植物组织培养
实验报告
实验小组成员：
姓名 班级
2013 年4 月 20 日
绿豆的植物组织培养 学号
一、实验目的
1．通过诱导绿豆根、茎、芽形成愈伤组织，学习愈伤组织的建立方法。
2．熟悉植物组织培养各阶段的过程，初步掌握无菌操作的植物组织培养方法。
3．了解植物细胞通过分裂、增殖、分化、发育, 最终长成完整再生植株的过程, 加深对植物细胞的全能性的理解。
二、实验原理
1. 植物细胞的全能性：
一切植物，都是由细胞构成的，细胞是构成植物体的基本结构与功能单位。植物细胞含有全套遗传信息，具有形成完整植株的潜能。
2. 植物组织培养技术：
把植物的器官，组织以至单个细胞，应用无菌操作使其在人工条件下，能够继续生长，甚至分化发育成一完整植株的过程。
3. 组织的分化与器官建成
外植体诱导出愈伤组织后，经过继代培养，可以在愈伤组织内部形成一类分生组织即具有分生能力的小细胞团，然后，再分化成不同的器官原基。
4. 培养基的组成
培养基中各成分的比例及浓度与细胞或组织的生长或分化所需要的最佳条件相近，似成功地使用该培养基进行组织培养的主要条件。营养培养基一般由无机营养、碳源和能源、维生素、植物激素（生长调节剂）和包括有机氮、酸和复杂物质的添加剂组成。
三、实验材料，器具药品
材料：绿豆种子
器具：高压灭菌锅、超净工作台、烘箱、 镊子、记号笔、有盖培养瓶、烧杯、剪刀、棉花、
培养皿、牛皮纸、酒精灯。
药品：MS培养基、糖、琼脂、灭菌水、75%消毒酒精，1%升汞溶液
四、实验步骤
（一）实验前清洗培养瓶，并将培养皿、镊子剪刀等器具和蒸馏水包好进行高压灭菌，器具
烘干待用
（二）准备绿豆种子，用水进行发胀（一般上午泡着下午用）
（三） 配置培养基
1.配母液：根据MS培养基母液配制表配母液
2.配制培养基：
1）将贮藏的母液按顺序排好。
2）称好所需的琼脂、蔗糖，准备好蒸馏水及包纸、橡皮筋等。
3）配制：水、药、糖、琼脂→混合→加热溶解→调pH
4）分装：分装到有盖培养瓶中，液层约1到2cm
5）灭菌：高压灭菌→冷却→凝固
（四）接种与培养
1. 在接种前，打开超净工作台的风机以及台上的紫外线灯进行杀菌，后关闭紫外线灯，将升汞溶液，无菌水，绿豆，烧杯等放入超净工作台。
2.上工作台后，用酒精棉球搽拭双手，特别是指甲处。然后擦拭工作台面。用酒精棉球擦拭接种工具，再将镊子和剪刀从头至尾过火一遍，然后反复过火尖端处，再浸入无菌水中，对培养皿要过火烤干。
3. 在超净工作台上，往经浸泡处理的绿豆瓶中倒入适量1%升汞溶液，浸泡消毒10min，不时用镊子搅动，期间拿出两个培养皿待用。10min
后倒掉升汞溶液，倒入无菌水清洗，清洗
5次，此过程在酒精灯火焰旁操作。 4.清洗完成后，倒掉废液，将绿豆取出放在培养皿中分成几份盖上盖子，准备接种，用酒精棉球擦拭手及台面 5. 接着按小组进行接种，将灭菌处理好的绿豆种子在超净工作台上用镊子夹取靠近酒精灯的外焰放入向下倾斜的培养瓶杯中，横放保证不滑动，不弄破培养基，种子口朝上。每个瓶内装7粒豆子，接种过程中培养瓶应一直保持向下倾斜，直到接种完毕盖上瓶盖，做上标记，以上过程都在超净工作台中进行，保证无菌操作，最后放入光照培养箱中培养。 6. 一周后观察种子的萌发状况，挑选长势较好的幼苗用同样的接种方法将外植体接入不同的培养基上，接1瓶茎1瓶芽。在超净工作台上，取出绿豆芽，剪掉顶芽，稍留一截以便插入培养基，茎剪成约1cm厘米的小段，平铺在培养基上。培养茎和芽的培养基配方不同，在原有MS培养基中加入了不同的植物激素。最后将两个培养瓶做上标记，统一放到培养室中进行培养。 7.一周后观察外植体的分化情况，记录种子的萌发率、污染率、丛芽诱导率以及愈伤组织的
诱导率。最后纪录实验结果。
五、实验注意事项
酒精灯也是必不可少的，不管接种过程还是开关培养瓶，都应该在酒精灯上操作。操作过程中所有的动作都应尽量的小幅度，特别是不能横扫所有灭过菌的东西，如：消过毒的镊子、手术刀、培养皿等；接种时手指不能接触到瓶口，如果镊子不小心碰到瓶口或台面，马上消毒或直接换掉；分切的整个过程动作要快，时间越长越容易污染。
六、实验结果
根据观察记录，所接种子7个，发芽5个，两个长得很健壮。发育成愈伤组织时，芽都生长良好，无污染状况，长出了新的植株体,但是有一个茎段疑似长了白色的菌体。 种子的萌发率=(5/7)×100%=71.4%
