病虫害 实习心得

张文生

起初我认为做调查是件很简单的事情，但真正开始实践的时候我才意识到，原来这件看似简单的事情在执行的时候也会遇到许多想不到的困难，两天半时间，时间很短暂，在实习过程中，得到深刻的认识，鉴定，如何将昆虫制成标本，识别昆虫基本特征。两天半几乎是雨天，阻碍抓虫不便，在团队合作精神下、个人精神，及时完成老师布置的任务 。实习有：抓昆虫、制作标本、鉴定昆虫等等流程。虽看上去简单，通过流程做，有很多问题要问老师，或要老师制作一遍，我们才会制作。

统统此次作物病害防治教学实习，让我们认识了许多病害的种类和特征，并深刻地体会到病害对作物的产量和质量的影响，同时加强了我们队农作物的病害认识和提高了我们队病害防治的警惕，与此同时，明白了团队团结合作凝聚力的强大，以及让我们的思维得到发散，动手能力得以提高，同时书本上的理论我们的知识得到与实践操作结合起来，完善了教学的根本理论和最终目的。让理论和实际结合起来，把理论知识应用到实践过程中，为以后走出社会为农民朋友带去先进的病害防治技术，为带动国家的农业发展做出个人的点点贡献。

雨天阻碍我们组抓虫，但是我们也知道，这些小的挫折不过是我们漫漫人生道路中很小的障碍，在毕业后我们将要面临的是比它要困难百倍千倍的事，这次的调查让我们真切的认识到这一点。通过这次调查期，我学会了很多工作所必备的一些工作经验，也体会到哦工作

成员辛苦，更学到不少在课堂上学不到的知识，这段经历，不仅扩大了我们的知识面，也丰富了我们社会实践的经历，为我即将踏入社会奠定了很好的基础。我们呢通过实践找出了自身状况与社会实际需要的差距，以便在以后的学习期间及时补充相关知识，为求职与正式工作做好充分的知识，能力准备。

2014/4/28

第二篇：植物病虫害绿色治理实习指导

贵州大学

有害生物绿色实习指导书

（病害部分）

(农产品质量与安全专业)

主撰人：彭丽娟

农学院

20xx年2月

目 录

一、实习的性质与目的??????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????3

二、实习的时间分配???????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????3

三、实习地点选择???????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????3

四、实习内容安排与要求???????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????3

1、项目一：放线菌的分离纯化及稀释平板菌落计数?????????????????????????????????????????????????????????????3

2、项目二：木霉菌的分离及形态观察????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????7

五、注意事项?????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????8

六、实习报告要求?????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????8

七、成绩评定?????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????9

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一、实习的性质与目的

教学实习是学生学完40学时《有害生物绿色治理》理论及实验教学后，集中进行的实践教学环节。目的是让学生将学习到的理论知识应用到具体实践中，提高同学们解决实际生产问题的能力，特别是土壤中放线菌、木霉菌的分离与计数。通过实习，为同学们将来开展科研和技术推广打下一定的基础。

二、实习的时间分配

三、实习地点

本科生教学实验室。

四、实习内容安排与要求

（一）放线菌的分离纯化及稀释平板菌落计数

1、实验原理

稀释平板测数是根据微生物在高度稀释条件下固体培养基上所形成的单个菌落是由一个单细胞繁殖而成这一培养特征设计的计数方法，即一个菌落代表一个单细胞。计数时，首先将待测样品制成均匀的繁殖稀释液，尽量使样品中的微生物细胞分散开，使其成单个细胞存在，否则一个菌落就不只是代表一个细胞，再取一定稀释度、一定量的稀释液接种到平板中，使其均匀分布于平板中的培养基内。经培养后，由单个细胞生长繁殖形成菌落，统计菌落数目，即可计算出样品中的含菌数。在用稀释平板分离微生物时，还可以同时测定待分离的微生物的数量。此记数方法所计算的菌数是培养基上长出来的菌落数，故又称活菌计数。 3

自然条件下，微生物常以群落状态存在，这种群落往往是不同种类微生物的混合体。为了研究某种微生物的特性或者要大量培养和使用某种微生物，必须从这些混杂的微生物群落中获得纯培养，这种获得纯培养的方法称为微生物的分离与纯化。

