生物实验8：叶绿体中色素的提取和分离 （必修1）
一、实验原理
1、叶绿体中的色素能够溶解在有机溶剂无水乙醇中，所以可以用无水乙醇提取叶绿体中的色素。
2、色素在层析液中溶解度不同，溶解度高的色素分子随层析液在滤纸条上扩散的快，溶解度低的色素分子随层析液在滤纸条上扩散的慢，因而可用层析液将不同的色素分离。
二、实验目的
1、初步掌握提取和分离叶绿体中色素的方法与原理。
2、探索叶绿体中有几种色素。
三、实验材料用具
新鲜的绿色叶片（如菠菜叶片）、干燥的定性滤纸、试管、棉塞、试管架、研钵、小玻璃漏斗、尼龙布、毛细吸管、剪刀、药勺、量筒、天平、无水乙醇、层析液、二氧化硅、碳酸钙
四、实验步骤
1、提取色素
⑴称取5g绿色叶片，剪碎放入研钵中（剪得越细越好，尽量去除叶脉等部分）；
⑵向研钵中放入少量二氧化硅、碳酸钙，再加入5mL丙酮。
加二氧化硅的作用是使研磨更加充分、迅速；碳酸钙的作用是保护叶绿素不分解；丙酮用来溶解提取叶绿体中的色素。
⑶将研钵中物品进行研磨、漏斗过滤，最后将滤液收集到试管内并塞紧管口。
2、制滤纸条
⑴将干燥的滤纸剪成略小于试管长与直径的滤纸条，将滤纸条的一端剪去两角（使之呈梯形）。
⑵在距剪角端1cm处用铅笔画一条细横线。
3、画滤液细线
⑴用毛细吸管吸少量的滤液沿铅笔线小心均匀地画一道线。
⑵待滤液干燥后，重复划2~3次。
4、纸上层析
⑴向烧杯中倒入3mL层析液，以层析液不没及滤液细线为准。
⑵将滤纸条画有滤液细线的一端向下插入层析液中，随后用棉塞塞紧试管口。
注意千万不要将滤液细线浸没在层析液中，否则会使色素溶解而导致实验失败。层析液是挥发性较强的有机溶剂，并且具有一定的毒性，所以在操作中要尽量用棉塞塞紧试管口。
5、观察结果
滤纸条上将分离出四条色素带，颜色从上往下分别是橙黄色、黄色、蓝绿色和黄绿色，四种色素分别是胡萝卜素、叶黄素、叶绿素a和叶绿素b。
最宽：叶绿素a；
最窄：叶绿素b；
相邻色素带最近：叶绿素a和叶绿素b；
相邻色素带最远：胡萝卜素和叶黄素
五、实验关键
1、选材时应注意选择鲜嫩、色浓绿、无浆汁的叶片，如菠菜叶、棉花叶、洋槐叶等。
2、画滤液细线时，应以细、直、颜色浓绿为标准，重复划线时必须等上次划线干燥时再进行。
3、层析时不要让滤液细线触及层析液。
第二篇：高考生物实验复习学案10：叶绿体色素的提取和分离
高考生物实验复习学案十：
叶绿体色素的提取和分离（必修一P97）
一．实验目的：
思考题1．尝试用 方法提取叶绿体中的色素和用 法分离提取到的色素。
2．分析实验结果，探究叶绿体中有几种色素，以及各自所呈现的颜色。
二．实验原理：
1．叶绿体中的色素是有机物，不溶于水，易溶于丙酮等有机溶剂中，所以用丙酮
、乙醇等能提取色素。
思考题2．叶绿体色素在层析液中的溶解度不同，溶解度 随层析液在滤纸上扩散得快，溶解度 随层析液在滤纸上扩散得慢。
三、实验材料：幼嫩、鲜绿的菠菜叶
思考题3．为什么选用幼嫩、鲜绿的菠菜叶作为实验材料？
四、实验步骤：
1．提取色素：5克绿叶剪碎，放入研钵，加少量SiO2、CaCO3和5mL丙酮，迅速、充分研磨。
思考题4．加SiO2、加CaCO3的目的是什么？
思考题5．为什么要迅速研磨？
2．收集滤液：漏斗基部放一单层尼龙布，研磨倒入漏斗内挤压，将滤液收集到小试管中，用棉花塞塞住试管口
3．制备滤纸条：将干燥的滤纸，顺着纸纹剪成长10cm，宽1cm的纸条，一端剪去二个角，并在距这一端1cm处划一铅笔线。
思考题6．将干燥的滤纸的一端剪去二个角的目的是什么？
4．画滤液细线：用毛细吸管吸取少量滤液，沿铅笔线划出细、齐、直的一条滤液细线，干后重复三次。
思考题7．为
什么滤液细线越细、越齐越好？ 
