珍惜观赏竹的组织培养实验报告

一 、实验目的：

1. 通过配置MS培养基母液，掌握母液的配置和保存方法。

2. 学习母液法配制培养基以及掌握培养基灭菌的方法

3. 通过在无菌操作台上进行无菌操作训练，初步掌握组织培养的无菌操作技术。

4. 巩固植物组织培养的理论知识，熟练操作。

5. 通过实验，学生学会和掌握组培苗的驯化和移栽方法及移栽后的管理。

二 、实验原理：

植物组织培养是指植物的任何器官、 组织或细胞,在人工预知的控制条件下,放在含有营养物质和植物生长调节物质等组成的培养基中,使其生长、分化并形成完整植株的过程.其理论依据是植物细胞具有全能性。

培养基是植物组织培养中的主要部分,除了培养材料本身因素外,培养基的种类和成分等直接影响培养材料的生长和发育,应根据培养材料的种类和培养部位选择适宜的培养基.培养基的种类很多,不同的培养基有其不同的特点。配置培养基时，为了使用方便和用量准确，通常采用母液法进行配置，即按培养基配方中各试剂的用量，扩大若干倍后再准确称量分别先配制成一系列的母液置于冰箱中保存，使用时按比例吸取母液进行稀释配置即可。

试管苗由于是在无菌、有营养供给、适宜光照和温度近100%的相对湿度环境条件下生长的，因此，在生理、形态等方面都与自然条件生长的小苗有着很大的差异。所以需要移栽到自然化境生长，这样才能使之在自然生态下存活。

三 、实验材料、试剂和仪器设备：

试剂：MSNH4NO3 ,KNO3 ,KH2PO4 ,CaCl2·2H2O ,MgSO4·7H2O,FeSO4·7H2O Na2-EDTA,MnSO4·4H2O,ZnSO4·7H2O,CuSO4·5H2O,维他命，盐酸硫胺素，BA1培养

液，去离子水。

仪器设备：电子天平，精密电子天平，烧杯（50ml、100ml、500ml、1000ml）量筒（1000ml、100ml、10ml），容量瓶(1000ml、500ml、100ml)，试剂瓶，玻璃棒数支，药芍，称量纸，转子等。

超净工作台、培养基，大号镊子，剪刀，酒精灯，喷雾器，烧杯，手术刀。 蛭石、珍珠岩、腐殖土，草炭土、砂子、喷壶、育苗盘、塑料钵等。

四、 实验步骤：

1 大量元素母液的配制

先用量筒称量适当蒸馏水放入500ml烧杯中，用电子天平称取30g糖，放入烧杯中加入转子，不断搅拌溶解，然后按照配方表中用10ml量筒依次分别称取：NH4NO3 ,KNO3 , KH2PO4 , MgSO4·7H2O, CaCl2·2H2O，待第一种化合物完全溶解后再

加入第二种化合物，一次按照顺序把微量元素母液分别加入到烧杯中，当最后一种化合物完全溶解后，测量溶液PH，然后用标准1mol/lNAOH调节PH至5.7，搅拌，然后将溶液转移至1000ml量筒中，用蒸馏水润洗烧杯3-6次，再加水定容至980ml,再倒入1000ml烧杯中，反复几次，直到混合均匀。然后用精密电子天平称取琼脂2.5g,导入1000ml容量瓶中，再将原先配制好的母液倒入，加去离子水定容至1000ml，用锡箔纸封口，并贴好标签，注明培养液名称，配置日期，配置人。放入高温杀菌箱杀菌15min。趁热将配好的培养液分装到试管内。

2.去温室取材，取笋或竹子的侧芽，每人5根

3．将取来的芽完整的截取，放入烧杯中，取新烧杯，剪好纱布，用纱布，洗洁精清洗烧杯，将剪好的植株放入烧杯中，用干净的留了一个口的纱布将烧杯口盖住，将水管通过留的口子插入，用清水冲洗1小时。同时，穿好实验服去清理室清洁手臂，洗手致手肘部位两遍。

4.打开超净工作台，用酒精清洗，器材用酒精清洗，高温杀菌器材。将高温杀菌器预热。

5.将洗净的植物放入次氯酸钠溶液里真空抽滤10分钟。将器材放入高温中杀菌。每组四个培养皿，一个放次氯酸钠，三个放去离子水，用培养皿的盖子切植株。

6.将灭菌处理好的材料在超净工作台上，用镊子和手术刀将竹子的芽尖剥出，然后依次在放次氯酸钠和去离子水的培养皿中浸洗后，放入配有培养基的试管中，

试管打开前须在酒精灯上加热灭菌，芽朝向外，三分之一插入培养基内，密封。

7.接种完毕后，用记号笔写上制作人编号等相关信息。

8．接种完毕后，将器具拿去清洗，用洗洁精洗一次，ROA水洗一次，去离子水洗一次，打扫实验室。

9．移栽基质的配制：用珍珠岩，蛭石，草炭土或腐殖土比例为1：1：0．5；也可用砂子：草炭土或腐殖土为1：1。这些介质在使用前应高压灭菌。

10．移栽前的练苗：移栽前可将培养物不开口移到自然光照下锻炼2-3d，让试管苗接受强光的照射，使其长得壮实起来，然后再开口练苗1-2d，经受较低湿度的处理，以适应将来自然湿度的条件。

