实验22 蛙类离体心脏灌流

【目的要求】

1．学习斯氏或八木氏离体蛙心灌流法。

2．观察Na+、K+、Ca2+及肾上腺素、乙酰胆碱等对离体心脏活动的影响。

【基本原理】

心肌具有自动节律性收缩活动的特性，可用人工灌流的方法研究心脏活动的规律及其特点，还可通过改变灌流液的成分或加入某些药物来观察其对心脏活动的影响。

【动物与器材】

蟾蜍或蛙、蛙心套管（斯氏套管或八木氏套管）、常用手术器械、蛙心夹、套管夹、记纹鼓及通用杠杆或记录仪与张力换能器、万能滑轮、多用仪或刺激器、蜡盘、滴管、培养皿或小烧杯、任氏液、5%NaCl溶液、2%CaCl2溶液、1%KCl溶液、1∶100000肾上腺素溶液、1∶10000O0乙

酰胆碱溶液、300u/ml肝素溶液。

【方法与步骤】

1．离体蛙心的制备制备离体蛙心的方法有两种。

(1)斯氏蛙心插管法取一只蟾蜍或蛙，双毁髓后背位置于蜡盘中，按实验19暴露心脏。仔细识别心脏周围的大血管（参见图4-1，4-2）。在左主动脉下方穿一线，距动脉圆锥2-3mm处结扎。再从左、右两主动脉下方穿一线，打一活结备用。左手提起左主动脉上的结扎线，右手用眼科剪在动脉圆锥前端，沿向心方向剪一斜口，然后将盛有少量任氏液（内加入一滴肝素抗凝）的斯氏蛙心套管由此开口处插入动脉圆锥（图4-8）。当套管尖端到达动脉圆锥基部时，应将套管稍稍后退，使尖端向动脉圆锥的背部后方及心尖方向推进。经主动脉瓣插入心室腔内（于心室收缩时插入）。不可插得过深，以免心壁堵住套管下口。此时可见套管中液面随心脏搏动而上下移动，用滴管吸去套管中的血液，更换新鲜任氏液，提起备用线，将左、右主动脉连同插入的套管扎紧（不得漏液），再将结线固定在套管的小玻璃钩上。剪断结扎线上方的血管。轻轻提起套管和心脏，在心脏下方绕一线，将左右肺静脉、前后腔静脉一起结扎，注意保留静脉窦与心脏的联系，切勿损伤静脉窦，于结扎线的外侧剪去所有牵连的组织，将心脏离体。用任氏液反复冲洗心室内余血，使灌流液不再有血液。保持套管内液面高度恒定（1.5—2cm），即可进行实验。

(2)八木氏蛙心插管法取一只蟾蜍或蛙，同上法暴露心脏。于左主动脉下方穿一线，再用蛙心夹夹住心尖，使心脏轻轻吊起（参见图4-2），将线向后绕过左、右前腔静脉，左、右肺静脉及右主动脉支，结扎后剪断，也可分别结扎。再将心脏翻向头端，用线结扎右肝静脉及后腔静脉（勿伤静脉窦），剪断。于左肝静脉下方穿一线，打一活结备用，用眼科剪沿向心方向剪一斜口，将装有灌流液的八木氏静脉套管从开口处插入肝静脉（尖端勿伤静脉窦）。若套管插入静脉，则心脏的颜色变浅，此时可继续加入灌流液。将心脏内余血冲洗干净，然后扎紧静脉套管（图4-9）。 在左主动脉下方穿一条线，先用眼科剪将动脉剪一小口，再将动脉套管沿向心方向插入动脉（尖端不深入动脉圆锥），此时可见套管中有灌流液流出，随即扎紧套管，剪断左主动脉及左肝静脉，使心脏完全离体。将套管稳妥地固定在灌流支架上，调节两个套管的方向，使灌流液在心缩时能畅通地搏出心室，从动脉套管流出，即可进行实验

2．将插好离体心脏的套管固定在支架上，用蛙心夹夹住心尖（不可夹得过多，以免漏液）。用记纹鼓记录时，将蛙心夹上的系线与通用杠杆相连（图4-10），调节心搏曲线记录、刺激及记时电磁标三只笔尖与记纹

