亲民型抗衰老成分：维生素C

抗衰老原理：提起维生素C，相信没有人会陌生。它是水溶性物质，能够重建真皮表皮结合部，促进胶原纤维生成。此外还具有很强的清除自由基能力，同时也是增强身体免疫力不可缺少的成分。研究证明，经常补充维生素C的人比普通人的寿命更长，它富含于瓜果蔬菜当中，胡萝卜、西红柿和柑橘类水果中都含有丰富的维C。

高科技抗衰老成分：二胜肽

抗衰老原理：胜肽最近一直是化妆品科研领域最热门的话题，因为胜肽成分先进，效果显著，被很多药妆品牌使用。但是胜肽的价格很贵，所以添加了胜肽的产品也卖的比较贵。一般来说，胜肽能促进胶原蛋白，弹力纤维和透明质酸增生，提高肌肤的含水量，增加皮肤厚度以及减少细纹。继之前的五胜肽与六胜肽大热之后，最近二胜肽也被广泛的应用在了抗衰老的护肤品中。

新生代抗衰老成分：番茄红素

抗衰老原理：番茄红素是一种自然色素，呈红色晶体状，广泛存在于红色蔬果中，因最早从番茄中分离提取出而得名。它的抗氧化能力也比多酚类要强。不过番茄红素是脂溶性的，所以一般都是加在乳霜类的产品中。

重量级抗衰老成分：透明质酸纳

抗衰老原理：它是透明的人体天然保湿成分，可以持久保湿，促进其他活性成分的吸收，为真皮胶原蛋白和弹性纤维的合成提供良好的环境，减轻老化皱纹痕迹。

骨灰级抗衰老成分：维生素E

抗衰老原理：它是被研究和应用最多的抗老成分之一，属于人体主要的脂溶性抗氧化物，可以清除体内自由基以阻断氧化反应的生成，并减轻和修复细胞膜损伤，达到抵抗衰老的作用。由于细胞中只含有极少量的维生素E，且人体自身无法合成，所以只能从外来补充物中获得，未精制的植物油、杏仁、坚果油等都含有较多的维生素E。 天王级抗衰老成分：多酚类

抗衰老原理：从植物中提取的植物多酚类是很好的抗氧化剂，它能够清除体内自由基，抑制氧化反应的进行，而且大多具有抗敏性，因而广泛应用于保养品当中。常见的植物多酚包括葡萄多酚、茶多酚、石榴多酚、红酒多酚，最近咖啡多酚也被证实具有很强的抗氧化效果。 纯天然抗衰老成分：熊果酸

抗衰老原理：熊果酸是存在于天然植物中的一种三萜类化合物，具有镇静、抗炎、抗菌等多种生物学效应。除此之外，熊果酸还具有明显的抗氧化功能，因而被广泛地用作医药和化妆品原料。

绿色环保抗衰老成分：Pro-Xylane(玻色因)

抗衰老原理：Pro-Xylane是一种可以直接影响贯穿于皮肤三层结构中的细胞外基质，它来源于山毛榉木的木糖，是皮肤中木糖的模拟物，更是第一代具有活性的绿色化学制品。这种分子能够被生物降解，因此不会在生物体内积累。

珍贵稀有抗衰老成分：白藜芦醇浓萃

抗衰老原理：白藜芦醇是一种天然的抗氧化剂，能够延缓衰老。而白藜芦醇浓萃是源自生长在中国偏远省份的名贵珍稀植物虎杖根萃取精华，能强化肌肤天然防御机制，赋予肌肤细胞6倍强度的强效保护，帮助抵御环境的伤害，给予受损细胞更长的自我修复周期。

不可缺少的抗衰老成分：多肽

抗衰老原理：曾经有生物学家说过，补肽就等于补生命，可见肽对于抗衰老的重要性。多肽通常由10-100氨基酸分子脱水缩合而成的化合物。多肽是人体重要的生理调节物，它可全面调节人体生理功能，有效抗击衰老。

容易忽略的抗衰老成分：烟酸

抗衰老原理：烟酸也称作维生素B3，在身体内转化成盐酸酰胺。它拥有消除肌肤炎症、延缓肌肤衰老的功效。像猪肝等一些内脏类食物都富含烟酸。

我准备写篇说教性比较强的文章，而且篇数也许会比较长，不知道大家有没有兴趣看下去，不过我敢保证，如果你看完，对你今年几十年的护肤，绝对有帮助作用，因为我今天要说的就是抗衰老成份。不管你今天是二八年华，还是年过四十，抗衰老都是大家必学的功课。

现在市面上，不管是十块钱的超市货，还是几千块的大品牌，广告词都喜欢加上一句抗老化，那到底什么才是真正抗老化的产品呢？有些里面只含有了甘油、维生素E、植物油等等，也称自己是抗老化，如果是这样，我不知道这世界上还有什么东西不是抗老化的。作为一个聪明的消费者，我们有必要捍卫我们口袋里的银子！

下面我们来看看现在比较流行的抗老化的护肤品成份，有些成份出现在高档护肤品牌的产品中时，价钱动辄N（N≥1）千元以上，但是，只要你知道了这些成份，你其实是可以找到某些品牌不是特别知名的同类产品的。

今天我们先来讲生化类的成份，这些成份是科学家们多年的心血所集而成，而且随着科技的发展，这些成份仍在不断完善中，以期达到更为显著的目的。但是由于本人能力有限，只能把各个成份介绍写个大概，让大家初步了解各个成份的主要功效。排序方法基本就是由强到弱。

第一位：BOTOX

BOTOX即我们所说的肉毒杆菌，在19xx年正式注册“BOTOX“作为其商标，很多明星都靠着这个来永葆青春，原理也很简单，BOTOX注入产生皱纹的肌肉内，会阻断神经递质乙酰胆硷的释放，从而使肌肉张力下降或是肌肉瘫痪麻痹,皱纹也随之而逐渐消失，当然这个也不是一劳永逸的，一般保持时间就是四个月左右，因此，如果你想靠此办法消除皱纹就需要注射来注射去，而价格也不是普通人所能接受的。

第二位：人类表皮生长因子

表皮生长因子简称 EGF (Epidermal Growth Factor)，是人体内原有的一种具有生物活性的物质。于19xx年被美国Stanley Cohen博士在实验中偶然发现的。Cohen博士发现随着年龄的增加，EGF也会越来越少，皱纹便随之出现，如果我们可以找到方法给人体补充EGF的含量，新生细胞快速生成，衰老细胞快速角质化脱落，新生细胞比例增加，已断裂、变性的胶原纤维得到修复，皮肤弹性增加，皱纹逐渐平复、消失，这样我们就可以阻止皮肤的衰老，因为此项研究，Cohen博士还获得了19xx年的诺贝尔生理和医学奖，但科技转化为生产力之间，还需要

漫长的过程，因此，至今使用EGF的护肤品还是少数，相对其他护肤成份来讲，而且价钱也不算是很便宜，但是生物类成份做为护肤主打，我觉得这应该会是一种趋势。

第三位：胜肽Peptide类

即Peptide，这个可算是当今世界护肤品产业的大热门，任何一个品牌如果不插上一脚，就生怕别人说他落后。大家都知道，蛋白质是好东西，但是作为皮肤的保养品，一般而言，分子不能太大。蛋白质的分子太大，只能留在皮肤的表面，而无法吸收。于是科学家把蛋白质切成小小的胜肽键，所以可以被皮肤深层吸收，科技真是个好东西呀！

蛋白质的最基本构造是氨基酸，而多个氨基酸结合在一起就形成胜肽链。三个氨基酸就组成三胜肽，五个氨基酸就称为五胜肽，以此类推，但是由于里面含的氨基酸种类不同，所以即使同为三胜肽，也会有不同的名字。

胜肽类的作用因为含的氨基酸种类和数目的不同，基本可以分为以下几种：阻断神经元的传递，使面部肌肉放松达到平复细纹的目的，象EA这几年宣传的六胜肽，就是属于这一类型；其次就是刺激胶原蛋白的增生和透明质酸的形成，来达到增加皮肤含水量消除皱纹的目的；再者就是增强皮肤抗氧化的能力，阻止黑色素形成等功效，总的来说，胜肽类的最大作用就是消除皱纹，抗衰老作用明显，因此，价格才会如此之贵。

第四位：维生素A酸类

维A酸，一般做为去痘成份更多地被人关注，同样的，还有维A醇和A醛，后两者的刺激性要小于维A酸。维A酸类会加速皮肤老旧角质的脱离，促进新生细胞的形成，以达到去除皱纹的效果。但同时，使用此类成份的产品通常会有些副作用，比如皮肤红肿、长痘痘、脱皮等等，而且如果在白天使用，对防晒的要求也比较高。用这种成份进行抗衰老作用的品牌，象是强生旗下的ROC就比较著名。

第五位：DNA

DNA学名脱氧核糖核酸，是细胞核的主要组成成分，在细胞核中的作用就是复制DNA及蛋白质的合成，DNA的机能衰退，蛋白质的合成速度也会减缓下来，皱纹也极易产生。

第六位：SOD、维生素E等

SOD你一定不陌生，那个著名的大宝SOD蜜总是摆在超市最显著的位置上。SOD英文名：super oxide dimutase，顾名思议，其是人体内自行产生的自由基防御成份，说白了，就是抗氧化成份。人体一切机能衰老的根源，我们都可以认为是自由基产生的作用，不安定的自由基对人体正常细胞产生攻南昌，造成细胞

无法进行正常生理机能，老化问题随之产生。所以，含SOD的产品可以捕捉自由基，让细胞免于被自由基攻击，抗衰老作用也就是这样产生的。

同样的道理，维生素E也具有同样的抗氧化作用，之所以把这几个成份都放在最后，是因为其虽然在抗老化方面也起到一定的作用，但是在现在这种高污染的社会环境中，仅凭抗氧化就想达到抵抗皱纹的效果，实在是有点力不从心，因此，建议后面几种成份，大家做为日常保养所需就好，不要寄予太高的希望。

第二篇：高EGCG茶树活性成分提取工艺优化及其茶多酚抗衰老作用的研究

福建农林大学

硕士学位论文

高EGCG茶树活性成分提取工艺优化及其茶多酚抗衰老作用的研

究

姓名：黄学敏

申请学位级别：硕士

专业：细胞生物学

指导教师：郑金贵

20080401

独创性声明

本人声明，所呈交的学位（毕业）论文，是本人在指导教师的指导下独立完成的研究成果，并且是自己撰写的。尽我所知，除了文中作了标注和致谢中已作了答谢的地方外，论文中不包含其他人发表或撰写过的研究成果。与我一同对本研究做出贡献的同志，都在论文中作了明确的说明并表示了谢意，如被查有侵犯他人知识产权的行为，由本人承担应有的责任。

学位（毕业）论文作者亲笔签名《孑数日期．舫，

论文使用授权的说明

本人完全了解福建农林大学有关保留、使用学位（毕业）论文的规定，即学校有权送交论文的复印件，允许论文被查阅和借阅；学校可以公布论文的全部或

‘

部分内容，可以采用影印、缩印或其他复制手段保存论文。

保密，在年后解密可适用本授权书。口

口不保密，本论文属于不保密。

学位（毕业）论文储亲笔签名．彰段学位（毕业）论文作者亲笔签名：女汐』技

指导教师亲笔签名：日期日期－日期：』玑口

福建农林大学硕士学位论文

中文摘要

以高ＥＧＣＧ含量茶树品种“１００５∞鲜叶为材料，丑鲜叶杀青，茶多酚浸提、～————－——————’。。—————————’—＇－————，，

茶多酚分离纯化、ＥＧＣＧ纯化工艺及其茶多酚提取物清除自由基能力和动物体内抗衰老的作用进行了研究。

对鲜叶杀青工艺的研究结果表明，ＥＧＣＧ含量从高到低的杀青方式依次是微波杀青１１．１３％、烘箱杀青９．５８％、锅炒杀青９．２７％、蒸汽杀青８．４４％，微波杀青比蒸汽杀青、锅炒杀青、烘箱杀青提高了２．６９％、１．６８％、１．５５％，因此杀青方式以微波杀青较好．

茶多酚的浸提、分离纯化工艺的研究结果表明，茶多酚最佳浸提条件为浸提溶剂５０ｊＩ乙醇、浸提次数４次、浸提时间５０ｒａｉｎ、浸提温度７０＂０、浸提体积比为ｌ：５０．ＤＭ３０１树脂比Ｄ１０１、Ｈ１０２０树脂具有更好的分离纯化茶多酚性能。ＤＭ３０１树脂具体的分离纯化荼多酚的参数条件是浸提液ＰＨ值在２—３之间、吸附解吸流速２ｍＬ／ｍｉｎ，解吸溶剂８０ｊ（丙酮．根据以上的浸提、纯化工艺，以高ＥＧＣＧ茶树、铁观音，黄旦鲜叶为原料，得到了三种荼多酚，茶多酚的平均提取率２２％，平均纯度９５％以上，高ＥＧＣＧ茶树茶多酚提取率分别比铁观音、黄旦高出４％、２ｊｌ，茶多酚中ＥＧＣＧ含量从高到低分别高ｅｃｃＧ茶树４７．０７％、铁观音３１．５５ｊＩ、黄旦２６．０８％．高ＥＧＣＧ茶树茶多酚中ＥＧＣＧ含量比铁观音、黄旦高，分别高出１５．５２％、２０．９９％．

在ＥＧＣＧ分离纯化研究表明，高ＥＧＣＧ茶树茶多酚和黄旦在流速为ｏ．５ｍＬ／ｍｉｎ，６０９；乙醇为洗脱溶剂下以ＳｅｐｈａｄｅｘＬＨ－２０葡聚糖凝胶柱分离纯化ＥＧＣＧ，高ＥＧＣＧ茶树和黄旦茶多酚的ＥＧＣＧ提取率分别为３３．３％和１６．６ｊｌ，纯度均为９６％～９８％．

茶多酚清除自由基能力和动物体内抗衰老研究表明，高ＥＧＣＧ茶树品种荼多酚比普通茶树的茶多酚具有更强的清除自由基能力，比黄旦的荼多酚清除自由基能力高出９．３７ｊＩ．在果蝇的平均寿命延长方面，高ＥＧＣＧ含量茶树茶多酚比黄旦更能延长果蝇的平均寿命，分别提高了１４．５｛Ｉ（雄），１４．９ｊＩ（雌），在果蝇体内的ＳＯＤ值和总抗氧化值方面，高ＥＧＣＧ含量茶树茶多酚比黄旦ＳＯＤ值提高了３２．９％（雄），１２．１％（雌），总抗氧化能力值提高了４４．１％（雄）、２８．５％（雌）．不同浸提溶剂提取的荼多酚在延长果蝇寿命上也是有差异的，以乙醇为浸提剂比以沸水为浸提溶剂提取的荼多酚在果蝇平均寿命上提高了６．５１％（雄），６．４５％（雌），在果蝇体内的ＳＯＤ值和总抗氧化值方面，乙醇浸提比沸水浸提的茶多酚更能提高果蝇体内ＳＯＤ

福建农林大学硬士学位论文

值和总抗氧化能力，ＳＯＤ值提高了９．５３％（雄）、９．４３％（雌），总抗氧化能力值提高了３１．９％（雄）、１８．４％（雌）．

关键词：高ＥＧＣＧ含量茶树茶多酚ＥＧＣＧ分离纯化清除自由基抗衰老２

福建农林大学硕士学位论文

Ａｂｓｔａｃｔ

Ｔｈｅ蠡ｒｅｓｈｌｅａｖｅｓｏｆｔｈｅｔｅａｔｒｅｅ

ａｓｖａｒｉｅｔｙ“１００５”ｗｉ伍ｌｌｉｇｈｏｎＥＧＣＧｃｏｎｔｅｎｔｗａｓｕｓｅｄｍａｔｅｒｉａｌｓ，ｔｏｃａｒｒｙｏｕｔｔｈｅｒｅｓｅａｒｃｈｔｈｅｆｏｌｌｏｗｉｎｇａｒｅａｓ：ｔｈｅｄｅａｃｔｉｖａｔｉｏｎｏｆ

