细胞生物学实验报告
细胞凝集反应
【实验目的】
⒈了解细胞膜的表面结构。
⒉掌握凝集素促使细胞凝集的原理。
⒊学习研究细胞凝集反应的方法。
【实验原理】
⒈细胞膜是双层脂镶嵌蛋白质结构，脂和蛋白质又能和糖分子结合为细胞表面的分枝状糖外被。目前认为：细胞间的联系，细胞的生长和分化，免疫反应和肿瘤发生都和细胞表面的分枝状糖外被有关。
⒉凝集素（lectin）是一类含糖（少数例外）并能与糖专一结合的蛋白质，它具有凝集细胞和刺激细胞分裂的作用。凝集素使细胞凝集是由于它与细胞外被中的糖分子连接，在细胞间形成“桥”的结果，加入与凝集素互补的糖可以抑制细胞的凝集。
【实验用品】
⒈材料
土豆块茎、家兔。
⒉试剂
⑴PBS缓冲液
称取NaCl 7.2g、Na2HPO4 1.48g、KH2PO4 0.43g，加蒸馏水，定容至1L，调pH至7.2。
⑵1％肝素溶液
0.1g肝素溶解于10mL0.9％氯化钠溶液中。
⒊器材
5mL注射器、酒精棉球、双凹片、普通光学显微镜、托盘天平、滴管、离心管。
【实验程序】
⒈以无菌方法抽取兔耳缘静脉血液（5mL注射器先吸取3mL1％肝素溶液）1mL，用0.9％氯化钠溶液洗5次，每次3000r/min离心5min，最后按沉淀的红细胞体积用0.9％氯化钠溶液配成1％红细胞悬液。
⒉称取去皮土豆块茎2g，切成薄片，加10mLPBS缓冲溶液，浸泡2h，浸出的粗提取液中含有可溶性土豆凝集素。
⒊用滴管吸取土豆凝集素和PBS缓冲液各一滴，置于双凹片的左右两孔内，再分别滴入一滴1％红细胞悬液，振荡10min。
4.待红细胞液发生明显凝集反应后，将双凹片置于显微镜下观察。
【实验结果】
⒈结果
细胞凝集反应实验现象
⒉图像
加土豆凝集素 加PBS缓冲液
【分析与讨论】
⒈结果分析
实验过程中可以观察到：在双凹片上，加有土豆凝集素的一侧，震荡过程中，红细胞液先变浑浊，随后又变澄清，同时发生凝集反应，且凝集后的块状物聚集在液滴中央；而加有PBS缓冲液的一侧，震荡过程中，红细胞不发生明显变化，静置后，后细胞逐渐集中于液滴中间部位，而四周表现为澄清。
从对照实验中可以看出：细胞发生凝集时凝集素必不可少的，没有细胞凝集素，细胞几乎不发生凝集。
⒉注意事项
⑴实验中不能用40倍物镜，应该用10倍或4倍物镜，否则会弄脏镜头。
⑵实验前，可用手摸双凹片，已确认正反面。
⑶实验时，摇晃双凹片应注意手法，不可将液体摇出凹处。
⑷注意控制加入双凹片孔中的液体的量，以免双凹片的2个孔中液体混合。
⑸样品加到孔中后，摇一下双凹片，并进行计时。
⑹摇晃中，PBS缓冲液一侧的红细胞会集中于中央，这不是因为发生了细胞凝集，是摇晃手法的问题。
⑺用显微镜观察时，由于活细胞是无色的或颜色太浅，应将光线调暗些，否则就难以观察到细胞。
⑻抽血时时间不宜过长，否则血液会凝集；速度不宜过快，因为兔耳缘静脉很细，血量不大。
⑼抽血前后的整个过程中，应尽量减少对动物的刺激，否则可能对实验结果产生影响。
⒊收获
实验中，由于加大了凝集素的量，凝集现象更明显了。由此可以推测：红细胞的凝集程度与凝集素的量有关，二者呈正相关，即浓度越高，越易凝集，浓度越低，越不易凝集。
第二篇：细胞生物学重点
细胞生物学重点
题型：1、填空（15×1’）
2、是非判断（10×1’）
3、名词解释（8×3’）
4、简答（5×7’）
5、论述（1×16’）
一、填空、名词解释重点 低密度脂蛋白是富含胆固醇的脂蛋白，其胆固醇主要来自从CE转运的高密度脂蛋白中的胆固醇。它的降解是经低密度脂蛋白受体途径进行代谢。
