一、LH半定量试纸为什么能帮助优生？

要了解 LH半定量试纸为什么能帮助优生，首先要明白优生的原理：

让精子和卵子在最新鲜、最具活力的时候结合可以得到优质的胚胎，大大降低流产几率，并降低受精卵畸变可能，是保证优生的关键之一。

也就是说，优生的关键点在于找准受孕的时间点，即精子和卵子结合的时间点。让最新鲜的精子碰到最新鲜的卵子。

因为精子在卵巢存活时间相对卵子较长，所以以前一般建议同房时间是在排卵之前，也就是说让精子先进入卵巢等待排卵，采用这样的同房时间，当卵子排出时，精子的新鲜度已经降低，并不是最新鲜的精子。

现代优生学发现，女性卵子排放后，一般会在72小时内逐步衰老死亡。卵子最佳的受孕时间是在其排放后的24小时内。

那么如果是在卵子排放后24小时内同房，卵子是最新鲜的，精子也是最新鲜的。这样的受孕可以得到优质的胚胎，从第一步保证优生！

如何找准卵子排放后的24小时（即排卵后24小时）是优生的关键，根据排卵原理，LH（黄体生成素）激素的峰值到达时将触发排卵。LH半定量试纸采用免疫层析技术和金标显色技术，使用特异性的单克隆抗体试剂固着在硝酸纤维素膜等材料上制成，可以准确的测定出LH达到峰值的时间，即排卵的准确时间，也就能把握到卵子排卵后的24小时这个最佳的受孕时机。

通过LH半定量试纸科学、方便的把握准确的排卵时间，帮助想要怀孕的夫妇做到计划安排，有的放矢，从而提高优生的几率。

二、LH半定量试纸和普通排卵试纸的区别

LH半定量试纸和普通的排卵试纸的基本原理都是通过捕捉到排卵前一定会出现的LH（黄体生成素）的一个脉冲（高峰），当有了这个高峰，排卵就会在24小时内发生。能更准确的捕捉到这个（高峰），能大大的提高受孕率。

在捕捉这个高峰的时候，LH半定量试纸和普通排卵试纸使用的技术和参数有很大区别：

1、使用的技术不一样。一般的排卵纸使用胶体金技术，LH半定量试纸是用单克隆抗体测排卵。单克隆抗体更先进，更灵敏。

2、LH半定量试纸采用的单克隆抗体免疫层析技术捕捉到的LH水平高峰比一般测试纸要精确得多，所以怀孕成功的机会更大。

3、LH（黄体生成素）参数值不一样。一般排卵试纸的检测标准是欧美妇女的LH水平，LH半定量试纸的检测标准应当是采用中国女性的LH（黄体生成素）水平，参数更准确，更能帮助中国女性捕捉到正确的LH（黄体生成素）的脉冲（高峰）！ LH半定量试纸因人而异，能找到每个人自身LH水平的具体数值