在自然界中，土壤是微生物生活的良好环境，其中生活的微生物数量和种类都是极其丰富的，因此土壤是人类开发利用微生物资源的重要基地。土壤中的微生物数量、种类与土壤肥力有关，肥沃的土壤中多，贫瘠土壤中少。放线菌与细菌同属原核微生物，是一类丝状原核生物，是重要的抗生素产生菌，在土壤中的数量仅次于细菌，尤其是在有机质丰富、透气性好的中性到微碱性土壤中的数量较多。放线菌多为腐生，少数寄生。腐生型在自然界物质循环中起着重要作用。放线菌以土壤最多。本实验以菜园土、林地土壤为材料分离土壤中的木霉菌、放线菌，并进行数量测定。

分离微生物时，一般是根据该微生物对营养、pH、氧气等要求的不同，供给它们适宜的生活条件，或加入某种抑制剂造成只利于该菌种生长，不利于其它菌种生长的环境，从而淘汰不需要的菌种。分离微生物常用的方法有稀释平板分离法和划线分离法，根据不同的材料，可以采用不同方法，其最终目的是要在培养基上出现欲分离微生物的单个菌落，必要时再对单个菌落进一步分离纯化。

本实验采用高氏一号琼脂培养基分离和计数树林土壤、菜园土中的放线菌。

真菌在土壤中的数量次于细菌和放线菌，主要在有机质丰富、透气性好的偏酸性土壤中较多。分离土壤中的真菌并不难，但由于其菌落大，容易扩展，计数准确性较低。本实验采用加有氯霉素或庆大霉素和孟加拉红的马丁氏培养基分离及计数菜园土中的真菌。按一般资料介绍为链霉素，但此种抗生素要先配成一定浓度的溶液，且应于倒平板前才加入培养基中。在此培养基上，放线菌和细菌被氯霉素或庆大霉素和孟加拉红所抑制，但大多数真菌能够生存，且其菌落受孟加拉红的抑制而较小，从而避免了某些真菌的扩散蔓延而带来的数量上的误差。

2、实验方法

（1）稀释平板测数法

a、样品稀释液的制备

准确称取待测样品10g，放入装有90mL无菌水并放有小玻璃珠的250mL三角瓶中，用手或置摇床上振荡20min，使微生物细胞分散，静置20～30s，即成10

1mL无菌吸管，吸取10

液混合均匀，即成10

－2－1－1稀释液；再用稀释液1mL，移入装有9mL无菌水的试管中，吹吸3次，让菌－2稀释液；再换一支无菌吸管，吸取10稀释液1mL，移入装有9mL4

无菌水的试管中，也吹吸3次，即成10

106、107、108、10－－－－9－3稀释液；以此类推，连续稀释，制成104、105、－－等一系列稀释菌液。

用稀释平板计数时，待测菌稀释度的选择应根据样品确定。样品中所含待测菌的数量多时，稀释度应高，反之则低。通常测定细菌菌剂含菌数时，采用107、108、10－－－9稀释度，

－测定土壤细菌数量时，采用104、105、10－－

－4－6稀释度，测定放线菌数量时，采用103、10－－4、10－5稀释度，测定真菌数量时，采用102、103、10－稀释度。

（2）平板接种培养

平板接种培养有混合平板培养法和涂抹平板培养法两种方法。

a混合平板培养法

将无菌平板编上103、104、10－－－5号码，每一号码设置三个重复，用无菌吸管按无菌

－5操作要求吸取1×10－5稀释液各1mL放入编号10的3个平板中，同法吸取10

－3－4稀释液各－31mL放入编号1×10－4的3个平板中，再吸取1×10稀释液各1mL放入编号1×10的3

个平板中，由低浓度向高浓度时，吸管可不必更换。然后在9个平板中分别倒入已熔化并冷却至45～50℃的细菌培养基，轻轻转动平板，使菌液与培养基混合均匀，冷凝后倒置，在30℃下培养。至菌落长出后即可计数。

b涂抹平板计数法

涂抹平板计数法与混合法基本相同，所不同的是先将培养基熔化后趁热倒入无菌平板中，待凝固后编号，然后用无菌吸管吸取0.1mL菌液对号接种在不同稀释度编号的琼脂平板上，每个编号设三个重复。再用无菌刮铲将菌液在平板上涂抹均匀，每个稀释度用一个灭菌刮铲，更换稀释度时需将刮铲灼烧灭菌。在由低浓度向高浓度涂抹时，也可以不更换刮铲。将涂抹好的平板平放于桌上20～30min，使菌液渗透入培养基内，然后将平板倒转，保温培养，至菌落长出后即可计数。

