叶绿体中色素的提取和分离
方案一【实验原理】
（1）叶绿体中的色素能够溶解在有机溶剂丙酮中，所以，可以通过研磨法用丙酮提取叶绿体中的色素(若无丙酮亦可用酒精代替)。
（2）纸层析法：层析液（在60℃～90℃下分馏出来20份石油醚 + 2份丙酮 + 1份苯混合而成）是一种脂溶性很强的有机溶剂。叶绿体中的色素在层析液中的溶解度不同(溶解度高的随层析液在滤纸上扩散得快；溶解度低的随层析液在滤纸上扩散得慢。)这样，几分钟之后，叶绿体中的色素就在扩散过程中分解开来。所以，可以用纸层析法分离出叶绿体中的色素。
【实验器材】
新鲜的绿色菠菜叶片，干燥的定性滤纸，烧杯，研钵，小玻璃漏斗，脱脂棉，载玻片，剪刀，小试管，培养皿盖，药勺，量筒，天平。
丙酮，层析液，二氧化硅，碳酸钙。
【实验过程】
（一）提取绿色叶片中的色素：
1、用天平称取5g绿色的叶片，用剪刀剪碎，放入研钵中；
2、向研钵中放入少许二氧化硅和碳酸钙，再加入5ml丙酮。由于丙酮具有一定的毒性并且很容易挥发。为了尽量少的吸入丙酮，可以将一片滤纸盖在研钵上，纸的中心穿一个洞，将杵棒套入洞口进行研磨。
※为什么要加入少许少许二氧化硅和碳酸钙？加入二氧化硅是为了研磨的更充分；加入少许碳酸钙是为了保护叶绿体中的色素，为是由于碳酸钙可以中和液泡破裂后释放出的有机酸，调节液体的PH，防止或避免色素被破坏。
※为什么要加入丙酮？丙酮是有机溶剂可以使色素溶解其中，作为色素的溶剂。
3、将研磨液迅速倒入小玻璃漏斗中进行过滤（漏斗基部放一小团脱脂棉）。将滤液收集到一个小试管中，及时用塞将试管口塞紧。（以防止滤液中的丙酮挥发）
※是否可以用滤纸来代替脱脂棉？不可以，滤纸对光合色素具有较强的吸附能力，使滤液的色素分子减少。
（二）制备滤纸条：
取一块预先干燥处理过的定性滤纸，将滤纸剪成长6cm、宽1cm的滤纸条，将滤纸条的一端剪去两角，并在距这一端1cm处用铅笔画一条细的横线。
※在剪裁定性滤纸时，尽量注意双手不要接触纸面，以免手上的油脂或其他脏物污染滤纸，影响色素在纸条上的扩散。
※为什么要剪去滤纸条的两角？使层析液在滤纸条上的扩散更均匀。
（三）画滤液细线：
用滴管管吸取少量滤液，放置在一个载玻片上，用第二片载玻片推匀，第三个载玻片取液体沿铅笔线均匀地画出一条直的滤液细线。画得越细越齐越好，但色素的量要多一些，否则色素带的颜色较浅，不利于观察。因此，为了增加色素的量，重复画滤液细线二三次。
※重复画滤液细线时，应在上一次干燥以后，再画下一次。为什么？有利于色素分子保留在细线上，而不会出现扩散现象，使色素带不均匀。
（四）分离叶绿体中的色素：
将3ml层析液倒入烧杯中，将滤纸条（有滤液细线的一端朝下）略微斜靠烧杯的内壁，轻轻地插入到层析液中，随后用培养皿盖盖上烧杯。
※放置滤纸条时要特别注意，不能让滤纸条上的滤液细线浸没在层析液中。否则，层析液没及滤液细线时，就会使滤液细线中的色素溶解在其中，影响实验结果。
（五）观察实验结果：
几分钟后，取出滤纸条。干燥后，就能看到色素的分层现象。
【实验结果和结论】
滤纸条上出现4条色素带，说明叶绿体中含有四种色素,胡萝卜素在最上端,呈橙黄色；其次是叶黄素，呈黄色；中间是蓝绿色的叶绿素a ；下端是黄绿色的叶绿素b。
