实验一 附子炮制前后致小鼠中毒死亡的情况比较

实验目的：用小鼠死亡数观察附子炮制前后毒性的不同

实验原理： 附子的有毒成份主要是乌头碱。它的性质不稳定，经长时间用水浸泡和加热煎煮炮制，都可使乌头碱水解成毒性较小的苯甲酰乌头胺和乌头胺。生附子中乌头碱含量高，经过炮制后乌头碱含量减少，毒性也降低，引起动物中毒死亡的剂量就比生附子大得多。 

实验器材：小鼠笼（或罐）、电子天平、注射器（1ml），小鼠灌胃针头。
药品：生附子和熟附子水煎液1g/1ml、苦味酸。

材料：小白鼠。体重18-22g，雌雄不拘。 

实验方法
1，取4只小白鼠，称重，用苦味酸标记后随机分为两组，分别0.2ml/10g的生附子和炮制后的附子水煎液灌胃。30min后观察两组小鼠中毒症状和死亡数有无不同。

2，生附子灌服后约20min动物出现腹部收缩，身体摇摆，步态不稳和不安静等现象；30min左右可能死亡。而炮制附子水煎液灌服后则无此中毒现象。观察结果并记录。

实验结果：

思考题：

1.  中药炮制后对临床有何指导意义

2.  为预防附子中毒，应如何降低其毒性

延胡索炮制前后镇痛作用的影响

实验目的：通过醋酸扭体法观察延胡索炮制前后镇痛作用的变化

实验原理：延胡索的醇制浸膏、醋制浸膏、散剂等均有明显镇痛作用。延胡索乙素镇痛作用最强，丑素次之，甲素较弱。延胡索乙素为镇痛主要有效成分，其镇痛作用较吗啡弱但优于复方阿司匹林，对钝痛的作用优于锐痛。与吗啡等麻醉性镇痛药相比副作用少而安全，没有成瘾性。镇痛时对呼吸没有明显抑制，也无便秘等副作用。生品中游离生物碱难溶于水，煎液中有效成分低，醋制后生物碱成盐，易溶于水，镇痛作用增强。

 左旋四氢巴马汀是一个多巴胺受体阻断剂，其镇痛作用机制可能与阻断脑内多巴胺D1

受体，使纹状体亮氨酸脑啡肽含量增加有关。

实验方法：

 取4只小白鼠，称重，用苦味酸标记后随机分为两组，分别0.2ml/10g的生延胡索和

炮制后的延胡索水煎液灌胃。45分钟后分别腹腔注射0.7％冰醋酸溶液。15min后观察小鼠们15分钟内扭体的次数。

实验结果：

思考题：

1.  炮制后延胡索镇痛作用增强的原因

实验二：生大黄制大黄对小肠运动的影响

实验目的：观察泻下药大黄、制大黄对小白鼠肠蠕动的影响以及它们的药理研究。

实验原理：大黄的主要成分为蒽醌衍生物及二蒽酮类衍生物，大黄为泻下药的代表，临床发现病人大量服用大黄后会产生继发性便秘，在中医治疗中，常以芒硝、厚朴、枳实等配伍应用，以减轻此副作用  。现代研究表明，是因为大黄同时含有泻下作用的蒽苷及止泻作用的鞣质所致，蒽苷泻下作用强而作用时间较短，鞣质止泻作用强度较弱而作用时间长，大黄不同炮制品的致泻强度亦不同，生大黄的致泻强度高于熟大黄（九蒸九晒品、热压一次品及热压三次品）和制大黄酒（或醋）炒后泻下效力降低30%左右。有研究表明，大黄煎煮时间越长，致泻作用愈小，以热水浸50℃以下减压浓缩为好。

实验步骤：取体重20±2g相近的小白鼠8只，随机均分为2组，每组4只，用苦味酸做标记。分别用上述3种炭末液0.2ml/10g体重灌胃。给药30min后脱颈椎处死，切开腹腔分离肠系膜，剪取上端至幽门，下端至回盲肠的肠管，置于托盘上。轻轻将小肠拉成直线，测量肠管长度作为“小肠总长度”，从幽门至炭末前沿的距离作为“炭末在肠内推进距离”，取各组小鼠平均值，用公式计算炭末推进百分率。 