ｔｅａｅｎｚｙｍｅｓｏｆｆｒｅｓｈｌｅａｖｅｓ，ｔｈｅｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｏｆｐｏｌｙｐｈｅｎｏｌ，ｔｈｅｓｅｐａｒａｔｉｏｎａｎｄ

ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆｔｅａｐｏｌｙｐｈｅｎｏｌ，ｔｈｅｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆＥＧＣｌ３ｌｔｈｅｅｌｉｍｉｎａｔｉｏｎｆｒｅｅｒａｄｉｃａｌａｂｉｌｉｔｙｏｆｔｅａｐｏｌｙｐｈｅｎｏｌｅｘｔｒａｃｔｉｏｎａｎｄｔｈｅａｎｔｉ－ｓｅｎｉｌｅｆｕｎｃｔｉｏｎｉｎｖｉｖｏ．

ｅｎｚｙｍｅｄｅａｃｔｉｖａｔｉｏｎｏｆｆｒｅｓｈｌｅａｖｅｓｉｎｄｉｃａｔｅｓ

ｃｏｎｔｅｎｔｓ（ａｆｔｅｒｅｎｚｙｍｅｄｅａｃｔｉｖａｔｉｏｎ）ｆｒｏｍｈｉ．ｇｈｔｏｌｏｗｉｎｔｕｒｎＴｈｅｒｅｓｕｌｔｓｏｆ

ｂｅｓｔｗａｙｆｏｒｔｈａｔｔｈｅＥＧＣＧａｒｅ１１．１３％ｂｙｍｉｃｒｏｗａｖｅ，９．５８％ｂｙｄｒｙｉｎｇｏｖｅｎ，９．２７％ｂｙｆｒｙｉｎｇｉｎｐａｎ，ａｎｄ８．４４％ｂｙｓｔｒｅａｍ．Ｔｈｅｅｎｚｙｍｅｄｅａｃｔｉｖａｔｉｏｎｉｓｕｓｉｎｇｍｉｃｒｏｗａｖｅ，ａｓｉｔｉｎｃｒｅａｓｅｄＥＧＣＧｃｏｎｔｅｎｔｂｙ

ｔｏｕｓｉｎｇ２。６９％，１．６８％，ａｎｄ１．５５％ｃｏｍｐａｒｅｄ

ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．ｓｔｒｅａｍ，ｆｒｙｉｎｇｉｎｐａｎａｎｄｄｒｙｉｎｇｏｖｅｎ，

Ｔｈｅｒｅｓｕｌｔｓｏｆｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ，ｔｈｅｓｅｐａｒａｔｉｏｎａｎｄｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆｔｅａｐｏｌｙｐｈｅｎｏｌ

ｔｏｉｎｄｉｃａｔｅｓｔｈａｔｔｈｅｍｏｓｔｓｕｉｔａｂｌｅｃｒａｆｔｆｉｎｄｉｎｇｓｉｎｄｉｃａｔｅｔｈａｔｔｈｅｂｅｓｔｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ

ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓａｒｅ５０％ｅｔｈｙｌａｌｃｏｈｏｌｉｎｔｈｅｓｏｌｖｅｎｔ，４ｔｉｍｅｓｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ，５０ｍｉｎｓ，７０℃，ｖｏｌｕｍｅｒａｔｅ１：５０．ＣｏｍｐａｒｅｄｔｏＤ１０１ａｎｄＨ１０２０ｒｅｓｉｎ，ｔｈｅＤＭ３０１ｒｅｓｉｎｉｓｂｅｔｔｅｒｏｎｔｈｅｓｅｐａｒａｔｉｏｎａｎｄｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆｔｅａｐｏｌｙｐｈｅｎ０１．Ｔｈｅｐａｒａｍｅｔｅｒｓ

ＤＭ３０１

ｉｎｆｏｒｔｈｅｓｅｐａｒａｔｉｏｎａｎｄｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆｔｅａｐｏｌｙｐｈｅｎｏｌｂｙｓｐｅｅｄ２ｍｌ／ｍｉｎｆｏｒａｄｓｏｒｐｔｉｏｎ

ＢａｓｅｄｏｎａｒｅｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｓｏｌｕｔｉｏｎＰＨ２－３，ｆｌｏｗａｎｄｄｅｓｏｒｐｔｉｏｎ，８０％ａｃｅｔｏｎｅｄｅｓｏｒｐｔｉｏｎｓｏｌｕｔｉｏｎ．ａｓｔｈｅｓｅｒｅｓｕｌｔｓ，ｕｓｉｎｇｈｉｇｈＥＧＣＧｔｅａｔｒｅｅ，ＯｏｌｏｎｇｔｅａａｎｄＨｕａｎｇｄａｎｍａｔｅｒｉａｌｓ，ｗｅｇｏｔｔｈｒｅｅｋｉｎｄｓｏｆｔｅａｐｏｌｙｐｈｅｎｏｌｓ，ｗｉｔｈａｖｅｒａｇｅｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｒａｔｅ２２％，ａｎｄａｖｅｒａｇｅｐｕｒｉｔｙａｂｏｖｅ９５％．ＴｈｅｔｅａｐｏｌｙｐｈｅｎｏｌｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｒａｔｅｏｆｈｉｇｈＥＧＣＧｔｅａｔｒｅｅｗａｓ４％ａｎｄ２％ｈｉｇｈｅｒｔｈａｎＯｏｌｏｎｇｔｅａａｎｄＨｕａｎｇｄ雒．ＴｈｅＥＧＣＧｃｏｎｔｅｎｔｓｉｎ

ｔｅａｔｅａｐｏｌｙｐｈｅｎｏｌｆｒｏｍｈｉｇｈｔｏｌｏｗｉｎｔｕｍａｒｅ４７．０７％ｉｎｈｉｇｈＥＧＣＧｔｒｅｅ，３１．５５％ｉｎ

Ｏｏｌｏｎｇｔｅａ，２６．０８％ｉｎ

ｔｒｅｅｉｓＨｕａｎｇｄａｎ．ＥＧＣＧｃｏｎｔｅｎｔｉｎｔｅａｐｏｌｙｐｈｅｎｏｌｏｆｈｉＤＥＧＣＧｔｅａ１５．５２％ａｎｄ２０．９９％ｈｉｇｈｅｒｔｈａｎ

ｏｎＯｏｌｏｎｇｔｅａａｎｄＨｕａｎｇｄａｎ．ＴｈｅｒｅｓｅａｒｃｈｓｅｐａｒａｔｉｏｎａｎｄｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆＥＧＣＧｉｎｄｉｃａｔｅｓｔｈａｔ，ｗｉｔｈｆｌｏｗ

ｓｐｅｅｄ０．５ｍＹｍｉｎ，６０％ｅｔｈｙｌ

ｇｅｌａｔｉｎａｌｃｏｈｏｌｉｎｅｌｕｔｉｏｎｓｏｌｕｔｉｏｎａｎｄＳｅｐｈａｄｅｘＬＨ－２０ｇｌｕｃｏｓａｎｃｏｌｕｍｎ，ｔｈｅ

ＨｕａｎｇｄａｎＥＧＣＧｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｒａｔｅｓｏｆｔｅａｐｏｌｙｐｈｅｎｏｌｆｒｏｍｈｉｇｈＥＧＣＧｔｅａｔｒｅｅａｎｄｗｅｒｃ３３．３％ａｎｄ１６．６％，ｗｉｔｈｂｏｔｈｏｆｔｈｅｐｕｒｉｔｉｅｓｂｅｔｗｅｅｎ９６％一

９８％．

Ｔｈｅｒｅｓｕｌｔｓｏｆｔｅａｐｏｌｙｐｈｅｎｏｌｄｌｍｉ－ａｔｉｏｎｆｒｅｅｒａｄｉｃａｌａｂｉｌｉｔｙａｎｄｔｈｅａｎｉｍａｌｉｎｖｉｖｏａｎｔｉ－ｓｅｎｉｌｅｒｅｓｅａｒｃｈｉｎｄｉｃａｔｅｄｔｈａｔ，ｃｏｍｐａｒｅｄ

３ｔｏｔｈｅｔｅａｐｏｌｙｐｈｅｎｏｌｅｘｔｒａｃｔｅｄ

福建农林大学硕士学位论文

ｆｒｏｍｎｏｒｍａｌｔｅａｔｒｅｅ，ｔｅａｐｏｌｙｐｐｈｅｎｏｌｆｒｏｍｈｉｇｈＥＧＣＧｔｅａｔｒｅｅｈａｄｓｔｒｏｎｇｅｒａｂｉｌｉｔｙｔｏｅｌｉｍｉｎａｔｅｆｒｅｅｒａｄｉｃａｌｓ，９．３７％ｈｉｇｈｅｒｔｈａｎｔｈｏｓｅｉｎＨｕａｎｇｄａｎ．Ｏｎｔｈｅｅｘｔｅｎｓｉｏｎｏｆｆｒｕｉｔｆｌｙ＇ｓｌｉｆｅｔｉｍｅ，ｔｈｅｔｅａｐｏｌｙｐｈｅｎｏｌｆｒｏｍｈｉｇｈＥＧＣＧｔｅａｔｒｅｅｗａｓａｂｌｅｔｏｅｘｔｅｎｄｌｏｎｇｅｒｌｉｆｅｔｉｍｅｏｆｆｒｕｉｔｆｌｙｃｏｍｐａｒｅｄｔｏＨｕａｎｇｄａｎ，１４．５％ｈｉｇｈｅｒ（ｍａｌｅ）ａｎｄ

ａｎｄ１４．９％ｈｉｇｈｅｒ（ｆｅｍａｌｅ）．Ｏｎ

ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｔｈｅａｓｐｅｃｔｓｏｆｆｒｕｉｔｆｌｙｉｎｖｉｖｏＳＯＤｖａｌｕｅｔｏｔａｌｏｘｉｄａｔｉｏｎｖａｌｕｅ，ＳＯＤｖａｌｕｅｆｏｒｔｅａｐｏｌｙｐｈｅｎｏｌｆｒｏｍｈｉｇｈＥＧＣＧｔｅａｔｒｅｅｉｓ３２．９％

ｔｈａｎ（ｍａｌｅ）ａｎｄ１２．１％（ｆｅｍａｌｅ）ｈｉｇｈｅｒ

ｖａｌｕｅｓｗｅｒｅＨｕａｎｇｄａｎ，ａｎｄｔｏｔａｌｏｘｉｄａｔｉｏｎｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ４４．１％（ｍａｌｅ）ａｎｄ２８．５％（ｆｅｍａｌｅ）ｈｉｇｈｅｒ．Ｕｓｉｎｇ

ｏｎｄｉｆｆｅｒｅｎｔｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｓｏｌｕｔｉｏｎｓ，ｔｈｅｒｅｓｕｌｔｓＷＣＩ＇Ｃｄｉｆｆｅｒｅｎｔｔｈｅｌｉｆｅｔｉｍｅｅｘｔｅｎｓｉｏｎｏｆｆｒｕｉｔｆｌｙ．Ｃｏｍｐａｒｅｄｔｏ

ｕｓｉｎｇｂｏｉｌｅｄｗａｔｅｒ，ｅｘｔｒａｃｔｅｄｔｅａｐｏｌｙｐｈｅｎｏｌｂｙｅｔｈｙｌａｌｃｏｈｏｌｗｅｒｅ６．５１％（ｍａｌｅ）ａｎｄ６．４５％（ｆｅｍａｌｅ）ｈｉｇｈｅｒ

ｂｏｉｌｅｄｏｎｔｈｅａｖｅｒａｇｅｏｆｔｈｅｆｉ＇ｕｉｔｆｌｙ’Ｓｌｉｆｅｔｉｍｅｅｘｔｅｎｓｉｏｎ．Ｏｎｔｈｅａｓｐｅｃｔｓｏｆｆｒｕｉｔｆｌｙｉｎｒｉｖｅ’ＳＳＯＤｖａｌｕｅａｎｄｔｏｔａｌｏｘｉｄａｔｉｏｎｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｖａｌｕｅ，ｃｏｍｐａｒｅｄｔｏｕｓｉｎｇｗａｔｅｒ，ｕｓｉｎｇｅｔｈｙｌａｌｃｏｈｏｌＷａｓｂｅｔｔｅｒｏｎｉｎｃｒｅａｓｉｎｇＳＯＤｖａｌｕｅａｎｄ

ｏｘｉｄａｔｉｏｎｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｖａｌｕｅ，ＳＯＤｖａｌｕｅｉｍｐｒｏｖｅｄ

ｏｘｉｄａｔｉｏｎｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｖａｌｕｅｓｉｍｐｒｏｖｅｄ９．５３％（ｍａｌｅ），９．４３％（ｆｅｍａｌｅ），ｔｏｔａｌ３１．９％ｍａｌｃ），１８．４％（ｆｅｍａｌｅ）．

Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：ＨｉｇｈＥＧＣＧｔｅａｔｒｅｅ；Ｔｅａｐｏｌｙｐｈｅｎｏｌ；ＥＧＣＧ；ＳｅｐａｒａｔｉｏｎａｎｄＰｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ；ｆｒｅｅｒａｄｉｃａｌｅｌｉｍｉｎａｔｉｏｎ；ａｎｔｉ－ｓｅｎｉｌｅ４

福建农林大学硕士学位论文

第一章文献综述

１．１茶叶概况

我国是最早开发利用茶叶资源的国家，荼圣陆羽在《茶经》中记载：“荼之为饮，发于神农氏，闻于周鲁公”．我国古代就已对茶叶的记载大部分是在生理和药理功能方面，比如《神农本草经》记载了久服茶叶能“安心益气，轻身耐老”．《本草拾遗》记载道：“诸药为各病之药，茶为万病之药．”顾元庆在《茶谱》中有。人饮真茶，能止渴、消食、除痰、少睡、利尿道、明目、益思、除烦、去腻，各国，深受世界人民喜爱．茶叶已从最初的治疗药物发展成日常的饮料，现在茶叶是当今世界上三大饮料之一．

在我国，根据茶叶品质的差异和制作工艺的不同，分为绿茶、乌龙荼、红茶、白茶、黑茶和黄茶六大类．为了满足我国和世界茶饮爱好者的需求，茶叶工业也发生着巨大的变化．在制茶方面，制茶工艺越来越现代化，不断开发出满足不同消费者需求的制作工艺；在茶多酚、ＥＧｃＧ提取分离纯化方面，茶多酚的产品已实现了工业化的生产和生活中的应用，而表没食子儿荼素没食予酸酯

（ｅｐｉｇａｌｌｏｃａｔｅｃｈｉｎ一３－ｇａｌｌａｔｅ，简称Ｌ—ＥＧＣＧ）的产品由于其提取纯化难度较大，产量有限，及其在药理方面的应用还仅限于临床阶段。

１．２茶叶化学成分

茶叶的化学成分极为复杂，经过分离鉴定的已知化合物约有５００种，其中有机化合物有４５０种以上，无机矿物质１５种以上．其主要成分可以分为多酚类、芳香类物质、氨基酸和荼氨酸，生物碱、天然色素、糖类等ｎ１．下面就上述几种主要成分简要介绍：

①多酚类：茶叶中这类物质又叫茶单宁或者茶鞣质，其含量一般在１８％一３６％（干

重）之间，它们与茶树的生长发育、新陈代谢和茶叶品质关系非常密切，是决定茶汤滋味、颜色的主要成分，对人体具有重要的生理活性．

②芳香类物质：荼树中的芳香类物质又称“挥发性香气组分（ＶＦＣ）靠，是茶树中挥发性物质的总称．目前为止，已分离鉴定的茶叶芳香物质越７００种，但其主要成分仅为几十种，它们有的是红茶、绿茶，鸟龙荼所共的，有的是各自分别５人固不可一日无茶”．茶叶从唐代开始传入到日本，朝鲜，而后又迅速传入西方

