实验一 蛋白质及氨基酸的呈色反应
一、实验目的
1、了解构成蛋白质的基本结构单位及主要联接方式
2、了解蛋白质和某些氨基酸的呈色反应原理
3、学习几种常用的鉴定蛋白质和氨基酸的方法
二、实验原理
1. 双缩脲反应(biuret reaction)
蛋白质和多肽分子中肽键在稀碱溶液中与硫酸铜共热，呈现紫色或红色，此反应称为双缩脲反应，双缩脲反应可用来检测蛋白质水解程度。
2. 茚三酮反应(ninhydrin reaction)
蛋白质经水解后产生的氨基酸也可发生茚三酮反应。
3.苯环的黄色反应
Tyr
Trp
Phe+少量浓硫酸+浓硝酸 黄色
4. 乙醛酸的反应：
检测Trp或含Trp蛋白质的反应。当Trp与乙醛酸和浓硫酸在试管中滴加时，产生分层现象，界面出现紫色环。主要是由于蛋白质中的吲哚环作用。
5. 偶氮反应
偶氮化合物都含有-N=N-这样结构，通常作为染料。
6. 醋酸铅反应
三、实验步骤
1. 双缩脲反应(biuret reaction)
取1支试管，加乳蛋白溶液（蛋清：水= 1：9）约1ml和10%NaOH约2ml，摇匀，再加1%CuSO4溶液2滴，随加随摇。观察现象，记录。
2. 茚三酮反应(ninhydrin reaction)
（1）取2支试管分别加入蛋白质溶液（蛋清：水= 1：9）和甘氨酸溶液1ml，再各加0.5ml0.1%茚三酮，混匀，沸水浴中加热1-2分钟，观察颜色是否由粉红色变紫红色再变蓝色。
（2）在一块小滤纸上滴1滴0.5%的甘氨酸溶液，风干后再在原处滴1滴0.1%茚三酮乙醇溶液，在微火旁烘干显色，观察是否有紫红色斑点的出现。
3.苯环的黄色反应
向6个试管中按下表加试剂，观察现象并记录。鸡蛋清溶液（蛋清：水= 1：9）
4. 乙醛酸的反应：
向3个试管中按下表加试剂，观察现象并记录。蛋白质溶液（蛋清：水= 1：20）
5. 偶氮反应
向3个试管中按下表加试剂，观察现象并记录。鸡蛋清为纯蛋清。
6. 醋酸铅反应
取1支试管，加入10%醋酸铅溶液1ml，再加入10%NaOH至产生的沉淀完全溶解为止，摇匀。加入被水稀释一倍的蛋白质溶液0.4ml.混匀,小心加热,至溶液变黑后,加入浓盐酸数滴,嗅气味,并将湿润的醋酸铅试纸置于管口,观察其颜色变化,记录。（蛋白质溶液为蛋清：水= 1：1）
四、注意事项
1、实验内容繁多，请认真预习、操作。
2、操作请按步骤进行
五、问题讨论
1、如果茚三酮反应呈阳性，结果颜色为何？能否用茚三酮反应可靠鉴定蛋白质存在？
2、黄色反应得阳性结果说明什么问题？
3、为什么蛋清可作为铅或汞中毒的解毒剂？
第二篇：4实验1-1
实验1－1 蛋白质的性质实验（一）
蛋白质及氨基酸的呈色反应
一、目的和要求：
（1）了解构成蛋白质的基本结构单位及主要连接方式
（2）了解蛋白质和某些氨基酸的呈色反应原理
（3）学习集中常用的鉴定蛋白质和氨基酸的方法
二、实验内容
（一）双缩脲反应
1、操作方法：取一支试管，加入卵清蛋白溶液约1毫升和10％NaOH约2毫升，摇匀，再加1％CuSO4溶液两滴，随加随摇。观察是否有紫玫瑰色的出现。
2、试剂：（1） 10％NaOH （2）1％CuSO4 （3） 2％卵清蛋白溶液
