的常用方法，为检测电泳后凝胶中的蛋白质，一般使用考马斯亮蓝（CBB）染色^[1]。本次实验的目的在于学习聚丙烯酰胺凝胶电泳的原理，并掌握聚丙烯酰胺凝胶垂直板电泳分离蛋白质的操作技术。

2 材料和方法

2.1  实验原理

2.1.1 聚丙烯酰胺凝胶的性能及制备原理

2.1.1.1 性能

聚丙烯酰胺凝胶的机械性能好，有弹性，透明，相对地化学稳定，对pH和温度变化比较稳定，在很多溶剂中不溶，是非离子型的，没有吸附和电渗作用。通过改变浓度和交联度，可以控制孔径在广泛的范围内变动，并且制备凝胶的重复性好。由于纯度高和不溶性，因此还适于少量样品的制备，不致污染样品。

2.1.1.2 制备原理

聚丙烯酰胺凝胶是用丙烯酰胺（Acr）和交联剂甲叉双丙烯酰胺（Bis）在催化剂的作用下聚合而成。聚丙烯酰胺凝胶聚合的催化系统有化学聚合和光聚合两种。本实验是用化学聚合。化学聚合的催化剂通常多采用过硫酸铵（AP）或过硫酸钾，此外还需要一种脂肪族叔胺作加速剂，最有效的加速剂是N,N,N’,N’-四甲基乙二胺（TEMED）。在叔胺的催化下，由过硫酸铵形成氧的自由基，后者又使单体形成自由基，从而引发聚合反应。叔胺要处于自由碱基状态下才有效，所以在低pH时，常会延长聚合时间；分子氧阻止链的延长，妨碍聚合作用；一些金属也能抑制聚合；冷却可以使聚合速度变慢。通常控制这些因素使聚合在1小时内完成，以便使凝胶的性质稳定。

聚丙烯酰胺凝胶电泳和SDS－聚丙烯酰胺凝胶电泳有两种系统，即只有分离胶的连续系统和有浓缩胶与分离胶的不连续系统，不连续系统中最典型、国内外均广泛使用的是著名的Ornstein-Davis高pH碱性不连续系统，其浓缩胶丙烯酰胺浓度为4％，pH = 6.8，分离胶的丙烯酰胺浓度为12.5％，pH = 8.8。电极缓冲液的pH = 8.3，用Tris、SDS和甘氨酸配制。配胶的缓冲液用Tris、SDS和HCl配制。

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牛血清白蛋白的分离纯化及鉴定实验报告

作者：吴素平 魏利莎 孙锦 刘倩茹 胡健康 胡昭

（江南大学制药工程1003班）

摘  要：清蛋白，又称白蛋白（albumin,Alb）。由肝实质细胞合成，在血浆中的半寿期约为15-19天，是血浆中含量最多的蛋白质，占血浆总蛋白的40%-60%。溶于水且遇热凝固的一种球形单纯蛋白。是一类不被50％饱和度的硫酸铵溶液沉淀的球状蛋白质。存在于动物组织、体液和某些植物的种子中。其分子量较低，溶于水，易结晶。在中性溶液中加热即沉淀或凝固。其重要代表是血清蛋白、乳清蛋白、卵清蛋白、麦清蛋白、豆清蛋白及有毒的蓖麻蛋白。人血清（或血浆）清蛋白占血清蛋白质的55～63％，是血清中少数不含糖的蛋白质之一；分子量67500道尔顿，有584个氨基酸残基和高净电荷（等电点4.9）；与水、Ca2+、Na+、K+、脂肪酸及胆红素都有较好的结合能力。 最熟知的球蛋白是人血清球蛋白，可经电泳法分成α1-、α2-、β1-、β2-和γ-球蛋白，有免疫性。此外还有乳球蛋白、肌球蛋白等。人血浆内的免疫球蛋白大多数存在于丙种球蛋白（γ-球蛋白）中。可分为五类，即免疫球蛋白G（IgG）、免疫球蛋白A（IgA）、免疫球蛋白M（IgM）、免疫球蛋白D（IgD）和免疫球蛋白E（IgE）。其中IgG是最主要的免疫球蛋白。在体液pH7.4的环境中，白蛋白为负离子，每分子可以带有200个以上负电荷。本实验利用白蛋白带负电的性质对其采用SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳法分离提纯牛血清白蛋白。

关键字：白蛋白； 人血清白蛋白； SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳

一、牛血清白蛋白的分离纯化

【实验目的】

掌握牛血清白蛋白分离纯化各步骤（分段盐析、离子交换层析）原理及操作方法。

【实验原理】

盐析法是一种利用蛋白质在不同浓度盐溶液中溶解度不同而分离的方法。通过将盐类加入到蛋白质溶液中，使蛋白质表面电荷被中和，水化膜被破坏，导致蛋白质在水溶液中的稳定性因素去除而沉淀。分段改变盐类浓度达到分离目的的方法叫分段盐析法。

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