          炭末推进率=炭末在肠内推进距离（cm）÷小肠全长（cm）×100%

实验结果：

思考题：1.大黄泻下的主要成分及机制

        2.大黄炮制前后化学成分有何变化

实验三：猪苓泽泻对家兔的利尿作用

实验目的：学校导尿法，观察猪苓泽泻的利尿作用

实验原理：猪苓味甘、淡、性平，归肾、膀胱经，具有利尿渗湿作用,且作用于黄芪、玉米须、木通、淡竹叶等。主治小便不利、水肿、泄泻、淋浊、带下。实验研究表明猪苓的利尿作用与抑制肾小管对水、电解质的重吸收有关,但其利尿特点及分子生物学机制尚不明确。 研究发现，其为利尿药，也有降血压的作用，可医治肾性水肿、心脏性水肿、烦热口渴、小便不利、泻痢及其他新陈代谢障碍等。猪苓提取物对肾结石大鼠实验表明: 猪苓具有明显促进肾排泄Na+、k+、cl-,而抑制尿ca+排泄及抑制尿草酸钙结晶的生长与聚集作用，同时其肾脏骨桥蛋白(OPN) mRNA的表达也得到抑制，表现出明显的利尿和抑制尿结石形成作用，并具有明显的肾功能保护作用。研究发现，猪苓含钾量不高(30mg) ，亦不稀释血液，其利尿作用可能是由于抑制了肾小管对电解质和水的重吸收。

泽泻性寒,味甘、淡，归肾、膀胱经。具有利水渗湿、泄热之功效。用于小便不利、水肿胀满、泄泻、尿少、痰饮、眩晕、热淋涩痛等症。泽泻有明显的利尿作用,这与其含有大量的钾盐有关。泽泻可用于小便不利、水肿胀满、泄泻尿少、痰饮眩晕、热淋涩痛、高脂血症、泽泻含三萜类化合物及甾醇、生物碱、苷类、黄酮、有机酸、氨基酸、多糖、挥发油等成分。研究发现，泽泻对人及家兔均有利尿作用，可使健康人尿量增加63%，尿中排钠、尿素量也增加，而泽泻经甲醇、苯和丙酮提取的组分T 10mg/kg给药可使猫和兔的血压下降。

实验步骤：取一只家兔称重,固定，耳缘静脉注射生理盐水10ml/kg,固定在手术台上，插导尿管，排空膀胱内尿液，收集5～10min内尿液两次，一只家兔灌胃猪苓泽泻水煎液，另一只灌胃等量的生理盐水，30min后收集30min的尿液。

实验结果：

思考题：

1.  影响中药利尿的因素有哪些？

2.  猪苓利尿作用机制

3.  泽泻利尿作用机制

实验四 三七对小鼠出血时间和凝血时间的影响

实验目的：学习玻片法测定出血时间及凝血时间的测定，观察三七缩短出血时间的作用

实验原理：三七具有良好的止血功效，能明显缩短出血和凝血时间。 研究表明，三七的止血成分主要为三七素（Dencichine）。三七素能促使血小板聚集、变形，释放ADP、血小板因子Ⅲ和钙离子等物质而达到止血作用。三七中含有的三七皂苷与人参皂苷均对ADP诱导的家兔血小板聚集有明显抑制作用，且表现出剂量——反应模式。在同等剂量下三七总皂苷与人参总皂苷的作用没有明显差转自http://www.foryn.cn异。三七皂苷表现出对血浆凝血因子与血小板聚集性均有抑制作用。且在对血小板聚集的抑制方面，三七皂苷与人参皂苷的作用相当。人参三醇型皂苷具有溶血作用，人参二醇型皂苷的溶血活性很低。因此，三七具有活血化瘀的功效！ 