鼓面需接触良好。如用记录仪描记，则将蛙心夹上的系线绕过一个滑轮与张力换能器相连（图4-11）。注意：勿使灌流液滴到换能器上。

3．实验观察

(1)开动慢鼓记录正常心搏曲线。

(2)向套管内加2—6滴5%NaCl溶液，用电磁标作好加药标记，观察心搏曲线的频率及振幅的变化。当曲线出现明显变化时，立即吸去套管中的灌流液（作好冲洗标记），用新鲜任氏液清洗2—3次，待心搏恢复正常。

(3)向套管内加入1滴2%CaCl2溶液，观察并记录心搏曲线的变化。

当出现明显变化时，立即更换任氏液（方法同上），待心搏恢复正常。

(4)向套管中加1－2滴1%KCl溶液，记录心搏曲线的变化。当心搏曲线变化时，立即同(2)法更换灌流液，待心搏恢复。

(5)同(2)法记录套管中加入1—2滴1∶100000肾上腺素溶液后心搏曲线的变化。(6)同(2)法记录套管中加入1—2滴1∶1000000乙酰胆碱溶液后心搏的变化。4．将心脏搏动变化的情况填入表4-2。

表4-2几种离子及药物对离体心脏活动的影响

【思考题】

1．此实验说明心肌有哪些生理特性？

2．以本实验为例说明内环境相对恒定的重要意义。

3．各种离子和药物对心搏有何影响，为什么？

哺乳动物离体心脏灌流实验

哺乳动物离体心脏灌流实验

一、实验目的和原理

心脏从动物体摘取之后，用有一定压力、温度（37℃）并充氧的修正洛氏液经主动脉根部灌流。灌流液经冠状动脉口进入冠状血管营养心脏，以维持心脏的

节律性活动。灌流液经冠状血管流入右心房，然后由腔静脉口及肺动脉口流出，在单位时间内的流出量即为冠状动脉血流量（冠脉流量）。心脏活动可通过张力

换能器进行记录，也可用压力换能器（心室内放置水囊）进行记录。

了解哺乳类动物心脏离体灌流方法（Langendorff 氏法）和离体心脏冠脉血流量的测定灌流。观察肾上腺素、乙酰胆碱对心脏活动及冠脉流量的影响。

二、实验动物

大鼠

三、实验器材与药品

哺乳动物类手术器械一套，注射器，针头，线绳，鼠手术台，灌流液瓶，心脏Langendorff 法灌流装置，恒温循环器，滑轮，烧杯，量筒，修正洛氏液，1:10000,肾上腺素，1:10000 乙酰胆碱。

四、实验方法和步骤

1．Langendorff 灌流装置包括恒温、恒压灌流和供气三个部分。

[attach]3[/attach]

(1).修正洛氏液的配置：成分如下

原液 1000ml 2000ml

20%NaCl (ml) 45 90

10%kCl (ml) 4.2 8.4

10%CaCl (ml) 2.4 4.8

5%NaHCO3 (ml) 3 6

葡萄糖 2.5 5

注意事项：

(1)先加蒸馏水(总体积90%左右)，再依次加入上述试剂，但加NaHCO3时应逐滴加入，并不断摇晃混匀，防止形成CaCO3沉淀，最后再加入蒸馏水，补足液体量。

(2).将灌流系统用胶管连接，灌流液瓶灌满灌流液。调整灌流液瓶的高度使灌流压力达到实验要求，一般要求灌流液瓶中心管的下端距心脏的高度为70～90cm，可按心脏的大小而适当调整。

(3).混合气瓶（或球胆）的减压阀出口用软管接至灌流管内的充气管，调节气瓶上的减压阀，使灌流液中的气泡连续且小而均匀。

(4).调节恒温循环器使心脏插管内的灌流液温度恒定在37℃左右。为了保证离体心脏的表面有一定的温度和湿度，将心脏置于由玻璃或有机玻璃制成的保温灌流槽内。保温灌流槽的底部有漏斗形的开口，上方盖子盖住可以保持槽内温度

恒定.

2．标本制备

(1).摘取心脏：取心脏前20min，大鼠腹腔注射肝素液抗凝((3125μ/kg)。取心脏时腹腔麻醉(20%氨基甲酸乙酯，3ml/kg)后，固定仰置于手术台上。迅速沿胸前壁正中剪开皮肤，打开胸腔，轻轻提起心脏，小心剪断腔静脉、主动脉及心脏周围组织，迅速将心脏连同一段主动脉取出。手术过程中注意不要损伤心脏，主动脉根部要留0.5~1cm 长度以备插管用。心脏取出后立刻置于预先备好的充氧的冷克氏液（4℃左右）中，用手指轻压心室以利于其中的剩余的血排出，防止凝血块形成。心脏停跳后，迅速剪开心包膜并剪去心脏周围的组织（包括肺组织、气管以及附着于心脏上的其他组织），认清主动脉、腔静脉及肺动脉的解剖位置，在主动脉根部穿一棉线备用。

