1、              抽提出高质量的RNA。要求：实验器材和用品做好抑制RNA酶准备；操作过程中避免RNA酶污染；提取的组织细胞样品不能太多（可能裂解不充分等）。
2、选用高质量的RT酶。如Promega、Invitrogen公司等。
3、引物设计正确。尤其注意动物种属、至少包含1个内含子、参考文献的质量等。
4、PCR扩增中循环次数恰当。过少的循环次数条带出不来，过高的循环次数条带太亮看不出差异（达到平台期后也不准确）。
5、Mg2+浓度和Taq酶含量适度。过高容易引起非特异性条带。
6、建议在RT逆转录前可以对样品进行DNA酶处理，以纯化提取的样品RNA。
7、图像定量分析时尽量选择浅条带，太亮的条带不可靠。

我在做半定量Rt-Pcr 如下图。跑出来发现平行样的亮度差异颇大。
实验设计：
共有4个cDNA的样本,分别命名为A,B,C,D，检测其中某基因表达的差异。
为了准确每个样本设3个平行样，也就是说 A1, A2 ,A3 均是从同一管(A管)取等量的（3UL）cDNA，加入同样的反应系统（先配好反应系统再分装到各pcr管中），用同一次pcr反应跑出来的。
发现平行样的亮度差异颇大。尤其是A 和C系列，几乎相差两倍。
请问各位大侠，PCR中平行样的误差真有这么大吗？？还是我的操作有问题？？
请各位大侠帮忙………………….
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我用的是50ul的反映系统，条件是：94 ℃ 30秒 ，55 ℃ 60秒， 72 ℃60秒。
25次循环 

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什么是LH半定量排卵检测试纸？什么是排卵试纸?

——半定量排卵试纸相关知识介绍

前言：

本文整理自天涯、知乎、百度、播种网等网站，由金秀儿半定量排卵试纸、秀儿排卵试纸提供技术参数。

目录：

一、LH半定量排卵试纸为什么能帮助优生？

二、LH半定量排卵试纸和普通排卵试纸的共同原理

三、LH半定量排卵试纸和普通排卵试纸的区别

四、LH半定量排卵试纸的功效及功能

五、LH半定量排卵试纸的适用人群

六、LH半定量排卵试纸可以解决您哪些烦恼？

七、LH半定量排卵试纸产品特点（举例）

八、LH半定量排卵试纸如何使用

九、LH半定量排卵检测的LH变化曲线及医学意义

十、LH半定量排卵试纸网友使用经验

一、LH半定量排卵试纸为什么能帮助优生？

要了解 LH半定量排卵试纸 为什么能帮助优生，首先要明白优生的原理：

让精子和卵子在最新鲜、最具活力的时候结合可以得到优质的胚胎，大大降低流产几率，并降低受精卵畸变可能，是保证优生的关键之一。

1

也就是说，优生的关键点在于找准受孕的时间点，即精子和卵子结合的时间点。让最新鲜的精子碰到最新鲜的卵子。

因为精子在卵巢存活时间相对卵子较长，所以以前一般建议同房时间是在排卵之前，也就是说让精子先进入卵巢等待排卵，采用这样的同房时间，当卵子排出时，精子的新鲜度已经降低，并不是最新鲜的精子。

现代优生学发现，女性卵子排放后，一般会在72小时内逐步衰老死亡。卵子最佳的受孕时间是在其排放后的24小时内。

那么如果是在卵子排放后24小时内同房，卵子是最新鲜的，精子也是最新鲜的。这样的受孕可以得到优质的胚胎，从第一步保证优生！

如何找准卵子排放后的24小时（即排卵后24小时）是优生的关键，根据排卵原理，LH（黄体生成素）激素的峰值到达时将触发排卵。LH半定量排卵试纸采用免疫层析技术和金标显色技术，使用特异性的单克隆抗体试剂固着在硝酸纤维素膜等材料上制成，可以准确的测定出LH达到峰值的时间，即排卵的准确时间，也就能把握到卵子排卵后的24小时这个最佳的受孕时机。

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一、LH半定量试纸为什么能帮助优生？

要了解 LH半定量试纸为什么能帮助优生，首先要明白优生的原理：

让精子和卵子在最新鲜、最具活力的时候结合可以得到优质的胚胎，大大降低流产几率，并降低受精卵畸变可能，是保证优生的关键之一。

也就是说，优生的关键点在于找准受孕的时间点，即精子和卵子结合的时间点。让最新鲜的精子碰到最新鲜的卵子。

因为精子在卵巢存活时间相对卵子较长，所以以前一般建议同房时间是在排卵之前，也就是说让精子先进入卵巢等待排卵，采用这样的同房时间，当卵子排出时，精子的新鲜度已经降低，并不是最新鲜的精子。

