实验七 贫血骨髓涂片检查（二）
一、 教学内容：
1. 巨幼细胞性贫血骨髓片观察。
2. 再生障碍性贫血骨髓片观察。
二、 目的与要求：
1. 初步掌握巨幼细胞性贫血的骨髓象特点。
2. 初步掌握再生障碍性贫血的骨髓象特点。
三、 器材、试剂与标本：
1. 器材与试剂：
（1） 显微镜
（2） 香柏油
（3） 擦镜液
（4） 擦镜纸
2. 标本：
已染色的巨幼细胞性贫血、再生障碍性贫血骨髓片
四、 检查方法：
将已染色的涂片先用低倍镜观察，选择涂片较薄，细胞分布均匀，红细胞不重叠，染色较佳的区域，在涂片上滴加一滴香柏油，转换油镜观察。
1. 再生障碍性贫血的骨髓象特点：见理论教学
2. 巨幼细胞性贫血的骨髓象特点：见理论教学
五、 拖片与擦镜：
在涂片的一端放上两张擦镜纸后滴加擦镜液，完全浸透后从另一侧拖出即可，涂片擦净后交给学习委员统一收回。另用两张擦镜纸滴加擦镜液按同一方向擦拭显微镜油镜镜头后将其放回原处。
六、 实验报告：
填写骨髓检查报告单。
实验八 红细胞渗透脆性试验
一、 教学内容：
红细胞渗透脆性试验
二、 目的与要求：
掌握红细胞渗透脆性试验的方法。
三、 原理
本试验是测定红细胞对不同浓度低渗盐水溶液的抵抗力。这主要取决于红细胞表面积与其体积之比。表面积大而体积小对低渗盐水抵抗力较大(脆性较小)；反之，则脆性增加。
四、 器材、试剂：
1. 器材：试管（架）、静脉采血器材、移液管
2. 试剂：171.1mmol/L NaCl溶液、蒸馏水
五、 操作：
3. 按表配制不同浓度的NaCl溶液。
4. 静脉采血1ml，针头斜面向上，通过6号针头向以上每管加入1滴血，轻轻摇匀，
在室温静置2h后，观察结果。
5. 同时用正常人作对照组。
六、 结果观察：
先从高浓度开始观察，上层溶液开始出现透明红色者为开始溶血管，溶液为透明红色 且管底红细胞完全消失者为完全溶血管。分别记录其各自的NaCl浓度。
七、 注意事项：（详见实验指导）
6. 浓度配制要准确。
7. 采血要顺利，避免溶血。
八、 参考值
开始溶血：4.4～4.8/L NaCl；
完全溶血：2.8～3.2g/L NaCl。
患者与正常对照溶血管的NaCl浓度相差0.4g/L具有诊断价值。
九、 临床意义
1.渗透脆性增加见于遗传性球形红细胞增多症、自身免疫性溶血性贫血伴球形红细胞增多时。
2.渗透脆性减低见于各种地中海贫血、缺铁性贫血、阻塞性黄疸、脾切除术后及某些血红蛋白病。
十、 实验报告：
第二篇：红细胞检验方法
第六章 红细胞检验方法 一、多选题： A型题
1．下列哪项检查是诊断溶血的最可靠证据 A．血清间接胆红素升高
B．网织红细胞升高>5％(0.05) C．骨髓红系明显增生 D．红细胞寿命缩短 E．尿胆原强阳性
2．诊断慢性血管内溶血最有意义的阳性结果是
A．网织红细胞升高 B．尿胆原阳性
C．尿含铁血黄素试验阳性 D．血清间接胆红素阳性 E．人球蛋白试验阳性
3．诊断急性血管内溶血最有意义的阳性结果是
A．抗人球蛋白试验阳性
B．血红蛋白血症和血红蛋白尿 C．红细胞减少 D．可见畸形红细胞
E．红细胞渗透脆性试验阳性 4．下述哪项不符合血管外溶血 A．脾肿大
B．网织红细胞增高 C．遗传性多见
D．尿含铁血黄素阳性 E．常见红细胞形态改变 5．下述哪项不是血管外溶血 A．丙酮酸激酶缺陷症
B．先天性球形红细胞增多症 C．微血管病性溶血性贫血 D．不稳定血红蛋白病
E．阵发性睡眠性血红蛋白尿
6．阵发性睡眠性血红蛋白尿时，下列哪项实验常呈阳性
A．红细胞渗透脆性试验 B．抗人球蛋白试验 C．尿含铁血黄素试验 D．异丙醇试验 E．冷凝集素试验
7．红细胞渗透脆性试验脆性增加主要见于 A．遗传性球形红细胞增多症 B．阵发性睡眠性血红蛋白尿 C．海洋性贫血 D．再生障碍性贫血