实验步骤：取4只小白鼠，称重，用苦味酸标记后随机分为两组，分别0.2ml/10g的三七和等量的生理盐水灌胃。30min后剪去小鼠尾端尾巴3mm左右，每隔30秒用滤纸轻轻吸除尾巴上的血，直至血流自然停止。然后45min左右，眼球取血滴于再玻片上两滴。计时，每隔30秒用针头轻佻，直至有血丝出现，马上挑另一只予以验证。即为凝血时间。

实验结果：

思考题：

1.  三七及三七伤药片对凝血时间有何影响，此作用临床意义何在？

2.  测定凝血时间有何临床意义？

实验五 桔梗对小鼠的祛痰作用

实验目的：学习酚红从呼吸道分泌法，观察桔梗对小鼠的祛痰作用

实验原理：指示剂酚红自小鼠腹腔注射并经腹腔吸收后，可部分地由支气管黏液腺分泌入气道，有祛痰作用的药物在使支气管分泌液增加的同时，其由呼吸道粘膜排出的酚红也随之增多。因而可从药物对气管内酚红排泌量的影响来观察其祛痰作用。酚红在碱性溶液中呈红色，将气管放入定量的生理盐水中，加碳酸氢钠使其显色，用比色法，分光光度计，测出酚红的排泌量。从而得到药物的祛痰作用。

实验步骤：取小鼠 4 只，随机分为对照组和桔梗水煎液组，按 20ml/kg，体重，灌胃给药 30min 后。对照组给同体积生理盐水。由腹腔注射酚红溶液0.5ml/只。30min 后颈椎脱臼处死小鼠，剥去气管周围组织，剪下自甲状软骨至气管分支处的一段气管，放进盛有 3ml 生理盐水的试管中，再加入 0.1ml 碳酸氢钠溶液。比较生理盐水组和桔梗组的液体颜色。

实验结果：

思考题：

1.桔梗祛痰作用的机制？

实验六 人参对小鼠游泳时间的影响

实验目的：了解人参对小鼠游泳时间的影响，掌握疲劳作用药物的常用筛选方法

实验原理：人参能促进人体对糖原和三磷酸腺苷等能量物质的合理利用，并使剧烈运动时产生的乳酸转化为丙酮酸进入三羧酸循环，为机体提供更多的能量，减轻体力运动时的疲劳。本实验以小鼠游泳时间为指标观察人参的抗疲劳作用。

实验步骤：玻璃缸内加水，水深20cm，水温保持在20±0.5℃。取4只小鼠，雌雄不限，称重，用苦味酸标记，随机分为两组。给药组每只灌胃人参水煎液0.25ml/10g，对照组每只灌胃等容量的生理盐水，给药后30min分别放入玻璃缸内游泳，立即计时并注意观察，当小鼠头部沉入水中10s不能浮出水面者即为体力耗竭，停止计时，记录小鼠游泳时间。与对照组比较并进行统计学处理。分别算出两组的平均游泳时间实验结果：

思考题：

1.为什么人参可以抗疲劳？

2.影响小鼠游泳时间的因素有哪些？

第二篇：中药药理学实验课

第一组

题目：延胡索提取物的镇痛作用

班级：

成员：

指导老师：

延胡索提取物的镇痛作用（方法的研究）

一、延胡索镇痛的历史[1]

罂粟科紫堇属延胡组植物延胡索的块茎。 根据南北朝以来直到明清的医案记载和现代科学研究，可把延胡索的临床应用分为三类：1.镇痛作用：延胡索中多种生物碱对胸部疼痛、胃肠疼痛、腹部疼痛、跌打扭伤等有显著的止痛作用;2.治疗心血管疾病：延胡索对心血管疾病有肯定的药效，能扩张冠脉，治疗心率失常;3.用于妇产科通经、行气：可治疗痛经和产妇产后宫缩痛。

现代药理实验证明，延胡索对中枢神经系统具有明显的抑制作用，能使肌肉松弛，并具有解痉作用。口服延胡索可产生类似吗啡及可待因的效果，能缓解一般神经痛、头痛、腰痛、关节痛、月经痛、肿疡疼痛等。延胡索对轻度痉挛性疼痛的有效率大致与杜冷丁相当。另外，延胡索还有镇静、催眠、抗惊厥的功效。