福建农林大学硕士学位论文

独特的，有的是在鲜叶生长过程中合成的．根据气相色谱等分析，茶叶芳香物质的组成包括碳氢化合物、醇类，酮类、酸类，醛类、酯类、过氧化物类、含硫化合物类、吡啶类等。

③氨基酸和荼氨酸：茶叶中的氨基酸，不仅是组成蛋白质的基本单位，也是活性肽、酶和其他一些生物活性分子的重要组成成分．茶叶氨基酸的纽成、含量以及它们的降解产物和转化产物也直接影响茶叶品质．氨基酸本身也具有一定的香味，特别是某些氨基酸与茶叶的滋味及香气关系密切．茶氨酸是茶树中一种比较特殊的在一般植物中罕见的氨基酸．茶氨酸是荼树中含量最高的游离氨基酸，占茶叶干重１％一２％．在茶鲜叶中，一般茶氨酸的含量占干重１％一２％，某些名优茶含量可超过２％．

④生物碱：茶叶中含有多种嘌呤碱，其中含量最多的是咖啡碱，咖啡碱是茶叶

重要的滋味物质，其与荼黄素以氢键结合后形成复合物具有鲜爽味，咖啡碱对人体具有一定的兴奋作用，因此还具有一定的药理作用．茶叶中的生物碱除了咖啡碱以外还有可可碱、茶叶碱，这两种生物碱在茶叶中的含量很低．⑤天然色素：茶叶中的天然色素包括脂溶性和水溶性色素两大类，脂溶性色素

主要为叶绿素和类胡萝卜素。荼鲜叶中的叶绿素约占茶叶干重的０．３％一Ｏ．８％，叶绿素难溶于水．类胡萝卜素是一类具有黄色到橙红色的多种有色化合物，一般分为胡萝卜．素和叶黄素两大类．水溶性色素主要是花黄素、花色素，它们含量约占茶叶干重的４．５％．

⑥糖类：茶叶中糖类物质包括各种单糖，多糖和果胶类物质．糖类在新老叶片

中的含量是有差异的，老叶糖类含量比较多，新叶比较少．鲜叶中多糖的含量约占干重的１％．

⑦其他化学成分：茶叶中还含有少量的游离有机酸、微生物、酶、无枳Ｉ元素等．１．３茶多酚、Ｅ６ＣＯ的理化性质

茶多酚（Ｔｅａｐ０１ｙｐｈｅｎ０１ｓ）一般占荼嫩梢干重的２０％一３５％，由大约３０种以上的酚类物质组成．按其化学结构可以分成四类：（１）儿荼素类，属黄烷醇类；（２）黄酮及黄酮醇类；（３）花白素及花青素；（４）酚酸及缩酚酸类．其中以儿荼素类化合物最为重要，约占多酚的８０ｊ６左右，而儿荼素类中的（一）－表没食子儿荼素没食子酸酯（简称Ｌ－ＥＧＣＧ）占儿茶素总量的５０％左右啪，化学结构如图１表示６

福建农林大学硕士学位论文

Ｈ

ｏＨ

图１ＥＧＣＧ的结构式

１．３．１茶多酚的理化性质

荼多酚是荼汤涩味的主要来源，纯净的茶多酚是以淡黄色至茶褐色的固体粉末或结晶的形式存在的蜘．荼多酚具有２一苯并毗喃的苯基碳架，含有两个以上互为邻位的羟基多元酚，故有酚类化合物的通性．因此茶多酚具有亲水性，易溶于热水、甲醇、含水乙醇、乙酸乙酯，含水乙醚、含水丙酮及冰醋酸等溶剂，难溶解在氯仿、苯、石油醚等溶剂．在酸性条件下稳定，在碱性条件下容易发生聚合反应．室温条件下，茶多酚粉末很容易潮解，并被氧化成棕色．茶多酚在结构上具有很强的供氢能力，能发生多酚类的颜色反应，并且很容易发生氧化反应，因此是一种很理想的抗氧化剂。在一定的条件下，荼多酚还可以发生降解反应，生成苯酚酸等物质“。１．

１．３．２ＥＧＣＧ的理化性质

纯净的ＥＣＣＣ单体是一种白色粉末状固体．易溶于热水、甲醇、含水乙醇、乙酸乙酯、含水乙醚、含水丙酮及冰醋酸等溶剂，难溶解在氯仿、苯、石油醚等溶剂．在可见光下不显颜色，在紫外光下呈黑色，在２７８ｎｍ波长处有最大的吸收峰．ＥＧＣＧ和茶多酚一样可以发生酚类的颜色反应．ＥＧＣＧ还能和许多金属离子络合，如ＥＣＣＣ胄ｇ与ｚｎ２＋、Ａ１３＋离子发生沉淀反应．ＥＧＣＧ是一种更强的抗氧化剂，在空气中很容易自动氧化成黄棕色物质Ｄ１．７

福建农林大学硕士学位论文

１．４茶多酚，ＥＧＣＧ分离纯化工艺

１．４．１荼多酚的分离纯化工艺

目前对荼多酚的分离纯化工艺己有了相当深入的研究，如溶剂萃取法、离子沉淀法、吸附树脂法、超临界萃取法、盐析法、膜技术纯化法，超声法、微波法等．

１．４．１．１溶剂萃取法

溶剂萃取法是传统的提取工艺“?Ｌ。’’１．溶剂萃取法的原理是利用茶多酚在不同溶剂中的溶解度差异进行提取分离的．其一般的工艺路线为：茶叶原料一溶剂提取一过滤一去杂质一萃取一干燥一荼多酚粗品．

溶剂萃取法主要有水提取法和有机溶剂萃取法，去杂质常规方法有氯仿脱咖啡碱，柠檬酸溶液或胶原纤维吸附咖啡碱ｎ们，活性炭脱色，石油醚除色素或通过低温静止除杂等．姜绍通、潘丽军ｎ１１对乙酸乙酷多级逆流萃取的工艺过程进行了理论分析，确定了最佳工艺参数．刘仲华等ｕ２１系统地研究了茶叶原料品种、溶剂种类、萃取次数等对儿茶素制备工艺的影响，提出了最佳儿茶素制备工艺．

溶剂萃取法得到广泛应用，主要的优点是操作简单，易于工业化，其缺点是工艺流程长，使用大量的有机溶剂，有机溶剂的回收耗能大，产品纯度不高．１．４．１．２离子沉淀法

离子沉淀法的原理是利用金属离子可以与茶多酚形成络合物沉淀下来．杨晓萍“３１研究了用Ｚｎ＋２沉淀荼多酚的过程中ＰＨ值、ＺｎＳＯ．的用量、沉淀时间之间的关系．在其工艺下可以分离出高于９０％纯度的茶多酚．蒋建平ｎ帕利用（Ｚｎ２．＋Ａ１’＋）为复合沉淀剂沉淀茶多酚，提取出纯度９９．５ｊ６的茶多酚．

离子沉淀法的优点是能耗低、选择性好、产品的纯度相对较高，其缺点是会产生一定毒性的金属离子、沉淀时偏确洼的环境下易造成茶多酚的氧化．１．４．１．３吸附树脂法

吸附树脂法的原理是利用树脂对荼多酚和杂质的吸附一解吸作用不同来实现分离荼多酚的．一般利用硅胶．氧化铝、活性炭、聚酰胺、离子交换树脂和大孔吸附树脂等固态物质作为载体，利用树脂特异的选择性，对混合物的进行提取纯８

福建农林大学硕士学位论文

化．徐向群等“５１通过对４种阴离子树脂和１６种吸附树脂对儿茶素粗品的交换或吸附和解吸性能进行比较，发现９２—２和９２—３吸附树脂对荼多酚有较强的吸附能力和良好的解吸性能．王梅Ｄ”等通过对４中大孔树脂的筛选，发现荼多酚高吸附量的树）３旨ＮＫ－Ｓ３．陈海霞“７１等通过对１５种树脂的静态和动态吸附以及解吸性能的比较，开发了能从茶叶中连续提取荼多糖、茶多酚、咖啡碱的工艺．

吸附树脂法分离茶多酚，工艺简单、能耗低、可再生、易于实现规模化生产，而且产品的收率和纯度较高．但是树脂价格贵，选择性有待于再提高，洗脱的溶剂消耗多，还容易堵塞．

１．４．１．４超临界萃取法

超临界萃取法（ＳＦＥ）是近年来发展起来的一种新型分离技术，它的原理是利用超临界状态下的流体作为萃取荆，在超临界状态下，萃取剂极容易溶解到样品基质中，使萃取组分通过分配扩散作用而充分溶解，从而达到分离目的．用于超临界萃取的介质通常是ｃ０：．ｃ０：没有毒性，不会对人体造成伤害，因此超临界萃取法适用于医药、食品添加剂等方面的．由于茶多酚在ｃＯ：中的溶解度不高，而且受到萃取时间、流体流速的影响，此法的一次的提取率低．

１．４．１．５茶多酚的其他分离提取工艺

盐析法ｎ屯”１：利用无机盐饱和溶液使某些物质的溶解度降低，甚至沉淀析出．其一般工艺流程为荼多酚粗提液一盐析一过滤一（滤液）乙酸乙酯萃取一＋浓缩一干燥一成品．

膜技术纯化法乜棚：利用选择性透过膜作为分离介质，当膜二侧存在压力时，原料侧各个组分有选择地透过膜，从而进行分离．目前，主要是利用超滤、微滤等技术手段对可溶性多糖、蛋白质等大分子量物质进行截取以及利用反渗透进行浓缩．

超声波法ｍ１：利用超声波在媒质中传播可使媒质质点在其传播空间内进入振动状态强化溶质扩散，传质，可以加速荼多酚在溶剂里面的扩散速度，使茶多酚更容易分离出来．

微波法１２２１．利用微波场使分子发生高频运动，扩散速度加快．茶多酚在微波９

福建农林大学硬士学位论文

场的作用下，快速的分离出来．利用微波辅助提取，时间上大大缩短，并且减少了污染．

１．４．２ＥＧＣＧ的分离纯化工艺

要得到纯度较高的ＥＧＣＧ单体成分，需在分离提取得到茶多酚的基础上进一步分离纯化．由于儿茶素各个组分的分子结构差别不大，性质也十分相近，分离难度相对较大．目前主要有以下几种方法进行分离纯化：

１．４．２．１柱层析分离方法

柱层析分离方法是将茶多酚粗品用溶剂溶解后上柱，用一定的洗脱溶剂使茶多酚内的各个组分在特定的填充介质里面分离开来的方法。目前的层祈柱所使用的填料主要有三种类型：１．吸附型柱：硅胶、纤维素、聚酰胺等；２．离子交换柱：ＸＡ０－２；３．凝胶柱：ＴｏｙｏｐｅａｒｌＨｗ＿４０、ＳｅｐｈａｄｅｘＬＨ一２０。洗脱溶剂主要有甲醇、乙醇、乙酸乙酯等．Ｔ．Ｏｚａｗａｎ３１斥］ＴｏｙｏｐｅａｒｌＩ－１１Ｉ『－４０Ｆ作为填充柱分离儿茶素，以丙酮作为洗脱剂，按丙酮浓度梯度进行洗脱，淋洗液易出现气泡，影响分离效果，而且操作不易控制．戚向阳比町以ＳｅｐｈａｄｅｘＬＨ一２０为填充柱，以４０％的丙酮为洗脱荆进行分离得到高纯度的ＥＧＣＧ，但是收集得率低，所需时间长，分离最后面严重拖尾，而且丙酮有一定的毒性．

１．４．２．２高效液相制备色谱法

制备型ＨＰＬＣ可以用于分离纯化出儿荼素中的的单体ＥＧＣＧ．其工艺前提是已经得到粗纯化过的儿荼素混合物，经过制备型的ＨＰＬＣ再次分离纯化更纯的儿荼素各个单体物质．良边文久等ｎ朝先用葡聚撇ＳｅｐｈａｄｅｘＬＨ－２０柱分离出一定纯度的

Ｊ．儿茶素混合物，然后用制备型的ＨＰＬｃ二次分离制备了儿荼素单体．Ｊｏｓｅｐｈ

Ｄａｌｌａｇ乜司等把传统ＨＰＬｃ中所用的Ｃ１８柱改进成超高纯Ｃ１８（具有活?ｌ睦－ＳｕｍＯＤＳ固定相），改进后能有效地分离儿茶素六种组分，但重现性不好．利用高效液相制备色谱法来分ＳＥｏｃｏ的成本相对偏高，但是其产品的纯度得到较好的保证．

１．４．２．３高速逆流色谱法

高速逆流色谱法（ＨＳＣＣＣ）是８０年代发展起来的一项新技术，其原理是利用高速运转产生的重力场作用使样品在固定相中的分配能力不同，从而大大提高了分１０

福建农林大学硕士学位论文

离能力。这种分离方法是在两相之间进行的，克服了使用固体吸附材料造成的样品的死吸附或降解的缺点，因此样品可最大限度地得以分离．杜琪珍等乜钉利用高速逆流层析分离荼多酚中的ＥＧＣＧ，成功分离出６个儿荼素单体组分，但上样量过多的时候，组分会发生严重重叠，分离效果降低．

１。５荼多酚、ＥＯＣＯ的药理作用

随着研究的深入，茶叶中茶多酚类物质的在药理方面和保健方面的功能不断被发现，而ＥＧＣＧ做为茶多酚类物质中最核心的成分也被越来越深入地研究。以下就简述目前几点茶多酚、ＥＧＣＧ在药理方面的作用．

１．５．１抗茵、抗病毒

荼多酚对多种细菌、真菌及其多种病毒具有很强的抑制能力。褚敏让铂研究发现茶多酚具有一定的抑制细菌生长能力，对变链菌Ｉｎ９６７１５有轻微的抗粘附活性．李志光乜町等研究在不同浓度下的茶多酚对大肠杆菌，产气杆菌两种细菌的抑制作用，发现荼多酚不同浓度对大肠杆菌具有普遍的抑制作用，而在一定的浓度下对产气杆菌具有强烈的抑制作用．日本科学家ｎ蚰研究发现，绿茶和红茶的提取物荼多酚能抑制甲、乙型流感病毒，其中起关键作用的是ＥＧＣＧ．日本东京大学的科研人员在发现ＥＧＣＧ能够附着在ＣＤ４受体分子上，从而阻止艾滋病病毒对ＣＤ４薹ｍ胞的攻击ｂ帕．此外，茶多酚、ＥＧＣＧ对甲肝病毒、植物病毒也有很强的抑制作用［３１，３２１．１．５．２抗过敏、抗炎作用

荼多酚、ＥＧｃＧ具有抗过敏作用．ＯｂｅｕＨｉｒｏｂｕｍ等Ｄ３１研究证实，荼多酚中分离出来的四种儿茶素可以抑制由化合物４８／８０诱导的大鼠外周胎大细胞的组胺释放．其中ＨＧＣＧ对组胺释放具有明显的抑制活性．ＳｕｇｉｙａｍａＫ［３４１在ＯｂｅｕＨｉｒｏｂｕｍ的基础上进一步研究发现６０％抑制浓度的ＥＧＣＧ的抑制效果比目前的抗过敏药Ｔｒａｎｉｌａｓｔ的抑制效果强ｌＯ倍．此外，茶多酚。ＥＧＣＧ还具有抗炎作用．

ＳｗａｍａｌａｋｓｌｍＬＴＤ钉在动物实验中发现茶多酚、ＥＧＣＧ可以有效的抑制角叉素诱导产生的大鼠的足部水肿，还对囊液的蓄积，内芽组织的生成及墁性关节炎有明显的治疗作用．

１．５．３抗氧化１ｌ

福建农林大学硕士学位论文

人体内会因为新陈代谢不断产生有害的自由基（ｆｒｅｅｒａｄｉｃａｌ），自由基具有很强的氧化能力，可以使体内的不饱扣脂肪酸氧化生成过氧脂质，这些过氧脂质能够消弱和破坏生物膜，影响正常的新陈代谢，从而促发各种炎症，疾病．茶多酚、ＥＧＣＧ具有活性的多酚羟基，能够提供质子Ｈ＋，能够与自由基反应，因此具有显著的抗氧化能力．茶多酚的清除自由基的能力也明显大于维生素ｃ和维生素Ｅ．研究表明茶多酚的抗氧化能力是维生素Ｅ的１８倍，是维生素Ｃ的３—１０倍Ｄ‘１．