一般排列试纸测试LH时并不知道自身的LH的水平到底是多少，只知道检测线颜色的深浅。而LH半定量检测试纸就克服了这个不足，它利用“色标”可以找到具体的数值。

一般排列试纸测试LH时并不知道自身的LH的水平到底是多少，只知道检测线颜色的深浅。而LH半定量检测试纸就克服了这个不足，它利用“色标”可以找到具体的数值。

1、使用LH半定量检测试纸，可以很明确地知道自己的LH水平到底是多少？40还是50？或者30；

2、根据每天测到的数值，就像画基础体温曲线一样，每个月可以画出一根LH曲线；

3、从曲线的变化，能够很容易地判断自己的四种情况：有正常排卵、没有排卵、内分泌功能异常、卵泡黄素化。说明书上有四种不同类型的曲线图。

（1）如果有排卵从这个曲线上很方便地就能找到哪一天是PL日；

（2）如果没有排卵也很容易地看出大致是什么问题，用不到经常去医院检查了，既费时间，又费金钱！

这样，在LH水平这类有着个体差异的激素上，你才能对自己的真实情况做到了如指掌！！而不是总是参考平均水平，人云亦云。

三、如何使用LH半定量试纸

LH半定量试纸的使用方法和步骤：

1、LH半定量试纸的使用周期

10天为一个测定周期。

2、确定从哪天开始使用LH半定量试纸进行测试。

根据月经周期天数来确定相应的测试日。28天周期，月经来第12天开始测，29天周期，月经来第13天开始测，以次类推！

3、每天使用LH半定量试纸的时间：

从开始测试之日起，每天在相对固定的时间进行测定。测试前4小时内不宜排尿或大量饮水。

4、使用LH半定量试纸的操作步骤：

（1）用干燥，清洁容器取尿液少许。

（2）撕开铝箔代，取出试纸条。

（3）把试纸箭头所指的一端侵入尿液，保持30秒钟后取出平放。

（4）注意不要使尿液液面超过箭头所指的交界线，也不要用手触摸试纸中段的白色部分。

（5）18分钟时观察试纸中段的色带。说明：本试纸在20分钟后显示的结果无临床意义

5、观察和记录LH半定量试纸的结果

（1）观察LH半定量试纸中段的色带，有无一条红色色带。

（2）如出现色带，在所附色标上，找出与色线颜色最接近的色带，将色带对应的数值和测定日期记录在所附色标上的表中。

6、精确预测排卵：

用半定量LH试纸检测到LH值>=20IU/L后，可采用每4小时等时间间隔连续测定。LH曲线一般会先上升，在LH值出现维持不变下降时，即可基本判断排卵将在24小时以内发生。

四、如何挑选和购买合适的LH半定量试纸

选择LH半定量试纸的几个关键点在于判断：

1、使用哪种技术来测试排卵？

这决定了测定女性排卵时间的灵敏度和准确度。大部分排卵试纸都是使用胶体金技术，远不如单克隆抗体技术的灵敏度高。

2、试纸的LH（黄体生成素）的检测标准是多少？

LH值影响参考线在怎样的LH水平时出现，也直接影响是否排卵的判断。所以在购买时要问清楚是使用欧美女性还是亚洲女性LH水平作为检测标准的，最好选用是以中国女性LH水平作为检测标准的优生试纸。

3、试纸是双线检测还是单线检测？

未准妈妈们在使用排卵试纸中经常遇到困惑，检测线比参考线感觉是浅一点还是差不多呢？目测比较容易有误差。现在有单线检测技术，根据试纸红色色带区分，比较直观，会大大减少误判，帮助想要怀孕的妈妈们更直观的确定是否排卵日。 LH变化参考曲线示意图（1）--排卵完全正常

LH变化参考曲线示意图（1）--排卵完全正常

以排卵的当天为0天，卵泡发育初期LH值在5－10IU/L之间波动，随着卵泡的发育，

在－2天时LH值上升为20－25IU/L；

－1天时，LH突然升至高峰，峰值在50－100IU/L之间，其高低与每个人排卵的时间的不同而不同；达到峰值24小时内排卵。

在排卵当天（0天），绝大多数降到10－25IU/L之间，＋1天均降到<＝10IU/L。

LH变化参考曲线示意图（2）--PCOS患者

LH变化参考曲线示意图（2）：PCOS患者

大部分PCOS患者（如下丘脑－垂体－卵巢轴功能异常者等）的LH水平较高，没有周期性变化，也不出现LH峰值

LH变化参考曲线示意图（3）--LUFS征（卵泡黄素化）

LH变化参考曲线示意图（3）：LUFS征（卵泡黄素化）

随着卵泡的增大，尿LH缓慢的增加，LH值一直在25－50IU/L之间波动，无峰值出现，中低水平的LH可维持5天左右，同时黄素化的卵泡不断地长大。与正常排卵时尿LH值上升的陡峭高峰状曲线完全不同。