延胡索的研究新发现

以中科院上海药物研究所金国章院士为代表的药理学家以中西医结合的方式对延胡索进行了系统、深入的研究，发现其主要成分延胡索乙素的镇痛、镇静机理与传统的麻醉性镇痛或消炎解热镇痛机理不同，延胡索乙素是属于植物中枢多巴胺受体抑制剂，是一种增强内源抗痛系统功能的新作用机制，具有良好的镇痛、镇静作用，且安全性好，无成瘾性。 二、延胡索的主要功效及化学成分[2]

功效：延胡索有活血、理气、止痛功效和镇痛、抗心肌缺血、抑制血小板聚集

化学成分：延胡索甲素、延胡索乙素、延胡索丙素、延胡索丁素、延胡索戊素、延胡索己素、延胡索辛素、延胡索壬素、延胡索癸素、延胡索子素、延胡索丑素、淀粉、黏液质、挥发油及树脂

三、延胡索乙素的镇痛机理[3]

延胡索乙素生物活性最强，其左旋四氢巴马汀对脑内多巴胺（DA）受体有亲和力起通过阻断多巴胺DI受体增加脑内纹状体亮氨酸脑啡肽含量而产生镇痛作用。

四、提取方法[4]

１、回流提取法：以延胡索乙素的提取量为考察指标，用高效液相色谱（ＨＰＬＣ）法测定其含量，采用正交试验优选提取工艺。结果优选工艺为，以３倍量７５％乙醇回流提取３次，每次提取1.5h,该提取工艺合理、转移率高。

２、动态逆流提取法：采用动态逆流提取法提取元胡中的延胡索乙素，并与渗漉法、回流法进行比较，结果在提高指标成分延胡索乙素的提取率及降低提取液的含固量基础上，减少溶剂消耗达５０％以上。该法具有提取完全、节省能源、可实现连续批量生产、缩短生产周期和工艺实用性强等特点，是一种比较科学的中药提取方法。

３、超声提取法:以氨一乙醚为溶剂，采用超声、冷浸、热回流３种方法提取延胡索，并以提取物生物碱中延胡索乙素提取量为考察指标进行比较研究。结果表明超声提取方法含量高、操作简便。

４、超临界ＣＯ2流体萃取法：技术是利用超临界ＣＯ2的高渗透性和高溶解能力来提取和分离物质的一种新的单元提取分离技术。

五、三种常用的镇痛试验方法[5]

热板法

试验目的与要求：

1.熟悉延胡索镇痛的主要成分及提取方法；

2.掌握三种常用的镇痛试验方法；

3.了解延胡索的一些研究新进展；

4．掌握热板测痛仪的使用。

试验原理及材料:

将小鼠置于恒温热板上，热刺激小鼠足部产生疼痛反应，以其舔足作为“疼痛”反应指标。当小鼠开始出现疼痛反应的时间作为小鼠痛阈值，比较各组间痛阈值的差异，判断药物有无疼痛作用。

动物：14只小鼠（雌性），体重18-22克

药物：生制延胡索、醋炙延胡索、生理盐水

主要器材：热板测痛仪，秒表，注射器等。

试验方法步骤：

1、给药前先测定每只小鼠的痛阈值(共测二次，以平均值为5-30s者为合格)

2、将9只小鼠编号分为3组：（生制延胡索组、醋炙延胡索组、生理盐水组）

3、给生制延胡索组、醋炙延胡索组、生理盐水组小鼠灌胃延胡索0.1ml/10g，30min后将恒

。温水浴调节至55±0．5C，金属盘的底部接触水面，加热后作为热刺激，用秒表记录小鼠

自投入热板至出现舔后足的时间(s)作为该鼠的痛阈值。给药后每隔0.5～1h测定一次，连续数次，如痛阈值超过60s,即停止测试而按60s计(时间过久，易烫伤足部)。

试验数据记录与处理:

