流式细胞术

实验目的

掌握流式细胞仪的工作原理

掌握用流式细胞仪测量细胞群体DNA含量分布的方法

了解流式细胞术在细胞生物学研究中的应用

实验原理

流式细胞仪的工作原理是将待测细胞放入样品管中，在气体的压力下进入充满鞘液的流动室。在鞘液的约束下细胞排成单列由流动室的喷嘴喷出，形成细胞柱。通过对流动液体中排列成单列的细胞进行逐个检测，得到该细胞的光散射和荧光指标，分析出其体积、内部结构、DNA、RNA、蛋白质、抗原等物理及化学特征。

细胞内的DNA含量随细胞周期进程发生周期性变化，如G0/G1期的DNA含量为2C，而G2期的DNA含量是4C。利用PI标记的方法，通过流式细胞仪对细胞内DNA的相对含量进行测定，可分析细胞周期各时相的百分比。

仪器、材料与试剂

仪器：流式细胞仪、离心机。

材料：Hela细胞样品、试管、离心管、封口膜、微量移液器、Tip头、Eppendorf管。 试剂：70％乙醇（保存于4℃），RNase（-20℃保存），PI染液（避光保存于-20℃），PBS(pH 7.4，保存于4℃)

实验步骤

样品细胞由老师于课前收集并置于70%(预冷)乙醇中4℃下固定过夜。

2000rpm 15min收集固定细胞，PBS洗2次。

用100μL PBS重悬细胞并转至试管中轻轻吹打（防止细胞破碎）。

加PI染液50?L和RNase约2?L室温放置15min。

上机检测。

样品测定并使用ModFit LT软件分析结果。

实验结果与讨论:

所测样品中各周期时相的百分比：

G1期 68.48%

G2/M期 16.63%

S期 14.89%

G2：G1= 1:1.77

CV 12.16 提示结果可能不可靠或存在多倍体细胞。

流式细胞术是一种对悬液中细胞、微生物或细胞器等进行单个快速识别、分析和分离的技术。用以分析细胞大小、细胞周期、DNA含量、细胞表面分子以及进行细胞分选等。这种技术具有以下特点1.测量速度快；2.可进行多参数测量；3.是一门综合性的高科技方法（ FCM综合了光学，电子学，流体力学，细胞化学，免疫学，激光和计算机等多门学科和技术）；4.既是细胞分析技术，又是精确的分选技术。本次实验是通过流式细胞仪对细胞内DNA的相对含量进行测定，分析Hela细胞样本中各细胞周期时相所占的百分比。实验中所使用的Hela

细胞应为对数生长期的细胞，因为这一期的细胞分裂活动最为旺盛，各个周期的细胞均有存在。

第二篇：视深度知觉实验报告实验报告

视深度知觉实验报告

摘要：本实验使用霍尔—多尔曼的深度知觉测量器对六名陕西师范大学09级应用心理学本科生（五女一男）进行了单双眼深度知觉准确性的测试，目的在于证示双眼视差在深度知觉中的作用，比较单眼和双眼在辨别远近中的差异，学习适用霍尔—多尔曼的深度知觉测量器。实验结果表明：单双眼深度知觉辨别能力存在显著差异，双眼深度知觉准确性明显高于单眼。

关键词：单眼线索 双眼线索 视深度知觉

引言：深度知觉是指人对物体远近距离即深度的知觉，它的准确性是对于深度线索的敏感程度的综合测定。在外界对象离眼一定距离时，人眼能感受到的深度知觉是受刺激差异程度影响的。

作为深度知觉的线索多种多样。主要有：

1）单眼视觉线索：遮挡，线条透视，空气透视，明暗，阴影，运动级差，结构级差等。

2）双眼线索：水晶体的调节和双眼视轴的辐合两种。

3）双眼视觉线索的双眼视差是知觉立体物体和两个物体前后相对距离的的主要线索，借助双眼视差比借助上述各种线索更能精细地知觉相对距离，特别是在缺乏其他线索来估计对象距离的时候，双眼视差更为重要。

当人看远近不同的平面物体时，由于两眼相距约65mm，两眼视象便不完全落到对应部位，这时左眼看物体的左边多一点，右眼看物体的右边多一点，它都偏向鼻侧。这样，在不同平面上的物体在两眼视网膜上的成像就有了差异，这一差异便称为双眼视差。因为双眼比单眼有更多的深度线索可以参照，所以根据以往的资料和生活实际，均可得到单眼的深度知觉准确性差于双眼。

深度知觉的准确性是对于深度线索的敏感程度的综合测定。以往对于深度知觉准确性的测定主要有以下两种方法：

1）三针实验。此实验是由赫尔姆霍兹设计的。以两针为标准，被试在一定距离外，调节第三根针，使之与前两针在同一平面为止。黑姆霍兹的实验证明像差阈限小于60角度秒。

2）霍瓦-多尔曼深度实验。19xx年有霍瓦设计的深度知觉测量仪，代替三针实验。此仪器可测量人视深度知觉的能力（深度知觉敏锐度），并且在这种测试条件下，除了双眼视差，即网膜上造成的差异是深度知觉的明显的线索起作用外，排除了其他深度知觉的线索。

它可以广泛地应用于与深度知觉有关项目运动员的测试和选拨。本实验正是采用这种方法。

深度知觉阈限是用双眼视角差来表示的。

用a代表双眼间的距离，F代表相应的变异刺激，F′代表两根标准刺激中的一根。R代表与双眼轴垂直相交的至F的距离。δ代表在F与F′间垂直相交的距离差。θ2代表左眼视线至两个对象的视角，θ1代表右眼视线至两个对象的视角。由此可知，θ2—θ1即为视角差，即相应于两眼对两个对象的视线。θ2—θ1在理想情况下是以角单位表示的两个对象间的网膜上距离的标尺。

在弧度计算时，若计算到弧秒就应该乘上206265这一转换系数。公式为：

视差角η=206265aX/[D(D+X)]（单位：弧秒）

a：目间距65mm

D：观察距离。本实验为2000mm（被试与仪器标尺零点距离，非观察窗口距离） X：视差距离，即判断误差（平均数）

霍瓦的研究结果表明：双眼平均误差为14.4mm，单眼达285mm，单双眼误差比约为20：1。

通过本实验，探讨双眼和单眼（优势眼）在辨别深度中的差异。

根据以往资料和生活实际，做出假设：1）双眼比单眼有更多的深度线索可以参照，准确性也高于单眼。2）性别差异对深度知觉准确性的影响不显著。