土壤有机质及腐殖质组成测定
一、土壤有机质测定
土壤的有机质含量通常作为土壤肥力水平高低的一个重要指标。它不仅是土壤各种养分特别是氮、磷的重要来源，并对土壤理化性质如结构性、保肥性和缓冲性等有着积极的影响。测定土壤有机质的方法很多。本实验用重铬酸钾容量法。
(一)重铬酸钾容量法
1、方法原理：在170—180℃条件下，用过量的标准重铬酸钾的硫酸溶液氧化土壤有机质(碳)，剩余的重铬酸钾以硫酸亚铁溶液滴定，从所消耗的重铬酸钾量计算有机质含量。测定过程的化学反应式如下：
2K2Cr207+3C+8H2S04——→2K2S04十2Cr2(SO4)3+3CO2+8H20
K2Cr207+6FeSO4+7H2S04——→ K2S04十Cr2(SO4)3+3Fe2(SO4)3+7H20
2、操作步骤
方法一：
(1)准确称取通过0.25mm筛孔的风干土样0.100-0.500克，倒入干燥硬质玻璃试管中，加入0.8000molL-1（1/6 K2Cr207）5.00毫升，再用注射器注入5毫升浓硫酸，小心摇匀，管口放一小漏斗，以冷凝蒸出的水汽。试管插入铁丝笼中。
(2)预先将热浴锅(石蜡或磷酸)加热到180—185℃，将插有试管的铁丝笼放入热浴锅中加热，待试管内溶液沸腾时计时，煮沸5分钟，取出试管，稍冷，擦去试管外部油液。消煮过程中，热浴锅内温度应保持在170—180℃。
(3)冷却后，将试管内溶液小心倾入250毫升三角瓶中，并用蒸馏水冲洗试管内壁和小漏斗，洗入液的总体积应控制在50毫升左右，然后加入邻啡罗林指示剂3滴，用0.1molL-1FeS04滴定溶液，先由黄变绿，再突变到棕红色时即为滴定终点（要求滴定终点时溶液中H2SO4的浓度为1—1.5molL-1）。
(4)测定每批(即上述铁丝笼中)样品时，以灼烧过的土壤代替土样作二个空白试验。
方法二：
(1)准确称取通过0.25mm筛孔的风干土样0.100-0.500克，倒入150ml三角瓶中，加入0.8000molL-1（1/6 K2Cr207）5.00毫升，再用注射器注入5毫升浓硫酸，小心摇匀，管口放一小漏斗，以冷凝蒸出的水汽。
(2)先将恒温箱的温度升至185℃，然后将待测样品放入温箱中加热，让溶液在170-180℃条件下沸腾5分钟。
(3)取出三角瓶，待其冷却后用蒸馏水冲冼小漏斗和三角瓶内壁，洗入液的总体积应控制在50毫升左右，然后加入邻啡罗林指示剂3滴，用0.1molL-1FeSO4滴定，溶液先由黄变绿，再突变到棕红色时即为滴定终点（要求滴定终点时溶液中H2SO4的浓度为1-1.5molL-1）。
(4)测定每批样品时，以灼烧过的土壤代替土样作二个空白试验。
注：若样品测定时消耗的FeSO4量低于空白的1/3，则应减少土壤称量。
3、结果计算
0.8000×5.00
———— -—--------（V0-V）×0.003×1.724×1.1
V0
土壤有机质(%)＝————————————————————————--------——— — ×100
烘干土重
式中：V0—— 滴定空白时所用FeS04毫升数；
V—— 滴定土样时所用FeS04毫升数；
5.00—— 所用K2Cr2O7毫升数
0.8000——— 1/6 K2Cr207标准溶液的浓度；
0.003——— 碳毫摩尔质量0.012被反应中电子得失数4除得0.003；