(2).灌流心脏：将主动脉套进心脏插管口内，用棉线将主动脉和心脏插管结扎在一起并固定。插管进入主动脉不宜过深，以免损伤主动脉瓣及堵住冠状动脉开口，影响冠状血管的灌流。心脏经充氧的温修正洛氏液灌流后，在lmin 内即可开始恢复跳动，但起初心率较慢，并常有心律不齐，以后逐渐变快而且心律也逐步恢复正常和稳定（大鼠心脏的心率约200～300 次／min），可维持数小时。

3．仪器参数设置

显示方式：采集频率800HZ；通道1：心肌收缩，扫描速度1.0s/div，灵敏度2.5g，时间常数直流，滤波频率30HZ。

4．用蛙心夹在心室舒张期夹住心尖，并将连接蛙心夹的丝线通过滑轮连至张力换能器，调节与张力换能器

相连丝线的松紧度，使心肌前负荷约5g，记录心脏活动。

5．调节固定保温灌流槽，使保温灌流槽罩住心脏。灌流液进入冠状血管后到右心房经腔静脉及肺动脉滴入双层灌流槽中，经槽底部的漏斗形开口流出，用量筒收集一定时间内的流出液即为冠脉流量。流量基本稳定后，进行下列各项观察。

五、实验观察项目

1．记录正常情况下的冠脉流量（ml/min）和心脏活动作为对照。

2．由心脏插管的侧管注入1:10000 肾上腺素溶液0.5ml，观察冠脉流量和心脏活动的变化。

3．由心脏插管的侧管注入1:10000 乙酰胆碱溶液0.5ml，观察冠脉流量和心脏活动的变化。

六、实验结果分析

记录和测量各种处理前后冠脉流量和心肌收缩张力、心率，并进行统计处理。

七、实验注意事项

1．制作离体心脏标本时操作要迅速，不要损伤心脏。

2．灌流压力和灌流液温度要严格维持恒定。

3．冠状血管要保持通畅。

4．注射各种药物时要观察其影响流量的全过程。

第二篇：蛙类斯氏离体心脏灌流及对其节律性 收缩的影响因素

中央民族大学生命与环境科学学院

-

生理学实验报告 蛙类斯氏离体心脏灌流及对其节律性 中央民族大学生命与环境科学学院 生理学实验报告收缩的影响因素 蛙类斯氏离体心脏灌流及对其节律性收缩的影响因素

20xx年10月22日

一、实验目的

1.学习蛙斯氏离体心脏灌流法。

2. 了解心肌的生理特性。

3.观察Na+、K+、Ca2+离子及肾上腺素、乙酰胆碱等对离体心脏的影响。

4.观察心脏在收缩活动的不同时期对额外刺激的反应，了解心肌收缩的生理特性。

二、实验原理

两栖类动物的心脏为两心房、一心室，心脏的起搏点是静脉窦。静脉窦的节律最高，心房次之，心室最低。正常情况下，心脏的活动节律服从静脉窦的节律，其活动顺序为：静脉窦、心房、心室。这种有节律的活动可以能过张力传感器在生理信号采集系统中记录下来，称为心搏曲线。

心脏收缩的机械活动，与心脏兴奋的产生、传导和恢复过程中的生物电变化，是两个不同的生理过程。心脏收缩的机械活动可以能过心搏曲线记录下来，而心脏的生物电变化可以能过心电图表现了来。同时记录心脏的机械活动与电变化，可以清梦地观察到两个生理过程之间对应关系。

心肌的机能特性之一是具有较长的不应期，整个收缩期都处于有效不应期内。在心室收缩期给以刺激，心室都不发生反应，在心室舒张中后期给以单个阈上刺激，则产生一次正常节律以外的收缩反应，即期前收缩。当静脉窦传来的节律性兴奋

图1.蛙的心脏插管

恰好落在期外收缩的收缩期时，心室不再发生反应，须静脉窦传来下一个兴奋才会收缩。因此在期外收缩之后，就会出现一个较长时间的舒张间歇期，即代偿间歇。心肌具有自动节律性收缩的特性，其调节受植物性神经的支配及某些体液因素的调节和药物作用的影响。因此，在灌流液中，滴加肾上腺素、乙酰胆碱及其相应的受体阻断剂心得安和 阿托品等药品，可间接观察神经体液因素对心脏活动的影响。

