细胞裂解是改变细胞通透性和活性的重要实验方法。主要分为化学法和机械法，前者比较温和，后者虽然产量高，但反应更剧烈，很有可能造成细胞中的DNA断裂。本文主要是介绍细胞的裂解方法以及实验过程中的方法探讨。

裂解方法包括化学裂解、酶裂解和机械裂解。化学裂解和酶裂解通常是比较温和的方法，通常会很少使DNA 断裂。这两种方法(包括SDS 和溶菌酶处理等)提取纯化DNA中常用的方法。机械裂解可以更均一的裂解细胞，同化学裂解相比，机械处理具有更高的裂解效率和更低的选择性。机械处理可以更剧烈和全面的裂解细胞，但也会造成DNA 的断裂。

一、机械裂解法主要有以下两种：

1.  热休克(Thermal shock)，既反复冻溶法，是一种常用的机械裂解方式比，通常由冷冻和解冻两部分组成(freezing and thawing)，。原理：由于细胞内冰粒形成和剩余细胞液的盐浓度增高引起溶胀，使细胞结构破碎。冷冻通常在液氮或-20  ℃ 冰上进行，解冻可以在37、50、65 或100 ℃水浴中进热休克比化学裂解温和，但是很有效，有资料表明用热休克和溶菌酶与SDS的方法获得了90%的细胞裂解率。

2.  超声波处理(Ultrasonication)既利用超声加热的方法，把细胞破碎。但这种处理会导致DNA 的断裂，所以加热不宜过剧烈，要设定好超声时间和间隙时间，一般超声时间不超过5秒，间隙时间最好大于超声时间，这些都有利于保护酶的活性。bead-beating 也是常用的机械处理方式，有报道指出bead-beating 比热休克和化学裂解的细胞裂解效果更好 虽然DNA产量较高，但通常得到的DNA片段较小。

二、 化学裂解和酶裂解法(在提核酸时联合使用)

主要是裂解液处理法，细胞裂解液的主要目的有以下几种：

（1）利用去污剂破坏脂质双分子层，破裂细胞；

（2）溶解蛋白；

（3）蛋白变性使其稳定；

（4）抑制蛋白酶活性。

主要根据不同的目的，裂解液的组成有所不同，主要有提取核酸和蛋白两中。在提取RNA或DNA时，我们主要是要充分裂解细胞，得到更多的核酸；如果我们的目的是蛋白，那要根据蛋白的位置、特性等因素考虑裂解液，在提取蛋白后，再根据实验需要复性蛋白等。以下是细胞裂解中常用试剂和其作用：

50 mM Tris-HCl pH 7.4(缓冲体系)，150 mM NaCl(等渗体系)，1 mM PMSF (强大的蛋白酶抑制剂)，1 mM EDTA(变性剂和稳定剂)，5 µg/ml Aprotinin(蛋白酶抑制剂)，5 µg/ml Leupeptin(蛋白酶抑制剂)，1% Triton x-100(破坏细胞)，1% Sodium deoxycholate(中度变性剂和蛋白溶解剂)，0.1% SDS(强变性剂和蛋白溶解剂)。7M 尿素，2M硫脲(可以提高膜蛋白的融解)，蛋白酶K等。

细胞裂解时间把握问题：孔板里细胞用PBS洗2次后，加入细胞裂解液，然后去测总蛋白含量和酶的活力，不知道细胞要裂解到什么程度?

答：因为所用的细胞类型不一样，所以实验的条件也需要摸索，建议这样来做：加入细胞裂解液后，不同时间取样，以时间和总蛋白含量和酶的活力作曲线，这样就可以找到裂解的最佳时间，仅供参考。

原核表达的细胞裂解问题：做原核表达，用BL21表达，之后如何裂解细胞才行呢?我的菌液只有300微升，说明书上用超声裂解细胞，但没给出具体做法，我们这只有大的探头，不好做，有什么好的办法么? 要是用超声裂解，要怎么做才行?我是超声15 s间隔10 s座4次。裂解不好，应该怎样改呀?!

答：请试一试IFCC推荐法：

1.  收集细胞悬液

2.  4  ℃  低温离心(3000 rpm，5min)

3.  弃上清，加入一定量PBS(200 ul)，轻轻吹打混匀，-20  ℃  冷冻30 min， 37  ℃  解冻，如此反复3次，可形成细胞裂解液

三、western blot细胞裂解方法个人小结：

过些天准备做western blot，昨天就提前把细胞裂解了，提出蛋白来保存。一下是我做的方法，大家参考，可能有不正确的地方，希望大家指出来，谢谢!