结合实验原理可以知道：溶解度最高的是胡萝卜素，其它依次是：叶黄素、叶绿素a 、叶绿素b。
【重点提示】
1、实验成败的几个关键步骤：
①选材：选材时应注意选择鲜嫩、色浓绿、无浆汁的叶片。如菠菜、棉花叶等。
②研磨：光合色素分子存在于叶绿体内囊状结构的薄膜上，只有充分研磨，破坏叶肉细胞的细胞壁、细胞膜以及叶绿体膜等，才能使色素被释放出来，并溶解在丙酮中。
③画滤液细线：应以细、直、均匀、颜色浓绿为标准，重复画线时必须等上次画线干燥后再进行，重复2—3次。
④层析时，滤液细线不能没入层析液中。
⑤研磨前加入的物质的量不能太多，一般用药匙一勺即，加丙酮也不能太多，过多会使滤液浓度过低。
2、保证安全的措施：
①研磨过程中，为了尽量少吸入丙酮，可以将纸盖在研钵上，纸中心穿一个洞，将杵棒套入洞口进行研磨。
②由于层析液易挥发，所以层析时烧杯上应盖培养皿盖，防止层析液挥发。
③滤液过滤到试管后，应用棉塞将试管口塞紧，以防止丙酮挥发和色素遇空气氧化。
3、若提取色素为淡绿色，可能原因有：
①研磨不充分，色素末能充分提取出来。
②丙酮加入量大多，稀释了色素提取液；
③末加或入加了碳酸钙，叶绿素分子已被破坏。
动手做：
方案二：改变层析液：95%乙醇，观察实验结果，并比较两次实验结果。
方案二观察到的现象（色带颜色的顺序）：
第二篇：7------实验：叶绿体中色素的提取和分离
叶绿体中色素的提取和分离
一．课本回扣：
1．实验原理：
（1）提取：叶绿体中的色素能够溶解在 中，所以，可以用 提取叶绿体中的色素。
（2）分离：叶绿体中的色素在层析液中的溶解度 ：溶解度高的随层析液在滤纸上扩散得 ，溶解度低的随层析液在滤纸上扩散得 。这样几分钟后，叶绿体中的色素就在扩散过程中分离开来
2．步骤方法：
（1）研磨前加入少许石英砂的目的是 。
（2）研磨前加入少许碳酸钙的目的是 。
（3）加入10mL无水乙醇的目的是 。
（4）层析液是有机溶剂，常由 、 和 混合而成。 也可代用。层析液的作用是 。
3．实验结果及分析：
（1）扩散最快的是 （颜色： ）扩散最慢的是 （颜色： ）。滤纸上有四条色素带说明了什么？ 。
（2）滤液细线为什么不能接触到层析液？ 。
1．（1）无水乙醇 无水乙醇 （2）不同 快 慢
2．（1）研磨充分 （2）防止叶绿素被破坏 （3）溶解（提取）色素 （4）20份石油醚 2份丙酮 1份苯 93号汽油 使叶绿体中的色素随着层析液在滤纸上的扩散而分离开来
3．（1）胡萝卜素（橙黄色） 叶绿素b（黄绿色） 绿叶中的色素有四种，它们在层析液中的溶解度不同，随层析液在滤纸上扩散的快慢也不一样。（2）滤纸上的滤液细线如果触到层析液，细线上的色素就会溶解到层析液中，就不会在滤纸上扩散开来，实验就会失败。
1．“叶绿体色素的提取和分离”实验：
（1）在“叶绿体色素的提取和分离实验”中，将叶绿体色素进行分离的方法名称是 。
（2）某学生在实验过程中将划有滤液细线的滤纸条（已重复几次划线）插入层析液，几分钟后取出观察，发现在滤纸条上无色素分带现象，而其他用同一滤液作实验的同学的滤纸条上却色素分带明显。其实验失败的原因最可能是 。