1.724——— 有机质含碳量平均为58%，故测出的碳转化为有机质时的系数
为100/58≈1.724；
1.1——— 校正系数。
4、药品配制
(1)0.8000molL-1（1/6 K2Cr207）标准溶液，将K2Cr207(分析纯)先在130℃烘干3—— 4小时，称取39．2250克，在烧杯中加蒸馏水400毫升溶解(必要时加热促进溶解)，冷却后，稀释定容到1升。
(2)0.1 molL-1FeS04溶液，称取化学纯FeSO4·7H20 56克或(NH4)2SO4·FeS04·6H2O 78.4克，加3molL-1硫酸30毫升溶解，加水稀释定容到1升，摇匀备用。
(3)邻啡罗林指示剂，称取硫酸亚铁0.695克和邻啡罗林1.485克溶于100毫升水中，此时试剂与硫酸亚铁形成棕红色络合物[Fe(C12H8N3)3]2+。
5、注意事项
(1)含有机质5％者，称土样0.1克，含有机质2—3％者，称土样0.3克，少于2％者，称土样0.5克以上。若待测土壤有机质含量大于15％，氧化不完全，不能得到准确结果。因此，应用固体稀释法进行弥补。方法是：将0.1克土样与0.9克高温灼烧已除去有机质的土壤混合均匀，再进行有机质测定，按取样十分之一计算结果。
（2）测定石灰性土壤样品时，必须慢慢加入浓H2SO4，以防止由于CaCO3分解而引起的激烈发泡。
（3）消煮时间对测定结果影响极大，应严格控制试管内或烘箱中三角瓶内溶液沸腾时间为5分钟。
（4）消煮的溶液颜色，一般应是黄色或黄中稍带绿色。如以绿色为主，说明重铬酸钾用量不足。若滴定时消耗的硫酸亚铁量小于空白用量的三分之一，可能氧化不完全，应减少土样重作。
（二）土壤有机质含量参考指标
土壤有机质含量（%） 丰缺程度
≤1.5 极低
1.5-2.5 低
2.5-3.5 中
3.5-5.0 高
>5 极高
二、土壤腐殖质组成测定
土壤腐殖质是土壤有机质的主要组成分。一般来讲，它主要是由胡敏酸(HA)和富里酸(FA)所组成。不同的土壤类型，其HA／FA比值有所不同。同时这个比值与土壤肥力也有一定关系。因此，测定土壤腐殖质组成对于鉴别土壤类型和了解土壤肥力均有重要意义。
(一)方法原理
用0.1M焦磷酸钠和0.1M氢氧化钠混合液处理土壤，能将土壤中难溶于水和易溶于水的结合态腐殖质络合成易溶于水的腐殖质钠盐，从而比较完全的将腐殖质提取出来。焦磷酸钠还起脱钙作用，反应图示如下：
提取的腐殖质用重铬酸钾容量法测定之。
(二)操作步步骤
1、称取0.25mm相当于2.50克烘干重的风干土样,置于250毫升三角瓶中，用移液管准确加入0.1M焦磷酸钠和0.1M氢氧化钠混合液50.00毫升,振荡5分钟，塞上橡皮套，然后静置13—14小时(控制温度在20℃左石)，旋即摇匀进行干过滤，收集滤液(一定要清亮)。
2、胡敏酸和富里酸总碳量的测定
吸取滤液5.00毫升，移入150毫升三角瓶中，加3molL-1 H2S04约5滴(调节pH为7)至溶液出现浑浊为止，置于水浴锅上蒸干。加0.8000molL-1（1/6 K2Cr207）标准溶液5.00毫升，用注射筒迅速注入浓硫酸5毫升，盖上小漏斗，在沸水浴上加热15分钟，冷却后加蒸馏水50毫升稀释，加邻啡罗林指示剂3滴，用0.1molL-1硫酸亚铁滴定，同时作空白试验。
3、胡敏酸(碳)量测定