Ｏｓａｗａ．Ｔｔ３ｎ等研究表明，荼多酚具有强烈的抑制脂质过氧化和ＤＮＡ被氧化的功能。１．５．４抗肿瘤、抗癌，抗突变

荼多酚、ＥＧＣＧ对肿瘤、癌症的预防主要是作用在突变阶段的抑制上．茶多酚、ＥＧＣＧ对ｕｙ和多种致癌物质引起的突变具有抑制作用．胡秀芳等Ｄ引研究发现茶多酚可以抑制ｕＶ引起的皮肤肿瘤。曹明富等聆＂研究发现低浓度的茶多酚－－ＴＪ，Ｙ，抑制致突变物ＭＮＮＧ，ＥＭＳ和ＮａＮ，诱导ＳＯＳ应答反应．茶多酚、ＥＧＣＧ通过影响肿瘤细胞的生长周期来抑制肿瘤细胞的生长，并且还可以使肿瘤细胞生长阻滞在某个生长周期，诱导细胞凋亡．ＡｈｍａｄＮ等Ｈ们研究报道，ＥＧＣＧ可以调节表皮癌细胞Ａ４３１细胞中的ｃｙｃｌｉｎＤｌ、ＣＤＫ４和ＣＤＫ６的蛋白表达，是Ａ４３１细胞的生长周期停滞在Ｇ。／Ｇ。期，进而导致Ａ４３１细胞凋亡．沈生荣等¨ｕ研究发现一定剂量的ＥＧｃＧ可以保护由６－０ＨＤＡ诱导的ＰＣＩ２因此的细胞损伤，从而影响ＰＣＩ２的细胞凋亡．

１．５．５防治心血管疾病

心血管疾病在中老年人中是比较常见的，因为随着年龄的增长，机体中的各个组织器官逐渐减退，胆固醇开始堆积，血粘度增大，流动性下降，继而很容易形成血栓，血管壁增厚，管壁的韧性变小，脆性增大，导致高血压、冠心病、心肌梗塞等心血管系统的疾病．日本专家“２１研究表明ＥＧＣＧ能对胶原和ＡＤＰ诱导的血小板具有抑制作用．陈群等“朝对高凝状态心血管病人服用茶多酚后的抗栓作用进行观察，结果发现茶多酚有明显的抗栓作用，并且对肝功能、肾功能、血糖没有不良的影响．陶厚权等¨町研究发现茶多酚可以降低老鼠血压，并且发现降压作用及时间与剂量成正比关系．

１．５．６抗衰老衰老是积体不可避免的一个自然过程，目前科学家对衰老的机制提出的假说

福建农林大学硕士学位论文

主要有：氧自由基学说、线粒体损伤学说、ＤＮＡ损伤修复学说，端区假说等．但是这些假说都不能全面地解释衰老的现象．研究表明茶多酚、ＥＯＣ（；具有抗衰老的功能。林一萍等Ｈ帕采用茶多酚处理老年小鼠并与未用茶多酚处理的成年小鼠比较发现，老年小鼠的肝细胞ＤＮＡ甲基化酶活性比成年小鼠提高，从而延缓老年小鼠的衰老．潘喜华等“钉研究发现，利用茶多酚作为果蝇培养基的果蝇会比未添加茶多酚培养基的果蝇的半数死亡时间及平均最高寿命显著延长．朱洁Ｈ棚等研究发现ＥＧＣＧ可以上调经过多次长、中波紫外线照射引起的人皮肤成纤维细胞的光老化概率．

１．５．７其他药理作用

茶多酚、ＥＧＣＧ不仅具有以上几方面的药理作用，而且还具有调节免疫系统¨＂、降血糖、治疗糖尿病的功效．此外，还有些报道表明茶多酚可用于消除口臭、减肥、美容等．在国内，茶多酚已作为心血管治疗药物投入生产，荼多酚的其他药理作用还停留在临床阶段，还需进一步地深入研究．

福建农林大学硕士学位论文

１．６茶多酚、ＥＧＣ６的分离纯化的现状与展望

我国的茶园面积和茶叶产量都居世界前列，但茶业的总产值和茶叶附加值却并不高．荼多酚于１９９１年由中国农业科学院茶叶研究所首次工业化生产成功，每年产量仅为２吨．其后的ｌｏ多年间，茶多酚的生产技术得到了快速的发展。１９９６年以前，我国生产的荼多酚主要内销，主要用于医药行业，年需求量约４０吨，产值约１０００万元．１９９９年起，茶多酚开始部分外销，当年的销售量为２２０吨，产值３０００万元．２００３年的销售量达２０００吨，产值已超过３亿元．我国的茶多酚、ＥＧＣＧ加工企业大部分集中在江浙两地，近两年西部地区开始兴起，目前全国共有４０余家茶多酚中小型加工企业，年总生产能力约４０００吨，ＥＧＣＧ在近２—４年的市场容量（主是国际市场）分别约是２５００Ｋｇ和４００Ｋｇ左右，目前国内相关企业对含量９５－９８％ＥＧＣＧ的报价一般为８０－１２０万元／Ｋｇ，因此ＥＧＣＧ具有更广阔的市场前景．但ＥＧＣＧ由于其分离难度比较高，分离成本比较高，因此生产规模有限。

茶多酚、ＥＧＣＧＩ困其药理方面的功能，已成为医药、食品界开发的热点，目前除了荼多酚片剂、胶囊剂等外，作为抗氧化剂和食品添加剂在粮油食品、方便食品、水产品、肉制品、调味品、糖果、饮料等多类食品中均有广泛的应用．ＥＧＣＧ具有良好的抗癌作用，已作为抗癌药物投入临床治疗中．茶多酚、ＥＧＣＧ有强劲的市场需求，开发和应用前景十分广阔，而荼多酚、ＥＧＣＧ的分离纯化技术也必然越来越成熟．１４

福建农林大学硕士学位论文

１．７本研究的目的及意义

随着人们生活质量的不断提高，人们的饮食消费观念也趋向天然化、营养化，保健化．茶叶作为一种具有独特保健功效的天然饮料而深受人们喜爱．随着科技的发展，茶叶中有效的天然活性成分不断被开发利用．而随着研究的深入，茶叶中茶多酚类物质的新功能不断被发现，茶多酚是一种天然无毒的抗氧化剂，具有清除自由基和抗氧化等生物活性，在抑菌，抗病毒、防癌抗癌，抑制肿瘤、防治心血管疾病等方面具有良好功效，并且茶多酚中的ＥＧＣＧ具有很好的抗癌作用．目前，茶多酚产品在食品添加剂、日用化工、医药等领域开始大量应用，具有非常广阔的国内外市场，而荼多酚的提取分离技术也在不断的提高，茶多酚产品的生产规模也不断的产业化、成熟化．

茶叶的产地、品种、鲜叶嫩度不同，荼多酚及茶多酚内ＥＧＣＧ的含量也会有差别，所以原料的选择对荼多酚础ＧｃＧ的提取分离影响很大．福建农林大学农产品品质研究所林金科博士对２１１个品种、株系进行高含量ＥＧＣＧ的茶树特异资源的筛选，成功筛选出平均新梢ＥＧＣＧ含量高达１５．３４％的“１００５”株系ｎ盯．本研究主要目的在此基础上，对高ＥＧＣＧ含量的“１００５”茶树品种进行荼多酚、ＥＧＣＧ的提取分离工艺优化，确定“１００５”茶树品种从鲜叶到茶多酚再到ＥＧＣＧ提取分离的一系列最佳提取工艺，通过与普通茶树品种对比进一步表明“１００５一茶树品种的茶多酚、ＥＧＣＧ深加工在优质种质资源方面独特优势．本研究为以高ＥＧＣＧ含量的“１００５力品种作为茶多酚及ＥＧＣＧ产品工业化生产原料进行大规模的产业化生产提供了基础性的研究。，

福建农林大学硕士学位论文

第二章杀青工艺对鲜叶中荼多酚、ＥＧＣＧ含量的影响

荼叶在加工的过程中，通常先会进行杀青对鲜叶进行固样品，然后再加工成各种成茶。而杀青方式的不同会影响固样后鲜叶中的活性成份变化，如茶多酚，ＥＧＣＧ、茶氨酸等．研究表明不同杀青工艺会对儿荼素组分如茶多酚、ＥＧＣＧ含量发生变化‘例。

本试验通过对微波杀青、锅炒杀青、蒸汽杀青、烘箱杀青４种不同杀青方式进行比较，以茶多酚、ＥＧＣＧ的含量为评定指标，选出能使茶多酚和ＥＧＣＧ保留量较高的杀青方式．

１材料与方法

１．１材料

福云六号茶叶，一芽三叶标准，采自福建农林大学茶场

１．２试剂与仪器

试剂：ＥＧＣＧ标准品，上海友思生物技术有限公司；甲醇（色谱纯），ＭＥＲＣＺ／２－司；

Ｏ．４５Ｉｌｍ有机滤膜

仪器：Ｗａｔｅｒｓ１５２５高效液相色谱系统；Ｕｌｔｒｏｓｐｅｃ２０００紫外检测器；Ｓａｒｔｏｒｉｕｓ

电子天平；８０目筛；九阳粉碎机；Ｍｅｍｍｅｒ水浴锅；Ｎａｔｉｏｎａｌ微波炉；

ＤＨＧ一９１４０Ａ型电热恒温鼓风干燥箱；ＳＨＢ－ｍＡ循环水式多用真空泵

１．３方法

１．３．１鲜叶的处理

利用微波杀青、锅炒杀青、蒸汽杀青、烘箱杀青４种不同杀青工艺对鲜叶进行杀青，然后烘干固样．

①微波杀青：取鲜叶１５０ｇ各３份，微波功率８００Ｗ，微波时间２ｍｉｎ．

②锅炒杀青：取鲜叶１５０ｇ各３份，锅温２００＂Ｃ～３００＂Ｃ，锅炒时间３ｍｉｎ．③烘箱杀青：取鲜叶１５０ｇ各３份，烘箱温度１２０＂Ｃ，时间３ｍｉｎ．

④蒸汽杀青：取样品１５０ｇ各３份，蒸汽杀青，时间３ｍｉｎ．

⑤固样：将４种杀青方法杀青后的茶叶于９０℃烘干４０ｒａｉｎ，含水量（＜３勋．

固样后的样品，粉碎后过８０目筛，准确称取５．００９茶粉放入铝盒中，１０５１６

福建农林大学硕士学位论文

℃烘干至恒重．准确称取烘干至恒重后的茶末１．００９于广口瓶中，加１００ｍＬ蒸馏水于１００＂Ｃ水浴３０ｍｉｎ，冷却３０ｍｉｎ后过滤，取滤液，滤渣加１００ｍＬ蒸馏水于１００℃水浴３０ｍｉｎ，冷却３０ｍｉｎ后过滤，合并２次滤液定容到５００ｍＬ．

取定容后的茶汤ｌｍＬ，测定茶多酚的含量．

取定容后的茶汤ｌｍＬ，配成５ｍＬ２０％甲醇溶液，用０．４５¨ｍ有机滤膜膜过滤，待测．

１．３．２茶多酚、ＥＧＣＧ的测定方法

①荼多酚的测定方法（酒石酸亚铁比色法）：

准确吸取１．３．１中的待试液１ｍＬ，注入２５ｍＬ的容量瓶中，加水４ｍＬ和酒石酸铁溶液５ｍＬ，充分混合，再加ｐＨ７．５的缓冲溶液至刻度，用１０ｍｍ的比色皿，在紫外波长５４０ｎｍ处，以试剂空白溶液为参比，测定吸光度（Ａ）．浸提液中茶多酚的含量，以干态质量百分率表示，按下式计算：

Ｌ２ｘＭ荼多酚ｃ（ｊ１）．—Ａｘｌ．９—５７ｘ２×———二Ｌ×１００１０００ｘｍ

式中：ＬＩ一试液的总量（ｍＬ）；

Ｌ２一测定时的用液量（ｍＬ）；

Ｍ一试样的质量（ｇ）；

ｍ一试样干物质含量（％）：

Ａ一试样的吸光度；

ｌ。９５７一用１０ｍｍ比色杯，当吸光度等于０．５０时，每毫升茶汤中含茶

多酚相当于１．９５７ｍｇ．

②ＥＧＣＧ测定方法：

利用高效液相色谱法测定ＥＧＣＧ，取１．３．１中过滤好的待测液１０“Ｌ，在色谱条件为：Ｃ１８色谱柱；紫外检测波长：２７８ｎｍ；流动相为甲醇：水：冰乙酸；２０：７８：２；流速ｌｍＬ／ｍｉｎ；柱温３８１２下进行测定．

１．３．３ＥＧＣＧ标准曲线的绘制

精确称取ＥＧＣＧ标准样品２．４０ｍｇ，加１ｍＬ２０ｊＩ色谱甲醇溶解．取溶解后的标准样品溶液分别用２０ｊ（色谱甲醇稀释成标准样品浓度为Ｏ．０１２ｍｇ／ｍＬ、０．０１６ｍｇ／ｍＬ、

０．０２４ｍｇ／ｍＬ，Ｏ．０４８ｍｇ／ｍＬ．依照上述的色谱条件，进行测定，做出标准曲线图．１７

福建农林大学硕士学位论文

２结果与分析

２．１．１ＥＧＣＧ标准曲线的制作

根据方法１．３．１，以标准样品浓度为Ｘ轴横坐标，以相对应的峰面积为Ｙ轴纵坐标，如图２显示，其线性方程：ｙｆｆｉｌ０７ｘ－１３３６７（Ｒ２＝Ｏ．９９８８）

６０００００

５０００００

４０００００

３０００００

《喧蚺拳妯２０００００

１０００００

Ｏ

ＯＯ．０２Ｏ．０４０．０６

ＥＧＣＧ标准样品浓度（ｍｇ／ｍ１）

图２ＥＧＣＧ标准样品的标准曲线

２．１．２鲜叶在不同杀青方式处理后测得样品中荼多酚、ＥＧＣＧ的含量（茶多酚含量、

ＥＧＣＧ含量均指每克茶粉中荼多酚、ＥＧＣＧ的百分含量）如下图３，图３中数据是３次平均后的数据．

如

”

加

＂

加

，，、曩、－，酚含量（％）合量（％）一如淼Ｉ皿

０

微波杀青锅炒杀青蒸汽杀青烘箱杀青杀青方武

图３不同杀青工艺处理后样品中茶多酚、ＥＧＣＧ的含量

从图３中可以得出

１）荼多酚保留量较高的杀青顺序是微波杀青＞锅炒杀青＞烘箱杀青＞蒸

汽杀青，在茶多酚保留量上微波杀青比蒸汽杀青提高了１２．７％

１８

福建农林大学硕士学位论文

２）ＥＧｃＧ保留量较高的杀青顺序是微波杀青＞烘箱杀青＞锅炒杀青＞蒸汽

杀青，微波杀青在保留ＥＧＣＧ含量方面比锅炒杀青、蒸汽杀青、烘箱杀青提高了１．６８％、２．６９％、１．５５％．

３）综合考察荼多酚含量与ＥＧＣＧ含量来看，杀青顺序依次是微波杀青＞

烘箱杀青＞锅炒杀青＞蒸汽杀青．

４）微波杀青是一种可以使茶多酚、ＥＧＣＧ保留量较高的杀青方式，选择

杀青方式对鲜叶中荼多酚、ＥＧＣＧ含量有非常关键的影响．１９

福建农林大学硕士学位论文

３讨论

杀青对茶叶的品质起着决定性作用，它主要是通过高温，破坏鲜叶中酶的活性（主要是多酚氧化酶ＰＰＯ和过氧化物酶ＰＯＤ）‘５∞，从而阻止鲜叶中的多酚类物质氧化转变成其他物质。因此，在用鲜叶作为提取茶多酚以及进一步提取ＥＧＣＧ的原料，杀青是一项必不可少的工序．