溶酶体标志酶——酸性磷酸酶。
细胞膜向外分泌的蛋白作用于糙面内质网上。
细胞骨架由微管、微丝组成。秋水仙素破坏微管，紫杉醇维护微管。
肌纤维由粗细肌丝组成。肌球蛋白是发动机，组成粗肌丝；肌动蛋白组成细肌丝。 个体细胞大小不一样，同一个体基因组相同。
膜蛋白分为糖蛋白、载体蛋白、通道蛋白。
信号分子举例：内分泌激素、神经递质、局部激素。
细胞分为:周期中细胞、G0期细胞、终末分化细胞
名词解释：
细胞学说：细胞学说包括三方面内容： 1.细胞是一切多细胞生物的基本结构单位，对单细胞生物来说，一个细胞就是一个个体； 2.多细胞生物的每个细胞为一个生命活动单位，执行特定的功能； 3.现存细胞通过分裂产生新细胞。
细胞外被：又称糖萼，曾用来指细胞质膜外表面覆盖的一层粘多糖物质，实际上，细胞外被中的糖与质膜中的蛋白分子或脂类分子是共价结合的，形成糖蛋白和糖脂，所以，细胞外被应是细胞质膜的正常结构组分，它不仅对膜蛋白起保护作用，而且在细胞识别中起重要作用。 分子伴娘：又称分子伴侣，是指一类在序列上没有相关性但有共同功能的蛋白质，它们在细胞内帮助其他含多肽的结构完成正确的组装，而且在组装完毕后与之分离，不构成这些蛋白质结构执行功能时的组份。
分子开关：分子开关是指通过激活机制或失活机制精确控制细胞内一系列信号传递的级联反应的蛋白质。细胞内信号传递作为分子开关的蛋白质可分两类：一类开关蛋白，另一类主要开关蛋白由GTP结合蛋白组成。
自体组装：是生物大分子借助本身的力量自行装配成高级结构，这种组装也需要一种称为分子伴侣的蛋白介导，如核小体的组装就需要核质素的介导。
Na-K离子泵：相当于Na+-K+ATP酶，Na—K 泵首先在膜内侧与细胞内的 Na 结合，ATP 酶活性被激活后，由 ATP 水解释放的能量使“泵”本身构象改变，将 Na 输出细胞；与此同时， “泵”与细胞膜外侧的 K 结合，发生去磷酸化后构象再次改变，将 K 输入细胞内
受体：是一类存在于胞膜或胞内的，能与细胞外专一信号分子结合进而激活细胞内一系列生物化学反应，使细胞对外界刺激产生相应的效应的特殊蛋白质。
配体：同锚定蛋白结合的任何分子都称为配体
载体蛋白：指多回旋折叠的跨膜蛋白质，它与被传递的分子特异结合使其越过质膜。其机制是载体蛋白分子的构象可逆地变化，与被转运分子的亲和力随之改变而将分子传递过去。糖、氨基酸，核苷酸等一般由载体蛋白运载。
分子发动机：将细胞内利用ATP供能，产生推动力，进行细胞内的物质运输或细胞运动的蛋白质分子称为分子发动机或发动机蛋白
内膜系统：是真核细胞特有的结构，主要包括内质网、高尔基复合体、溶酶体、各种转运小泡以及核膜和过氧化物酶体等功能结构。
酶联受体：既是受体又是酶，都是一次跨膜的，形成同源或异源二聚体发挥作用，一旦被配体激活即具有酶活性并将信号放大，又称催化受体。
离子通道偶联受体：具有离子通道作用的细胞质膜受体称为离子通道受体。这种受体见于可兴奋细胞间的突触信号传导，产生一种电效应，如烟碱样乙酰胆碱受体(nAchR)、γ-氨基丁酸受体(GABAR)和甘氨酸受体等都是离子通道偶联受体。
受体介导的内吞作用（受体配体的识别结合）：是细胞依靠细胞表面的受体特异性地摄取细胞外蛋白或其他化合物的过程。细胞表面的受体具有高度特异性，与相应配体结合形成复合物，继而此部分质膜凹陷形成有被小窝，小窝与质膜脱离形成有被小泡，将细胞外物质摄入细胞内。