E．自身免疫性溶血性贫血
8．下述哪项不符合先天性球形红细胞增多症
A．脾肿大
B．红细胞在脾窦被破坏 C．尿胆原阳性
D．网织红细胞明显增高
E．血红蛋白电泳出现异常区带
9．下列哪项不符合先天性球形红细胞增多症
A．红细胞渗透脆性增高
B．自溶试验明显增高，加葡萄糖不能纠正
C．外周血球形红细胞大于20％ D．脾肿大明显
E．属于先天性红细胞膜异常性疾病 10．红细胞G6PD酶缺乏时，下列哪项试验呈阳性反应
A．抗人球蛋白试验 B．热溶血试验
C．高铁血红蛋白还原试验 D．酸溶血试验
E．血红蛋白电泳出现异常区带
11．下列哪项不符合G6PD缺乏症的实验室检查
A．高铁血红蛋白还原试验还原率下降 B．红细胞组织化学洗脱试验空影细胞大于30％
C．自溶血试验轻度增加，并能被葡萄糖纠正
D．氰化物一抗坏血酸试验阳性 E．抗人球蛋白试验阳性 12．珠蛋白生成障碍性贫血的主要诊断依据是
A．网织红细胞增高 B．血红蛋白尿
C．外周血出现有核红细胞 D．血红蛋白电泳异常
E．骨髓中幼稚红细胞明显增高 13．下列哪项不符合异丙醇试验 A．异丙醇浓度为17％
B．试剂pH为7．2
C．血红蛋白液应新鲜
D．每次试验应做正常对照 E．正常人呈阴性
14．下列哪项不符合冷凝集素综合征 A．抗体为IgM
B． 0～4摄氏度时凝集反应最强 C．可见红细胞呈缗钱状 D．溶血不需要补体参与 E．冷溶血试验阴性 15．诊断温抗体型溶血性贫血的最重要的实验室检查是
A． Ham试验 B ．Coombs试验
C ．Donath－Landsteiner试验 D．免疫球蛋白测定 E．血红蛋白电泳
二、名词解释 1．血管内溶血 2．PNH
3．自身溶血试验 4．丙酮酸激酶缺乏症
三、论述题
1．抗人球蛋白试验的原理是什么?
2．哪些实验室检查结果可以显示有溶血性贫血的可能性?
3．G6PD酶缺乏症的筛选和确诊试验可有哪些? 答案
一、选择题
1.D. 2.C. 3.B. 4.D. 5.E. 6.C. 7.A. 8.E. 9.B. 10.C. 11.E. 12.D. 13.B. 14.D. 15.B
二、名词解释
1．红细胞内在缺陷或外在溶血因素所致，红细胞在血管内被直接破坏，血红蛋白进入血浆，临床以血红蛋白血症和血红蛋白尿为主要特征，遗传性多见。
2．是一种后天获得性造血干细胞基因突变引起的溶血病。临床表现为与睡眠有关的间歇性溶血发作，以血红蛋白尿为主要特征，多为慢性血管内溶血，可伴有全血细胞减少和反复血栓形成。 3．红细胞在37℃孵育48小时，其间由于膜异常引起钠离子内流明显增加，ATP消耗过多，或糖酵解途径酶缺乏所引起脚生成不足等原因导致溶血，称为自身溶血试验。 4．由于红细胞内丙酮酸激酶缺乏，ATP生成减少，钠泵、钙泵功能受损引起的慢性溶血性贫血，属常染色体隐性遗传。 三、论述题
1．抗人球蛋白试验是检测自身免疫性溶血性贫血自身抗体的试验。分为抗人球蛋白直接试验和抗人球蛋白间接试验。直接试验是检测红细胞表面有无不完全抗体的试验，应用抗人球蛋白试剂与红细胞表面的IgG分子结合，如红细胞表面存在自身抗体，则出现凝集反应。间接试验是检测血清中有无不完全抗体的试验，应用Rh(D)阳性0型正常人红细胞与受检血清混合孵育，如血清中存在不完全抗体则红细胞致敏，再加入抗人球蛋白试剂可出现凝集。
2．血红蛋白尿；外周血网织红细胞增多；间接胆红素试验阳性、尿胆原强阳性；外周血可见异常形态红细胞和破碎红细胞；骨髓有核细胞增生活跃，以红系为主，粒/红比值降低甚至倒置。
3．筛选实验包括：高铁血红蛋白还原试验、变性珠蛋白小体生成实验、葡萄糖-6-磷酸脱氢酶荧光斑点试验、硝基四氮唑蓝试验；确诊实验包括葡萄糖-6-磷酸脱氢酶活性测定和分子生物学手段研究G6PD基因片段长度多肽性、确诊基因的酶缺陷型、找出突变位点等。