茶叶中多酚氧化酶ＰＰＯ和过氧化物酶ＰＯＤ在３０℃一５０℃范围内酶活性最强，因此杀青的关键就是如何使多酚氧化酶ＰＰＯ和过氧化物酶ＰＯＤ快速失活。本试验所选用的四种不同杀青方式其基本区别就是热量传递介质不同，从而瞬间释放出的热量不一样，对多酚氧化酶ＰＰＯ和过氧化物酶ＰＯＤ失活及多酚类物质的转化速率也不同．

蒸汽杀青过程中，由于蒸汽具有湿热作用，而ＥＧＣＧ会由于湿热作用水解氧化，从而使ＥＧＣＧ含量下降．烘箱杀青则是以纯铁质作用，水蒸气很快就蒸发，因此ＥＧＣＧ的保留含量比蒸汽杀青高．锅式杀青则以铁质和蒸汽双重作用，因此ＥＧＣＧ的保留量介于蒸汽杀青和烘箱杀青之间．用微波进行茶叶杀青的基本原理是：在微波为４５０ＭＨｚ时，有２．４５ｘ１０７次／ｓ振波，彼此间的碰撞产生了大量的摩擦热量，迅速提高了鲜叶的温度，从而瞬间失活多酚氧化酶ＰＰＯ和过氧化物酶ＰＯＤ，因此微波杀膏方式可以使ＥＧＣＧ得到最大的保留量．

微波杀青固样可以使ＥＧＣＧ保留量较高，时间可控、功率可调，速度很快，但也存在排汽能力不够、物料盘透气性不合要求等问题，需要在今后的进一步研究中加以改进．同时，就目前来说微波固样还不适合工业化杀青，要使微波杀青应用工业化杀青仍需进一步研究．

福建农林大学硕士学位论文

第三章荼多酚的漫提及分离纯化条件的研究

采用五因素五水平的二次正交旋转组合设计，以乙醇为浸提溶剂，探索乙醇浓度、浸提次数、浸提时问、浸提温度、漫提体积比与茶多酚浸出量之间的相关性，并建立相应回归方程进行数学模型上分析．

对三种比较合适分离茶多酚的大孔树脂进行筛选，氟逢出最合适分离茶多酚的树脂类型（ＤＭ３０１），并通过试验得ｔ｝：ＤＭ３０１树脂分离纯化荼多酚的最佳工艺条件．

１茶多酚的浸提

１．１材料与方法１．１．１材料

八仙荼叶荼末，取粉碎后过８０目筛１．１．２试剂与仪器

试剂：乙醇（分析纯）

仪器：Ｕｌｔｒｏｓｐｅｃ２０００紫外检测器－Ｓａｒｔｏｒｉｕｓ电子天平；８０目筛；九阳粉

碎机；Ｍｅｍｍｅｒ水浴锅；ＳＨＢ－ＩＩＩＡ循环水式多用真空泵；ＤＰＳ分析软件

１．１．３方法

采用五因素五水平的二次正交旋转组合设计方案如表１，分析乙醇浓度、浸提次数、浸提时间、浸提温度、浸提体积比与荼多酚浸出量之间的相关性．以２９茶粉为原料，根据下面五因素水平编码值表的测定各个因素水平下荼多酚浸出量，茶多酚浸出量以２９荼粉中含有茶多酚的质量表示．

表１荼多酚浸提条件五因素水平编码值表

乙醇浓度（ｊ１）Ｘｌ

２１Ｏ

浸提次数Ｘｚ浸提时间（ｍｉｎ）Ｘ，

Ｏ，，Ｏ５ＯＯ

浸提温度（℃）Ｘ．

浸提体积比ｘ，

１ｌ１ｌ１

００

ｍ

∞∞伯加

，ｔⅢ

如卯如如

５Ｏ

ｑ吨

２

１

１，

３Ｏ

１Ｏ

１Ｏ

福建农林大学硕士学位论文

１．２结果与分析１．２．１数学模型的建立

通过茶多酚浸提条件五元二次正交旋转组合设计结构矩阵进行试验，得到结果见表２

表２荼多酚浸提条件的五元二次正交旋转组合设计结构矩阵及结果

处理号

ｘ。Ｘｌ

ｘ，Ｘ．

ｘｓ

茶多酚的浸出量（ｍｇ／ｇ）

ｌｌ

ｌｌ１

ｌ

０

—ｌｏ

ｑ

１

ｑ■ｌ

ｌ●ｌｌｌ

ｌ

１

ｑ

１ｌ

ｑ

ｌ

ｑ以ｑｑ

１ｌ

ｑ

ｏ以１

ｌ

王Ｅ置乳矗Ｚ

ｑｌ

ｔ

ｑ‘ｌ

ｌ

ｎ

ｌ

ｑ以ｏｄｑｑ

１

ｑ

ｑ以ｌ

ｌ

殳争ｔ

７４１

ｌ＿ｌｑ

ｌ

ｌ

ｑ

０‘以ｑ

Ｏ

ｑ

ＯＯＯ

ｑ

ＯＯＤＯＯ

ｑ—ｌ

Ｏ

Ｏ

２６Ｏ７ＳＯ５６９６３ｌ９３５５

ｑ屯２

Ｏ

Ｏ

ＯＯ

ＯＯ

屯Ｏ

Ｏ

Ｏ

ＯＯＯＯＯＯ

ｔ

２ＯＯＯＯ

Ｏ

Ｏ

Ｏ

ＯＯＯ

ＯＯＯ

屯ＯＯ

Ｏ

ｑ

２Ｏ

Ｏ

Ｏ

ＯＯ

Ｏ

Ｏ

Ｏ

ＯＯ

ＯＯＯ

Ｏ

ＯＯ

ＯＯ

ＯＯ

Ｏ

Ｏ口ＯＯ

ＯＯ

ＯＯ

Ｏ

３

３５

ＯＯＯ

０

ＯＯＯ０

Ｏ

Ｏ

Ｏ

３６

Ｏ

Ｏ

Ｏ０

Ｏ

５９７．１

Ｏ

福建农林大学硕士学位论文

表２的结果用ＤＰＳ软件进行数学模型分析，以荼多酚浸出量为应变量Ｙ，乙醇浓度、浸提次数、浸提时间、浸提温度、浸提体积比五个因素为自变量，进行多元分析，建立以下回归方程：

ｙ＝５７３．８８－２４．９５ｘｌ＋１８．１７ｘ２＋１７．５２ｘ３＋２０．９２ｘ．＋９．４０ｘ５－１９．１４ｘ１２＿８．４０ｘ２２－９．２８ｘ３２—１８．０３Ｘ４２－１１．２４ｘｓ２＋Ｏ．２００ｘ１Ｘ２－６．１８ｘｌＸ３－１７．５８ｘｌＸ．＋１．２００ｘ１Ｘ５－３．４１ｘ２Ｘ３＋Ｏ．９４ｘ２Ｘ．＋１５．２４ｘ２Ｘ５－５．８６ｘ３ｘ４－３．２９ｘ３Ｘ５－２．０９ｘ．Ｘ５

利用ＤＰＳ软件对以上回归方程进行试验结果方差分析，结果如下表３

表３五元二次正交旋转组合试验结果方差分析表

从表３的方差分析中得出失拟均方显著性检验Ｆ１＝４．７００＜ＦⅧｌ‘．”一５．８０，说明耒控因素对试验处理的影响不明显，误差是随机的，试验所得到的方程与实澳ｌ值拟合程度较好．回归均方显著性检验Ｆ：ｔ５．６４６＞Ｆ．－．１ａⅧ一３．３７，达到显著水平，说明五个因素与荼多酚浸出量关系之间的密切程度达到极显著水平．１．２．２主效应分析

福建农林大学硕士学位论文

在ｏ【＝Ｏ．１０显著水平上剔除不显著项后，简化后的回归方程为：

ｙ＝５７３．８８－２４．９５ｘｌ＋１８．１７ｘ２＋１７．５２ｘ３＋２０．９２ｘ．－１９．１４ｘ：－９．２８ｘ］－１８．０３ｘ．

２－１１．２４ｘ：－１７．５８ｘｌｘ．＋１５．２４ｘ２Ｘ５

从以上方程可以得出，荼多酚浸提条件五因素与茶多酚浸出量的关系，５个因素的影响大小分别为乙醇浓度＞浸提温度＞浸提次数＞浸提时间＞浸提体积比．Ｉ．２．３单因素效应分析

在ｃｔ＝Ｏ．１０显著水平上剔除不显著项后，其他因子为零水平前提下，寻求单一因子与荼多酚浸出量的关系，得到以下各个因素的偏回归方程．

Ｙｌ＝５７３．８８－２４．９５ｘ广１９．１４ｘ１２

Ｙ２＝５７３．８８＋１８．１７ｘ２

Ｙ３＝５７３．８８＋１７．５２ｘ３－９．２８ｘ３２

Ｙ．＝５７３．８８＋２０．９２ｘ‘一１８．０３ｘ．２

ｙｓ＝５７３．８８—９．２３５ｘ２２

根据上述各个因子的偏回归方程，以茶多酚浸出量为应变量Ｙ，五个处理水平为自变量ｘ，各个因素在不同处理水平上对茶多酚浸出量的关系如图４：

芒７００∞

目

■

羽

啷

裔５５０坻

转

４００理水平

—２—１．５—１—０．５００．５１１．５２

＋乙醇浓度＋漫提次数＋浸提时问

漫提温度＊一漫提体积比

图４在不同处理水平上各个因子对茶多酚浸出量影响

通过图４各偏回归方程曲线图分析各个因子在不同处理水平上与荼多酚浸出量的关系：①乙醇浓度在浸提过程中的影响

福建农林大学硕士学位论文

从图４中的乙醇浓度的方程曲线得出，乙醇浓度与荼多酚浸出量的关系为抛物线的关系，抛物线的曲线下降幅度比较大，乙醇浓度的变化对茶多酚浸出量的影响是比较大的，乙醇浓度越高，荼多酚浸出量的下降量越大．茶多酚浸出量在处理水平一０．５水平（乙醇浓度为５０％）达到最大值，而在高于乙醇浓度５０％或者低于乙醇浓度５０％时，均呈下降的趋势．

②浸提次数在浸提过程中的影响

从图４浸提次数的方程曲线得出，浸提次数与荼多酚浸提量呈上升直线关系，但是直线的斜率相对较低，即随着浸提次数的增加，荼多酚浸出量的增加相对比较平缓。因此我们选择浸提次数时，为了节约原料耗材，以浸提次数４次为最佳的浸提次数．

③浸提时间在浸提过程中的影响

从图４中的浸提时间的方程曲线得出，并非浸提时间越长，荼多酚的浸出量越多，浸提时问与茶多酚浸提量的关系呈抛物线的关系，即茶多酚浸出量随着浸提时间的增加而减少，茶多酚可能随着浸提时间的增加成分发生变化．当浸提时间在处理水平１时（浸提时间５０ｍｉｎ），荼多酚浸出量达到最高值．

④浸提温度在浸提过程中的影响

从图４中的浸提温度的方程曲线得出，浸提温度与茶多酚浸出量呈抛物线关系，曲线的幅度上升相对也比较大，浸提温度在处理水平Ｏ．５（浸提温度为７０℃）的时候，荼多酚浸出量达到最高水平，此时是最佳的浸提温度．

⑤浸提体积比在浸提过程中的影响

从图４中的浸提体积比的方程曲线得出，浸提体积比与茶多酚浸出量大约呈抛物线的关系．浸提体积比的抛物线整体上看来是比较平缓，浸提体积比在处理水平Ｏ（浸提体积比为１：５０）水平时，荼多酚浸出量达到最高值．

１．２．４最佳浸提方案确定

综合对五个因素结果分析可以得出，荼多酚的最佳浸提条件是浸提溶剂乙醇浓度５０％、浸提次数４次、浸提时间５０ｍｉｎ、浸提温度７０℃、浸提体积比为１：５０．

福建农林大学硕士学位论文

１．３讨论

荼叶的浸提是指将茶叶加入溶剂中，使茶叶中各种可溶性化学成分溶出，从而使茶叶中可溶物与不可溶物达到完全分离的过程．在对茶叶内含物浸出的动力学研究发现，荼叶内合物从茶叶内部扩散至茶叶表面这一过程是整个浸出的限速阶段，这一阶段的浸出速率与浸出溶剂（水或者乙醇等溶剂）有关，而与溶质（茶叶内含物）即无关ｂ¨．茶多酚浸提条件试验的结果分析也证实了浸提溶剂在对其他整个浸提过程的影响比其他因素的影响要大．由于茶多酚是一类热稳定性差的物质，在温度较高的条件下，易发生氧化反应，从而失去活性，所以在茶叶浸取的时候，要考虑温度对茶多酚漫提的影响，试验也进一步说明了温度对茶多酚浸提的影响仅次于浸提溶剂．浸提次数、浸提时间、浸提的体积比对茶多酚浸提的影响相对较小，但是在产业化过程中，应该考虑到其成本因素，因此在进行产业化过程中应该就浸提次数、浸提时间、浸提的体积比之间选择一个最佳的平衡点．

目前茶多酚浸提溶剂主要是水溶液和乙醇溶液，以乙醇作为浸提溶剂可以提高茶多酚的浸出率，但是考虑到乙醇的低毒性和浸提的成本，一般在产业化生产上的适用性不高．本试验结果显示高浓度的乙醇不利于荼多酚的浸出，而低浓度的乙醇可以提高荼多酚的浸出量，综合考虑生产成本和效益，可以在产业化生产中寻求以低浓度乙醇为浸提溶剂，并且对乙醇进行回收再利用的茶多酚浸提的生产路线．从茶多酚浸提的其他４个浸提因素分析上说明了茶多酚的浸提是一个极其复杂的多因素互作效应的过程，而进一步揭示茶多酚浸提中多个因素浸提条件如何互相作用的的浸提机理仍然进一步研究．

福建农林大学硕士学位论文

２茶多酚的分离纯化

２．１材料与方法

２．１．１材料

八仙茶末，粉碎后过８０目筛

２．１．２试剂与仪器

试剂：乙醇（分析纯）；丙酮（分析纯）；甲醇（分析纯）；

仪器：２．６ｍｍ×５０ｃｍ普通层析柱；；ＤＭｌ０１、ＤＭ３０１大孔树脂，天津海光化工有

限公司；Ｈ１０２０大孔树脂，天津南开大学化工厂；Ｕ１ｔｒｏｓｐｏｃ２０００紫

外检测器；Ｓａｒｔｏｒｉｕｓ电子天平；８０目筛；九阳粉碎机；Ｍｅｍｍｅｒ水

浴锅；ＳＨＢ－ＩＩＩＡ循环水式多用真空泵；ＲＥ－５２０３旋转蒸发器；Ｈｘ一１０５０

恒温循环器

２．１．３方法

１）供试液的制备

按茶粉：水－－２：４００的质量比，于沸水中浸提２次，过滤，合并澄清液，作为供试液．

２）树脂的预处理

树脂使用前，需根据使用要求进行不同程度的预处理，目的是将树脂内孔残存的未聚合单体与致孔剂、分散剂、防腐剂等有机残留物除去，提高树脂洁净度，提高树脂使用的安全性．

①用水除去水溶性杂质

②用有机溶剂除去脂溶性杂志

⑦再用吸附介质除去残留的其它溶剂，以免影响树脂的吸附量

３）树脂的吸附

①静态吸附量：取处理好的树脂，置于１００此￥锥瓶中，加入一定体积已知浓

度的供试液，盖紧瓶塞，于室温放置２４小时，然后分别吸取前后的溶液进行测定．算出静态吸附量、吸附率．２７

福建农林大学硕士学位论文

静态吸附量（ｍｇ）；（吸附前供试液’浓度－吸附后的供试液浓励×加入供试液

的体积

静态吸附率（％）啼态吸附量／吸附前供试液浓度×１００％．

②动态吸附量：取一定质量的树脂装入普通层析柱（２．６ｍｍ×５０ｃｍ）中，将已知

浓度的供试液以一定流速经过树脂层析柱，监测流出液中供试液的浓度．当其吸附饱和时候，可计算树脂动态吸附量、吸附率．

动态吸附量（ｍｇ）＝（吸附前供试液浓度一流出后的供试液浓度）Ｘ上柱供试

液体积

动态吸附率（％）＝（吸附前供试液’浓度－流出后的供试液浓度）／吸附前供试

液浓度×１ＯＯ％

４）树脂的解吸

①静态解吸量：往已知茶多酚吸附量的吸附饱和的树脂中加入一定体积的解吸

剂，盖紧瓶塞，于室温放置２４小时，然后测定解吸后的溶液的

茶多酚的浓度．

静态解吸量（ｍｇ）＝解吸前的茶多酚吸附量－解吸后的溶液的茶多酚浓度×（解

吸前供试液的体积＋解吸剂体积）

静态解吸率（ｍｇ）＝静态解吸量／解吸前的荼多酚吸附量ｘ１００ｊＩ

⑦动态解吸量：已知茶多酚吸附量的树脂柱，将一定体积的解吸剂以一定流速

经过树脂层祈柱，监测流出液中解吸液的荼多酚浓度．当液中

解吸液的浓度趋近于稳定时，计算树脂动态解析量、解析率。

动态解吸量（ｍｇ）＝已知荼多酚吸附量一流出后的解吸液的浓度×解吸剂的体

积

动态解吸率（ｊＩ）＝动态解吸量／已知荼多酚吸附量×１００％

５）树脂的再生

树脂再生方法一般是用无水乙醇或９５％乙醇洗脱至无色后，树脂柱即已再生．然后用大量水洗去乙醇，可用于相同植物成分的分离．若树脂颜色变深，可试用稀碱威稀酸溶液清洗，最后水洗至中性．树脂再生的评价指标应从树脂的吸附性

