德州学院医学系教案（实验）
实验一 坐骨神经-腓肠肌标本的制作
实验二 刺激与反应 刺激频率与骨骼肌收缩的关系
【实验目的】学习制备蟾蜍坐骨神经-腓肠肌标本，掌握一些生理实验必要的基本技能；观察组织反应与刺激强度之间的关系，加深对阈值、阈强度、阈刺激、阈下刺激等概念的理解；观察用不同频率刺激时腓肠肌标本的收缩形式，从而理解刺激频率与骨骼肌收缩之间的关系。
【实验仪器与材料】
实验动物：蟾蜍
仪器与器材：蛙类常用手术器械、肌动器(肌槽)、任氏液、棉线等、电刺激器、硫酸滤纸片、培养皿。
【实验原理】
蛙类的一些基本生命活动和生理功能与恒温动物相似，若将蛙的神经-肌肉标本放在任氏液中，其兴奋性在几个小时内可保持不变。若给神经或肌肉一次适宜刺激，可在神经和肌肉上产生一个动作电位，肉眼可看到肌肉收缩和舒张一次，表明神经和肌肉产生了一次兴奋。在生理学实验中常利用蛙的坐骨神经-腓肠肌标本研究神经、肌肉的兴奋、兴奋性；刺激与反应的规律和肌肉收缩的特征等，制备坐骨神经腓肠肌标本是生理学实验的一项基本操作技术。
【实验内容】
1、破坏脑、脊髓。
左手持蛙，用食指按压其头部前端，使其尽量前俯，右手持探针由枕骨大孔处垂直刺入至椎管，将探针改向上刺入颅腔，向各侧不断搅动，彻底损毁脑组织；再将探针退回至进针处，向下刺入椎管内，捣毁脊髓。此时蛙四肢松软，表明脑和脊髓已完全破坏。
2、剪除躯干上部、皮肤及内脏。
剪开腹壁，将内脏向前推，在两前肢的下方，剪下身体的前半部（包括头、前肢和全部内脏），保留一段腰骶部脊柱及后肢。在腹面脊柱的两侧可见坐骨神经丛。
3、剥皮
用左手捏紧蟾蜍脊柱断端，右手捏住断端边缘皮肤，用力向下剥掉全部后肢皮肤。把标本放在盛有任氏液的培养皿中。将手及用过的器械洗净。
4、分离坐骨神经、腓肠肌。
用玻璃分针沿脊柱游离坐骨神经腹腔部，然后用大头针将标本脊柱固定于干净蛙板上。再用玻璃分针循股二头肌和半膜肌之间的坐骨神经沟，找出坐骨神经大腿部分，小心剥离，剪去神经干上所有分支，然后从脊柱根部将坐骨神经剪下（连一小块脊椎骨）。
5、剪掉其他不用的组织，完成坐骨神经-腓肠肌标本，放入有任氏液的培养皿中。
6、用不同的刺激强度刺激该标本（阈刺激、阈上刺激、阈下刺激），观察反应情况。
7、用不同的刺激频率刺激该标本，观察单收缩和强直收缩。
【实验作业】书写实验报告，分析实验现象和结果，并回答以下问题：
1、为何有的实验，剪断了坐骨神经，仍有反射的出现？
2、刺激频率与骨骼肌的收缩有何关系？
【实验小结】
德州学院医学系教案（实验）
实验三 ABO血型的鉴定
【实验目的和原理】
学会用玻片法测定ABO血型，用已知的标准的A型血、B型血的血清，测定未知的血型。观察红细胞凝集现象，根据测定结果确定血型。
【实验仪器与材料】干燥玻片、记号笔、标准血清、采血针、75﹪酒精棉棒、消毒干棉棒等。
【实验步骤】
1．取干净玻片一块，用记号笔在两端分别表明A、B字样。
2．在玻片A侧滴加标准抗A血清1滴，B侧滴加标准抗B诊断血清1滴，注意不可混淆。
3．用75﹪酒精棉棒消毒指端后，以消毒采血针刺破皮肤，用采血针两端各取少许血液（绿豆粒儿大小即可）分别与两种标准血清充分混匀。可用消毒干棉棒压迫采血部位。
4．静置片刻，观察有无凝集现象，记录结果。
【实验作业】
书写实验报告（包括实验现象及现象分析）
实验四 红细胞渗透脆性的测定