LH变化参考曲线示意图（4）--无排卵型

LH变化参考曲线示意图（4）：无排卵型

一直徘徊于5－10IU/L之间，无峰值出现的曲线是无排卵型LH曲线。

这是一测安不孕检测试纸，一盒10张，是目前测排卵最为准确的一款产品来的，要比B超更为精准的预测排卵时间。

是引用了半定量单克隆技术，测试自身体内的黄体素高低具体是多少值来定排卵时间的。

可以测准排卵当天，做到优生，让新鲜卵子及新鲜精子结合，孕育优质胚胎，减少流产率的发生。同时试纸除了可以有效的测到排卵的正确时间，还可以测到无排卵，卵泡

黄素化，内分泌失调，四种情况的。

使用方法：

根据月经周期天数来确定相应的测试日。28天周期，月经来第12天开始测，29天周期，月经来第13天开始测，以次类推！

固定同一个时间测试，在早上10：30-13：00，或者下午19：00-22：00这段时间内测试，

体内的LH水平相对平稳，可选择这两个时间段内来测的。

开始的时候一天一次，值在25或以上，就是排卵前2-4天，就要开始多测一下的。当亲测到值在65了，或比65值更深一些，就可以安排一次同房，同房前要禁欲5-7天的。

解释一下LH（促黄体生成素）与排卵的关联

在-1天，就是高峰值顶峰的，到高峰值了，就会促发排卵（随时要排，都会在24小时内完成排卵的

要在高峰值的时候同房一次，下降的时候同房一次（一般是连着两天同房的），店内这样同房，受孕的MM就非常高。就是在-1天的时候同房一次，-1~0天的时候补一次同房。

注意：如果要破卵后同房的MM，可以越过高峰值刚下降的时候安排第一次同房，例如高峰值是80值，可以下降至65值的时候安排同房。此时怀男宝宝的机率较高，但怀上的机率就没有高峰值前的65值同房高。卵泡排出后一般只有8-15小时的受精时间，精子进去也要6-24小时，一旦精子到达的时间较晚，怀的机率就大大降低了。一般建议65值就同房，让精子先进去等着。而且65值后随时要破卵的，如果要下降同房的，都要保持2小时一测，这样不容易错过时间，但用量相对来说要大很多。

有原色卡，色段是0，5，10，25，45，65，（65值是平均促发排卵的高峰值，一般在50-100值都正常的）。到了最高值就会促发排卵，要在24小时内发生。 值会从低到高变化，到最高值就会促发排卵。像下图的走向

像这样叠色对比，这是10值

测试后把试纸放色色段上对比，这是25值，LH值已经开始攀升，开始多测，要早中晚各测一次以上。

测到像这样，显45值，就要注意间隔4小时一测。

这是65值（周期短的可以在此安排同房）27天周期以下，此时同房可以第二天补一次同房，怀的机率要高（让精子进去先等着）

周期长一些的MM，可以65值后空2-3小时测一次，测到像这MM这样比65值更深，此时就是高峰值，要在24小时内排卵结束的，此时一定要安排第一次同房（同房前要禁欲5-7天）。简单来说，就是测试后对比色卡，LH值测到高峰值或降的时候开始同房，受孕的机率就相当的高。

