山东大学细胞生物学实验报告
姓名：高超 年级：20##级生科三班 学号:201300140020 实验名称：苏丹Ⅲ染色观察小鼠脂肪 同组者：樊晓航，王昊明，余敬洋一，实验目的：
1，了解小鼠膜的剪取方法，以及小鼠的内部结构。
2，掌握并了解苏丹三染色的原理及方法。
3，理解苏丹Ⅲ脂类染色的基本原理。
二，实验原理：
脂类细胞化学的主要目的是研究细胞中脂类物质的成分变化以及分布。
在动物细胞中，脂肪是动物体主要的储能物质，很多种细胞都含有脂肪。通常，细胞中的脂肪和类脂体混合物以游离的液滴状态悬浮在细胞质中，比如肝细胞。在脂肪含量很高的脂肪细胞中，游离的脂肪液滴可以聚集在一起，占据大部分细胞质空间，将细胞质、细胞核挤到细胞边缘。
脂类染色最常用的染料是苏丹系列染料，本实验即使用苏丹Ⅲ为脂肪显色。苏丹Ⅲ是一种橙红色偶氮染料，由于其在脂肪中的溶解度高于在乙醇中的溶解度，当用70%乙醇溶解的苏丹Ⅲ饱和溶液浸染脂肪细胞时，苏丹Ⅲ会从70%乙醇中脱离，溶解并集中在脂肪液滴中，使脂肪细胞着色（橘黄色）。以70%乙醇作为苏丹Ⅲ的溶剂可以减少乙醇对脂肪细胞中脂肪液滴的溶解，染色较大的脂肪块。染色的主要过程不涉及化学变化。
三，实验器材及材料
1，器材 ：镊子两把 显微镜 托盘一个 剪刀一把 滴管一支 载玻片（盖玻片）
2，试剂：苏丹Ⅲ染液 蒸馏水 70%乙醇 生理盐水 甲醛钙溶液
四，实验步骤:
1、断头法处死小鼠，置于解剖盘中，剪开腹腔，用镊子提起小肠将盖玻片紧贴于肠系膜，用剪刀连同盖玻片和其上粘的肠系膜取下，反扣于已滴加甲醛钙的载玻片上，固定 20min。
2、用吸管吸取蒸馏水滴入载玻片与盖玻片之间冲洗掉甲醛钙溶液。
3、用70%乙醇溶液代替蒸馏水重复步骤二的操作，冲洗。
4、滴加苏丹Ⅲ于盖玻片上，染色30min。
5、吸去载玻片上溢出的染液，擦净载玻片表面及周边，显微镜观察。
五，实验结果及分析：
脂肪细胞呈圆球形，内充满橘黄色之类物质 
由于肠系膜标本过厚，细胞染色效果起初不太明显，脂肪细胞渐渐变为橘黄色，可观察到清晰的脂肪细胞，但细胞分散程度较差，单细胞形态较为少见，细胞质较难观察的到。随着染色时间增长，基本可以分辨出脂肪滴与细胞质。六，实验总结：
1，制作肠系膜玻片时要注意去除血管组织，尽量将其压薄，便于后期染色，观察。
2，染色必要时可采取反扣盖玻片染色，以保证染色充分，均匀。
3，染色完后去除多余染液以便于观察。
第二篇：细胞生物学实验报告
细胞生物学实验报告
小鼠睾丸染色体的制备与观察
姓名：杜旭 学号：201100230155 系年级：20##级临七一班 同组者：赵伟 日期：2012/5/16
【实验目的】
⒈了解小白鼠睾丸细胞染色体的形态及数目。
⒉初步掌握小白鼠睾丸细胞染色体的玻片标本制作方法。
⒊观察动物细胞染色体的数目和形态。
【实验原理】
⒈制作染色体标本的先决条件：
⑴细胞具有旺盛的分裂能力（①选择活跃的组织如睾丸、骨髓。②施加药物使细胞分裂如PHA）
⑵设法得到大量中期细胞，秋水仙素处理。
⒉操作方法
利用睾丸细胞的制片技术虽然需要离心以及细致的操作，但其基本程序是简便的。在小鼠睾丸中，细胞有丝分裂和减数分裂比较旺盛，因此不需要体外培养就可以直接得到分裂中期细胞。通过小鼠睾丸得到染色体比较简便，一般不需要无菌操作。用秋水仙素作为有丝分裂的抑制剂。
由于小鼠睾丸细胞分裂活动旺盛，具有高度的分裂能力，本实验采用这一材料，通过前处理，低渗，固定，制片，染色等步骤制得染色体标本，可观察到许多处于分裂中期的染色体，可以进行染色体组型分析。
减数分裂是细胞分裂染色体数目减半时发生在性细胞的形成过程中。哺乳动物在性成熟以后，精巢内的性细胞总是在分批分期不断的成熟，因此，对哺乳动物的精巢进行一定的技术处理，随时都可以获得减数分裂过程中各个时期染色体的标本。
用适量的秋水仙素溶液注入动物腹腔内，可以阻止分裂细胞纺锤丝的形成，从而积累大量处于分裂中期的细胞。利用上述原理，通过常规的制片方法，观察小鼠睾丸细胞的染色体。
⒊中期染色体的特征
⑴突出在纺锤丝的牵引下，染色体的着丝点集中到细胞中央的道板上；
⑵DNA高度螺旋化。短粗的染色体清晰可见，染色体数目形态稳定，便于观察；
⑶由于染色体高度集中，造成纺锤体清晰可见。
通过本实验的结果看，本实验要想做的较好不太容易，需要娴熟的技术和耐心。