实验结束，按所测之痛阈平均值计算痛阈提高百分率。

用药后痛反映时间-用药前平均痛反应时间

痛阈值提高百分率= ——————————————————— ×100%

用药前平均痛反应时间

以时间为横座标，痛阈提高百分率为纵座标，绘出镇痛作用时程曲线，以分析药物的作用强度、作用开始时间和持续时间。

药物对小鼠热刺激的镇痛作用

用药前平均用药后痛阈小鼠数（n） 剂量（）mg/kg 痛阈值（s） 值（s）

生制延胡索组

醋炙延胡索组

生理盐水组 组别

注意事项: 1 小鼠不能连续进行测定

2 室温对本实验有一定影响，以15～20℃为宜

3 小鼠疼痛易躁动，注意安全。

思 考:影响热板法镇痛实验准确的因素有哪些？

扭体法

实验目的

1 掌握镇痛的实验方法

2 观察药物镇痛作用

实验原理

小鼠腹腔注射化学物质，可刺激腹膜引起腹腔深部大面积且较持久的疼痛，并引起小鼠”扭体“反应（腹部内凹，躯体与后退伸张等）。本实验以药物减少小鼠扭体反应的只数及次数作为指标，观察药物镇痛作用。

材 料

动 物：小鼠，体重18-22克，雌雄各半。

试 剂：生制延胡索、醋炙延胡索、生理盐水。

主要器材：秒表，注射器，鼠笼等。

方 法

取健康小鼠，雌雄各半，随机分为生理盐水组（等体积生理盐水），生制延胡索（灌胃10g/0.1ml生制延胡索水煎液）和醋炙延胡索组（灌胃10g/0.1ml醋炙延胡索水煎液）。给药后30min各组小鼠腹腔注射0. 6%醋酸液0. 2ml/只，记录15min内各组小鼠扭体反应的次数，并计算药物镇痛百分率。

给药镇痛百分率=（对照组平均扭体反应次数-给药组平均扭体反应次数）/对照组平均扭体反应次数×100%

痛阈提高百分率

药物对小鼠扭体反应的影响

组别 小鼠数（n）

生理盐水组

生制延胡索

醋炙延胡索组

注意事项 剂量（mg/kg） 扭体次数 抑制率（%）

1 醋酸有挥发性，应用时临时配；

2 每只小鼠腹腔注射部位和操作技术力求一致。

思 考:扭体法观察药物镇痛作用有哪些优点？

光照甩尾法

【原理】:

鼠尾光照甩尾镇痛方法是通过固定强度的光束,持续照射到鼠尾产生集热效应,使鼠尾局部温度升高从而产生疼痛.当灼热产生的疼痛超过动物能忍受的痛阈时,动物会以甩尾来回避疼痛,以甩尾作为判断痛阈改变的指标,是镇痛药物筛选的物理性致痛方法之一.

【方法与步骤】:

将大鼠或小鼠放入鼠固定器内,露出鼠尾然后紧固.待动物安静后,将尾部摆放在测痛仪光电控制探头中间的出光孔上,测定指示灯出现慢闪动,按“开始”键或踏下脚踏开关,计时开始,当鼠尾受热刺激疼痛摆动时,光源自动关闭,停止计时,锁定数据(痛阈值)并记录给药前后动物痛阈的变化.动物药物处理和测定时间同痛热板法.

数据处理:

给药镇痛百分率=（对照组平均扭体反应次数-给药组平均扭体反应次数）/对照组平均扭体反应次数×100%

药物对小鼠扭体反应的影响

组别 小鼠数（n）

对照组

给药组

阳性药组

【注意事项】:

注意区别鼠尾自然摆动与痛刺激时甩尾的差异

参考文献

[1]马胜兴，等，延胡索研究概况。中医研究院西苑医院心血管病研究室，1985；5；12

[2]鲁春梅、张春森、姜立勇，延胡索化学成分及药理作用研究进展，2010；5；15 剂量（mg/kg） 扭体次数 抑制率（%）

[3]金国章（中国科学院上海药物研究所）、胡江元（中国科学院上海生理研究所）2003；01

[4] 程建明、井山林，《时珍国医国药》；006；07

[5]愈浩、胡勃、杨硕，延胡索、醋炙延胡索镇痛作用实验研究，2009；01