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3、土壤中放线菌的分离与计数

（1）土壤稀释液的制备

按实验“稀释平板计数法”中的方法进行，将菜园土稀释至105。在稀释时，可在盛无菌－

水的三角瓶中加10滴100g/L的石炭酸溶液和50μg/m L 的制霉菌素以抑制细菌和霉菌的生长。

（2）分离方法

采用稀释平板分离法，又可分为两种方法。

①混菌法：按“稀释平板计数法”中的“混合平板培养法”进行，所不同者是稀释度，应采用10－3、104、10－－5三个稀释度，各做3个重复。

－－－4②涂抹法：按“稀释平板计数法”中的“涂抹平板计数法”进行，应采用102、103、10

稀释度，各做3个重复。

（3）培养

将上述接种过土壤悬液的平板倒置于28～30℃培养4～5d。

（4）挑菌纯化 三个

从平板中选择分离较好的放线菌菌落（应与细菌菌落区别开）较接斜面，并制片作纯度检查，若不纯，应进一步将该菌作稀释平板分离或划线分离，直至获得纯培养。

4、培养基

高氏一号琼脂培养基配方：

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可溶性淀粉20.0g、硝酸钾1.0g、K2HPO40.5g、MgSO4·7H2O 0.5g、氯化钠0.5g、硫酸亚铁0.01g、琼脂20g、蒸馏水1000 mL、pH7.2～7.4。

高氏一号培养基是用来培养和观察放线菌形态特征的合成培养基。如果加入适量的抗菌药物，则可用来分离各种放线菌。此合成培养基的主要特点是含有多种化学成分已知的无机盐，这些无机盐可能相互作用而产生沉淀。因此，混合培养基成分时，一般是按配方的顺序依次溶解各成分，甚至有时还需要将两种或多种成分分别灭菌，使用时再按比例混合。

操作步骤：

（1）称量和溶化 按配方先称取可溶性淀粉，放入小烧杯中，并用少量冷水将淀粉调成糊状，再加入少于所需水量的沸水中，继续加热，使可溶性淀粉完全溶化。然后再称取其他各成分，并依次溶化，对微量成分FeSO4 ．7 H2 O可先配成高浓度的贮备液，按比例换算后再加入。待所有试剂完全溶解后，补充水分到所需的总体积。 配制固体培养基时，将称好的琼脂放入已溶的试剂中，在加热融化，最后补充所损失的水分。

（2）调pH 用试纸测培养基的原始PH,如果偏酸，用滴管向培养基中加入1mol/LNaOH,边滴边搅拌，并随时用pH试纸测其pH,直至pH达7.4。反之，用1mol/LHCI进行调节。