使用要点：

1.测前四小时不喝水，测了后立马补水，接尿的时候，看一下尿液，如果是黄色就可以测，如果很清淡的，就先不要测，再等等。

2.不要用晨尿测试，脑垂体在睡眠时分泌激素不平稳，晨尿有可能偏淡，有可能偏浓

3.把试纸浸入尿液中30秒，数30下就拿出来平放（不要放太久，容易失色），然后第18分钟的时候对比色卡。

4.测试的密度，亲可以做这样的安排（不要用晨尿测试）：

开始的时候一天测1次，

25值了，就早中晚各测一次；

45值了，就四小时一测，

65值了，就隔2-3小时再往下测。

当值不再上升了（或比65值深），就是高峰值，此时安排一次同房。 25值距离排卵日也只是2-4天，多测也只有这几天的。

使用要点

1.测前四小时不喝水，测了后立马补水，接尿的时候，看一下尿液，如果是黄色就可以测，如果很清淡的，就先不要测，再等等。

2.不要用晨尿测试，脑垂体在睡眠时分泌激素不平稳，晨尿有可能偏淡，有可能偏浓

3.把试纸浸入尿液中30秒，数30下就拿出来平放（不要放太久，容易失色），然后第18分钟的时候对比色卡。

4.测试的密度，亲可以做这样的安排（不要用晨尿测试）：

开始的时候一天测1次，

25值了，就早晚各测一次；

45值了，就隔3-4小时再往下测。

当值不再上升了（或比65值深），就是高峰值，此时安排一次同房。 25值距离排卵日也只是1-3天，多测也只有这几天的。

同房要点

如果早上测到高峰值了，一般在晚上同房不一定来得急的。下午开始降的，就要请假回家同房。

如果是下午测到高峰值了，晚上同房也来得急啦。

如果白天值在25-45，晚上测到了高峰值，而且睡前还是高峰值不变，就可以同房后再睡。

使用过程中，不懂的时候随时上线来咨询都可以的，尽量把测试后对比色卡的图发过来。

祝亲好孕，生个健康可爱的如愿宝宝哈。

普通的排卵试纸测强阳容易，但强阳后有可能会连着几天强阳或阳的状态，什么时候才是排出，就不好定断的。

普通试纸，强阳后还会显阳，弱阳，强阳之间徘徊，同房时间不好定的。金时测试结果，就很分明，升是升，降是降，同房时间就很好安排的，高峰值一降就同房，受孕的机率就相当的高。

第二篇：半定量RT

1 半定量RT－PCR 方法的检测步骤

1. 1 提取组织或细胞中的总RNA

总RNA 的纯度和完整性关系到后面的cDNA合成及PCR 扩增, 因此所提的总RNA 要求纯度高,完整性好并达到一定的浓度. 要达到这一要求, 必须从取标本开始就进行无RNA 酶操作, 以防RNA 酶对所提总RNA 的降解, 具体做法为: 所用的器械及器皿必须经200 ℃以上的高温烘烤最少5 h; 所用的耗材及试剂必须用0. 1% 的DEPC 水处理12～ 16 h,这样方可保证所提总RNA 的完整; 在选用试剂时最好选用知名品牌公司的试剂, 以保证总RNA 纯度及提取的产量; 另外所用的组织量最少应在100mg、细胞数最少应在107.

1. 2 总RNA 的纯度和完整性鉴定

总RNA 提取之后, 必须用紫外分光光度计测定其纯度和浓度,A 260?A 280 在1. 8～ 2. 0 之间方可采用; 然后再用1. 5% 左右的琼脂糖凝胶对总RNA 进行电泳, 以鉴定其完整性, 浓度不高, 完整性不好的标本最好不用, 以免影响后面的实验结果.

1. 3 cDNA 第一链的合成

由总RNA 逆转录成cDNA 时, 所取的各组标本的总RNA 的量必须要一样多, 最好在1ug 以上, 这样才能保证各组标本总RNA 中所需检测的mRNA量的差异.为了使逆转录效益最大, 最好采用含有多个碱基的随机序列引物.

1. 4 PCR 扩增

以逆转录的cDNA 第一链为模板, 以特异性引物扩增所要检测的mRNA. 在PCR 扩增时一定要注意以下两点: ①为了克服不同管间扩增引起的“管效益”, 必须以组成型表达的内参基因如β-actin (或其它的看家基因, 如GA PDH、β-M G 等) 为内标, 在同一管中加入扩增内参基因的引物, 共同扩增所要检测的基因和内参基因, 内参扩增产物的大小最好与目的基因mRNA 扩增产物的大小相差200 bp 以上,这样便于观测结果; ②由于PCR 扩增存在着扩增效率及平台期的问题, 因此必须进行预试验以确定待检测基因与内参基因达到平台期前扩增效率最大的

循环数. 对于PCR 反应存在着这样的关系式: N =N 0 (1+ E) n. 其中N 0为起始浓度, E 为扩增效率, n代表扩增周期,N 为产物最终浓度. 那么log N = nlog (1+ E) + log N 0. 通过预试验, 在不同的周期取样进行密度扫描, 以待检测基因与内标比值的对数分别与扩增周期作图, 如在20～ 30 周期内, 它们的线性关系良好, 说明在30 周期内二者的扩增未到达平台期, 最后确定扩增效率最大的循环数, 这样可有效地避免因引物结合效率不同而引起的误差.