现代优生学发现，女性卵子排放后，一般会在72小时内逐步衰老死亡。卵子最佳的受孕时间是在其排放后的24小时内。

那么如果是在卵子排放后24小时内同房，卵子是最新鲜的，精子也是最新鲜的。这样的受孕可以得到优质的胚胎，从第一步保证优生！

如何找准卵子排放后的24小时（即排卵后24小时）是优生的关键，根据排卵原理，LH（黄体生成素）激素的峰值到达时将触发排卵。LH半定量试纸采用免疫层析技术和金标显色技术，使用特异性的单克隆抗体试剂固着在硝酸纤维素膜等材料上制成，可以准确的测定出LH达到峰值的时间，即排卵的准确时间，也就能把握到卵子排卵后的24小时这个最佳的受孕时机。

通过LH半定量试纸科学、方便的把握准确的排卵时间，帮助想要怀孕的夫妇做到计划安排，有的放矢，从而提高优生的几率。

二、LH半定量试纸和普通排卵试纸的区别

LH半定量试纸和普通的排卵试纸的基本原理都是通过捕捉到排卵前一定会出现的LH（黄体生成素）的一个脉冲（高峰），当有了这个高峰，排卵就会在24小时内发生。能更准确的捕捉到这个（高峰），能大大的提高受孕率。

在捕捉这个高峰的时候，LH半定量试纸和普通排卵试纸使用的技术和参数有很大区别：

1、使用的技术不一样。一般的排卵纸使用胶体金技术，LH半定量试纸是用单克隆抗体测排卵。单克隆抗体更先进，更灵敏。

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LH半定量试纸和普通排卵试纸的区别

和普通试纸的基本原理都是通过捕捉到排卵前一定会出现的LH（体生成素）的一个脉冲（高峰），当有了这个高峰，排卵就会在24小时内发生。能更准确的捕捉到这个（高峰），能大大的提高受孕率。

在捕捉这个高峰的时候，LH半定量试纸和普通排卵试纸使用的技术和参数有很大区别：

1、使用的技术不一样。一般的排卵纸使用胶体金技术，LH半定量试纸是用单克隆抗体测排卵。单克隆抗体更先进，更灵敏。

2、LH半定量试纸采用的单克隆抗体免疫层析技术捕捉到的LH水平高峰比一般测试纸要精确得多，所以怀孕成功的机会更大。

3、LH（黄体生成素）参数值不一样。一般排卵试纸的检测标准是欧美妇女的LH水平，LH半定量试纸的检测标准应当是采用中国女性的LH（黄体生成素）水平，参数更准确，更能帮助中国女性捕捉到正确的LH（黄体生成素）的脉冲（高峰）！ LH半定量试纸因人而异，能找到每个人自身LH水平的具体数值

一般排列试纸测试LH时并不知道自身的LH的水平到底是多少，只知道检测线颜色的深浅。而LH半定量检测试纸就克服了这个不足，它利用“色标”可以找到具体的数值。

1、使用LH半定量检测试纸，可以很明确地知道自己的LH水平到底是多少？40还是50？或者30；

2、根据每天测到的数值，就像画曲线一样，每个月可以画出一根LH曲线；

3、从曲线的，能够很容易地判断自己的四种情况：有正常排卵、没有排卵、内分泌功能异常、卵泡黄素化。说明书上有四种不同类型的曲线图。

（1）如果有排卵从这个曲线上很方便地就能找到哪一天是PL日；

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上回说到20xx年8月了，现在揭晓结果。哈哈！看题目就知道了！

这次呢，算是我正式试孕的第三次了，也是我从青岛回来以后的第一次演习，所以本来也没有抱有太大的希望，但是医生交代的我还是认认真真去做了。这次失败，也正好让我的造影过了第三个月，现在我是彻底安全啦！

好了，说说我这个月的具体情况，仅供参考。别再说我紧张啥的啊，我还是那个原因，老公不在，所以需要精确时间。别提了，这个精确时间也许就是失败的最大原因！他根本回不来！于是这个月，我决定什么也不做了！因为他还是不能保证能回家，我不想再浪费我的时间金钱和精力了！什么时候能回家了什么时候再开始吧！

这次监测让我很纠结，我是继续去那个给我误诊并且两次赶我走的监测呢？还是去计生服务中心呢？的医生老骂我，我挺害怕的，可是毕竟还是最的，有什么情况可以方便处理。计生服务中心的医生跟我比较熟，会给我监测很认真，可是不知道万一卵泡长太大她们是否能够处理。最后思来想去，我最终还是决定冒着挨骂的风险去吧！

