肥达实验
原理:用已知的伤寒杆菌O、H抗原和甲、乙型副伤寒杆菌H抗原,与待测血清作试管或微孔板凝集实验,以测定血清中无相应抗体存在,作为伤寒、副伤寒诊断的参考。
步骤:
1、 取两块洗净晾干的20孔凹窝塑料板,分成4组,2排/每组用
蜡笔做好标记。用微量移液器于每组的1—8孔内加入生理盐水0.2ml,然后在每组的第1孔内加入已经稀释成1:10的病人血清0.2ml,吹打混匀后吸出0.2ml至第2孔,在吹打混匀后吸入0.2ml至第3孔,如此稀释到第7孔,吸出0.2ml弃去,第8孔不加病人血清,作为对照孔。同法滴2、3、4组一次作对倍稀释。
2、 于第一组各孔内加入伤寒杆菌“H”液0.2ml,同法于第2、3、
4组各孔依次加入伤寒“O”、副伤寒甲、乙菌液0.2ml;,
3、 加完菌液,振荡摇匀,置56℃温箱30—60min,取出观察结果,
记录凝集价,并做出判断。
结果判断
以能出现++凝集现象的血清最高稀释倍数为该血清的凝集效价。 ++++ 完全凝集,上层液体澄清,细菌凝集块全部沉于管底 +++ 大部分凝集,上层液轻度混浊,凝集块沉于官底
++ 部分凝集,管底仅有少量凝集块上层液体较澄清。, + 小部分凝集,管底有小量凝集块,上层液体较混浊。 — 无凝集现象,管底液体呈均匀混浊。
结果: 1 2 3 4 5 6 7 血清最低稀释
度 1:40 1:80 1:160 1:320 1:640 1:1280 1:2560
伤寒“H” ++++ ++++ +++ ++ + - - 8 对照-
伤寒“O”
副伤寒甲
副伤寒乙 ++++ - - ++++ - - +++ - - ++ - - ++ - - + - - - - - - - -
第二篇:肥达实验操作步骤
肥达实验操作步骤
1. 血清稀释:《1:20倍》0.25ml(血清)+4.75ml(生理盐水)
→混匀分别装入5支试管各0.5 ml(横排)再加2.5 ml(生理盐水)混匀加入第二排(1:40)至稀释倍数为1:320。
2. 菌悬液稀释:《1:10》→0.3 ml菌悬液(使用前混匀)+2.7
ml→生理盐水→混匀加入个试管中各0.5ml混匀(纵排)。
3. 空白对照:取5支试管各加0.5ml生理盐水+0.5ml已稀释
好的菌悬液混匀放入37.0℃水浴箱12h观察结果。