溶血实验

1.浓度

2.溶液配制

D-PBS：Dulbecco’s Phosphate Buffered Saline

3.方法

⑴新鲜血液2ml至用抗凝剂肝素预处理的采血管中。

⑵加入4ml D-PBS，10000g离心5min。

⑶弃上清，补加D-PBS至10ml，混匀后10000g离心5min。

⑷重复⑶4次，至上清澄清透明。

⑸加入20ml D-PBS重悬红细胞。

⑹将0.2ml红细胞悬液与0.8ml材料工作液混合。以加0.8ml水作为阳性对照组，0.8ml D-PBS为阴性对照组。

⑺各组设4个平行，4h后，10016g离心5min，各取样品100ul至96孔板测定577nm吸光度，以655nm吸光度为参考。

溶血率% =[(OD样品-OD阴性)/(OD阳性–OD阴性)]×100%

取健康非吸烟男性志愿者静脉血3 ml。取2 ml血液，加入4 ml PBS，涡旋混匀。4 ℃，10020 g离心10 min。小心移除上清，补加PBS至10 ml，混匀后离心，PBS重复处理5次至上清澄清透明。最后将红细胞用PBS定容至20 ml重悬混匀。用PBS配制三种HAP纳米粒子的梯度工作液：100 µg/ml，50 µg/ml，25 µg/ml，12.5 µg/ml，6.25 µg/ml。用0.2 ml上述红细胞重悬液与0.8 ml纳米粒子工作液混合，得到纳米粒子的终浓度为80 µg/ml，40 µg/ml，20 µg/ml，10 µg/ml，5 µg/ml。0.2 ml红细胞悬液与0.8 ml PBS混匀为阴性对照，0.2 ml红细胞悬液与0.8 ml无菌三次水混匀为阳性对照，各组设3个平行。涡旋混匀后，于37 ℃孵育3 h，10020 g离心10 min，各样取100 µl上清，于570 nm处测吸光度值。溶血率计算方法如下：溶血率% = [(OD样品-OD阴性)/ (OD阳性 – OD阴性)] × 100%。

第二篇：酸溶血试验

酸溶血试验

1.酸溶血试验的原理：阵发性睡眠性血红蛋白尿症（PNH）患者体内存在对补体敏感的红细胞。酸化血清溶血试验，也称Hamtest，即红细胞在酸性（pH6.4～6.5）的正常血清中孵育，补体被激活，PNH红细胞破坏而产生溶血。而正常红细胞不被溶解，无溶血现象。

2.适应症：本试验阳性主要见于PNH,某些自身免疫性溶血性贫血发作严重时也可阳性。

3.试验仪器：水温箱，离心机

① 试验试剂：同型正常人血清或AB型血清：取正常人同型或AB型血5ml分离血清备用（37℃孵育）。取新鲜血清0.5ml放60℃水浴3分钟灭活备用。 ②50%RBC悬液：由被检者静脉采血2ml，肝素抗凝。用生理盐水洗涤红细胞2次，配成50%红细胞悬液。

③0.2mol/l HCL

4.操作步骤：

①取患者的红细胞，用生理盐水重复洗涤2次，最后配成50%红细胞悬液；

②取与患者同型或AB型血3-5ml，待其自然凝固，分离正常人血清（最好采用多人混合新鲜血清，以保证有足够的补体）

③取同一正常人的红细胞，用生理盐水重复洗涤2次，最后配成50%红细胞悬液；按下表操作：

试管号 1 2 3 4 5 6 同型或AB型血清（ml） 0.5 0.5 0 0.5 0.5 0 灭活血清 0 0 0.5 0 0 0.5 0.2NHCL 0.05 0 0.05 0.05 0 0.05 患者50%红细胞悬液 0.05 0.05 0.05 0 0 0 正常人50%红细胞悬液 0 0 0 0.05 0.05 0.05 置37℃水浴中1小时，观察结果。

参考值范围及报告;

1. 试验管溶血、对照管不溶血为阳性。

2. 试验管和对照管都不溶血为阴性。

注意事项：

1. 血清酸化后，试管必须塞紧，否则二氧化碳逸出，可使血清酸度下降。

2. 抗凝剂会影响PH值，故不宜用抗凝血浆，但可用脱纤维血；

3. 为了保证补体充足，最好用混合血清，但正常对照红细胞必须用“O”型血；

4. 如患者曾经多次输血，血中异常红细胞相对减少，本试验可为弱阳性或阴性。