红细胞渗透脆性的测定

[目的与原理] 掌握测定红细胞渗透脆性的方法，测定不同鱼类红细胞渗透脆性并理解细胞外液渗透压对维持细胞正常形态与功能的重要性。 正常情况下，动物红细胞内的渗透压与血浆的渗透压相等，哺乳动物约相当于0.9％NaC1溶液的渗透压，鱼类的等渗溶液为0.85％～1.0％NaC1溶 液。将红细…

[目的与原理]
掌握测定红细胞渗透脆性的方法，测定不同鱼类红细胞渗透脆性并理解细胞外液渗透压对维持细胞正常形态与功能的重要性。
正 常情况下，动物红细胞内的渗透压与血浆的渗透压相等，哺乳动物约相当于0.9％NaC1溶液的渗透压，鱼类的等渗溶液为0.85％～1.0％NaC1溶 液。将红细胞置于等渗溶液中， 其形态和容积可保持不变。若将红细胞悬浮于低渗的NaC1溶液中，则水分进入红细胞使之膨胀甚至破裂溶解，但红细胞对低渗溶液具有一定的抵抗力，其抵抗力 大小与红细胞膜脆性有关。通常用不同浓度的NaC1溶液来测定红细胞膜的渗透脆性，红细胞膜渗透脆性大的，则对低渗NaC1溶液的抵抗力小，NaC1溶液 的渗透压稍有降低，此类红细胞便发生破裂而溶血。反之，脆性小的则对NaC1溶液的抵抗力大，Nac1溶液的渗透压降到很低时才使这些红细胞破裂溶血。刚 能引起一部分红细胞溶解的低渗NaCl的浓度可以代表最小抵抗值；使全部红细胞溶解的NaCl浓度为最大抵抗值。通常就以抵抗值表示红细胞的渗透脆性。在 刚成熟的红细胞，其膜的渗透脆性较小，而衰老的红细胞膜的渗透脆性较大。
[实验对象]
鲤、鲫或草鱼。
[试剂与器材]
5毫升无菌注射器，消毒棉球，中试管，小试管，试管架，滴管，1%NaCl，
蒸馏水，75%酒精，碘酒，凹瓷盘，1%肝素钠或10%草酸钾溶液，3.8% 枸橼酸钠。
[实验步骤]
1、 取小试管10支，编号后，按下表制成不同浓度的NaCl 溶液。

2、用润湿过抗凝剂的注射器 从鱼尾静脉采1毫升血，立即向每一试管中各加一滴血，将试管夹在两掌心中迅速搓动，使血液与管内NaCl溶液混匀（切勿用力震荡），室温下放置2小时后观 察结果。多余血液注入盛有0.1毫升3.8% 枸橼酸钠的试管内。加以混合，以备重复实验使用。
3、观察结果：记录开始溶血和完全溶血的两管NaCl溶液浓度。
按下列标准判断有无溶血、不完全溶血或完全溶血。
（1）上清液无色，管底为混浊红色或有沉淀的红细胞，表示没有溶血。
（2）上清液呈淡红色，管底为混浊红色表示只有部分红细胞破裂溶解，为不完全溶血。开始出现部分溶血的NaCl溶液浓度，即为红细胞的最小抵抗值，也是红细胞的最大脆性。
（3）管内液体完全变成透明的红色，管底无细胞沉积，为完全溶血。引起红细胞完全溶解的最低NaCl溶液浓度，即为红细胞的最大抵抗值，即红细胞的最小脆性。
[方法评估]
该方法筒单实用，但应严格控制血量（血液和NaCl溶液之比约为1:25）和防止血标本在体外溶血，否则易影响试验的准确度。本试验敏感性较差，需结合其他实验室检查结果进行分析。
[应用意义]
渗透脆性指标对于掌握细胞膜的特性、形态和生理功能具有一定意义，如膜的特性、流动性、结构、组成成分等的改变，均使膜的脆性发生改变。
[注意事项]
1、配制1.0%NaCl溶液，称量必须准确。
2、取血时一定要避免溶血。
3、滴加血液时要靠近液面，使血滴轻轻滴入溶液以免血滴冲击力太大，使红细胞破损而造成溶血的假象。． 4、加入血滴后，轻轻摇匀溶液，切勿剧烈振荡。
5、应在光线明亮处观察结果。如对完全溶血管有疑问，可用离心机离心后，取试管底部液体一滴，在显微镜下观察是否有红细胞存在。

第二篇：机能学实验——红细胞渗透脆性

二、 影响红细胞渗透脆性的因素有哪些？

红细胞自身因素;凡能影响红细胞表面积/体积的因素均可影响红细胞渗透脆性，如珠蛋白数量不足或完全缺乏、遗传性球形细胞增多症、自身免疫性溶血性贫血伴继发球形细胞增多、缺铁性贫血、红细胞寿命、等

实验因素：血液放置时间较长（一般不能超过6小时）、低渗盐溶液的浓度不准确、实验器具未清洁干燥、试管编号错误、向试管内滴加血液或混匀含红细胞的液体时动作用力过大、有凝血、抗凝剂用量过多、等

【课前讲解】

一、 实验设计的原理

将红细胞悬浮于低渗盐溶液中，水将在渗透压差的作用下渗入细胞，于是红细胞发生膨胀，由正常的双凹圆碟形变成球形，并开始破裂而发生溶血。红细胞在低渗盐溶液中发生膨胀破裂的现象称红细胞渗透脆性。但红细胞对低渗盐溶液具有一定的抵抗力，这种抵抗力的大小可作为衡量红细胞渗透脆性高低的指标。对低渗盐溶液抵抗力小，表示渗透脆性高；相反，则表示渗透脆性低。同一个体的红细胞对低渗盐溶液的抵抗力并不相同。将血液滴入不同浓度的低渗NaCl溶液中可检测其抵抗力的大小，刚开始出现溶血的NaCl溶液浓度为该血液中红细胞的最小抵抗力；出现完全溶血溶液浓度，为该血液中红细胞的最大抵抗力。前者代表红细胞的最大渗透脆性，后者代表红细胞的最小渗透脆性。