福建农林大学硕士学位论文

能、稳定性等方面综合判断．具体可用比吸附量、比洗脱量、有效成份保留率及纯度等指标评价．２．２结果与分析

２．２．１大孔吸附树脂的筛选

取ＤＭ３０１、Ｄ１０１、Ｈ１０２０．５－．种不同型号树脂５９分别置于ｌＯＯｍＬ．三角锥中，各加，入５０ｍＬ的供试液，室温下静置４８小时后测各个型号树脂静态吸附率（试验重复三次取平均值）．结果如表４，虽然这三种树脂对茶多酚都有良好的吸附能力，但ＤＭ３０１ｌ：ｈＤｌ０１、Ｈ１０２０具有更好的茶多酚的吸附能力，因此选择ＤＭ３０１树脂用来分离纯化茶多酚．

表４三种不同型号树脂对茶多酚吸附性能的比较

２．２．２

ＤＭ３０１树脂分离纯化茶多酚工艺条件

①ｐＨ值对ＤＭ３０１树脂吸附茶多酚能力的影响

茶多酚在酸性介质中比较稳定，在碱性介质中不稳定，因此本试验ｐＨ值的选定为２．ＯＯ，２．７８、４．１５、５．０１、６．１７．取ＤＭ３０ｌ树脂５９，供试液５０ｎｄ．，，室温２５℃，放置２４ｈ后测得供试液的终止茶多酚浓度，结果如表５表示，酸性条件有利于ＤＭ３０１树脂对茶多酚的吸附，ｐＨ值范围２．ＯＯ～３．００内荼多酚的吸附率较高，而随着ｐＨ值的增加，荼多酚的吸附率呈下降趋势．因此在进行吸附前调节供试液的ｐＨ值可以提高ＤＭ３０１树脂对荼多酚的吸附率．

表５

ｐＨ值

初始荼多酚质量浓度（鸭／ｍＬ）终止荼多酚质量浓度（ｍｇ／ｍＬ）

吸附率∞

２．６３

ｐＵ值对ＤＭ３０１树脂吸附的影响

２．６３２．１０７９．８５

２．６３Ｉ．９９７５．６７

２．６３１．９３７３．３８

２．６３１．８９

７１．８６

２．０５７７．９５

２９

福建农林大学硕士学位论文

②流速对ＤＭ３０１树脂吸附和解吸茶多酚能力的影响

在流速为２ｍＬ／ｍｉｎ、４ｍＬ／ｍｉｎ，６ｍＬ／ｍｉｎ、８ｍＬ／ｍｉｎ、１０ｒａＬ／ｒａｉｎ时，同等体积的供试液的条件下，考察流速对ＤＭ３０１树脂吸附茶多酚能力的影响。结果如下表６，结果显示，随着流速的加快，树脂对荼多酚的吸附率降低。当流速在２ｍＬ／ｍｉｎ时，ＤＭ３０１树脂对茶多酚的吸附效果比在其响９４个流速下的高

袁６流速对蹦３０ｌ树脂吸附荼多酚能力的影响

流速（ｍＬ／ｍｉｎ）２４６８１０

在当流速为２ｍＬ／ｍｉｎ、４ｍＬ／ｍｉｎ、６ｍＬ／ｍｉｎ、８ｍＬ／ｍｉｎ、ｌＯｍＬ／ｍｉｎ时，所用的解吸剂和吸附的供试液体积一样的条件下，考察流速对ＤＭ３０１树脂解吸荼多酚能力的影响如下表７，结果显示，当随着流速的加快，树脂对茶多酚的吸附率降低，流速在２ｍＬ／ｍｉｎ时，ＤＭ３０１树脂吸附对茶多酚的解吸效果最好．

表７流速对蹦３０１树脂解吸茶多酚能力的影响

流速（ｍＬ／ｍｉｎ）２４

３．５６

３．１８

８９．３２６８２．９６２．４６８３．１０１０２．６９２．２２８２．５２吸附荼多酚质量浓度（ｍｇ／ｍＬ）４．２４洗脱出茶多酚质量浓度（ｍｇ／ｍＬ）解吸率（ｊ１）３．８５９０．８０３．１８２．６４８３．０１

⑦解吸荆的选择

取定量的ＤＭ３０１树脂，充分吸附后，过滤，取滤后的树脂于不同浓度的乙醇、甲醇、丙酮中，室温（２５＂Ｃ），放置２４ｈ，测得各解吸剂在不同浓度下的解析率。结果如图５表示，结果显示三种解吸剂解吸能力的从大到小依次是丙酮、乙醇、甲醇，当丙酮浓度为８０％时，荼多酚在ＤＭ３０１树脂上的解吸率最高．因此选定８０％丙酮作为最佳的解吸溶剂．

福建农林大学硕士学位论文

１００

邑９０

篓８０

装７０

６０一＋乙醇

５０＋甲醇

４０一一丙酮

３０

２０

１０

Ｏ

２０４０６０８０１００解吸剂浓度（％）

图５不同解吸剂在不同浓度下的解析率

④ＤＭ３０１树脂的稳定性试验

取定量的ＤＭ３０１树脂装柱，连续进行五个周期的动态吸附解吸试验，结果如表８表示，结果显示ＤＭ３０１树脂对荼多酚的吸附解吸性能较为稳定，效果良好．

表８ＤＭ３０１树脂的稳定性试验

＠ＤＭ３０１树脂的再生．

对ＤＭ３０１树脂的再生方法为用１００％丙酮洗去部分吸附在树脂上面的色素，洗至ＤＭ３０１树脂柱呈白色，然后用大量水洗去丙酮，水洗至中性后完成ＤＭ３０１树脂的再生．

２．２．２．１ＤＭ３０１树脂的分离纯化荼多酚最佳工艺条件

从前面试验结果，我们得出了ＤＭ３０１树脂的分离纯化茶多酚最佳条件为调节茶水浸提液在ｐＨ＝２—３范围内，以流速为２ｍＬ／ｍｉｎ吸附，在８０％丙酮为解吸剂的条件下，ＥＡ２ｍＬ／ｍｉｎ解吸，然后用１００％丙酮洗去吸附在ＤＭ３０１树脂上的少量色素，最３１

福建农林大学硕士学位论文

后水洗至中性完成树脂的再生．

２．３讨论

树脂法提取分离茶多酚的优点是提取简单，操作方便，能耗较低，操作条件温和，避免有效成分的丧失，产品得率和纯度都比较好，而且树脂容易再生，可连续生产，有利于大规模工业化生产．因此，树脂在茶多酚的工业生产中有广阔的应用前景．选择合适的树脂种类分离荼多酚可以提高生产效率和增加经济效益．本试验所选择的ＤＭ３０１树脂具有良好的吸附荼多酚的性能，并具有良好的稳定性，可以作为荼多酚大规模工业化生产的分离介质．

影响树脂分离纯化茶多酚的因素主要有ｐＩ－Ｉ值、流速，解吸溶剂。茶多酚在酸性介质中比较稳定，在碱性介质中不稳定，因此合适的ｐＨ值可以使茶多酚成分不发生变化．流速会影响茶多酚在树脂表面扩散，从而会影响吸附和解吸效果。在树脂对荼多酚的吸附方面，如果流速太陵，吸附效果会比较高，但是吸附时间相对较长，长时间的吸附会使茶多酚的成分发生变化；而流速太快的话，则荼多酚还来不及扩散到树脂的内表面，就会产生漏点，吸附效果不高．对于茶多酚的解吸方面，流速慢不利于茶多酚从树脂表面的脱离开来，解吸效果不高，而且浪费解吸剂，太快则会把一些吸附在ＤＭ３０Ｉ树脂上面的色素洗脱下来，影响荼多酚样品纯度．解析溶剂可以使茶多酚有效的从吸附树脂上解吸下来，由于不同树脂对荼多酚的吸附能力不同，因此必须针对特定的树脂来选择合适的解析溶剂．

虽然树脂在提取分离茶多酚过程中良好的性能，但是茶叶中的蛋白质、多糖等堵塞树脂空隙，而茶叶中的色素会死吸附在树脂上，造成树脂失活，树脂活化和再生较麻烦，这些问题在具体试验过程中也出现过，因此树脂在荼多酚的工业生产应用还需要进一步探索研究．

福建农林大学硕士学位论文

第四章高ＥＧＣＧ含量茶树茶多酚、ＥＧＣＯ分离纯化

利用前二章得到的茶多酚浸提及其分离条件结论，对高ＢＧＣＧ的茶树、黄旦、铁观音为原料进行荼多酚的提取分离及其纯化，得到荼多酚样品粉末，并利用高效波相色谱（ＨＰＬＣ）测定其茶多酚样品中ＥＧＣＧ的含量．

用高ＢＧＣＧ含量茶树和黄旦茶多酚为原料，ｕｘＳｅｐｈａｄｅｘＬＨ－２０葡聚糖凝胶为层析填料，以乙醇为洗脱溶剂进行ＥＧＣＧ分离纯化。

１高ｌｊＯＣＧ的茶树荼多酚的分离纯化

１．１材料与方法

１．１．１材料

高ＥＧＣＧ的茶树（福建农产品品质实验室）、黄旦、铁观音（福建农林大学南区茶山），一芽三叶标准，鲜叶微波杀青后固样，样品粉碎后过８０目筛

１．１．２试剂与仪器

试剂：乙醇（分析纯）；丙酮（分析纯）；甲醇（色谱纯），ＭＥＲＣＫ公司；Ｏ．４５

¨晡机滤膜

仪器：２．６ｍｍ×５０ｃｍ普通层祈柱；Ｗａｔｅｒｓ１５２５高效液相色谱系统；Ｕｌｔｒｏｓｐｅｃ

２０００紫外检测器；Ｓａｒｔｏｒｉｕｓ电子天平；８０目筛；九阳粉碎机；Ｍｅｍｍｅｒ

水浴锅；ＳＨＢ一ⅢＡ循环水式多用真空泵；ＲＥ－５２０３旋转蒸发器；ＨＸ－１０５０

恒温循环器；ＤＭ３０１大孔树脂，天津海光化工有限公司；ＬＧＪｌ．５冷冻干

燥器

１．１．３方法

综合前二章取得试验结，蝴Ｆ．ＧＣＧ的茶树、黄旦、铁观音３个茶树品种进行荼多酚的分离纯化．具体试验技术路线为：

鲜叶一微波杀青一固样一粉碎后过８０目筛一按乙醇浓度５０ｊｌ、浸提次数４次、浸提时间５０Ｍｎ、浸提温度７０℃、浸提体积比为１：５０漫提一旋转蒸发去乙醇．．调节ｐＨ在２—３范围内以流速２ｍＬ／ｍｉｎ吸附ＤＭ３０１树脂一８０％丙酮以流速２ｍＬ／ｍｉｎ解吸一解吸液旋转蒸发去丙酮．．冷冻干燥得茶多酚样品一测茶多酚样品的纯度及茶多酚样品内ＥＧＣＧ含量．３３

福建农林大学硬七学位论文

１．２结果与分析

依照上述的试验技术路线，得到三种不同茶树品种的茶多酚样品，茶多酚提取率、纯度及其中的ＥＧＣＧ含量如下图６，高ＥＧＣＧ茶树的茶多酚样品，如下图７。一莩口１００５’

一

妇ｌ口毒里口铁观音

如

惫

虹

２：Ⅱｌ。…ｌ

萘多酚纯度（％）｝打

图６三种不同茶树品种的荼多酚粳取率．纯度及其的ＥＧＣＧ含量

图７高ＥＧＣＧ茶树的茶多酚样品

１）图６的结果显示，在茶多酚提取率方面，高ＥＧＣＧ茶树提取率为２４％分别比

铁观音、黄旦提高了４％、２％。这三个茶树品种茶多酚的平均提取率２２％，说明该荼多酚提取的试验技术路线具有相当的稳定性，而且茶多酚样品纯度平均达到９５％以上。

２）高ＥＧＣＧ茶树提取出茶多酚样品中的ＥＧＣＧ含量比铁观音．黄旦高，分别高

出１５．５２＇／，．２０．９９％。因此可以得出，高Ｅｃｃｃ茶树作为原料提取ＥＧＣＧ具有独特的品种优势．

福建农林大学硕士学位论文

３）图７显示高ＥＧｃＧ茶树品种的茶多酚样品为淡黄色的粉末，该样品在空气中容易潮解，易溶与热水甲醇、含水乙醇、乙酸乙酯。

福建农林大学硕士学位论文

２高ＥＧＣＧ含量茶树茶多酚中ＥＧＣＧ分离纯化

２．１材料与方法

２．１．１材料

高ＥＧＣＧ茶树的茶多酚；黄旦的茶多酚

２．１．２试剂与仪器

试剂：ＥＧＣＧ标准样品，上海友思生物技术有限公司；乙醇（分析纯）；甲醇（色

谱纯），ＭＥＲＣＫ公司；Ｏ．４５ｕｍ有机滤膜；Ｓｅｐｈａｄｅｘ

Ｓｉｇｍａ公司；

仪器：ｌｃｍ×５０ｃｍ普通层析柱；Ｗａｔｅｒｓ１５２５高效液相色谱系统；ＢＳ－１６０Ａ自动

部分收集器；ＨＤ－２１－８８紫外检测仪；Ｎ２０００双通道色谱工作站；ＢＴ－１００恒流泵；ＫＱ－５００ＤＥ型医用数控超声波清洗器；Ｓａｒｔｏｒｉｕｓ电子天平；

ＳＨＢ－ＩＨＡ循环水式多用真空泵；ＲＥ－５２０３旋转蒸发器

２．１．３方法

１）ＳｅｐｈａｄｅｘＬＨ－２０葡聚糖在使用之前Ｊ必须先用洗脱溶剂进行溶胀．在溶胀的ＬＨ－２０葡聚糖凝胶，

过程中，要尽量避免过分搅拌，否则会破坏球形胶粒，且要避免使用磁力搅拌器．在室温下，将凝胶溶胀于洗脱溶剂中至少三小时．将溶胀后的凝胶根据装柱要求均匀倒入柱内，在保证胶粒不变形的前提下，应在尽可能高的压力下装柱，反压不要超过１．５ｂａ．