种子的污染率：0 外植体的污染率：0
愈伤组织（茎）的诱导率：(6/7) ×100%=85.7%
丛芽诱导率=(2/2) ×100%=100%
七、实验反思及体会
本次实验本组还是比较成功的，相对其他组污染率较低，但是可能由于操作不当例如并没有完全靠近火焰，工具碰到了其他地方导致有细菌进入到培养瓶中导致一些污染。在本期试验中，由于各组的培养条件，工具材料都是一样的，但得到的结果却不一样，污染情况也不同，由此看来在植物组织培养技术中，无菌操作至关重要。通过本次试验基本了解了植物组织培养的前期步骤和方法，随着时间延长，因为营养物质枯竭，水分散失，以及代谢产物的积累，导致死亡，所以没有观察到愈伤组织后来的生长特点，有些遗憾。
思考题：为了降低污染率，该如何进行无菌操作？
1、必须在超净工作台中完成接种，不在试验中将手伸出，最好戴口罩不说话
2、在操作前用酒精洗净双手或酒精棉球擦拭双手
3、用75%的酒精棉球擦拭各种盛溶液的瓶子，工具及超净净工作台台面
4、工具每次在用之前先要经过高压灭菌，用时酒精消毒后在火焰上进行烘烤
5、在取无菌实验材料时要尽量小心，避免造成污染
6、在接种时，镊子等工具不能碰到培养瓶的瓶口及甁壁，所有操作均在火焰旁进行，完成后马上盖紧培养瓶瓶盖
第二篇：植物组织培养试题
植物组织培养考试题5
一、名词解释：（每小题3分，共15分）
1．初代培养基；2．脱分化； 3．液体培养； 4．细胞全能性；5．再分化.
二、填空（每空1分，共40分）
1． 植物组织培养过程中，最常用的培养基是，培养基的pH因外植体的来源不同而异，常用 和 pH，大多数植物的pH要求调节在 范围内。
2． 可以通过、 、等措施预防褐变的发生。
3． 植物组织培养时，外植体可以是 、 、 、 。 4． 应用微尖嫁接技术进行脱毒培养无病毒苗，主要程序为 → → →→。 5． 组织培养植株的再生途径有两条：一是发生，另一是 发生。
6． 在配制培养基时，可以在培养基中添加，利用其吸附能力，可以降低褐变的发生，但它对物质的吸附 。 7． 培养基的灭菌要求压力为 温度为、维持时间为 。
8． 组织培养中常用的生长素有吲哆乙酸（IAA），2，4-二氯苯氧乙酸
（2，4-D），吲哆丁酸（IBA），萘乙酸（NAA），它们的作用强弱顺序为 > > > 。
9. 茎尖微繁殖过程一般包括五个阶段，即 、 、 、 、 。
10．茎尖分生组织培养的目的主要是，其茎尖一般取为了使脱毒效果更好，可以将茎尖分生组织培养与 结合起来。脱毒处理的试管苗，在用于生产之前，必须进行 。
11．污染的原因从病源菌上分析主要有两大类、 。
三、判断正误，并改错。（每小题2分，共20分）
1．一般将微量元素母液均配制成10倍，在配制培养基时，使用量为10ml/L。 细胞分裂素/生长素的比值较高时，有利于愈伤组织的诱导。
2． 对于金边虎尾兰等遗传学上的嵌合体植物，要是组织培养繁殖的植株保持原有的园艺价值，只能通过叶培养。
3． 植物生长调节物质使用不当时，材料也容易褐变，生长素有刺激多酚氧化酶活性提高的作用。
4． 利用茎尖分生组织进行脱毒培养时，茎尖外植体大小与脱毒效果成正比。
5．某些植物通过愈伤组织培养可以获得无病毒苗。
6．无病毒植株不具有抗病毒的能力，而且在清除病毒之后，体内营养和生理状况发生改变，因而对其他病毒和病原体的侵染更为敏感，因此在种植脱毒苗的一定要隔离种植。
7．微繁不定芽的产生有两个途径，一是不定芽不通过愈伤组织由外植体直接产生，二是外植体诱导产生愈伤组织，由愈伤组织上产生不定芽。后一途径相
对较为优越，因为通过愈伤组织不会出现一些突变。
8．细胞的全能性，可以通过分裂细胞的脱分化和再分化过程得以体现。
9．培养基中的铁盐，常用不易分解的乙二胺四乙酸铁螯合物，以防在pH较高时铁被氧化为不溶的氢氧化铁。
四、简答题：（每小题5分，共15分）
1．植物生长物质如何调控外植体形态发生？
2．为什么要对脱毒苗进行多次检定？
3．茎尖培养根据培养的目的和取材大小可分为哪几种类型？各有何特点？
五、综述题（每小题10分，共10分）
试管苗移栽时应注意哪些事项？
答案5