（3）为了获得整齐又不重叠的四条色素带，在画滤液细线时应注意：
①
②
（4）如果没有丙酮和菠菜叶片，要保证分离后的色素带清晰，可以用来代替的最佳实验材料是
A．酒精和麦苗 B．酒精和大白菜 C．蒸馏水和大白菜 D．蒸馏水和麦苗
（1）纸层析法 （2）滤液细线没入层析液中 （3）应画得细而直 待上次凉干后再重复几次 （4）A
2．下面是有关叶绿体色素的提取和分离实验的问题，请回答：
（1）实验中加入研钵内的丙酮的作用是 ；实验中加入研钵内的石英砂的作用是 ；实验中加入研钵内的碳酸钙的作用是 。
（2）实验中将研磨液倒入漏斗中，漏斗底部放有 。
（3）画滤液细线的要求是 。
（4）层析时的关键注意事项是 ；加盖的目的是 ；色素带最宽的是 ；扩散速度最快的是 。
（1）溶解色素 研磨得充分 防止色素被破坏 （2）尼龙布 （3）细、齐、直 （4）层析液不要没及滤液细线 防止层析液挥发 叶绿素a 胡萝卜素
3．分别在A、B、C三个研钵中加2克剪碎的新鲜菠菜绿叶，并按下表所示添加试剂，经研磨、过滤得到三种不同颜色的溶液，即：深绿色、黄绿色(或褐色)、几乎无色。
注：“+”表示加；“－”表示不加。
试回答：
(1)A处理得到的溶液颜色是 ，原因是 。
(2)B处理得到的溶液颜色是 ，原因是 。
(3)C处理得到的溶液颜色是 ，原因是 。
（1）黄绿色 部分叶绿素受到破坏 （2）几乎无色 叶绿素不溶水 （3）深绿色 大量叶绿素溶于乙醇中
练习：
1．通过纸层析分离叶绿体色素，结果在滤纸条上出现四条色素带，从上而下依次为：A
A．胡萝卜素、叶黄素、叶绿素a、叶绿素b
B．胡萝卜素、叶绿素a、叶绿素b、叶黄素
C．叶绿素b、叶绿素a、叶黄素、胡萝卜素
D．叶黄素、叶绿素a、叶绿素b、胡萝卜素
2．叶绿素不溶于A
A．水 B．石油醚 C．丙酮 D．苯
3．下列关于“叶绿体色素提取和分离”的实验描述中，不属于实验要求的是：C
A．提取高等植物叶绿体中的色素 B．用纸层析法分离色素
C．了解各种色素的吸收光谱 D．验证叶绿体中所含色素的种类
4．提取高等植物叶绿体中的色素，在研磨时加入少量CaCO3的作用是 C
A．调节PH值，加速叶绿素溶解 B．使叶片研磨充分
C．调节PH值，保护叶绿素不被破坏 D．促使4种色素的分开
5．纸层析法分离叶绿体色素，扩散速度最慢与最快的依次是D
A．胡萝卜素，叶绿素b B．叶黄素，胡萝卜素
C．叶绿素a，胡萝卜素 D．叶绿素b，胡萝卜素
6．在叶绿体中色素的提取和分离实验过程中，加入丙酮的作用是C
A．充分研磨 B．防止色素被氧化破坏 C．提取色素 D．破坏叶绿体
7．用纸层析法分离叶绿体色素时，滤纸条上呈橙黄色的色素是B
A．叶黄素 B．胡萝卜素 C．叶绿素a D．叶绿素b
8．在进行叶绿素提取和分离的实验时不让层析液没及滤液细线的原因是C
A．滤纸上几种色素会扩散不均匀而影响实验结果
B．滤纸上的滤液细线会变粗而使色素太分散
C．色素会溶解在层析液中而使实验失败
D．滤纸上的几种色素会混合起来不分散
9．某同学在做提取叶绿体中色素的实验时，收集到的色素提取液为淡绿色。分析产生该结果的可能原因是A