信号识别颗粒（SRP）：在真核生物细胞质中一种小分子RNA和六种蛋白的复合体，此复合体能识别核糖体上新生肽末端的信号，顺序并与之结合，使肽合成停止，同时它又可和ER膜上的停泊蛋白识别和结合，从而将mRNA上的核糖体，带到膜上。SRP上有三个结合位点：信号肽识别结合位点，SRP受体蛋白结合位点，翻译暂停结构域。
信号肽：指新合成多肽链中用于指导蛋白质的跨膜转移（定位）的N-末端的氨基酸序列 离子通道偶联受体（CDK）：具有离子通道作用的细胞质膜受体称为离子通道受体。这种受体见于可兴奋细胞间的突触信号传导，产生一种电效应，如烟碱样乙酰胆碱受体(nAchR)、γ-氨基丁酸受体(GABAR)和甘氨酸受体等都是离子通道偶联受体。
G蛋白：是指能与鸟嘌呤核苷酸结合，具有GTP水解酶活性的一类信号转导蛋白。
论述、简答题:
1、生物膜的化学组成和结构。
生物膜主要有脂质和蛋白质组成，此外，还有少量的糖类。其中脂质约占膜总量的50%，蛋白质约占40%，糖类占2%-10%
膜的结构模型是流动镶嵌模型，其以磷脂双分子层为基本支架，蛋白质镶嵌在其中，糖以结合形式从在，其中的各成分是可流动的
2、生物膜具有哪些特征？各具有什么生物意义。
生物膜的主要特征：?不对称性?流动性?选择透性
生物意义：?不对称性主要是指膜脂和膜蛋白的不对称，包括种类和数量的差异，这可以保证膜功能的不对称和方向性，保证生命活动的高度有序。
?流动性包括膜脂和膜蛋白的流动性，细胞的物质运输，细胞识别，细胞免疫，细胞分化和信号转导等功能都和膜的流动性有关，其中细胞膜中含有的酶，它们的活性也和膜的流动性相关。在物质运输中，如受体介导的胞吞作用都依靠生物膜的流动性
?选择性透性可以保证细胞内环境的稳定。
3、蛋白质三种必需信号序列的作用，各自举例及说明意义
蛋白质三种必需信号序列：入核信号、引导肽和信号肽。
各自作用：入核信号指导核蛋白的运输，引导肽指导线粒体、叶绿体和过氧化物酶体蛋白的运输，信号肽则指导内膜系统的蛋白质运输。
细胞中两类蛋白质分选的信号：?信号序列?信号斑（存在于完成折叠的蛋白质中，构成信号斑的信号序列之间可以不相邻，折叠在一起构成蛋白质分选的信号）
4、染色体DNA 的三种功能元件及其结构特点
三种功能元件是DNA复制起点，着丝粒，端粒
结构特点：?DNA复制起点，简单来说就是一段DNA序列。从酵母中最早分离出真核生物染色体复制子中启动DNA复制的序列，称为自主复制序列
?着丝粒。在两条姐妹染色单体相连处，有一个向内凹陷的缢痕，称为主缢痕，光镜下相对不着色。着丝粒处于主缢痕的内部，是主缢痕的染色质部位。
?端粒是短的多重复的非转录序列及一些结合蛋白组成特殊结构，除了提供非转录DNA的缓冲物外，它还能保护染色体末端免于融合和退化，在染色体定位、复制、保护和控制细胞生长及寿命方面具有重要作用，并与细胞凋亡、细胞转化和永生化密切相关
各自意义：① DNA复制起点，至少一个，确保染色体在细胞周期中能够自我复制，维持染色体在细胞世代传递中的连续性
②着丝粒，一个，使细胞分裂时已完成复制的染色体能平均分配到子细胞中
③端粒，两个，在染色体末端，保持染色体的独立性和稳定性
5、滑/光面内质网的结构和生理功能。
光面内质网多是管泡状，仅在某些细胞中很丰富，并因含有不同的酸类而功能各异。
生理功能：①类固醇激素的合成，在分泌类固醇激素的细胞中；光面内质网膜上有合成胆固醇所需的酶系，在此合成的胆固醇再转变为类固醇激素；