【实验目的和原理】 红细胞处于低渗盐溶液中时，细胞膜对低渗盐溶液有一定的抵抗膜破裂的能力，这种抵抗力的大小用渗透脆性来表示。红细胞对低渗盐溶液抵抗力小表示渗透脆性大；反之，表示渗透脆性小。观察溶血和部分溶血现象，理解细胞外液渗透张力对维持细胞正常形态与功能的重要性。
【实验仪器与材料】兔血、小试管及试管架、滴管、2ml吸管、1﹪NaCl溶液、蒸馏水等。
【实验步骤】
1、配制溶液
取干燥小试管10支，依次编号排列在试管架上，按实验表1要求配制10种浓度的低渗盐溶液。
实验表1 10种浓度低渗盐溶液的配制
2、制备抗凝血
用灭菌干燥注射器取家兔动脉血液1ml，放入加有抗凝剂的试管中，制备成抗凝血。用滴管向每个试管内注入1滴血液，将血液与各试管中的NaCl溶液混匀（切忌用力摇晃），静置30分钟。
【观察结果】
根据各试管内混合液的颜色和混浊度的不同，判断最大脆性和最小脆性。
（1）未发生溶血的试管：液体下层为混浊红色，上层为无色，表明无红细胞破裂。
（2）部分溶血的试管：液体下层为混浊红色，上层出现透明红色，表明部分红细胞已破裂，称为不完全溶血。开始出现不完全溶血的NaCl溶液浓度为红细胞的最小抵抗力，即红细胞的最大脆性。
（3）全部溶血的试管：液体完全变成透明红色，表明红细胞完全破裂，称为完全溶血。开始完全溶血的NaCl溶液浓度为红细胞的最大抵抗力，即红细胞的最小脆性。
记录红细胞的脆性范围，即开始部分溶血时的NaCl溶液浓度与开始完全溶血时的NaCl溶液浓度。
【注意事项】
1．配制不同浓度的低渗盐溶液时，小试管的口径与大小应一致。加血量要准确，加血时持针角度应一致，每只试管只加1滴。
2．混匀时，用手指堵住试管口轻轻倾倒1～2次，减少机械震动。
【实验作业】
1、书写实验报告，分析实验结果。
2、分析红细胞的渗透脆性实验中各试管出现的现象及原因。
【实验小结】
德州学院医学系教案（实验）
实验五人体心音的听诊 实验六 人体动脉血压的测量 实验七 心电图描记
【实验目的】
1、了解听诊器的结构，学习心音的听诊方法和部位，初步掌握第一心音和第二心音的特点，了解各瓣膜心音的听诊区。
2、动脉血压是动脉血管内流动的血液对单位面积动脉血管壁的侧压力。本实验意在了解血压计的主要结构，初步学会间接测量人体动脉血压的方法，加深理解影响动脉血压的因素。
3、了解临床常用的导联种类及引导电极的放置部位，初步学会心电图的描记步骤，学习辨认正常心电图波形。
【实验仪器与材料】听诊器 血压计 心电图机
【实验原理与内容】：
实验五 人体心音的听诊
【实验用品】听诊器
【实验步骤】
1、确定听诊部位，找准各瓣膜心音听诊区。
2、听取心音。
（1）听诊顺序：二尖瓣听诊区→主动脉瓣听诊区→肺动脉瓣听诊区→三尖瓣听诊区。
（2）如果第一、第二心音难以分辨，可用左手触及心尖搏动或颈动脉搏动，与心尖搏动同步出现的是第一心音。
【注意事项】
1、保持实验室安静；避免听诊器其它物品。
2、如果呼吸音影响心音听诊，可令受试者暂停呼吸。
附：各瓣膜听诊区：
二尖瓣：左锁骨中线第五肋间稍内侧（心尖区）
三尖瓣：胸骨右缘第四肋间或剑突下
主动脉瓣：胸骨右缘第二肋间，
第二听诊区在胸骨左缘第三肋间，主A瓣关闭不全时，此处可听到杂音。
肺动脉瓣：胸骨左缘第二肋间。
实验六 人体动脉血压的测定
【实验用品】血压计、听诊器。
【实验准备】
1、 熟悉台式血压计的结构（检压计、袖带、打气球）。
2、 受试者静坐，上臂与心脏同一水平。