生理学上将渗透压与血浆的渗透压相等的溶液称为等渗溶液；能使悬浮于其中的红细胞保持正常体积和形态的溶液称为等张溶液。等渗溶液不一定是等张溶液，如1.9%的尿素溶液虽是等渗溶液，但不是等张溶液；而等张溶液溶液一定是等渗溶液，如浓度为0.85%的NaCl溶液既是等渗溶液又是等张溶液。

成败关键（注意事项）

1. 血液最好新鲜制备。

2. 准确配制不同浓度的低渗盐溶液。

3. 所有玻璃器皿要求干燥清洁。

4. 向试管内滴加血液时不可用力挤压，不可将血泡沫注入试管。混匀含红细胞的液体时动作应轻，以免造成溶血。

5. 观察溶血情况时以白色为背景。

6. 为使各管加血量相同，加血时持针角度应一致。

一、 结果分析

将红细胞悬浮于低渗盐溶液中，水将在渗透压的作用下渗入细胞，于是红细胞发生膨胀，由正常的双凹圆碟形变成球形，并开始破裂而发生溶血。红细胞在低渗盐溶液中发生膨胀破裂的现象称红细胞渗透脆性。但红细胞对低渗盐溶液具有一定的抵抗力，这种抵抗力的大小可作为衡量红细胞渗透脆性的指标。同一个体的红细胞对低渗盐溶液的抵抗力并不相同。生理情况下，衰老的红细胞可变形性减小，变成球形，因而对低渗盐溶液抵抗力低，会先发生破裂，正常人刚开始出现溶血的NaCl溶液浓度为0.46%~0.42%NaCl溶液；而较幼稚

的红细胞的抵抗力高，较后发生破裂，正常人出现完全溶血的NaCl溶液浓度为0..34%~0.32% NaCl溶液。

红细胞膜对水分子可自由通透，水分子依渗透压梯度进入红细胞，红细胞膨胀破裂而溶血，因此，红细胞在蒸馏水中立即发生溶血。

红细胞膜对尿素分子可自由通透，尿素分子依浓度梯度进入红细胞，而红细胞内的物质不能自由通过红细胞膜，导致红细胞内渗透压增高，水进入细胞，红细胞膨胀破裂而溶血，因此，

1.9%的尿素溶液虽是等渗溶液，但不是等张溶液。

NaCl分子和红细胞内的物质都不易透过红细胞膜，故红细胞在等渗的0.85%的NaCl溶液中不会发生溶血，因此，0.85%的NaCl溶液既是等渗溶液又是等张溶液。

二、 非预期结果及可能原因分析

血液放置过久；混匀血液或向试管内滴加血液时用力过大；肝素抗凝时用量过多；玻璃器皿未干燥。

2. 溶血程度不随NaCl溶液浓度改变而有规律地变化，原因主要有：

各试管加血量不准确；试管编号不准；溶液浓度配制不准。

【参考结论】

1. 红细胞在小于或等于0.46%浓度的低渗盐溶液中会发生溶血。

2. 正常人红细胞渗透脆性最高值为0.46%～0.42% 的NaCl溶液，最低值为0.34%～0.32% 的NaCl溶液。

3. 红细胞在等渗盐溶液中为双凹圆碟形，在低渗盐溶液中为球形。

4. 红细胞在等渗的尿素溶液或蒸馏水中会立即发生溶血。

【实验报告要点】

一、 为什么同一个体的红细胞渗透脆性有最大值和最小值？

同一个体的红细胞对低渗盐溶液的抵抗力并不相同。生理情况下，衰老的红细胞可变形性减小，变成球形，因而对低渗盐溶液抵抗力低，会先发生破裂；而较幼稚的红细胞的抵抗力高，较后发生破裂。将血液滴入不同浓度的低渗NaCl溶液中，刚开始出现溶血的NaCl溶液浓度为该血液中红细胞的最大渗透脆性，出现完全溶血的溶液浓度，为该血液中红细胞的最小渗透脆性。

二、 红细胞在等渗的1.9%尿素溶液中会发生什么现象？为何出现这种现象？

红细胞在等渗的1.9%尿素溶液中会立即溶血。因红细胞膜对尿素分子可自由通透，尿素分子依浓度梯度进入红细胞，而红细胞内的物质不能自由通过红细胞膜，导致红细胞内渗透压增高，水进入细胞，红细胞膨胀破裂而溶血，因此，1.9%的尿素溶液虽是等渗溶液，但不是等张溶液。

【参考内容】

一、红细胞渗透脆性实验的临床意义

【临床意义】

红细胞在低渗盐水中，水分透过细胞膜可使红细胞逐渐胀大而破坏。本试验是测定红细胞对各种浓度的低渗溶液的抵抗力。红细胞对低渗溶液抵抗力与其厚度有关，厚度越大，膜面

积与体积比值越小，则渗透脆性越大。

1.红细胞脆性增加 遗传性球形红细胞增多症，自身免疫性溶血性贫血伴球形红细胞增多者。

2.红细胞脆性减低 见于各型海洋性贫血，包括轻型，重型β海洋性贫血及血红蛋白增多病。缺铁性贫血，镰状红细胞贫血以及其它红细胞面积/体积比例增大情况，如肝病等。