7月监测情况如下：

月经7月21日（姑且还是从这一天算吧），现在想想其实应该是20日，之前一直在出血，量和月经少的时候差不多，所以不好分辨。因为20日那天没降温36.8，我不敢确定，结果21号还是没降温，36.8，但从量来说确实是月经了，25日开始吃补佳乐每天一粒。

月经第10天（30日）去监测。在进去看医生前，我很担心她又骂我，于是自作聪明地把病历本上那页给我输卵管误诊全部堵塞的结果撕掉了，没想到她不仅又一眼认出了我，而且问我病历上的东西呢？吓得我乖乖从包里掏出来了。看

完之前的误诊结果，我赶紧告诉她我做了造影了，输卵管是通的。她问我造影结果呢？我说没带，然后赶紧说别的把话题岔过去了，告诉她我要监测。

监测结果：内膜5.3A，左侧卵泡11*11，右侧卵泡11*12，医生说内膜太薄，让我补佳乐一天吃4粒！我不太敢加这么多的量，就征询了郝医生的意见，补佳乐增加到每天2粒，第11天吃了3粒（大胖的主意，说把两个医生的建议相加取个平均数吃）。那天在微博上公布了监测结果，大家比我还激动，都希望两个泡泡同时长起来，这样就是双胞胎了。于是我说，一个是黄小尚，一个是黄小夏。

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高等生物基因表达的变化是调控细胞生命活 动的核心机制，正是由于基因的差异表达才决定 了生物体的所有生命过程。因此，研究不同类型细 胞或同一类细胞在不同发育时期或不同发育状态 下基因表达的变化，已成为当今生物学的研究热 列无关的管家基因，如Ｂ一肌动蛋白（ｐ—ａｃｔｉｎ）和 甘油一３一磷酸脱氢酶（ＧＡＰＤＨ）等，因为这些基因 的转录比较稳定，含量相对丰富。将ＲＮＡ逆转录 为ｃＤＮＡ后，使靶基因和“管家基因”在同管或异 管中一起扩增，在对扩增产物进行分析时，首先根据各样本间“管家基因”扩增条带密度是否一致， 粗略地判断各样本抽提的效率、质量和扩增效率 是否一致，然后以“管家基因”扩增产物条带的密 度作为标准，计算出靶基因扩增条带密度与其之 点之－－〔１１。半定量逆转录多聚合酶链式反应（ＲＴ— ＰＣＲ，Ｒｅｖｅｒｓｅ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ ｃｈａｉｎｒｅａｅ－ ｔｉｏｎ）技术是近年来发展起来的探讨基因转录水平 的有效手段ｆ２】。与传统的Ｎｏｒｔｈｅｒｎ ｂｌｏｔ法比较，它具有灵敏、简捷、特异性高等优点，因此在检测基 因的表达水平上得到了广泛的应用。 比值，并通过观察各样本扩增产物的比值，得出靶基因的表达量的相对变化【３】。 １原理 ２反应参数 半定量ＲＴ—ＰＣＲ技术的核心即ＰＣＲ，是２０世 纪８０年代末出现的一种相对定量的技术。当人们 ２．１ ＲＮＡ的质量 在运用半定量ＲＴ—ＰＣＲ方法检测特异基因表 达量的差异时，总ＲＮＡ的质量至关重要，只有在 总ＲＮＡ未被降解的情况下，才能保证其中ｍＲＮＡ 的完整性，从而真实反映起始模板中基因表达量 的差异１４Ｊ。因此，每个ＲＮＡ样品须检查其完整性 和纯度，可以通过琼脂糖或甲醛变性电泳分析证 明总ＲＮＡ的完整性，一般在电泳图上会出现两条 欲利用该技术研究并揭示某一基因的表达产物量的改变时，利用相同量的ＲＮＡ进行反转录后，再 ＰＣＲ扩增，然后将扩增产物进行电泳判断量的差 异。为避免样本间模板质量和扩增效率的差异而 导致最终结果的差异，在ＰＣＲ反应体系中引人了 内对照系统。在一般情况下大多选用与靶基因序 收稿日期：２００７—０３—２７修订１３期：２００７—１２—１０ 作者简介：金凤媚（１９７７一），女，天津人。助理研究员，主要从事番茄分子育种研究。 万 方数据 第１期 金凤媚等：半定量ＲＴ—ＰＣＲ技术的研究及应用 带２８Ｓ和１８Ｓ，且２８Ｓ的亮度应是１８Ｓ的两倍【５】。 半定量ＲＴ—ＰＣＲ检测体系必须防止混在ＲＮＡ中 的基因组ＤＮＡ带来的假阳性，所以在抽提后一定 要用ＤＮＡ酶消解残存在样品中的ＤＮＡ。 ２．２逆转录（ＲＴ） 逆转录酶ＡＭＶ或Ｍ—ＭＬＶ能有效地逆转录 ＲＮＡ，合成模板ｃＤＮＡ，加Ｒｎａｓｉｎ（ＲＮＡ酶抑制 剂），可获得最高产量。实验证明，ｃＤＮＡ合成后残 留的完整ｍＲＮＡ模板干扰ＲＴ—ＰＣＲ，因为它与 ｃＤＮＡ竞争作为ＰＣＲ模板【６１，而ＡＭＶ和Ｍ—ＭＬＶ 反转录酶的内在ＲＮａｓｅＨ活性足以降解残存的大 多数ｍＲＮＡ模板。但使用缺乏ＲｎａｓｅＨ活性的反 转录酶时，则必须用ＲｎａｓｅＨ处理ｃＤＮＡ。 在逆转录过程中另一个需要考虑的情况是低 拷贝ＲＮＡ的反转录效率要低于高拷贝ＲＮＡ，尤 其是在反转录过程中存在大量非特异和背景 ＲＮＡ时，这种情况更为明显，因此反转录过程中 基因表达的实际情况…。２．４ Ｍ矛＋浓度对扩增效率的影响 Ｍ９２＋是影响Ｔａｑ酶扩增效率的重要因素，浓 度范围在０．５～５ ｍｍｏｌ／Ｌ，但扩增效率视序列而定。 徐春兰等【１３】的研究表明Ｍｇ：＋对细胞谷胱甘肽过氧 化物酶基因扩增的影响较大，浓度在０．５～１ｍｍｏｌ／ Ｌ时，扩增效率不理想，条带较淡，进一步应用分 析软件对电泳条带ＩＯＤ值进行分析时发现，在１．５ ｍｍｏｌ／Ｌ时扩增效率及特异性良好。而对于小 麦硫蛋白基因的检测结果，能同时稳定扩增目的 基因和内参的Ｍ９２＋浓度分别为１．７ ｍｍｏｌ／Ｌ和１．９ｍｍｏｌ／Ｌｔ叭ｏ ２．５引物的影响 ２．５．１引物问的竞争利用ＲＴ—ＰＣＲ技术对ｍＲＮＡ 进行检测时一般要在同一管中对内参照和目的基 因进行扩增。要在同一管中有效扩增出内参照和 目的基因产物，并在凝胶电泳上清晰显现，同时消 除引物对间可能的竞争，在设计引物时，除满足引 物设计的基本要求外，还应考虑