3、 正确缠绕袖带：袖带下缘距肘关节上2cm左右，松紧适度。
4、 正确放置听诊器胸件。
【实验步骤】
1、测量收缩压：减压时听到的第一声“嘣”的声音，检压计上对应的水银刻度。
2、测量舒张压：声音由强突然变弱时，检压计上对应的水银刻度。
3、记录测量结果，并判断是否正常。
注：正确记录方式为“收缩压/舒张压mmHg”
【注意事项】
1、 保持室内安静。
2，受试者右心房、上臂与检压计在同一水平，避免听诊器胶管与其它物体碰撞。
3、实验完毕，将水银槽开关关闭，整理好血压计。
实验七 人体心电图描记
【实验用品】人、心电图机、检查床、生理盐水、棉棒。
【实验步骤】
1、 接通电源，联好地线，预热心电图机。
2、 让受试者静卧检查床上，肌肉放松。
3、 连接导联线，在连接导联部位涂生理盐水，连接各导联。
4、 先打一方波，确认后，描记各导联心电图。
5、 在心电图上辨认5个基本波形，学会测量R-R间期，并由此推算心率。
补充各瓣膜听诊区：
二尖瓣区：左锁骨中线第五肋间稍内侧（心尖区）；
三尖瓣区：胸骨右缘第四肋间或剑突下；
主动脉瓣区：胸骨右缘第二肋间；
（主动脉瓣第二听诊区在胸骨左缘第三肋间，主动脉瓣关闭不全时，此处可听到杂音。）
肺动脉瓣区：胸骨左缘第二肋间。
2、心电图各导联的连接：
肢体导联： 红――右上肢 黄－－左上肢
绿――左下肢 黑――右下肢
胸前导联：V 1: 胸骨右缘第四肋间；
V 2：胸骨左缘第四肋间；
V 3：V 2 与V 4连线的中点；
V 4：左锁骨中线第五肋间；
V 5：左腋前线第五肋间；
V 6：左腋中线第五肋间。
【实验作业】 书写实验报告
德州学院医学系教案（实验）
实验八 离体蟾蜍心脏灌流
【实验目的】
利用离体蟾蜍心脏灌流方法，观察Na+、K+、Ca2+以及肾上腺素、乙酰胆碱等因素对离体心脏的影响。
【实验原理】
离体心脏，在保持适宜环境下，仍能维持一定时间的节律性跳动。改变灌流液的组成成分，可影响心脏的活动。
【实验仪器与材料】
蛙板、蛙类手术器械、蛙心插管、蛙心夹。任氏液、0.65%NaCL、2%CaCL、1%KCL、1:10,000肾上腺素、1:10,000乙酰胆碱。BL-420生物机能实验系统、张力换能器。
实验对象 蟾蜍
【实验步骤与内容】
1、取蟾蜍一只，破坏脑和脊髓，仰卧固定在蛙板上，剪去皮肤，胸骨和肌肉呈倒三角形、剪开心包、暴露心脏。
2、在动脉干下穿两条线，一条打一松结，另一条备用。
3、在一较粗的动脉分支上剪一“V”形切口。
4、将充满任氏液的蛙心插管从切口插入心室腔，用打一松结的线将动脉干与插管结扎。
5、将心脏提起，用另一条线结扎血管（注意勿损伤静脉窦），然后将心脏摘出，用任氏液将心室内血液冲洗干净。用蛙心夹在心缩期夹住心尖。
实验装置
1、连接装置 蛙心夹连接张力换能器。
2、输入信号 张力或实验项目－循环实验－蛙心落灌注。
3、实验标记 编辑－实验标记组－编辑标记。
4、控制区参数 增益：50 时间常数：DC 滤波：30HE
实验项目
1、记录一段正常心博曲线，观察心跳频率和强度及收缩舒张的程度。
2、将蛙心插管内的任氏液换成0.65%NaCL，观察心跳变化。
3、吸出0.65%NaCL，换以任氏液，然后加入2%CaCL1-2滴，观察心跳曲线变化。
4、将含有2%CaCL的溶液吸出，换以任氏液，加入1%KCL1－2滴，观察心跳曲线变化。