图2.心脏插管及换能装置

三、实验材料及试剂

蟾蜍，常用手术器械，蛙板，蛙心夹，实验信号采集系统，张力传感器，支架，双凹夹，滑轮，两个针形插入电极，双针形露丝刺激电极，秒表，滴管，培养皿，纱布，橡皮泥，任氏液，蛙心套管，套管夹，0.65%和5%的NaCl溶液，2%的CaCl2溶液，！%的KCl溶液，1:5000肾上腺素溶液，1:10000的乙酰胆碱溶液。

四、实验流程

具体明细参见：《生理学实验》第三版，解景田 刘燕强 崔庚寅，高等教育出版社，第75页至83页。

五、实验结果

1、蛙心脏代偿间歇现象的观察。

在收缩期、舒张早期即有效不应期内，给予任何刺激，心肌都不产生兴奋、不发

生收缩；舒张中、晚期即有效不应期之后，额外的刺激引起期前兴奋，发生期前

收缩。期前收缩之后一次较长的心舒期，窦房结正常刺激恰好在期前兴奋的有效不应期之内，产生代偿间歇。

如下图所示，心脏的正常节律是47次/min，在发生代偿间歇之后，其节律变为40次/min。另外，在给予心脏3.50V电压刺激的时刻，心脏就已经发生了代偿间歇，在之后的6.00V电压刺激时，其又出现了一次代偿间歇，且更加明显。

图3.心脏代偿间歇的观察

2、NaCl溶液对心脏兴奋节律的影响。

（1）、0.65%的NaCl溶液灌流心脏。

图4. 0.65%的NaCl溶液灌流心脏搏动心率图

在使用0.65%的NaCl溶液灌流刺激心脏时，由于它相当于蛙的等渗溶液（及任氏液），降低了心肌细胞外的Ca离子浓度，内流的Ca离子浓度也随之降低，心肌细胞的兴奋—收缩偶联下降，从而使得心肌细胞的收缩减弱，心率减慢。

（2）、5%的NaCl溶液刺激灌流心脏。

图5.5%的NaCl溶液灌流心脏的搏动心率图

再改用浓度为5%的NaCl溶液灌流心脏时，此时的NaCl溶液已不再相当于任氏液，而是与Ca离子竞争性的与肌钙蛋白结合，使浓度低的Ca离子无法与肌钙蛋白结合，这就不能引起心肌细胞发生收缩，表现为心率变小，心跳变慢，心肌收缩幅度变小。

3、K对心脏兴奋节律的影响。

从下图可以看出，在灌流KCl溶液后，心肌细胞的搏动节律明显加快，但是收缩的幅度却呈减小的趋势。理论上，细胞外K+浓度升高时会出现兴奋性的双向变化，轻度升高时，膜电位轻度减小，细胞内外K＋的浓度梯度减小，K＋外流的力量减弱,静息电位（RP）的绝对值减小,和阈电位(TP)差值减小,细胞的兴奋性增高；重度高钾时，RP的绝对值减小时，钠通道的开放效率降低，钠通道逐渐失活，兴奋性降低或者丧失膜电位显示著减小。

1%的KCl溶液相对而言，算是低浓度的含钾溶液，但它却使得心肌细胞外的钾离子浓度变大了，也即使得心肌细胞的膜静息电位的绝对值变小了，只要很小的外界刺激，心肌就可以兴奋。

图6.1%的KCl溶液灌流心脏节律图

4、2%的CaCl溶液灌流心脏其节律的变化。

由图可知，在Ca2+浓度变大时，心脏的收缩明显变大，收缩频率也随之增大。细胞外的Ca2+离子对细胞膜上Na+内流有竞争性抑制作用，成为膜屏障作用。而心肌兴奋-收缩偶联的媒介与骨骼肌一样也是Ca2+，但是钙的来源不同，由于心肌细胞的终末池很不发达，所贮存的Ca2+极少，因而胞内的Ca2+主要来源于细胞外液，即心肌细胞的兴奋-收缩偶联在很大程度上依赖于胞外内流的Ca2+，故细胞外液中的Ca2+浓度对心肌收缩力的影响较大。在一定范围内，细胞外液中的Ca2+浓度升高时，抑制Na+内流的同时，Ca2+内流量增多，心肌收缩力就强；反之，心肌收缩力就弱。