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好孕宝典

以下是店主的一些经验总结，结合了我自己和部分MM的经验，供亲们参考！

首先介绍准确测排卵日的方法：

第一：半定量排卵试纸

它可以测准排卵当天，做到优生，让新鲜卵子及新鲜精子结合，孕育优质胚胎，减少流产率的发生。同时试纸除了可以有效的测到排卵的正确时间，还可以测到无排卵，卵泡黄素化，内分泌失调，四种情况的。是目前测排卵最为准确的一款产品来的，可以精确到4-12小时。 第二：普通试纸测试法（因为试纸的预测时间是24-48小时，如果同时使用半定量和普通试纸的话，排卵时间半定量的更加接近排卵时间，可以精确到4-12小时）

首先是关于试纸的测试，以康乃格和康乃格排卵笔为例（秀儿的太敏感 大卫的又不敏感，店主暂时以处于这两种中间的康乃格为例说明）如果使用其他牌子试纸的MM可以参考是使用；

月经在28-35天之间的MM，试纸的测试从月经开始算起第10天开始测，坚持每天同一个时间段测，不要这样测，比如今天上午10点测，第2天的测试却是晚上7点，这样时间跨度长达30多小时了，容易错过最佳观测时间；测前2小时尽量不要喝水，测后试纸平放。5-15分钟可以读结果，实际上试纸半小时内显示的结果都是可以作为参考的，，等发现试纸颜色开始变得比前一天深或者自己估算接近排卵期的时候，一天需要测2次以上；用同一尿液同房用试纸和排卵笔测，以排卵笔的结果为准：

想生男孩的MM注意了，下面是一些小方法，供参考使用：

第一：AA时间，想生男孩的MM，A的时间应该在半定量测出高值转弱时（测出高值一下降就说明破卵排）4-6小时内进行第一次同房;隔12小时再同房一次；

第二：冲洗苏打水（辅助作用）小苏打使用方法：月经结束3-4天左右每天使用一次，使用6天，同房前半小时再使用一次；

阴道冲洗用法：将一袋冲洗用的碳酸氢钠粉倒在专配的一次阴道冲洗器(200ml )里再加温水后，旋上冲洗头：冲洗时，人蹲着，然后将冲洗头插入阴道，压缩瓶体药液进入阴道

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