1.  取一瓶细胞(100 ml的瓶子)，PBS洗2次，胰酶消化，加入10 ml 培养液，制备成细胞悬液；

2.  将细胞悬液移入10 ml离心管中，4  ℃ ，2500 rpm，离心5 min；

3.  弃上清，加入预冷的PBS(即4  ℃ 存放的PBS)于离心管中，吹打，4  ℃ ，2500 rpm，离心5min；弃上清，重复上述步骤一次；共洗细胞2次，充分洗掉培养液；

4.  弃上清，加入200 ul细胞裂解液(每1 ml裂解液中加入10 ulPMSF)，置于冰上，裂解40 min～1 h；裂解过程中可用枪头吹打或间断摇动离心管，以使蛋白充分裂解；

5.  取出离心管，于4  ℃ ，12000 rpm，离心5 min；

6.  将上清移入EP管中，-20  ℃ 保存，即可。

注：本来应该在培养瓶或培养皿中裂解，但出于某种原因，我为节约细胞裂解液，故试着在离心管中裂解，不知道这样裂解是否充分。但我想这种方法也是可以考虑的。

四、核蛋白裂解液配方与步骤：

1.  核蛋白裂解液配方

Buffer A

10 mM HEPES

1.5 mM MgCl2

10 mM KCl

0.5 mM DTT，

0.05% NP40 (or 0.05% Igepal or Tergitol) pH 7.9

Buffer B

5 mM HEPES

1.5 mM MgCl2

0.2 mM EDTA

0.5 mM DTT

26% glycerol (v/v)， pH 7.9

2.  核蛋白裂解操作步骤

Method

1. Prepare 1 ml of buffer A with added cocktail of usual inhibitors from frozen stock and store on ice.

2. Add 500 μl of buffer a per large petri dish on ice and scrape thoroughly， leave on ice for 10 min.

3. Centrifuge at 4 °C at 3000 rpm for 10 min.

4. Remove supernatant and keep it (this will contain everything except large plasma membrane pieces，

DNA， nucleoli)， extract out 10 μl for Bradford assay.

5. On ice resuspend pellet in 374 μl of buffer B and add 26 μl of 4.6 M NaCl to give 300mM NaCl (high salt

helps lyse membranes and forces DNA into solution).

6. Homogenize with 20 full strokes in Dounce or glass homogenizer on ice.

7. Leave on ice for 30 min.

8. Centrifuge at 24，000 g for 20 min at 4 °C.

9. Aliquot supernatant， remove 10 μl for Bradford assay and store at -70 °C.

细胞裂解机制被广泛应用于各类的生物实验中，最突出的当属WB。为达到最佳的实验结果，需要注意的是所有的实验步骤都需在四度以下进行，并且避免过多的反复冻融。而且整个实验过程中记得戴手套。

编辑： 呜咽

第二篇：初中实验方法总结

                      初中物理实验方法总结

模型法

　　即将抽象的物理现象用简单易懂的具体模型表示。如用太阳系模型代表原子结构，用简单的线条代表杠杆等,引入光线、磁感线等。

叠加法（积累法）

　　物理学中常常把微小的、不易测量的同一物理量叠加起来，测量后求平均值的方法俗称“叠加法”。

　　【经典实验：测邮票的质量；粗测分子的大小】

控制变量法

　　自然界发生的各种现象，往往是错综复杂的。决定某一个现象的产生和变化的因素常常也很多。为了弄清事物变化的原因和规律，必须设法把其中的一个或几个因素用人为的方法控制起来，使它保持不变，然后来比较，研究其他两个变量之间的关系，这种研究问题的科学方法就是“控制变量法”。初中物理实验大多都用到了这种方法，如通过导体的电流I受到导体电阻R和它两端电压U的影响，在研究电流I与电阻R的关系时，需要保持电压U不变；在研究电流I与电压U的关系时，需要保持电阻R不变。再如探究影响动能大小的因素时，在研究动能大小与速度的关系时，要控制质量不变；在研究动能大小与质量的关系时，要控制速度不变。

实验＋推理法

　　

  

牛顿第一定律演示实验

有一些物理现象，由于受实验条件所限，无法直接验证，需要我们先进行实验，再进行合理推理得出正确结论，这也是一种常用的科学方法。如将一只闹钟放在密封的玻璃罩内，当罩内空气被抽走时，钟声变小，由此推理出：真空不能传声。

　　【经典实验：牛顿第一定律的推理】

转换法

　　一些看不见，摸不着的物理现象，不好直接认识它，我们常根据它们表现出来的看的见、摸的着的现象来间接认识它们。如根据电流的热效应来认识电流大小，根据磁场对磁体有力的作用来认识磁场等。

　　【经典实验：电流的热效应来认识电流大小，根据磁场对磁体有力的作用来认识磁场】

等效法（等效替代法）

　　在研究物理问题时，有时为了使问题简化，常用一个物理量来代替其他所有物理量，但不会改变物理效果。如用合力替代各个分力，用总电阻替代各部分电阻，浮力替代液体对物体的各个压力等。

　　【区别于转换法的一点是：等效替代法指的必须是同一个量。】【 经典实验：曹冲称象 】

  

曹冲称象

描述法

　　为了研究问题的方便，我们常用线条等手段来描述各种看不见的现象。如用光线来描述光，用磁感线来描述磁场，用力的图示描述力等。

　　类比法 在认识一些物理概念时，我们常将它与生活中熟悉且有共同特点的现象进行类比，以帮助我们理解它。如认识电流大小时，用水流进行类比。认识电压时，用水压进行类比。