1. 5 结果的分析

根据扩增产物片段的大小配制最适宜浓度的凝胶, 将PCR 扩增产物进行电泳. 待检基因与内参基因的扩增条带应相隔一定的距离(最少200 bp 以上) , 以便于观测结果及密度扫描, 且所选用的Marker 应尽量含有与扩增产物相对应的条带. 电泳条带经密度扫描仪扫描, 得到待测基因与内参基因条带各自的峰面积积分值, 计算各组样品两者的比值. 为了使扩增条带密度扫描的峰面积积分值尽量的准确可靠, 电泳条带一定要清晰, 不能有杂带出现. 有杂带出现的标本最好不用, 若有杂带应重新调整PCR 过程中的退火温度, 直至杂带消失, 这样才能保证扫描结果的专一性及可靠性.

2 半定量RT -PCR技术的关键因素

2. 1 总RNA 和cDNA 的质量

只有在总RNA 未被降解的情况下, 才能保证其中mRNA 的完整性和随后反转录的cDNA 的质量,从而真实反映基因的表达.

2. 2 总RNA 的定量

在反转录之前, 作为起始模板各个样品中的总RNA 量要一样, cDNA 量和电泳PCR 产物量也要一样, 这样才能保证PCR 扩增产物能真实反映基因表达的实际情况.

2. 3 引物的选择

PCR反应的特异性是由一对上下游引物所决定的, 因此引物的好坏往往是PCR 反应成败的关

键. 引物包括扩增目的基因的引物及扩增内参基因的引物, 引物的设计, 要根据基因的非保守序列设计, 以保证扩增的特异性.

2. 4 PCR 循环数的确定

选择合适的循环数不仅能使扩增产物在琼脂糖凝胶上清晰可见和定量, 也可使扩增反应在到达平台期前的线性范围内进行.在RT-PCR 方法中, 反应的循环数是一个必须分析的参数. PCR 扩增产物的量与循环数之间有一线性关系. 前期的扩增产物量随循环数的递增而成比例增加. 随着DNA 聚合酶活性的下降和溶液中反应底物的消耗, 扩增产物将达到一个平台. 半定量分析的循环数应确定在成比例的线性关系范围内. 表达丰度不同的基因半定量分析的PCR 循环数不同.PCR 扩增反应是酶促反应, 遵循酶促反应定律, 开始的循环内扩增产物呈指数累积, 产物与模板呈线性关系, 半定量RT-PCR 技术正是利用产物与模板的这一线性关系, 通过扩增产物来对比总RNA 中目的基因的表达, 但经过一定的循环后, PCR 产物不再呈指数累积而进入平台期, 在平台期低水平表达的目的RNA 可能会增加到与高水平表达的目的RNA 相同的浓度, 因此, 为避免平台效应的影响, 合适的循环数是PCR 半定量方法的关键因素之

2. 5 最佳Mg2+ 浓度的确定

M g2+ 浓度对PCR 扩增的特异性和产量有显著的影响, 因为它是影响Taq 酶扩增效率的重要因素,除此之外,M g2+ 还可影响引物的退火和解链温度,影响产物的特异性以及引物二聚体的形成等. 浓度范围多在0. 5～ 5 mmo lPL , 但扩增的效率则主要视序列而定. 在一般的PCR 反应中, 各种dNTP 浓度为200 umo lPL 时,M g2+ 浓度为1. 5～ 2. 0 mmolPL 为宜. M g2+ 浓度过高, 反应特异性降低, 出现非特异性扩增, 浓度过低会降低Taq DNA 聚合酶的活性, 使反应产物减少. 实验过程中可分别取1. 0、1. 5、2. 0mmo lPLMg2+ 进行预实验, PCR 产物经琼脂糖凝胶电泳后, 通过鉴定其亮度和特异性, 来确定最适的M g2+ 浓度.