②脂类代谢-小肠吸收细胞摄入脂肪酸、甘油及甘油一酯，在光面内质网上酯化为甘油三酯，肝细胞摄取的脂肪酸也是在光面内质网上被氧化还原酶分解，或者再度酯化；光面内质网还可以参与脂肪酸的去饱和作用。
③解毒作用-肝细胞的光面内质网含有参与解毒作用的各种酶系，某些外来药物、有毒代谢产物及激素等在此经过氧化、还原，水解或结合等处理，成为无毒物质排出体外；
④离于贮存与调节-横纹肌细胞中的光面内质网又称肌浆网，其膜上有钙泵，可将细胞质基质中的Ca2+泵入、贮存起来，导致肌细胞松弛，在特定因素作用下，贮存的Ca2+释出，引起肌细胞收缩。胃底腺壁细胞的光面内质网有氯泵，当分泌盐酸时将CIˉ释放，参与盐酸的形成。
6、减数分裂和有丝分裂的特点和生物学意义。
减数分裂特点：染色体复制一次，而细胞连续分裂两次，结果子细胞中的染色体数目比原来减少一半。
有丝分裂特点：是将亲代细胞的染色体经过DNA复制以后，精确地平均分配到两个子细胞中去。
有丝分裂意义是：在生物的亲代和子代之间保持了遗传性状的稳定性，对于生物的遗传有重要意义。
减数分裂的意义是：加大了生物遗传信息突变和重组的概率，加速了生物的进化的概率。
7、溶酶体的生物发生过程及其生理功能。
生物发生过程：溶酶体的酶类在内质网上起始合成， 跨膜进入内质网的腔， 在顺面高尔基体带上甘露糖6-磷酸标记后在高尔基体反面网络形成溶酶体分泌小泡， 最后通过脱磷酸成为成熟的溶酶体．
生理功能：溶酶体内含有蛋白酶、酯酶核酸酶等几十种酸性水解酶。溶酶体内的水解酶可以降解细胞内大分子物质，还可以分解由外界进入细胞的病毒、细菌等异物，并加以再利用；在细胞衰老进程中和输导组织分化时，溶酶体酶会自动破裂，释放出水解酶，降解原生质体部分。
8、cAMP信号通路 又称PKA系统PKA系统，是G蛋白偶联系统的一种信号转导途径。
作用过程：信号分子作用于膜受体后，通过G蛋白激活腺苷酸环化酶, 产生第二信使cAMP后,激活蛋白激酶A进行信号的放大。故将此途径称为PKA信号转导系统。如胰高血糖素和肾上腺素都是很小的水溶性的胺,它们在结构上没有相同之处,并作用于不同的膜受体, 但都能通过G蛋白激活腺苷酸环化酶, 最后通过蛋白激酶A进行信号放大。
9、IP3、DAG通路 又称PKC系统，在这一信号转导途径中,膜受体与其相应的第一信使分子结合后，激活膜上的G蛋白,然后由G蛋白激活磷酸脂酶 PLC, 将膜上的 PIP2分解为两个细胞内的第二信使： DAG和IP3。IP3动员细胞内钙库释放Ca2+到细胞质中与钙调蛋白结合，随后参与一系列的反应；而DAG在Ca2+的协同下激活PKC，然后通过蛋白激酶C引起级联反应，进行细胞的应答,。 10、周期蛋白，周期蛋白cdk作用
周期蛋白：是一类呈细胞周期特异性或时相性表达、累积与分解的蛋白质，它与周期素依赖性激酶共同影响细胞周期的运行。
作用：参与细胞周期调控，并且其浓度在细胞周期中是浮动的,呈周期性变化。随着细胞周期阶段的不同，有时浓度高达几千倍，有时又降为零。周期蛋白作为一种调节亚基，与周期蛋白依赖性的蛋白激酶结合并将之激活。
周期蛋白cdk：指蛋白激酶，一类催化蛋白质磷酸化反应的酶。它能把腺苷三磷酸（ATP）上的γ-磷酸转移到蛋白质分子的氨基酸残基上。在大多数情况下，这一磷酸化反应是发生在蛋白质的丝氨酸残基上。。①底物专一的蛋白激酶：如磷酸化酶激酶，丙酮酸脱氢酶激酶等。②依赖于环核苷酸的蛋白激酶：如环腺苷酸（cAMP）蛋白激酶，环鸟苷酸（cGMP）蛋白激酶。③其他蛋白激酶：如组蛋白激酶等。