谷丙转氨酶活力测定（改良赖氏法）
一，实验目的
掌握血清丙氨酸氨基转移酶（ALT，也称谷丙转氨酶，GPT）活性测定的原理。
熟悉转氨酶活性测定的操作方法。
了解测定血清丙氨酸氨基转移酶活性的临床意义。
二，相关理论
体内蛋白质处于不断降解与合成的动态平衡
食物蛋白质经消化吸收的氨基酸和体内组织蛋白质降解产生的氨基酸混在一起，分布于体内各处，作为参与代谢的氨基酸库
氨基酸分解代谢的主要反应是脱氨基作用
肝脏的脱氨基方式有:氧化脱氨基,氨基转换作用及联合脱氨基
氨基转移酶
转氨酶： 催化氨基酸与酮酸之间氨基转移的一类酶
谷丙转氨酶 glutamic-pyruvic transminase GPT
又称丙氨酸转氨酶alanine aminotransferase ALT
三．转氨作用的意义
正常时转氨酶主要分布在细胞内，血清中酶活力很低
GOT以心脏细胞中活力最大，其次为肝脏细胞
GPT则以肝脏细胞中活力最大
谷丙转氨酶的临床意义
如果GPT血清值超过正常上限2－3倍，并持续两周以上，表明有肝胆疾病存在的可能。
参考范围：0-50 U/L，卡门氏单位0-25 KarU
四．酶活力单位（U，active unit）
国际单位：61年酶学委员会建议使用统一单位，在特定条件下，1分钟内转化1 μmol底物所需的酶量，称为一个国际单位（IU，又称U）
1个卡门氏单位的定义是：在温度25℃，pH7.4，波长340nm，光径1cm的条件下，1ml血清使反应液的吸光度下降0.001的转氨酶活性。
卡门氏单位和国际单位换算1 IU/L＝2.1 KarU
五，实验原理
血清中的丙氨酸转氨酶（ALT），在37℃、pH7.4的条件下，可催化基质（底物）液中的丙氨酸与α-酮戊二酸生成谷氨酸和丙酮酸。
生成的丙酮酸可与起终止和显色作用的2,4二硝基苯肼发生加成反应，生成丙酮酸-2,4-二硝基苯腙，进而在碱性环境中生成红棕色的苯腙硝醌化合物，其颜色的深浅在一定范围内与丙酮酸的生成量，亦即与ALT活性的高低成正比关系。据此与同样处理的丙酮酸标准液相比较，便可算出或通过标准曲线查出血清中ALT的活性
六，试剂盒组成成份
（R1）基质液 L-丙氨酸及α-酮戊二酸
（R2）显色剂 2,4-二硝基苯肼
（R3） NaOH
标准液 丙酮酸钠
七，实验步骤
血清GPT活性测定
标准曲线绘制：以各管酶活力单位的对数为横坐标，对应的吸光度为纵坐标，绘制工作曲线图。
混匀，室温恒定3分钟， 505nm波长，0号管调零，测定各管吸光度，制作工作曲线。
血清GPT活性测定
混匀，室温恒定3分钟， 505nm波长，空白管调零，测定各管吸光度。
计算：y=0.0027x-0.0115
（x:酶活性；y:A值；y=AU-AB）
第二篇：肝脏谷丙转氨酶活力测定
实验八肝脏谷丙转氨酶活力测定
实验类型：验证性实验
相关知识
1. 酶活力：
2. 酶活力单位(即酶含量的多少)
国际单位
习惯单位：谷丙转氨酶在37度与底物作用30min后，能产生2.5ug的丙酮酸者为一个谷丙转氨酶活力单位
3.转氨酶
4 谷丙转氨酶
一、 实验目的
1． 了解转氨酶的性质及临床意义
2． 掌握谷丙转氨酶活力的测定方法
二、实验原理
丙氨酸及α－酮戊二酸作用为谷丙转氨酶的作用底物，利用内源性磷酸吡哆醛作辅酶，在一定条件下及时间作用后测定所生成的丙酮酸的量来确定酶活力。
丙酮酸能与2,4－二硝基苯肼结合，生成丙酸－2,4二硝基苯腙，后者在碱性溶液中呈现棕色，其吸收光谱的峰为439~530nm，可用于测定丙酮酸的含量。
α－酮戊二酸也能与2,4－二硝基苯肼结合，生成相应的苯腙，但后者在碱性溶液中吸收光谱为与丙酸－2,4二硝基苯腙的吸光度有差别，在520nm波长比色时，丙酸－2,4二硝基苯腙吸光度高出3倍。
在520nm处吸光度增加的程度与反应体系中丙酮酸与α－酮戊二酸的摩尔比基本上呈线性关系，故可以测定谷丙转氨酶的活力。
三、实验器材、试剂、材料
1． 新鲜猪猪脏
2． 722型分光光度计、剪刀、吸管
3． 标准丙酮酸溶液；谷丙转氨酶底物；0.1mol/L磷酸缓冲液（pH7.4）；0.02%2,4－二硝基苯肼；0.4mol/L NaOH溶液
四、实验操作步聚
1. 肝匀浆制备
（1） 将猪肝脏用生理盐水冲洗，滤纸吸干，称取肝脏0.25g，剪成小块，置于玻璃匀浆管内（或小研砵中），加入2.25ml预冷的pH7.40.1%mol/L磷酸缓冲液，制成10%肝匀浆。（每四组1份）
（2） 吸取肝匀浆0.1ml于另一试管中，加入预冷的0.1mol/L磷酸缓冲液（pH7.4）4.9ml摇匀，为稀释肝匀浆（稀释50倍）（每四组1份）
2. 谷丙转氨酶活力测定 （每组做1份）
取试管4支按下表加液
五、实验结果与讨论
1. 分析（列表）各管与计算实验结果（OD值）相关的物质成分。
2. 每毫升稀释肝匀浆谷丙转氨酶活力单位（谷丙转氨酶活力计算：规定酶在37度与底物作用30min后，能产生2.5ug的丙酮酸者为一个谷丙转氨酶活力单位）
3. 每克肝脏谷丙氨酶的活力单位。