2. 6 合适内参的选择

设立内参照可以减少因RNA 定量时产生的误差, 也可消除细胞个数的差别所带来的误差. 为避免RNA 抽提、加样、测量、cDNA 合成及PCR 反应过程中的某些系统误差和人为误差, 实验要选用在生物体内稳定表达且在其它生理条件下不受影响或影响很小的持家基因片段作为内参.传统的半定量RT-PCR 技术多以β-act in 作内参, 另外常用的内参照还有GAPDH, 它是一种细胞内代谢酶, 其基因属于保守性强的“管家基因”, 该基因在生物体内普遍存在且稳定表达. β-M G 也是常用的内参, 研究表明18 S rRNA 具有更强的保守性和更普遍而恒定

表达

的特性, 因此在很多情况下也常常被用作内参. 不同的生物体其生命过程和生理过程各不相同, 选用何种内参要根据目的基因和实验的具体情况而定. 3 半定量RT-PCR 法的应用

半定量RT-PCR 是目前研究基因转录水平的有效手段, 可用来检测基因表达及其变化状况, 并可进行定量分析, 万平等以微管蛋白基因(Tubulin) 为对照, 利用半定量RT 2PCR 法研究发现小麦锌指蛋白基因(TazF) 属于组成型表达基因. 王维平等以水稻肌动蛋白基因(Actin) 为对照, 利用半定量RT-PCR 研究, 发现水稻RCOI1基因的表达受茉莉酸甲酯(MeJA) 的诱导. 同时半定量RT 2PCR 方法在病原体检测、转基因的安全检测及肿瘤的研究方面也有非常广泛的应用. 4 总结与展望

半定量RT-PCR 法除了要求反转录和PCR条件完全一致外, 相比较样品之间最好同批进行RT -PCR , 对于用凝胶扫描检测PCR 扩增产物来说, 更适宜在同一块凝胶上进行电泳分离. 如果样品数量多, 由于泳道限制, 就不能同时在一块胶上电泳. 这时可采用Life Technologies 公司的定量Marker, 通过计算分析, 得到PCR 扩增产物的含量, 这样就可对同批扩增的样品进行多次重复电泳检测, 以提高定量的准确性和可靠性. 另外采用反转录与PCR分开进行的两步法

RT-PCR , 在实验摸索阶段较一步法RT-PCR更为经济和方便, 因为每次提取到的总RNA 立即反转录成cDNA 存放, 可以尽量避免RNA操作中的降解, 而且一次反转录的cDNA 模板可供多次PCR 使用, 不但节约成本还可缩短实验周期,提高实验成功率.

若靶基因的模板量大大低于内参基因, 若按常规方法同时加入两种基因的引物进行PCR 扩增, 在同一PCR 体系中, 太高浓度的模板会竞争性地形成优势扩增, 从而使另一模板失去指数扩增. 同时, 由于PCR 扩增中“平台期”的影响, 当靶基因可用EB检测出时, 内参基因已快进入“平台期”. 因此可采用PCR 扩增时内参照引物滞后加入的方法, 使内参照与靶基因同时处于指数增长期, 这样就可避免内参的优势扩增. 另外半定量RT - PCR 检测体系必须防止混在RNA 中的基因组DNA 带来的假阳性. 为排除可能的污染, 在实验中可同时设置两个阴性对照,

一是以mRNA 为模板直接进行PCR 反应, 另一组不加任何模板. 若含有基因组DNA , 则会有条带出现.总之, RT-PCR 法是讨论基因转录水平的有效手段, 利用RT 2PCR 法对mRNA 进行半定量分析,最关键的是优化实验条件, 寻求PCR 线性扩增范围, 确定最适M g2+ 浓度和PCR 循环数. 但是要使该法能够较准确地定量, 还有许多要注意的问题, 如在进行目的基因的定量分析过程中尚需考虑目的基因和内对照基因的丰度、大小以及它们的引物长短对扩增反应的影响, 另外就定量分析而言, 要使PCR产物量能够较好地反映起始模板量, 必须对处于指数扩增阶段的产物进行检测, 而它是不能通过EB 染色检测到的, 这是在利用常规PCR 方法分析目的基因表达变化过程中常遇到的难题, 大多数实验室常将定量分析过程中的PCR 扩增循环数提高到30 甚至35 个循环, 但是, 往往导致实验失败, 因此, 寻求一种高灵敏度的检测核酸数量变化的方法是今后需要努力去做的工作.