5、将含有1%KCL的溶液吸出，换以任氏液，加入1:10,000肾上腺素2－3滴，观察心跳曲线变化。
6、将含肾上腺素的溶液吸出，换以任氏液，加入1:10,000乙酰胆碱1－2滴，观察心跳曲线变化。
注意事项
1、观察各项目时，应保持管内液面同等高度。
2、各种化学因素作用显著后，立即用任氏液换洗，待心脏活动稳定后，再作下一项。
3、不乱用吸管，避免混污试剂。
【实验作业】
书写实验报告，分析各种因素对离体蟾蜍心脏的作用机制。
【实验小结】
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实验九 家兔呼吸运动的调节
【实验目的】
呼吸运动能有节律地进行，并能适应机体代谢的需要，是由于呼吸中枢调节的结果。本实验的目的是观察某些因素对呼吸运动的调节作用。
【实验仪器与材料】
1、哺乳类动物手术器械、台秤、注射器（20ml、5ml）、50cm长橡胶管、气管插管、电麻仪、纱布、缝合线、20％乌拉坦、3％乳酸、二氧化碳气囊。
2、动物 家兔
【实验步骤与内容】
1．麻醉固定动物：称重家兔，由耳缘静脉缓慢注入20％乌拉坦（5ml/mg体重），观察角膜反射。将麻醉好的家兔仰卧位固定在手术台上。
2．气管插管和分离迷走神经：用剪刀剪掉颈部兔毛，沿颈部正中切开皮肤，分离气管并插入气管插管，结扎固定。在气管两侧小心分离迷走神经，穿线备用。
观察项目：
1、观察并记录正常呼吸频率。
2、吸入二氧化碳：将装有二氧化碳的气囊对准气管插管 ，观察呼吸运动的深度和频率改变，出现结果后移开气囊。
3、缺氧：用止血钳逐渐夹闭气管插管，观察呼吸效应，然后移开止血钳。
4、增大无效腔：将一段长50cm橡胶管连接气管插管，观察呼吸效应，然后移开橡胶管。
5、增加H＋浓度：耳缘静脉注射3％乳酸1ml，观察呼吸效应。
6、剪断迷走神经：先后剪断两侧迷走神经，观察呼吸运动的变化。
8、刺激迷走神经中枢端，观察呼吸运动的变化。
9、清洗器械，整理实验台，结束实验。
【实验作业】
书写实验报告，分析实验结果。
【实验小结】
德州学院医学系教案（实验）
实验十 胃肠运动的观察
【实验目的】
观察某些因素对胃肠运动的影响。
【实验原理】
消化道平滑肌具有自动节律性，可以形成多种形式的运动，主要有：紧张性收缩、蠕动、分节运动及摆动。在整体情况下，消化道平滑肌的运动受到神经和体液的调节。兔的胃肠运动活跃且运动形式典型，是观察胃肠运动的好材料。
【实验仪器与材料】
1、哺乳类动物手术器械、台秤、注射器（20ml、5ml）、气管插管、电麻仪、纱布、缝合线、20％乌拉坦、1：10000乙酰胆碱，1：10000肾上腺素等。
2、动物 家兔
【实验步骤】
1．麻醉固定动物：称重家兔，由耳缘静脉缓慢注入20％乌拉坦（5ml/mg体重），观察角膜反射。将麻醉好的家兔仰卧位固定在手术台上。
2．气管插管和分离迷走神经：用剪刀剪掉颈部兔毛，沿颈部正中切开皮肤，分离气管并插入气管插管，结扎固定。
3、腹部剪毛并小心切开腹部，暴露胃肠。
4、分离内脏大神经和膈下迷走神经，穿线备用。
5、观察正常胃肠运动。
6、在一段肠管上滴加1：10000乙酰胆碱1～2滴，观察肠管运动变化。
7、在肠管上滴加1：10000肾上腺素数滴，观察肠管运动变化。
8、电刺激膈下迷走神经：观察肠管运动变化。
9、电刺激内脏大神经，观察肠管运动变化。
10、清洗器械，整理实验台，结束实验。
【实验作业】
书写实验报告，分析实验结果。