①研磨不充分，色素未能充分提取出来 ②丙酮加入量太多，稀释了色素提取液 ③丙酮加得太少，色素未提取出来 ④未加CaCO2粉末，部分色素已被破坏
A．①②④ B．①③④ C．③④ D．①②
10．在圆形滤纸的中央点上，对叶绿体的色素进行色素层析，会得到近似同心的四个色素环，排列在最里圈的色素呈C
A．橙黄色 B．蓝绿色 C．黄绿色 D．黄色
11．某同学在做叶绿体中色素的提取时，改用下列处理：①绿叶放在盛有清水的烧杯中静置2h；②绿叶放在盛水的烧杯中，煮沸10min；③绿叶放在研钵中研磨，然后放在盛酒精的烧杯中。烧杯中液体会变绿色的有 ，原因是
。
②③ ②中煮沸后的绿叶细胞，细胞膜和叶绿体膜都变成了全透性膜，叶绿素扩散进入了水中；③中研磨破坏了细胞膜和叶绿体膜，叶绿素溶解在酒精中。
12．光和叶绿素是光合作用的重要条件，淀粉是光合作用的主要产物。某同学要验证光合作用需要光和叶绿体。请根据提供的实验材料和用具，补充完整实验步骤和实验结果，并分析回答有关问题。
一．材料用具：银边天竺葵（叶边缘呈白色，无叶绿体），黑纸片，打孔器，白纸扳，吸管，适宜浓度的酒精，碘液，回形针。
二．方法步骤：
第一步： 。
第二步：把黑纸片用回形针夹在绿色部位上，然后把植株放在阳光下照射4—6小时。
第三步：剪下此叶片，用打孔器分别在A 部位、B 部位和C 部位各取一个叶圆片。
第四步：把取下的叶圆片放在装有酒精溶液的试管中，热水浴加热，脱色，清水中漂洗。
第五步： 。
三．预测结果：
A B C
二．实验步骤：
第一步：将天竺葵放在黑暗处48小时；
第三步：A 黑纸片遮光的绿色部位、B 照光的绿色部位、C 照光的白色部位；
第五步：将三个叶圆片放在白纸板上，用吸管吸取碘液，分别滴在三个叶圆片上，一段时间后观察结果。
三．预测结果：A 不变蓝； B 变蓝色 C 不变蓝
（解析：黑纸片遮光的绿色部位因没有光线无法进行光合作用；照光的绿色部位既有光线又有叶绿体场所能进行光合作用；照光的白色部位因无叶绿体场所而不能进行光合作用。）
13．（08广州期末）提取和分离叶绿体中色素的实验中，正确的操作顺序应该是D
A. 进行纸层析——制取滤液——在滤纸条上画线——将实验材料研磨
B. 制取滤液——进行纸层析——在滤纸条上画线——取滤液——再画线
C. 将实验材料剪碎、研磨——在滤纸条上画线——制取滤液——进行纸层析
D. 将实验材料剪碎、研磨——制取滤液——在滤纸条上画线——进行纸层析
14．（08广东综合）提取光合色素，进行纸层析分离，对该实验中各种现象的解释，正确的是C
A.未见色素带，说明材料可能为黄化叶片
B.色素始终在滤纸上，是因为色素不溶于层析液
C.提取液呈绿色是由于含有叶绿素a和叶绿素b
D.胡萝卜素处于滤纸前方，是因为其在滤液中的溶解度最高
★21．(09苏南一模)在“绿叶中色素的提取和分离”实验中，某学生得到的色素带颜色较浅，导致这一现象可能的原因是ABC
A．取材的叶片本身颜色淡，色素总含量偏少
B．未加入二氧化硅，研磨不充分
C．划滤液细线的次数较少，使滤纸带上的色素含量较少
D．层析时滤液细线没入层析液中