思考题8．为什么画滤液细线需要重复三次？
5．分离绿叶中的色素
将3mL层析液倒入烧杯中，将滤纸条（划线一端朝下）插入层析液中，用培养皿盖盖上烧杯。注意：层析液不能没及滤纸条的滤液细线，烧杯要盖培养皿盖。
思考题9．为什么层析液不能没及滤纸条的滤液细线？
思考题10．为什么烧杯要盖培养皿盖？
6．观察实验结果
思考题11．请在右图中标示出相应的色素及其颜色：
思考题12．提取和分离叶绿体色素的关键是什么？
五、课堂练习：
1、叶绿体色素的纸层析结果显示．叶绿素b位于层析滤纸的最下端，原因是：
A．分子量最小 B．分子量最大
C．在层祈液中的溶解度最小 D．在层析液中的溶解度最大
2、通过纸层析法分离叶绿体色素，结果在滤纸条上出现4条色素带，从上而下依次为：
A．胡萝卜素、叶黄素、叶绿素a、叶绿素b
B．胡萝卜素、叶绿素a、叶绿素b、叶黄素
C．叶绿素a、叶绿素b、胡萝卜素、叶黄素
D．叶黄素、叶绿素a、叶绿素b、胡萝卜素
3、下列项目中，前项为实验试剂，中项为试剂的作用，后项为实验结果或实验目的，其中错误的一项是
A．丙酮 溶解叶绿体中色素 提取色素
B．二氧化硅 防止色素分解 研磨时避免色素被破坏
C．醋酸洋红溶液 染色体着色 观察染色体
D．斐林试剂 鉴定还原性糖 产生砖红色沉淀
4、以下是与高中生物实验有关的内容
(1)请将下列实验名称与材料、试剂
、用具的对应关系用连线表示，每项只准选择一次
实验名称 材料、试剂、用具
探索淀粉酶对淀粉和蔗糖的作用 黑藻
细胞质流动的观察 斐林试剂
温度对淀粉酶活性的影响 碘液
叶绿体中色素的提取和分离 载玻片
观察植物细胞的有丝分裂 乙醇
(2)做“叶绿体中色素的提取和分离”实验时，画滤液细线要注意的事项是：
；
为了防止丙酮和苯危害我们身体健康，在研磨和层析分离时应当分别采取的操作措施是 、 。
5、分别在A、B、C三个研钵中加2克剪碎的新鲜菠菜绿叶，并按下表所示添加试剂，经研磨、过滤得到三种不同颜色的溶液，即：深绿色、黄绿色（或褐色）、几乎无色。
注：“+”表示加；“－”表示不加。试回答：
（1）A处理得到的溶液颜色是 ，原因是 。
（2）B处理得到的溶液颜色是 ，原因是 。
（3）C处理得到的溶液颜色是 ，原因是 。
叶绿体色素的提取和分离参考答案：
思考题：
思考题1、过滤；纸层析
思考题2、高的；低的
思考题3、细胞中富含有叶绿体、色素；
思考题4、加SiO2为了研磨得更充分；加CaCO3防止研磨时叶绿素受到破坏。
思考题5、减少研磨过程叶绿素
的分解，减少有毒性的丙酮挥发。
思考题6、可使层析液同时到达滤液细线，层析时，色素分离效果好。
思考题7、为了防止色素带之间部分重叠。
思考题8、为了增加色素在滤纸上的附着量，实验结果更明显。
思考题9、防止色素溶解在层析液中，影响实验结果。
思考题10、层析液中的苯、丙酮、石油醚易挥发。
思考题11、详见右图：
思考题12、提取叶绿体色素的关键是：①叶片要新鲜、浓绿；②研磨要迅速、充分；③滤液收集后，要及时用棉塞将试管口塞紧，以免滤液挥发。分离叶绿体色素的关键是：一是滤液细线要细且直，而且要重复划几次；二是层析液不能没及滤液线。
课堂
练习：
1、C；2、A；3、B；
4、(1)探索淀粉酶对淀粉和蔗糖的作用 黑藻
细胞质流动的观察 斐林试剂
温度对淀粉酶活性的影响 碘液
叶绿体中色素的提取与分离 载玻片
观察植物细胞的有丝分裂 乙醇
(2)滤液细线均匀且直，滤液干后重复2—3次 ； 研磨时研钵上加开洞的纸盖、
层析装置要加培养皿盖。
5、（1）A 黄绿色，部分叶绿素受到破坏。
（2）B 几乎无色，叶绿素不溶于水。
（3）C 深绿色，大量叶绿素溶于乙醇中。