图7.2%的CaCl2 溶液灌流心脏节律图

5、去甲肾上腺素对心脏兴奋节律的影响。

如下图所示，心脏在未灌流前的心率为129次/min，用去甲肾上腺素灌流之后，其心率发生了较大的变化，变成了241次/min。表明去甲肾上腺素能引起心静脉窦发电频率变大，去甲肾上腺素对心肌α受体具有强大激动作用，对心肌β1受体作用较弱，对β2受体几无作用。起作用的结果表现为小剂量时较弱激动心脏的β1受体，使心肌收缩性加强，心率加快，传导加速，心排出量增加。在整体情况下，心率可由于血压升高而反射性减慢；剂量过大时，心脏自动节律性增加，也会出现心律失常，但较肾上腺素少见。

图8.去甲肾上腺素灌流心脏心率图

6、肾上腺素灌流心脏心率的变化。

据图可知，心脏在正常情况下的心率为129次/min，

当在用肾上腺素灌流刺激时，

心率发生了很大的变化，变成了390次/min，而再用去甲肾上腺素灌流心脏时其心率只变成241次/min。可见肾上腺素对心脏的影响比去甲肾上腺素更为明显，而心脏收缩的幅度却随着心率的变大而减小了。

图9.肾上腺素灌流心脏心率图

7、乙酰胆碱灌流心脏心率的变化。

由图发现，在灌流乙酰胆碱之后，心脏的心率反而变大了，这有悖于真实实验结果，加乙酰胆碱心脏收缩能力应该减弱，心率变小。乙酰胆碱与心肌细胞膜上的M受体结合使心肌细胞膜K通道的通透性增强，促使K外流，最大复极电位水平升高，自律性降低。同时，当乙酰胆碱与心肌细胞膜上的M型的胆碱能受体结合，可使腺苷酸环化酶抑制，细胞内的cAMP浓度降低，肌浆网释放Ca2＋减少，心肌的收缩力量减弱。也可以能使传导速度减慢，心率降低。并且乙酰胆碱可直接抑制Ca通道使Ca内流减弱，心肌收缩能力降低。

图10.乙酰胆碱灌流心脏心率的变化

六、结果讨论与讨论

1.额外刺激对蛙心脏搏动的影响。

通过本次实验可以验证心肌细胞的有效不应期较长，故不能发生完全强直收缩，从而保证了心脏泵血功能的正常进行。在每次心动周期中，心肌每发生一次兴奋——收缩后，其兴奋性将发生一系列周期性变化。心肌兴奋后其兴奋性变化的特点是有效不应期特别长：相当于整个收缩期加到舒张期的早期，在此期间给予任何强大刺激均不能引起心肌兴奋收缩。随后为相对不应期，在此期给予心肌强的刺激可引起心肌兴奋收缩，最后为超常期。而心肌细胞的有效不应期特别长，期前收缩和代偿间歇：相对不应期和超常期均处于心肌舒张期内，因此，在舒张期如果在窦房结（两栖类为静脉窦）按正常节律性兴奋下达以前，给予心室肌一次适当的阈上刺激可引起一个提前出现的扩布性兴奋和收缩，称为期前收缩或额外收缩，也称早搏。期前收缩也有自已的有效不应期，而随后窦房结传来的正常的节律性兴奋，常常落在这个期前收缩的有效不应期中，因而不能引起心室的兴奋和收缩，这样心室较长时间地停留在舒张状态，直至下一次窦房结正常的节律性兴奋到达时，才恢复原来的正常的节律性兴奋和收缩。因此，期前收缩后就会出现一个较长时间的舒张间歇期，此为蟾蜍的代偿间歇。

2.钠离子对心脏节律的影响。

0.65％NaCl对蛙和蟾蜍来说是等渗的溶液，完全可以置换任氏液，在用此溶液灌流后，心肌细胞外的Ca2＋浓度、K+浓度大大降低，使心肌的收缩能力减弱，心率减慢。5%的NaCl对蛙来说已不再是等渗溶液，起作用的机理也不尽相同，它是通过降低Ca2+内流，并且在心肌细胞内竞争性的与肌钙蛋白结合，导致肌钙蛋白损耗，心肌的兴奋性变弱。