２）茶多酚用洗脱溶剂溶解，用０．４５肛ｍ有机滤膜过滤后待上样．

３）上样前，周洗脱溶剂平衡层析柱至少两个柱体积直到基线变得平稳为止，

如改变洗脱溶剂应该注意凝胶在新洗脱溶剂中的溶胀性质．洗脱液在使用前应超声脱气，避免在洗脱过程中使ＳｅｐｈａｄｅｘＬＨ．２０葡聚糖凝胶柱产生气泡．

４）收集洗脱液：设定适当的恒流泵流速和自动部分收集器的收集时间，根据

Ｎ２０００双通道色谱工作站在电脑上显示的色谱峰出峰时间收集合并某个时间段的洗脱液．５）根据ＥＧｃＧ的出峰时间，合并出峰时间内收集到的洗脱液，旋转蒸发浓缩后，

福建农林大学硕士学位论文

冷冻干燥得ＥＧＣＧ样品，并用高效液相检测ＥＧＣＧ样品的纯度。

６）ＳｅｐｈａｄｅｘＬＨ－２０葡聚糖凝胶柱在流速为０．５ｍＬ／ｍｉｎ，６０％乙醇为洗脱溶剂下，

ＥＧＣＧ标准样品用６０％乙醇溶解上样后，经过Ｎ２０００双．通道色谱工作站分析得到的ＥＧＣＧ分离的标准色谱图．

７）ＳｅｐｈａｄｅｘＬＨ－２０葡聚糖凝胶柱在０．５ｍＬ／ｍｉｎ的恒定流速下，分别以４０％、５０％、

６０％、７０％不同浓度乙醇为洗脱溶剂洗脱，分析不同浓度洗脱剂对分离ＥＧＣＧ的影响。

８）准确称取１５０．０ｍｇ的高ＥＧＣＧ茶树和黄旦荼多酚粉末，用６０％乙醇溶解定容于

１００ｍＬ，则茶多酚的质量浓度为１．５ｍｇ／ｍＬ，超声脱气３０ｍｉｎ，ｏ．４５¨ｍ有机滤膜过滤后待上柱分离．上柱前，以０．５ｍＬ／ｍｉｎ流速，６０％乙醇平衡过夜．等基线平衡后，取４ｍＬ茶多酚溶液上柱，以０．５ｍＬ／ｍｉｎ￥耘＃．．，６０％乙醇洗脱，根据洗脱曲线上ＥＧＣＧ出峰时间，用自动样品收集器收集洗脱液，混合ＥＧｃＧ峰时间内的收集管，旋转蒸发浓缩后，冷冻干燥等至＊ＪＢＣＣＧ样品．

２．２结果与分析

１）ＥＧＣＧ标准样品在流速为０．５ｍＬ／ｍｉｎ，６０％乙醇为洗脱剂下，经过Ｎ２０００双通道

色谱工作站分析得到的ＥＧＣＧ分离的标准图谱图８，利用图８的ＥＧＣＧ标准样品的标准图谱，我们可以对茶多酚中Ｅｃｃｃ的色谱峰进行定性．

Ｏｒ∞蕾∞蚶翱∞挎∞∞，呻１１０

＿＿．，．１∞｝辅＇椎’秘１Ｗ１ｍｔＪＯ１∞撕ａ口埘搿郴２辅一瑚挪，卿铷３∞ｉ¨，。

’ｒ＿ｉ一－薯－一ｉ，？，Ｅ互里翟壅圃堡璧坚互三互鹜墼雪墨婴翌呈匠ａ．．，，ｊ

图８Ｅ６Ｃ６标准样品过ＳｅｐｈａｄｅｘＬＨ－２０萄聚糖凝胶柱分离的标准图谱

福建农林大学硬士学位论文

２）不同浓度乙醇洗脱剂对分；离ＥＧＣ６的影响如下图９表示，图９显示，乙醇的浓度会影响ＥＧＣＧ的出峰时间搠，浓度越高，出峰时间越短，峰形越好．从图

中的４个不同乙醇浓度的ＥＧｃＧ洗脱曲线来看，６喁乙醇浓度相对于其他３个不同乙醇浓度具有较好的分离曲线。７睇乙醇浓度洗脱曲线的中ＥＧＣＧ峰和前面一个杂质峰离得太近，收集的时候容易混入杂质．４０％．５０％Ｌ，醇浓度洗脱曲线中的ＥＧＣＧ峰出峰时间太长，而且峰宽太宽．因此，６嘿乙醇为最好的洗脱浓度．

图９不同乙醇浓度对洗脱ＥＧｃＧ的影响

３）茶多酚中ＥＧＣＧ的分离纯化

高ＥＧＣＧ茶树和黄旦茶多酚质量浓度为１－５ｍｇ／ｍＬ，上样４皿Ｌ，得到高ＥＧＣＧ茶树和黄旦ＥＧＣＧ样品量分别２ｍｇ和ｌｍｇ，提取率分别为３３．３％和１６．６％。用高效液相色谱测定ＥＧＣＧ样品的纯度为９６％一９８％。

ＥＧＣＧ样品如下图１０，ＥＧＣＧ样品冷冻干燥后为灰黄色粉末．纯净的ＥＧＣＧ标准样品为白色粉末。剐洗脱出来的ＥＧＣＧ洗脱液则为白色溶液，旋转蒸发浓缩的时候变为微黄色，冷冻干燥后就变成了灰黄色，说明ＥＧＣＧ板容易被氧化变色．

图１０ＥＧＣＧ样品３８

福建农林大学硕士学位论文

图１１，图１２分别是ＥＧＣＧ标准样品和提取到的ＥＧＣＧ样品在高效液相中的色谱峰，色谱图谱显示，ＥＧＣＧ样品的色谱图中杂峰的影响较小，ＥＧＣＧ样品有较高的纯度，经计算分析，纯度达到９６％以上．

图１１ＥＧＣＧ标准样品ＨＰＬＣ色谱图

‘

●

１

Ｉ

＾

，－＾－＿－∥一∥‰，、八～．．、一一ｌ从

图１２ＥＧＣＧ样品ＩＩＰＬＣ色谱图

福建农林大学硕士学位论文

３讨论

随着对茶叶中有效成分的研究不断深入，荼多酚、ＥＧＣＧ具有广泛的药理方面的作用，同时茶多酚的分离纯化技术也越来越成熟，由于ＥＧＣＧ本身活泼的化学性质，使的ＥＧＣＧ的分离纯化技术还无法大规模生产，并．且．ＥＧＣＧ无法人工合成的，目前茶树是ＥＧＣＧ的唯一来源．茶树品种的不同，茶多酚及茶多酚内ＥＧＣＧ的含量也会有差别，所以原料的选择对茶多酚及ＥＧｃＧ的提取的产业化影响很大。因此利用高ＥＧＣＧ含量的茶树品种在做为提取ＥＧＣＧ的原料方面具有非常大的种质资源优势．

本试验对比不同茶树品种的茶多酚提取物，从试验数据上可以发现，高ＥＧＣＧ含量茶树品种与普通茶树品种在茶多酚提取率和纯度稍高一点，并没有显著区别，但茶多酚提取物中ＥＣＣＣ含量上却差别很多，高ＥＧＣＧ含量茶树茶多酚中ＥＣＣＣ含量比黄旦高了将近２０％，说明高ＥＣＣＣ茶树在ＥＧＣＧ产业化生产上有着很大的经济效益．

目前，ＥＧＣＧ的分离大多数是以ＳｅｐｈａｄｅｘＬＨ－２０葡聚糖凝胶柱作为分离柱，只是所用的洗脱溶剂不同．本试验利用低毒性的乙醇作为洗脱溶剂，分析了乙醇浓度对洗脱效果的影响．试验得到高ＥＧＣＧ茶树ＥＧＣＧ和黄旦ＥＧＣＧ样品，纯度均为９６％以上，但是提取率却有差别，高ＥＧＣＧ茶树ＥＧＣＧ提取率比黄旦高了将近一倍．如果以高Ｅｃｃｃ茶树品种的荼叶为生产ＥＧＣＧ的原料，可以提高对ＥＧＣＧ的产率．

试验中得到ＥＧＣＧ样品洗脱液，但是ＥＧＣＧ洗脱液容易氧化，冻干后也容易在空气中氧化变色，这些问题势必在ＥＧＣＧ产业化中也会出现，因此需要进一步研究如何保存ＥＧＣＧ样品的方法．

福建农林大学硕士学位论文

第五章高ＥＧＣＧ含量茶树茶多酚清除自由基能力

及抗衰老作用的研究

研究不同荼树品种提取的茶多酚在清除１，卜二苯基苦基（ＤＰＰＨ）有机自由基能力之间的差异．

通过以不同茶树品种和同种茶树品种不同浸提溶卉１３提取的茶多酚做为培养基饲养果蝇，以果蝇寿命为指标研究不同茶树品种和同种茶树品种不同浸提溶剂提取的茶多酚抗衰老作用的差异，并测定各个试验组果蝇体内的ＳＯＤ值和总抗氧化能力值。

１不同荼叶品种的茶多酚清除自由基能力的差异

１．１材料与方法

１．１．１材料

高Ｅｃｃｃ含量茶树，黄旦，铁观音的茶多酚；维生素Ｃ

１．１．２试剂与仪器

试剂：１，卜二苯基苦基（ＤＰＰＨ），Ｓｉｇｍａ公司；乙醇（分析纯）；

试剂配制：

ＤＰＰＨ自由基的配法：准确称取１０．０ｍｇＤＰＰＨ用少量１００Ｓ乙醇溶解，然后用蒸馏

水定容２５０ｍＬ，ＤＰＰＨ自由基浓度为０．０４ｍｇ／ｍＬ

茶多酚溶液的配法：准确称取１０．０ｍｇ茶多酚样枞３ｍＬｌ００％乙醇溶解后用

水定容２５ｍＬ，取定容后的溶液ｌｍＬ后用蒸馏水定容到

２５ｍＬ，则维生素Ｃ溶液浓度为Ｏ．０１６ｍｇ／ｍＬ蒸馏水定容２５ｍＬ，取定容后的溶液ｌｍＬ用蒸馏水定容到２５ｍＬ，则茶多酚浓度为０．０１６ｍｇ／ｍＬ维生素Ｃ溶液配法：准确称取１０．０ｍｇ维生素Ｃ加入３ｍＬｌ００％乙醇溶解后用蒸馏

仪器：Ｕｌｔｒｏｓｐｅｃ２０００紫外检测器；Ｓａｒｔｏｒｉｕｓ电子天平；

１．１．３方法

１）试验原理：利用ＤＰＰＨ无水乙醇溶液在５１７衄处有紫色团的特征吸收峰，以分４１

福建农林大学硕士学位论文

光光度法测定加入抗氧化剂后，在５１７ｎｍ处吸光值的下降表示其对ＤＰＰＨ?自由基的清除能力．

２）试验步骤：往具塞试管中加３ｍＬＯ．０４ｍｇ／ｍＬ的ＤＰＰＨ．无水乙醇溶液，再加入３ｍＬ

荼多酚的乙醇溶液，混匀，在室温下３０ｍｉｎ后，５１７ｎｍ处测得吸光值Ａ。同时测定３ｍＬ０．０４ｍｇ／ｍＬ的ＤＰＰＨ无水乙醇溶液与２ｍＬ无水乙醇混合液的吸光值Ａｏ，以及３ｍＬ茶多酚溶液与３ｍＬ无水乙醇混合液的吸光值Ａｈ计算ＤＰＰＨ?自由基的清除率：

ＤＰＰＨ?自由基的清除率（％）一【Ａ广（Ａ；一Ａ，）】／Ａ。Ｘ

１．２结果与分析

通过上述试验方法测得不同品种的茶多酚提取物的ＤＰＰＨ?自由基的清除率，其清除自由基能力大小如图１３（３次取平均值），结果显示同等剂量下不同茶树品种的茶多酚提取物对ＤＰＰＨ?自由基的清除能力是有差异的，高ＥＧＣＧ舍量的茶树的荼多酚比其他茶树品种的茶多酚具有更强的ＤＰＰＨ?自由基的清除能力，比最低茶树品种黄旦茶多酚ＤＰＰＨ?自由基的清除率高出９．３７％．１００％。

８６

，‘８●

鲁８２

众

缸８０

７３

７６

７４

７２

７０

６８

黄旦铁观音维生素ｃ图１３不同茶树品种的茶多酚提取物的清除ＤＰＰＨ?自由基能力

福建农林大学硕士学位论文

２高ＥＧＣＧ茶树荼多酚抗衰老作用的研究

２．１材料与方法

２．１．１材料

高ＥＣＣＣ茶树茶多酚、黄旦茶多酚（乙醇为浸提剂）；高ＥＣＣＣ茶树茶多酚，（沸水为浸提剂）茶多酚提取物；野生型（ｗｉｌｄｔｙｐｅ）黑腹果蝇（Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａｍｅｌａｎｏｇａｓｔｅｒ），福建农林大学动科院提供

２．１．２试剂与仪器

试剂：玉米粉；琼脂；蔗糖（分析纯）；酵母粉；ＳＯＤ测定试剂盒、总抗氧化能

力测定试剂盒，由南京建成生物研究所提供；丙酸（分析纯）

试剂配制：

基本培养基的配制：玉米粉１７９，蔗糖１３９，琼脂１．５９，水１７０ｍＬ，酵母粉１．５９，

ｌｍＬ丙酸

Ｏ．０５ｊＩ的茶多酚提取物培养基的配制：１００．Ｏｍｇ茶多酚提取物，玉米粉１７９，

蔗糖１３９，琼脂１．５９，水１７０ｍＬ，酵母粉１．５９，ＩｍＬ丙酸

仪器：Ｓａｒｔｏｒｉｕｓ电子天平；ＩＪｌｔｒｏｓｐｅｃ２０００紫外检测器；Ｓａｒｔｏｒｉｕｓ电子

天平；

２．１．３方法ＲＸＺ智能型人工气候箱；Ｍｅｍｍｅｒ水浴锅

１）果蝇数学统计分析

①每天统计果蝇的死亡数目，过度麻醉或者培养基黏住等人为因素造成的死亡数不计算在内．

②果蝇寿命统计指标

半数死亡期：每组中半数果蝇死亡天数的算术平均数作为该组的半数死亡期平均寿命：每组全部果蝇死亡天数的算术平均数作为该组的平均寿命

平均寿命延长率：与对照组果蝇存活天数相比，试验组果蝇寿命延长的百分比平均最高寿命：每组最后５只果蝇死亡天数的算术平均值作为该组的最高平均寿

命

２）取８小时内羽化的果蝇雌性分开分别接入以不同茶树品种的荼多酚提取物做

为培养基中，以没有放入荼多酚提取物的培养基为对照，每个对照做３管，每４３

福建农林大学硕士学位论文

天计算果蝇死亡只数，最后根据记录表格统计半数死亡期、平均寿命、平均半数死亡时间（天）

组别。。酬平均寿命（天）之苌蓼志）

雄６雌辛平均最高寿命（天）雄古雌早雄６雌早。■ｊ’葶岬攀’

?与对照组相比（经方差分析）Ｐ＜Ｏ．０５她，Ｊ显署水平

．．与对照鲥目比（经方差分析）Ｐ＜Ｏ．０１达到极显著水平

从表８的结果可以得知，

①茶多酚具有延长果蝇寿命的作用．跟对照组相比，有加入茶多酚的培养基试验组都能延长果蝇寿命．

②不同茶树品种荼多酚在延长果蝇寿命是也是有差异的，在半数死亡时间、平均寿命、最高平均寿命均上，高ＥＧｃＧ含量茶树比普通茶树黄旦荼多酚分别提高了１５．７％（雄），１２．４ｊｌ（雌）、１４．５％（雄），１４．９％（雌）、４．９２ｊｃ（雄），儿．８％（雌）．

③不同浸提剂提取的荼多酚在延长果蝇寿命是也是有差异的，在半数死亡时间、平均寿命、最高平均寿命均上，以乙醇为浸提剂茶多酚提取物比以沸水为浸提溶剂的提高了８．２９ｊＩ（雄），４．１９％（雌），６．５１ｊｌ（雄），６．４５ｊｌ（雌），３．８０％