一、名词解释：（每小题3分，共15分）
1． 初代培养基：是指用来第一次接种外植体的培养基。
2． 脱分化：一个已停止分裂的成熟细胞转变为分生状态，并形成未分化的愈伤组织的现象。一个已停止分裂的成熟细胞转变为分生状态，并形成未分化的愈伤组织的现象。
3． 液体培养：指在进行培养时，培养基中不加琼脂等凝固剂，一般需要通过振荡等方法解决培养基的通气情况。
4． 细胞全能性：一个细胞能产生一个完整植株的固有能力，或植物细胞具有全部的遗传信息，不论是性细胞还是体细胞，在特定环境
下，能进行表达而产生一个独立完整的个体。
5． 再分化：愈伤组织形成不定芽或不定根或胚状体。
二、填空（每空1分，共40分）
1． MS、HCL、NaOH、5.6~6.0
2． 适宜外植体、最佳的培养基、连续转接、加抗氧化剂、加活性炭。
3． 器官、组织、细胞、去掉细胞壁的原生质体
4． 无菌砧木、茎尖准备、嫁接、嫁接苗培养、移植
5． 器官、胚胎
6． 活性炭、无选择性。
7． 1000~5000Lx、16h、25±2℃
8． 2，4-D、NAA、 IBA、IAA
9． 无菌外植体的建立、芽的增殖、中间繁殖体的增殖、诱导生根、试管苗的移栽。
10． 脱毒、0.1 热处理、病毒检定
11． 细菌、真菌
三、判断正误，并改错。（每小题2分，共20分）
1．×一般将微量元素母液均配制成100倍，在配制培养基时，使用量为10ml/L。
2．× 细胞分裂素/生长素的比值较高时，有利于愈伤组织芽的诱导。
3．× 对于金边虎尾兰等遗传学上的嵌合体植物，要是组织培养繁殖的植株保持原有的园艺价值，只能通过茎尖和侧芽培养。
4．×植物生长调节物质使用不当时，材料也容易褐变，细胞分裂有刺激多酚氧化酶活性提高的作用。
5. ×利用茎尖分生组织进行脱毒培养时，茎尖外植体大小与脱毒效果成反比。
6.√某些植物通过愈伤组织培养可以获得无病毒苗。
7.√无病毒植株不具有抗病毒的能力，而且在清除病毒之后，体内营养和生理状况发生改变，因而对其他病毒和病原体的侵染更为敏感，因此在种植脱毒苗的一定要隔离种植。
8. ×微繁不定芽的产生有两个途径，一是不定芽不通过愈伤组织由外植体直接产生，二是外植体诱导产生愈伤组织，由愈伤组织上产生不定芽。前一途径相对较为优越，因为通过愈伤组织会出现一些突变。
9. √细胞的全能性，可以通过成熟细胞的脱分化和再分化过程得以体现。
10．√培养基中的铁盐，常用不易分解的乙二胺四乙酸铁螯合物，以防在pH较高时铁被氧化为不溶的氢氧化铁。
四、简答题：（每小题5分，共15分）
1．答案要点： 在植物组织培养过程中，常用的植物激素有生长素类和细胞分裂素类，在高生长素（如使用高浓度2，4—D）时能促进外植体的脱分化，在生长素 / 细胞分裂素比值较高时，促进不定根的发生，比值较低时促进不定芽的发生。
2．答案要点：由茎尖分生组织培养获得的试管苗，经第一次扩繁后要对试
管苗进行病毒检测，以确定材料的脱毒情况。因为剥取茎尖的大小直接关系到脱毒效果，一船剥取的茎尖愈小成苗率愈低，但脱毒率高，而培养的茎尖愈大，成苗率愈高，但脱毒率低。
脱毒苗中病毒有可能再次出现，病毒的再现可能有三方面的原因，一是脱毒不彻底，脱毒后试管苗血清检测没有病毒反映，是因为植株体内病毒含量非常少，以致检测不到，试管苗多次继代后，病毒逐渐积累，从而再次出现病毒侵染；二是一些弱系病毒或一些暂时没有条件检测到的病毒，在强系病毒脱掉后快速繁殖造成危害，三是由于操作及其它一些原因造成的病毒再次侵染。
3．答案要点：茎尖培养根据培养目的和取材大小可分为茎尖分生组织培养和普通茎尖培养两种类型。茎尖分生组织培养主要是指对茎尖长度不超过0.l mm，最小只有几十微米的茎尖进行培养，这种培养可获得无病毒植株。但这样小的茎点分离实际上是很困难的，而且成苗时间也很长，需要一年乃至更长的时间。因此在茎尖分生组织培养中往往采用带有l～2个叶原基的生长锥进行培养。普通茎尖培养是指对几毫米乃至几十毫米长的茎尖、芽尖及侧芽的培养，这类茎尖的培养技术简单，操作方便，茎尖容易成活，成苗所需要的时间短，能加快繁殖速度。
五、总述题（每小题10分，共10分）
答题要点：
1．保持试管苗的水分平衡
2．要选择合适的基质
3．要防止杂菌滋生
4．要注意光、温的管理。