3.K+对心脏节律的影响。

总体看来心肌对细胞外K＋浓度变化比较敏感；但是不同部位心肌的敏感性有所不同，心房肌最敏感，房室束－浦肯野纤维系统次之，窦房结敏感性较低。细胞外液钾浓度增高时，对兴奋性的影响与其浓度增高的程度有关。当K＋浓度轻度或者中度升高时，细胞内外K＋的浓度梯度减小，K＋外流的力量减弱,静息电位（RP）的绝对值减小,和阈电位(TP)差值减小,细胞的兴奋性增高；当K＋的浓度大

幅度的升高，RP的绝对值减小（膜内－55mv左右）时，钠通道的开放效率降低，钠通道逐渐失活，兴奋性降低或者丧失，严重时，可导致心肌停搏于舒张状态。此时，仅由Ca2＋的内流来构成动作电位，故上升支小而缓慢，使兴奋传导速度减慢，传导性降低。当细胞外K＋的浓度升高时，细胞膜对钾的通透性增高，心室肌细胞复极过程加速，平台期缩短，不应期也缩短。高钾对心肌收缩功能有抑制作用。因为细胞外的K＋和Ca2＋在细胞膜上有竞争性抑制；因此当膜外K＋的浓度升高时，平台期内流的Ca2＋减少，心肌细胞内的Ca2＋浓度难于升高，减小了Ca2＋的兴奋－收缩偶联作用，从而减弱了心肌收缩能力。

4.Ca2+对心脏节律的影响。

细胞外Ca2＋在心肌细胞膜上对Na＋的内流有竞争性抑制作用，称为膜屏障作用。因此，细胞外Ca2＋浓度发生变化时，与Ca2＋内流和Na＋内流相关的生物电活动都将受到影响，而对静息电位则无明显作用。

当细胞外Ca2＋的浓度升高时，对Na＋的屏障作用加大，由于这种抑制作用，触发Na＋快速内流产生0期去极化就比较困难，即出现阈电位上移，从而与静息电位的差距加大，兴奋性降低；发生兴奋后，Na＋内流的抑制则导致0期去极化速度和幅度下降，传导性下降。

Ca2＋内流是慢反应细胞0期去极化和快反应细胞动作电位2期复极的主要离子活动。细胞外的高钙促使Ca2＋内流加快，慢反应细胞0期去极化加快加强，结果是其传导性增高。快反应细胞动作电位平台期将因Ca2＋的内流加速而缩短、复极加速、不应期和动作电位时程均缩短。

细胞膜Ca2＋对通透性升高，心室肌细胞平台期Ca2＋内流增加，心肌收缩力增强增快；当细胞外的Ca2＋浓度多高时，心脏就会停搏于收缩状态，称为钙僵直。

5.肾上腺素对心脏节律的影响。

肾上腺素是一种儿茶酚胺，能激活心肌蛋白细胞膜上的β受体，cAMP生成增加，从而增加心肌细胞膜对Na+和Ca2+ 的通透性，降低膜对K+的通透性，从而促进钙通道开放，加速钙内流；并促进肌浆网钙池释放储存的Ca2+；还能促进ATP放能，增加心肌的收缩能力。

6.乙酰胆碱对心脏节律的影响。

乙酰胆碱与心肌细胞膜上的M受体结合使心肌细胞膜K通道的通透性增强，促使

K外流，最大复极电位水平升高，自律性降低。同时，当乙酰胆碱与心肌细胞膜上的M型的胆碱能受体结合，可使腺苷酸环化酶抑制，细胞内的cAMP浓度降低，肌浆网释放Ca2＋减少，心肌的收缩力量减弱。也可以能使传导速度减慢，心率降低。并且乙酰胆碱可直接抑制Ca2+通道使Ca2+内流减弱，心肌收缩能力降低。

七、注意事项

1、在将电刺激施加于心脏之前，先刺激蛙腹部肌肉以检查电刺激是否有效。

2、制备标本的过程中，注意保持标本的活性；蛙心夹夹在心尖部，夹持1mm厚左右的心肌。

3、刺激输出线、信号引导线的正确连接；

4、心肌与张力换能器的连接要松紧要适度，太松信号传递不灵敏，太紧则容易损坏换能器；

5、心脏每刺激兴奋一次，要等正常搏动2~3次以后再继续刺激使之兴奋，且要用任氏液保持心脏湿润

6、注意加入刺激试剂的顺序，将乙酰胆碱加在最后，保证心脏的活性。

7、实验过程中，套管在加入药物之前，要保持套管中留有少量任氏液状态，不能过多。

8、当每种化学药物作用已明显时，应立即将蛙心插管内液体吸出而换上任氏液数次，以免心肌受损。