吸取上述滤液20.00毫升于小烧杯中，置于沸水浴上加热，在玻棒搅拌下滴加3 molL-1 H2S04酸化(约30滴)，至有絮状沉淀析出为止，继续加热10分钟使胡敏酸完全沉淀。过滤，以0.0lmolL-1 H2S04洗涤滤纸和沉淀，洗至滤液无色为止(即富里酸完全洗去)。以热的0.02 molL-1Na0H溶解沉淀，溶解液收集于150m1三角瓶中(切忌溶解液损失)，如前法酸化，蒸干，测碳。(此时的土样重量w相当于1克)。
(三)结果计算
0.8000×5.00×(V0-V1)×0.003
V0
1、腐殖质(胡敏酸和富里酸)总碳量(%)＝——————————————————----——— ×100
W
式中：V0—5.00毫升标准重铬酸钾溶液空白试验滴定的硫酸亚铁毫升数。
V1一待测液滴定用去的硫酸亚铁毫升数。
w一吸取滤液相当的土样重(克)。
5——— 空白所用K2Cr2O7毫升数
0.8000——— 1/6 K2Cr207标准溶液的浓度；
0.003—— 碳毫摩尔质量0.012被反应中电子得失数4除得0.003；
2、胡敏酸碳(％)：按上式计算。
3、富里酸碳(％)＝腐殖质总碳(％)一胡敏酸碳(％)
4、HA／FA＝胡敏酸碳(％)／富里酸碳(％)
(四)药品配制
1、0.1M焦磷酸钠和0.1M氢氧化钠混合液：称取分析纯焦磷酸钠44.6克和氢氧化钠4克，加水溶解，稀释至1升，溶液pH13，使用时新配。
2、3molL-1 H2S04：在300毫升水中，加浓硫酸167.5毫升，再稀释至1升。
3、0.01molL-1 H2S04：取3molL-1 H2S04液5毫升，再稀释至1.5升。
4、0.02 molL-1 NaOH：称取O.8克NaOH，加水溶解并稀释至1升。
(五)注意事项
1、在中和调节溶液pH时，只能用稀酸，并不断用玻棒搅拌溶液，然后用玻棒蘸少许溶液放在pH试纸上,看其颜色，从而达到严格控制pH。
2、蒸干前必须将pH调至7，否则会引起碳损失。
三、思考题
1、土样消煮时为什么必须严格控制温度和时间？
2、有机质由有机碳换算，为什么腐殖质用碳表示，而不换算？
3、测定腐殖质总量和胡敏酸时，都是蒸干后用K2Cr207氧化消煮进行测定，可否不蒸干测定？怎样测?
第二篇：土壤有机质含量测定
土壤有机质的测定
一 重铬酸钾容量法——外热法
1 原理：
用定量的重铬酸钾-硫酸溶液，在电加热条件下，使土壤中的有机质氧化，剩余的重铬酸钾用硫酸亚铁标准溶液滴定，并以二氧化硅为添加剂作实际空白标定，根据氧化前后氧化剂质量差值，计算出有机碳量，再乘以系数1.724，即为土壤有机质含量。
2 仪器设备：
1/10000的分析天平；电沙浴（石蜡浴）；
大试管；弯颈漏斗；容量瓶
定时钟；滴定管： 5.00ml；
温度计：200～300℃；
铜丝筛：孔径0.25mm；
3 试剂
除特别注明外，所用试剂皆为分析纯。
3.1 硫酸银：研成粉末；
3.2 二氧化硅：粉末状；
3.3 邻菲啰啉指示剂：称取邻菲哆啉1.490g溶于含有0.700g硫酸亚铁的100ml水溶液中，此指示剂易变质，应密封保存于棕色瓶中备用；