【实验小结】
德州学院医学系教案（实验）
实验十一 影响尿生成的因素
【实验目的】肾脏的主要功能是产生尿液。尿的产生包括肾小球滤过、肾小管和集合管的重吸收、肾小管和集合管的分泌等环节。本实验通过对家兔的急性实验的观察，进一步了解某些因素对尿生成的影响。
【实验仪器与材料】
哺乳类动物手术器械一套 、家兔手术台、气管插管、导尿管、注射器（20ml 和2ml），生理盐水、20％乌拉坦、50％葡萄糖溶液、速尿、垂体后叶素、去甲肾上腺素、班氏试纸。
实验动物：家兔
【实验原理与内容】
实验步骤
1、称重、麻醉和固定 20％乌拉坦耳缘静脉注射麻醉家兔（5ml/kg 体重），麻醉后仰卧位固定于手术台上。
2、手术
1）颈部切开做气管插管。
2）尿液收集：在下腹部剪毛，自耻骨联合向上正中线做4－5cm切口，沿腹白线切开腹壁及腹膜，暴露膀胱。在膀胱颈部结扎膀胱，在膀胱顶部血管较少处剪开一小口，插入导尿管进行结扎，用烧杯收集尿液。（也可做输尿管插管）
3、观察
1）计数基础尿量（滴/分）。
2）耳缘静脉注射38度生理盐水30ml，观察尿量变化。
3）待尿量基本恢复后，静脉注射1：10000去甲肾上腺素0.5ml，观察尿量变化。
4）待尿量基本恢复后，耳缘静脉注射38度50％葡萄糖液5ml，观察尿量变化；取尿量明显增多时的尿液数滴，用班氏试纸做尿糖定性试验。
5）静脉注射垂体后叶素2单位，观察尿量变化。
6）静脉注射呋噻米（5mg/kg体重），观察尿量变化。
7）颈总动脉放血20ml，观察尿量变化。
8）静脉补充生理盐水20ml，观察尿量变化。
【实验作业】
书写实验报告，分析实验结果。
【实验小结】
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实验十二 反射弧分析
【实验目的】本实验通过观察反射的进行依赖于反射弧的完整性；
【实验目的】本实验旨在观察和分析反射弧的组成并验证反射弧结构的完整性是反射活动的基础。
【实验原理】在中枢神经系统参与下，机体对刺激所作的适应性反应称反射。反射的结构基础是反射弧，它包括感受器、传入神经、中枢、传出神经和效应器。反射弧中任一环节受破坏，该反射活动便不能出现。
【实验仪器与材料】
实验动物：蟾蜍
仪器与器材：蛙类常用手术器械、任氏液、硫酸滤纸片、培养皿。
【实验内容】
1、制备脊蛙 用左手拇指及食指挟住蛙的脊柱，用剪刀伸进口裂，于鼓膜后缘，并尽量靠近口角水平断头，保留脊髓。
2、用铁钩穿过蛙的下颌，悬挂在铁支架上。
实验观察项目
1、破坏脑，制备脊蛙。
左手持蛙，用食指按压其头部前端，使其尽量前俯，右手持探针由枕骨大孔处垂直刺入至椎管，将探针改向上刺入颅腔，向各侧不断搅动，彻底损毁脑组织；再将探针退回至进针处，向下刺入椎管内，捣毁脊髓。此时蛙四肢松软，表明脑和脊髓已完全破坏。
2、硫酸滤纸片刺激一侧脚趾皮肤，观察有无屈肌反射。随即用盛有清水的烧怀浸洗足部，清除硫酸，以棉球擦干。
3、硫酸滤纸片刺激腹部皮肤，观察有无屈肌反射。
4、环切去掉一侧脚趾皮肤，硫酸滤纸片刺激该处脚趾肌肉，观察屈肌反射情况。
5、分离并破坏另一侧坐骨神经，硫酸滤纸片刺激该处脚趾皮肤，观察屈肌反射情况。
6、破坏脊髓，再用硫酸滤纸片分别刺激蛙的腹部皮肤和完整的脚趾皮肤，观察屈肌反射情况。
（分析步骤2、3、4、5、6）
【实验作业】
书写实验报告，分析2~6步实验结果。
【实验小结】