11．移栽和幼苗的管理：从试管中取出发根的小苗，用自来水洗掉根部粘着的培养基，要全部除去，以防残留培养基滋生杂菌。但要轻轻除去，应避免造成伤根。栽植时用一个筷子粗的竹签在基质中插一小孔，然后将小苗插入四分之一土，注意幼苗较嫩，防止弄伤，栽后把苗周围基质压实，栽前基质要浇透水。栽后轻浇薄水。再将苗移人高湿度的环境中。保证空气湿度达90％以上。

五、注意事项：

配制母液时注意药品只能出不能进。注意焦头滴灌不可碰到量筒。配制培养基前先大致估计一下药品数量，不够时提前配制。培养基灭菌时注意要放干净冷空气。 剥离竹子的芽尖时注意灭菌，注意要靠近超警工作台内侧，不可接触外部空气，进出超净工作台时都需要灭菌。

注意移栽前的驯化，种植时保护好幼苗。保持小苗的水分供需平衡。防止菌类滋生。一定的温、光条件。保持基质适当的通气性。

第二篇：植物组织培养实验报告

植物组织培养实验报告

一 实验目的

让植物组织经过脱分化作用，形成愈伤组织，经过再分化作用，愈伤组织又能重新分化为有结构的组织和器官，最终形成完整的植株。

二 实验原理

植物组织培养是把植物的器官，组织以至单个细胞，应用无菌操作使其在人工条件下，能够继续生长，甚至分化发育成一完整植株的过程。植物的组织在培养条件下，原来已经分化停止生长的细胞，又能重新分裂，形成没有组织结构的细胞团，即愈伤组织。这一过程称为“脱分化作用”，已经“脱分化”的愈伤组织，在一定条件下，又能重新分化形成输导系统以及根和芽等组织和器官，这一过程称“再分化作用”。植物激素在此过程中起着重要的作用，吲哚乙酸（ IAA ）和 6 –苄基氨基腺嘌呤（ 6 – BA ）的比例，决定了根和芽的分化。

三 实验器材

（一）试剂

乙醇、IAA 或 2 ， 4 – D 、HgCl 2 （或次氯酸钠）、6- 苄基氨基腺嘌呤（ 6-BA ） MS 培养基

（二）仪器设备

培养室，高压灭菌锅，水浴锅，解剖刀，三角烧瓶（ 100mL ），烧杯，量筒，培养皿，超净工作台，分析天平，长镊子，剪刀，橡皮筋等

三 实验步骤

1. 配制培养基

（ 1 ）愈伤组织诱导培养基： MS 培养基（蔗糖含量为 10 g/L ， 2,4 – D 含量为 2 mg/L ，琼脂 10 g/L ）。

（ 2 ）试验培养基：在 MS 培养基中按表 33 – 1 加入 IAA 和 6–BA 。

吲哚乙酸先用少量 0.1 mol/L NaOH 溶解， 6- 苄基氨基腺嘌呤先用少量 0.1 mol/L HCl 溶解，然后用蒸馏水稀释，再加入培养基中。

2. 培养基灭菌

将配好的培养基加入琼脂加热溶解，调至 pH 5.8 ，趁热分装于 100 mL 三角烧瓶中，每瓶约 20 mL 。待培养基冷却凝固后，用两层称量纸包扎瓶口，并用橡皮筋扎牢，然后在高压灭菌锅中 121 ℃（ 1 kg/cm 2 ）下灭菌 20 min 。取出三角烧瓶放在台子上，

冷却后备用。接种操作所需的一切用具（如长镊子、解剖刀、剪刀等）及灭菌水，需同时灭菌。

3. 诱导产生愈伤组织

（ 1 ）取健壮的玫瑰、菊花茎数段，每段约 5 cm 长，于烧杯中用 0.1% 氯化汞（升汞）浸泡 20 min ，取出用无菌水洗 3 ～ 4 次，置于无菌培养皿中，在接种箱中按无菌操作要求剥去外皮（接种箱事先用紫外灯灭菌 30 min ），用解剖刀切成 5 mm 厚的圆片（弃去开始一片和最后一片），用长镊子将它接种在诱导培养基上，注意圆片的切口朝向培养基，每瓶接种 4 片，接种后扎好瓶口。

（ 2 ）将已接入植物组织（外植体）的三角烧瓶，培养在 25 ℃温室中，每星期检查 l ～ 2 次，剔除材料已被杂菌污染的三角烧瓶， 3 ～ 4 周后产生愈伤组织。

（ 3 ）选取愈伤组织生长良好的三角烧瓶，用解剖刀将愈伤组织切下，转移到含有不同激素的试验培养基中（也可以连同原来的外植体一起转移），每瓶放 1 ～ 2 块，仍培养在 25 ℃温室中，每周 1 ～ 2 次观察不同处理的三角烧瓶中，愈伤组织分化情况，直至长出根和芽。长成的幼小植株即为“试管苗”，可移栽于花盆中。

四 实验结果

因为时间有限及实验严密性等问题，大部分都失败了，但是仍然有小部分分化发育了出来。已经证明了植物组织能够经过脱分化作用，形成愈伤组织，经过再分化作用，愈伤组织又能重新分化为有结构的组织和器官，最终形成完整的植株。