福建农林大学硕士学位论文

（雄），８．８７％（雌）．

２）对６０日龄各个试验组果蝇的ｓ０Ｄ活性值和总抗氧化能力值进行测定，结果

如下表１０．

表１０不同荼多酚提取物对果蝇体内ｓＯＤ值和总抗氧化能力的影响

?与对照组相比（经方差分析）Ｐ＜０．０５达到显著水平

??与对照组相比（经方差分析）Ｐ＜０．０１达到极显著水平

从袁９的结果可见：

①茶多酚能提高果蝇组织中的ＳＯＤ值和总抗氧化能力值．跟对照组相比，有

加入茶多酚的培养基的试验组比对照组的果蝇体内的ＳＯＤ值和总抗氧化能力值得到不同程度的提高．

②不同茶树品种荼多酚对果蝇体内的ＳＯＤ值和总抗氧化能力值影响也是有

差异的，高ＥＧＣＧ含量茶树茶多酚比黄旦更能提高果蝇组织中ＳＯＤ值和总抗氧化能力，ＳＯＤ值提高了３２．９％（雄）．１２．１ｊ５（雌），总抗氧化能力值提高了４４．１％（雄）、２８。５３Ｉ（雌）。

③不同浸提剂提取的茶多酚对果蝇体内的ＳＯＤ值和总抗氧化能力值影响也

是有差异的，乙醇浸提比沸水浸提的茶多酚更能提高果蝇体内ＳＯＤ值和总抗氧化能力，ＳＯＤ值提高了９。５３Ｓ（雄）、９．４３％（雌），总抗氧化能力值提高了３１．９％（雄）、１８．４％（雌）．”综合果蝇平均寿命和测得果蝇体内的ＳＯＤ值和总抗氧化值，得出下图１４

福建农林大学硕士学位论文

茶多酚（乙醇浸提）

（乙醇浸提）

荼多酚（沸水浸提）

图１４不同荼多酚提取物对果蝇平均寿命、ｓＯＤ值、总抗氧化能力的影响

从图１４中可以明显看出，同等剂量Ｔ高ＢＧＣＧ茶树茶多酚比普通茶树品种具有更强的抗衰老作用，而以乙醇为浸提溶剂比以沸水为浸提溶剂的荼多酚提取物的抗衰老作用更强．从果蝇体内测得的ＳＯＤ值和总抗氧化能力值也验证了以上的试验现象．

福建农林大学硕士学位论文

３讨论

本试验结果说明了茶多酚具有清除自由基的功能，并且不同茶树品种清除自由基的能力是有差异的，高ＥＧＣＧ含量的茶树品种的荼多酚提取物比普通茶树品种的茶多酚提取物具有更强的清除自由基的能力，虽然试验现象说明了这个结果，但是具体的清除自由基机理以及荼多酚各个成分在清除自由基方面上的作用还不清楚，仍需要进一步实验研究。

衰老是一个不可避免的复杂的生物学反应过程，对衰老的机制仍然还在研究中，目前衰老机制解释最多的是自由基学说，该学说认为氧化是导致衰老、细胞破裂和进行性退行性病变的重要原因．体内超氧化物歧化酶活性和总抗氧化能力已成为衰老与抗衰老研究的重要指标．果蝇是用于遗传学中研究的重要模式生物，由于果蝇饲养容易、生活周期短，也经常应用药理实验中［５２，５３１．

本试验中以不同茶树品种和同种茶树品种不同工艺的茶多酚提取物饲养果蝇，并对果蝇的寿命进行计算分析和对一定日龄的果蝇体内ＳＯＤ值和总抗氧化能力进行测定。结果显示，茶多酚能有效的延长果蝇寿命，而高ＥＧＣＧ含量荼树荼多酚在果蝇平均寿命延长率能比普通茶树的茶多酚表现出更好的效果．而以乙醇为浸提剂比以沸水为浸提剂的茶多酚在延长果蝇寿命方面有效果，进一步说明乙醇能比沸水更好的溶解茶叶中的活性成分物质．从测得的ＳＯＤ值和抗氧化能力数据结果也进一步印证了以上的试验结果．抗衰老作用是一个复杂的机制，而试验并不能明确证实高ＥＧＣＧ含量茶树品种具有更好的抗衰老作用是完全是由于ＥＧＣＧ含量高引起的，试验应就ＥＧＣＧ是否能更有效的抗衰老作用进一步进行研究．

福建农林大学硕士学位论文

参考文献

【１】

【２】

【３】

【４】宛晓春．茶叶生物化学第三版【Ｍ】．中国农业出版社，２００３：８－６３郑金贵．农产品品质学第一卷【Ｍ】．厦门大学出版社，２００４：３３８—３５０．谭仁祥主编．植物成分功能第一版【Ｍ】．科学出版社，２００３：２１７—２１８．中国食品添加剂生产应用工业协会编著．食品添加剂手册．第二版【Ｍ】Ｍ．中

国轻工业出版社，１９９６，１２：４６－４８．

【５】

【６】

【７】

【８】

【９】宛晓春主编．茶叶生物化学第－－＇；Ｒ【Ｍ】．中国农业出版社，２００３：９—１５．陆爱霞等．荼多酚提取和应用研究进展【Ｊ】．食品科技，２００２，（２）：５３—５５．罗晓明．荼多酚浸提工艺研究【Ｊ】．工艺技术，?２００２，２３（３）：４１－４３杨贤强等．茶叶中天然抗氧化剂的提取【Ｊ】．浙江大学学报，１９９２，１８（１）：１９．熊何健等．茶多酚分离制备的新工艺【Ｊ】．食品工业科技，１９９７，（６）：３２—３４．

【１０】廖学品，陆忠兵等．胶原纤维吸附除去荼多酚中的咖啡因【了】．离子交换与吸

附，２００３，１９（３）：２２２－２２８．

【１１】姜绍通，潘丽军．醋酸乙酯逆流萃取绿茶茶多酚的研究【Ｊ】．农业工程

学，１９９７，１３（４），２０２—２０６．

【１２】刘仲华，黄健安等．儿茶素提制工艺技术研究【Ｊ】．湖南农业大学学报，

１９９７，２３（６）：５３７－５４２．

【１３】杨晓萍，钟梅等．Ｚｎ２＋沉淀法提取茶多酚工艺研究【Ｊ】．食品与发酵工

业，２００６，３２（４）：１２２—１２５．

【１４】蒋建平，陈洪等．荼多酚的离子沉淀法提取及其成分分析【Ｊ】．株洲工学院学

报，２００４，１８（５）：５３－５６．

【１５】徐向群．吸附茶多酚树脂的筛选【Ｊ】．茶叶科学，１９９４（２）：１３７－１４０．

【１６】王梅，张笠，李慕玲等．树脂法提取茶多酚的研究【Ｊ】．离子交换与吸

附．１９９８，１４（５）：４２８－４３３．

【１７１陈海霞，谢笔均．树脂法从茶叶中综合提取有效成分的研究【Ｊ】．精细化

工，２０００，１７（８）：４９３－４９６．

【１８】唐德松，沈生荣．儿茶素的富集及单体分离研究进展【Ｊ】．茶

叶，２００３，２９（３）：１３６－１３８．

【１９】严明潮，罗明志．盐析对儿茶素提取的影响【Ｊ】．中国茶叶，１９９９，（４）：２９．４８

福建农林大学硕士学位论文

【２０】夏涛．膜技术在茶叶深加工中的应用【Ｊ】．茶叶科学技术，１９９６，（２）：１０－１３．

陆爱霞，姚开等．超声波辅助法提取茶多酚和儿茶素的研究【了】．中国油脂，２００５，３０（５）：４８－５０．［２１】

【２２】宋建红．用微波萃取法提取茶叶中茶多酚的工艺改进研究【Ｊ】．浙江化

工，２００６，３７（２）：１－３．

【２３】．Ｔ．Ｏｚａｗａ．ＴｈｅＳｅｐａｒａｔｉｏｎｏｆＣａｔｅｃｈｉｎｓｆｒｏｍＧｒｅｅｎＴｅａ【Ｊ】．Ａｇｉｃ，

Ｂｉ０１．Ｃｈｅｍ．１９８２．４６（７）：１０７９－１０８２．

【２４】戚向阳，谢笔均等．高纯度表没食子儿荼素没食子酸酯（ＥＧＣＧ）的分离与制备

【Ｊ】．精细化工，１９９４，１４，４０－４６．

【２５］掘Ｅｌ博等．茶叶试验研究报告（日），１９８９，３：６５－７４．

【２６】ＪｏｓｅｐｈｌＪ．Ｄａｌｌｕｇｅ．ＢｒｙａｎｔＣ．Ｎｅｌｓｏｎ．ＪｅａｎｉｃｅＢｒｏｗｎＴｈｏｍｓ．Ｌａｎｅ

Ｃ．Ｓａｎｄｅｒ．ＳｅｌｅｃｔｉｏｎｏｆＣｏｌｕｍｎａｎｄＧｒａｄｉｅｎｔＥｌｕｔｉｏｎＳｙｓｔｅｍｆｏｒｔｈｅＳｅｐａｒａｔｉｏｎｏｆＣａｔｅｃｈｉｎｓｉｎＧｒｅｅｎＴｅａＵｓｉｎｇＨｉｇｈＩ‘ＰｅｒｆｏｒｍａｎｃｅＬｉｑｕｉｄＣｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ【Ｊ】．ＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙＡ．１９９８，７９３：２６５－２７４．

【２７】杜琪珍，李名君等．高速逆流色谱法分离茶叶中的几茶素【Ｊ】．色

谱，１９９６，１４（４）：２０－２１．

【２８】褚敏，梁景平等．荼多酚、鞣酸抗细菌生长、粘附能力的研究［Ｊ】．现代口腔

医学杂质，２００１，１５（２）：１２７－１２８．

【２９】日本工药信息．１９９０，２（２）：２４．

【３０】张忠霞．茶叶成为艾滋病“后备军”【Ｊ】．科技文萃，２００４，１２：８４．

【３１】

ｔ３２】

【３３】

［３４】

【３５】Ｃｒａｎｃｅ，Ｊ．Ｍ．ｅｔＯｋａｓａ．Ｆｕｍｉｏａ１．Ｊ．ＭｅｄＶｉｒｏｌ【Ｊ】．１９９０，３１（２）：１５５－１６０．ＪＡＲＱｅｔ１９７８，１２（１）：２７－３２．ａ１．ＦｒａｇｒａｎｃｅＪＯｈｅｕ．Ｈｉｒｏｂｕｍｉ１９９０，１８（１１）：５０－５３．ＳｕｇｉｙａｍａＫ．ｅｔａ１．ＴｈｅＯｒｇａｎｉｚｉｎｇＣｏｍｍｉｔｔｅｅ＆ＩＳＴＳ．１９９２，３４２．Ｓｗａｍａｌａｋｓｈｍｉ．Ｔ．ｅｔａ１．ＩｎｄｉａｎＪ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．１９８１，４３（６）：２０５－２０８．

【３６】陈德彪等．福建荼叶，１９９１，３：５－７．

【３７】Ｏｓａｗａ．Ｔ，ｅｔａ１．Ｉｎｔ．ｃｏｎｇｒ．Ｓｅｔ．ＥｘｃｅｒｐｔａＭｅｄ．１９９４，１０６８（Ｆｒｏｎｔｉｅｒｓ

ｏｆＲｅａｃｔｉｒｅＯｘｙｇｅｎＳｐｅｃｒｅｓｉｎＢｉｏｌｏｇｙａｎｄＭｅｄｉｃｉｎｅ）：３３３－３３６．［３Ｓ１胡秀芳，杨贤强等．茶多酚对皮肤的保护与治疗作用【了】．福建茶

叶，２０００，（３）：４７－４８．４９

福建农林大学硕士学位论文

【３９】曹明富，袁妙葆等．茶多酚抗突变和消除自由基作用的研究

【Ｊ】．１９９４，１０（５）：３０１—３０５．

【４０】ＡｈｍａｄＮ，ＣｈｅｎＰＹ，ＭｕｋｈｔａｒＨ．Ｃｅ儿ｃｙｃｌｅｄｙｓｒｅｇｕｌａｔｉａｎｂｙｇｒｅｅｎｔｅａ

ｐｏｌｙｐｈｅｎｏｌｅｐｉｇａｌｌｏｃａｔｅｃｈｉｎ一３一ｇａｌｌａｔｅ．ＢｉｏｃｈｅｍｉｃａｌａｎｄＢｉｏｐｈｙｓｉｃａｌＲｅｓｅａｒｃｈＣｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎｓ，２０００，２７５（２）：３２８－３３４．

【４１】沈生荣，金超芳等．ＥＧＣＧ抑制ＰＣＩ２凋亡的细胞生物学研究［Ｊ】．茶叶科

学，２００１，２１（２）：１４８—１５２．

【４２】井木和子．日本食品工业学会志．１９９１，３８（３）：１８９－１９５，

【４３】陈群，毛瑞希等。茶多酚对高凝状态心血管病人的抗栓作用观察【Ｊ】．福建医

药杂志，１９９６，１８（５）：８２—８３．

【４４】林一萍，陈比特等．荼多酚对小鼠肝ＤＮＡ甲基化酶活性的影响【Ｊ】．茶叶科

学，２０００，２０（１）：７１—７３．

【４５】潘喜华，杨隽等．荼多酚调节免疫、抑制肿瘤及抗衰老作用的研究【Ｊ】．上海

预防医学杂志，２０００，１２（２）：５８－６０．

【４６】朱洁，骆丹等．ＥＧＣＧ对中长波紫外线引起的皮肤成纤维细胞光老化及光突

变的干预作用．中华医学杂志，２００７，８７（２０）：１３９８－１４０１．

【４７】Ｍｉｚｏｇｕｃｈｉ，Ｙａｓｕｂｉｒｏｅｔａ１．Ａｒｅｇｒｕｇｉ１９８６，３５（６）：４２３－４２７．

【４８】林金科．茶树高ＥＧＣＧ的种质资源及外源诱导研究．

【４９】齐桂年，刘勤晋．不同工艺杀青对绿茶中儿荼素组分含量影响的研究【Ｊ】．中

国食品报．２００１，１（２）：卜４．

【５０】祝东青．蚕桑茶叶通讯，２００１，（１）：５－８．

【５１】罗龙新．茶叶内含物浸出的动力学研究【Ｊ】．茶叶科学，１９８７，７（２）：３５－４１．

【５２】刘金庆，ｆｆｄｒ墨－等．５种珍稀食药用真菌活性提取物对果蝇寿命影响的研究

【Ｊ】．生命科学研究，２００６，１０（２）：１６６－１７１．

【５３１张建民，韩晓弟等．甲醛对果蝇的伤害及维生素ｃ的保护作用研究【Ｊ】．荷泽学院学报，２００６，２８（２）：７６—８１．

福建农林大学硕士学位论文

致谢

本文是在导师郑金贵教授的悉心指导下完成的。从论文的选题、设计、实施到论文撰写都凝结着导师的心血与汗水．三年来，郑金贵教授和袁弟顺副教授在学业上给予了我精心指导和谆谆教诲，生活上给予了热情关怀和照顾。导师严谨的治学态度、踏实的科研作风、对学生在科研上的指导和启示，令我今生难忘，值此论文完成之际，向恩师表示崇高的敬意和衷心的感谢！

在实验和论文撰写过程中，许明老师、黄志伟老师、刘峰老师给予了热情的指导和帮助。本论文完成过程中，还得到了袁地顺老师、林用松老师、黄科老师的热心指导，以及师兄林世强、苏永昌、郑华坤，师姐郑亚凤、陈凌华、谢丽雪，同学黄艺宁、程祖锌、何海华、陈团生、杨志坚、林志伟、廖银武、廖素凤、郭明殊、涂良剑、李宾等的无私帮助，在此一并表示诚挚的感谢！

感谢所有关心我的领导、老师和同学！感谢我的父母和亲人，你们的关爱与支持是我今生最大的财富！

高EGCG茶树活性成分提取工艺优化及其茶多酚抗衰老作用的研究

作者：

学位授予单位：黄学敏福建农林大学

本文链接：http://d..cn/Thesis_Y1322873.aspx