3.4 0.4mol·L-1（1/6 K2Cr2O7重铬酸钾）重铬酸钾-硫酸溶液：称取重铬酸钾40.0g，溶于600～800ml蒸馏水中，待完全溶解后，加水稀释至1L，将溶液移入3L大烧杯中；另取1L比重为1.84的浓硫酸，慢慢的倒入重铬酸钾水溶液中，不断搅动，为避免急剧升温，每加约100ml硫酸后稍停片刻，并把大烧杯放在盛有冷水的盆内冷却，待溶液的温度降到不烫手时再加另一份硫酸，直到全部加完为止；
3.5 0.1 mol·L-1重铬酸钾标准溶液：称取经130℃烘2～3h的优级纯重铬酸钾4.904g。先用少量水溶解，然后移入1L容量瓶内，加水定容。
3.6 0.1 mol·L-1硫酸亚铁标准溶液：称取FeSO4·7H2O硫酸亚铁28g，溶于600～800ml水中，加浓硫酸20ml，搅拌均匀，加水定容至1L（必要时过滤），贮于棕色瓶中保存。此溶液易受空气氧化，使用时必须每天标定一次标准浓度。
4 操作步骤：
4.1 选取有代表性风干土壤样品，用镊子挑除植物根叶等有机残体，然后用木棍把土块压细，使之通过1mm筛。充分混匀后，从中取出试样10～20g，磨细，并全部通过0.25mm筛，装入磨口瓶中备用。
4.2 按照表1有机质含量的规定称取制备好的风干试样0.05～0.5g，精确到0.0001g。置入150ml三角瓶中，加粉末状的硫酸银0.1g，准确加入0.4mol·L-1重铬酸钾-硫酸溶液10ml混匀。
表1 不同土壤有机质含量的称样量
4.3 将盛有试样的大试管放上弯颈漏斗，移至已预热到200～230的电沙浴（或石蜡浴）加热。当冷凝管下端落下第一滴冷凝液，开始记时，消煮5±0.5min。
4.4 消煮完毕后，将三角瓶从电沙浴上取下，冷凝片刻，用水冲洗冷凝管内壁及其底端外壁，使洗涤液流入原三角瓶，定容于100ml。摇匀后取上清液10ml于三角瓶，加3～5滴邻菲啰啉指示剂，用硫酸亚铁标准溶液滴定剩余的重铬酸钾。溶液的变色过程是先由橙黄变为蓝绿，再变为棕红，即达终点。
4.5 硫酸亚铁溶液的标定方法如下：
吸取0.1 mol·L-1重铬酸钾溶液10ml，放入150ml三角瓶中，加浓硫酸1ml和邻菲哆啉指示剂80ul，用硫酸亚铁溶液滴定，终点为砖红色。根据硫酸亚铁溶液的消耗量，计算硫酸亚铁标准溶液浓度C2。
C2=C1·V1/V2
式中：C2——硫酸亚铁标准溶液的浓度，mol·L-1
C1——重铬酸钾标准溶液的浓度，mol·L-1
V1——吸取的重铬酸钾标准溶液的体积，ml；
V2——滴定时消耗硫酸亚铁溶液的体积，ml
5 结果计算
土壤有机质含量X（烘干基）%=
式中：V0——空白滴定时消耗硫酸亚铁标准溶液的体积，ml；
V——测定试样时消耗硫酸亚铁标准溶液的体积，ml；
C2——硫酸亚铁标准溶液的浓度，mol·L-1；
0.003——1/4碳原子的摩尔质量数，g·ml-1；
1.724——由有机碳换算为有机质的系数；
m——烘干试样质量，g。
平行测定的结果用算术平均值表示，保留三位有效数字。
6 注意事项
6.1允许差：当土壤有机质含量小于1%时，平行测定结果的相差不超过0.05%；含量为1%～4%时，不得超过0.10%；含量为4%-7%时，不得超过0.30%；含量在10%以上时，不得超过0.50%。
6.2适用范围：土壤有机质含量在15%以下的土壤。
6.3如果试样滴定所用硫酸亚铁标准液的毫升数不到空白标定所耗硫酸亚铁标准溶液毫升数的1/3，则应减少土壤称样量，重新做。
6.4以干基计算应同时做土壤水分含量。