（二）茚三酮反应
1、操作方法：
（1）取2支试管分别加入蛋白质溶液和甘氨酸溶液1毫升，再各加0.5毫升0.1％茚三酮溶液，混匀，在沸水浴中加热1—2分钟，观察颜色是否由粉红色变紫红色再变蓝色。
（2）在一块小滤纸上滴一滴0.5％的甘氨酸溶液，风干后再在原处滴一滴0.1％茚三酮乙醇溶液，在微火旁烘干显色，观察是否有紫红色斑点的出现。
2、试剂：
（1） 0.5％甘氨酸溶液 （2） 0.1％茚三酮水溶液 （3） 0.1％茚三酮—乙醇溶液
（4） 蛋白质溶液：2％卵清蛋白或鸡蛋清溶液（蛋清：水＝1：9）
（三）黄色反应
1、操作方法
向6个试管中分别按下表加入试剂，观察各管出现的现象，有的试管反应慢可稍放置一会或微火加热，待各管出现黄色后，于室温下逐滴加入10％NaOH溶液至碱性，观察颜色变化。
2、试剂：（1） 鸡蛋清溶液 （2） 头发 （3） 指甲 （4） 0.5％苯酚 （5）浓硝酸
（6） 0.3％色氨酸溶液 （7）0.3％酪氨酸 （8）10％NaOH
（四）坂口反应（可定性鉴定含有精氨酸的蛋白质和定量测定精氨酸）
1、操作方法：向各管中按下表加入试剂，记录出现的现象
2、试剂：（1） 0.3精氨酸 （2） 蛋白质溶液（鸡蛋清：水＝1：20） （3） 20％NaOH
（4） NaBrO溶液：2克溴溶于100ml5％NaOH中，置棕色瓶中，可在暗处保存两周
（5） 1％α－萘酚乙醇溶液，临用时配制
（五）乙醛酸反应
1、操作方法：取3支试管，编号，分别按下表加入蛋白质溶液，色氨酸溶液和水，然后各加入冰醋酸2毫升，混匀后倾斜试管，沿壁分别缓慢加入浓硫酸约1毫升，静置，观察各管液面间紫色环的出现，若不明显，可于水浴中微热。
2、试剂：（1）蛋白质溶液（鸡蛋清：水＝1：20） （2）冰醋酸 （3）0.3％色氨酸溶液
（4） 浓硫酸（分析纯）
（六）偶氮反应
1、操作方法：取三支试管，编号，按下表所示顺序和剂量加入试剂，并观察有色产物形成。
2、试剂：（1）鸡蛋清 （2）0.3％组氨酸溶液 （3）0.3％酪氨酸溶液 （4）20％NaOH
（5）偶氮试剂：溶液A：5克亚硝酸钠溶于1000ml水中； 溶液B：5克对氨基苯磺酸溶于1000ml水中，溶解后再加入5ml浓硫酸。A、B溶液分别保存在密闭瓶中，用时以等体积混合。
（七）醋酸铅反应
1、操作方法：向试管中加入10％醋酸铅溶液1毫升，再加10%NaOH至产生的沉淀完全溶解为止，摇匀。加入被水稀释一倍的鸡蛋清0.4毫升，混匀，小心加热，至溶液变黑后，加入浓盐酸数滴，嗅其味，并将湿润醋酸铅试纸置于管口，观察其颜色的变化。
2、试剂：（1）蛋白质液（鸡蛋清：水＝1：1） （2）10％NaOH （3）浓盐酸
（4）醋酸铅试纸，用10％醋酸铅水溶液浸泡滤纸后晾干。
三、注意事项
1、实验内容繁多，请认真预习、操作
2、操作请按步骤进行
思考题：
1、如果蛋白质水解后双缩脲反应呈阴性，对水解作用的程度可作出什么结论？
2、茚三酮反应的阳性结果为何颜色？能否用茚三酮反应可靠鉴定蛋白质存在？
3、黄色反应的阳性结果说明什么问题？
4、为什么蛋清可作为铅或汞中毒的解毒剂？