◆染色体组型又名核型，是指根据染色体的长度、形态和着丝粒的位置将中期染色体依照所规定的标准顺序和组次予以系统排列而成的模式图，它代表了一个个体或物种的染色体特征。进行染色体组型主要依据有以下几个参数: ① 相对长度(relative length): 指单个染色体的长度与包括X染色体在内的单倍体染色体总长度之比，相对长度=单条染色体的长度/(单倍体常染色体+X染色体)的总长度×100%。②臂指数(arm index): 指染色体长臂与短臂的比率，臂指数=长臂/短臂。③ 着丝粒指数(centromere index): 指短臂占整个染色体长度的比率，着丝粒指数=短臂/整个染色体长度×100%, 该比率决定了着丝粒在染色体中的相对位置。④染色体的臂数: 对于端部着丝粒染色体，臂数为1，其它为2。根据Levan(1964)所制定的人类染色体标准，臂指数在1.0~1.7之间的染色体为中央着丝粒染色体，在1.7~3.0之间为亚中央着丝粒染色体，在3.0~7.0间为亚端部着丝粒染色体，大于7.0为端部着丝粒染色体；着丝粒指数在50.0~37.5之间的染色体为中央着丝粒染色体，在37.5~25.0之间为亚中央着丝粒染色体，在25.0~12.5之间为亚端部着丝粒染色体，小于12.5为端部着丝粒染色体。
⒋ 原理分析
通过获取小鼠睾丸细胞（分裂能力强），本实验采用这一材料，通过前处理，低渗，固定，制片，染色等步骤制得染色体标本，可观察到许多处于分裂中期的染色体，可以进行染色体组型分析。一般观察有丝分裂中期，染色体的形态最典型、最易辨认和区分。因此，制备染色体标本获取的是中期细胞。
【实验用品】
⒈材料
小白鼠
⒉试剂
秋水仙素、 0.3% KCl低渗液、 固定液（甲醇：冰醋酸=3：1）、 Giemsa染液、 0.9%生理盐水、 柠檬酸钠溶液
⒊仪器
注射器、针头、解剖盘、解剖剪、 镊子、玻璃吸管、 10ml刻度的离心管、离心机、 载玻片、 盖玻片、 显微镜、擦镜纸、 铜网
【实验步骤】
●预处理→取睾丸→剪碎→离心→低渗→离心→固定→离心→固定→滴片→染色→观察
⒈预处理：取雄性小鼠按每克体重注射4ug，给小白鼠注射秋水仙素，经14-16h后，断头法杀死小鼠，去除睾丸用生理盐水（0.9%的NaCl）洗去血污；
⒉放入装有1ml 0.3%KCl液的小烧杯中剪碎（呈乳白色）；
⒊用铜网过滤到刻度离心管中，再加0.3%KCl液至4ml；
⒋37℃静置30min，进行低渗处理；
⒌离心：800-1000r/min 离心8min ,弃上清
⒍加入2ml甲醇冰醋酸固定液（3:1），并用吸管吹气，轻轻打散细胞，固定8min；
⒎再以800-1000r/min 离心8min；
⒏弃去上清液，加1ml固定液，制成细胞悬液固定5min；
⒐取清洁的低温预冷载片，距10-15min高度滴下2-3滴细胞悬液，从一边轻轻吹气并随时轻轻敲打，以使细胞均匀分布和促进染色体展开；
⒑用滤纸擦去载片上多余液体，空气干燥后染色20-30min，用自来水冲洗后可观察；
⒒观察：先用低倍镜寻找细胞及中期分裂相，然后转入高倍镜下观察并记录。
?对实验步骤的分析简介如下：
⒈ 预处理——为了取出小鼠的睾丸细胞，在此之前要进行秋水仙素的注射，目的在于抑制纺锤丝的形成，使染色体排列在赤道板上，便于观察，而不至于纺锤丝的牵引下移动向细胞两极；
⒉ 低渗——此步骤不能使细胞因吸水而涨破；
⒊ 离心——务必要控制在800-1000r/min，过大会使细胞涨破，导致实验失败，时间也要控制，过长也会影响观察；
⒋ 固定——用固定液固定小鼠睾丸细胞，使细胞达到我们想要的状态；
⒌ 滴片——距10-15min高度滴下细胞悬液，并吹气和敲打，目的在于使细胞均匀分布和促进染色体展开；
⒍ 染色——采用倒置染色法，目的在于可使载玻片充分接触染液，若有杂质也可沉降至底部，不会和玻片直接接触。
【实验结果】
未观察到清晰的中期染色体
【分析与讨论】
⒈结果分析（可能的原因）
⑴滴片时的高度很重要，高度过低细胞不会破裂；过高则染色体过于分散甚至丢失，无法辨别出染色体的准确数量。
⑵低渗处理不好。低渗液的量、处理时间均与细胞的数量有关。低渗过度，细胞会破裂；低渗不足则染色体在一起，分散不开。
⑶离心速度或离心时间的影响。离心速度过大或离心时间过长，则会引起细胞破裂；反之，离心速度过小或离心时间过短，则细胞沉降不下来，则会引起大量细胞的丢失。
⑷固定液要随用随配，固定彻底后再打散细胞团块，否则细胞容易破碎，染色体分散亦受到影响。
⑸用吸管吹散细胞时用力必须尽量轻柔，用力过大则会造成细胞破裂，而染色体也会弥散在溶液中，在随后的离心中将会丢失。
⒉注意事项
⑴有足够量的细胞
⑵滴片时注意，保持一定高度，准确滴在玻片上，不能重叠，用嘴向一个方向吹气（避免用力，否则会被吹到一端）。
⑶自来水冲洗要掌握时间，避免标本褪色。
⑷低渗与离心等步骤的操作要轻。