（3）分装和加塞 将配制的培养基分装入试管内，在试管口或锥形瓶口上塞上棉塞。

（4）包扎 加塞后，将全部试管用麻绳捆好，再在棉塞外包一层牛皮纸，其外再用一根麻绳扎好。用记号笔注明培养基名称、组别、配制日期。

（5）灭菌 将上述培养基以1210C，20min，0.103MPa高压蒸汽灭菌。

5、基本要求：通过实习，掌握土壤中放线菌分离及计数方法。计算每克原始土样中的活放线菌数。

（二）木霉菌的分离及形态观察

1、实验目的

巩固纯系分离的方法；木霉菌的筛选、分离及菌落、形态识别。

2、实验内容

土壤中木霉菌的识别；木霉的分离、菌种的纯化、保存等。

3、实验原理、方法和手段

根据纯系分离的原理，调节pH值或添加化学药物，使培养基不适合细菌生长而适合真菌生长。木霉生长迅速，短时间内就长出菌落。

4、实验用品

PDA固体培养基，菜园土样，90ml无菌水，无菌培养皿，无菌吸管，天平，玻璃笔， 7

接种环，接种针、酒精灯等。

5、实验步骤

（1）倒平板 将已熔化并冷却至55℃左右的PDA固体培养基倒入无菌培养皿中，每皿倒15~20ml，完全冷凝后备用。

（2）按实验“稀释平板计数法”中的方法进行，将土样稀释至104。 －

（3）采用稀释平板分离法。又可分为两种方法。

①混菌法：按“稀释平板计数法”中的“混合平板培养法”进行，所不同的是稀释度，应选10-2、103、10－－4三个稀释度进行接种。

②涂抹法：按“稀释平板计数法”中的“涂抹平板计数法”进行，所不同的是稀释度，应选10-1、102、10－－3三个稀释度进行接种。

（4）培养 将培养皿倒置，放在25℃条件下培养2~3天。

（5）观察选择 将已生长菌的培养皿取出，在光线较好的环境下仔细观察，挑选所需木霉的分散菌落。

木霉菌落及形态特征：木霉菌PDA培养菌落初为棉絮状或致密丛束状，颜色为白色至灰白色，无固定形状。当分孢子成熟后，菌落自中央到边缘，渐渐变为不同程度的绿色菌落，极少数为白色粉状。分生孢子梗从菌丝的侧枝生出，直立分枝，小枝常对生，顶端不膨大，上生分生孢子团。分生孢子球形，浅色或无色。

（6）移种 用无菌接种针挑取一点所需木霉的培养物，接种于试管斜面上，然后将斜面放在25℃条件下培养2~3天。取出试管，仔细观察，如未发现有杂菌污染，即可使用或保存。如发现有杂菌污染，可采用平板划线法再次纯化，直至获得木霉的纯培养物。

6、培养基配方：马铃薯200g，葡萄糖20g，琼脂 15-20g，自来水1000毫升，自然pH。 其做法是马铃薯先洗净去皮，再称取200g马铃薯切成小块，加水煮烂（煮沸20~30分钟，能被玻璃棒戳破即可），用四层纱布过滤，再据实际实验需要加葡萄糖和琼脂，继续加热搅拌混匀，稍冷却后再补足水分至1000毫升，分装试管或者锥形瓶，加塞、包扎，（121℃）灭菌20分钟左右后取出试管摆斜面或者摇匀，冷却后贮存备用。

五、注意事项

做实验时注意水电安全。

六、实习报告要求

学生在实习结束后，每位同学向实习指导教师提交实习报告。

实习报告内容包括四方面的内容：

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（一）实习概况：介绍整个实习安排。

（二）实习内容：介绍实习过程。

（三）实习体会：介绍自己的实习体会，提出合理化建议。

（四）实习日记：介绍自己每天的工作安排。

七、成绩评定

1、实习表现（占30％）：；

2、实习报告内容（占40％）：

3、实习日记（占20％）：；

4、提出合理化建议（占10％）：按建议的合理与否计分。

评分标准

优秀

实习期间能运用本学科基本理论解决所遇到的问题，掌握基本技能，综合分析能力强，具有一定独立见解；实习报告结构严谨，逻辑性强，论述清楚，文笔流畅、规范。实习日记完整。出勤率为全勤，在实习报告中提出合理化建议的。

良好

实习期间能解决所遇到的一些问题，能运用本学科基本知识、理论，较好掌握基本技能，具有一定的综合分析能力和独立见解；实习报告结构较合理，论述较清楚，文字通顺。实习日记完整。出勤率为全勤，在实习报告中提出合理化建议的。

中等

实习期间能遵守实习纪律，完成规定的任务，一般能掌握基本知识、理论和技能，实习总结层次尚清楚，文字较为通顺。实习日记完整。有迟到现象，在实习报告中提出较合理的建议。

及格

实习期间无重大错误，对基本知识、理论和技能掌握一般；实习总结逻辑性一般，文字表述一般，无原则性错误。实习日记较完整。有迟到现象，在实习报告中提出较合理的建议。

凡有下列情况之一者，教学实习成绩按不及格记

实习期间，严重违纪造成恶劣影响者；实习违章操作，给国家（学校、集体）造成巨大损失者；实习结束后一周内不交实习总结者；旷、病、事假超过实习总天数五分之一者。

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