3. 静脉注射乳酸对循环、呼吸及泌尿的影响
实验中静脉注射乳酸后血压、呼吸及尿量与对照组相比均无明显差异（P>0.05）。静脉注乳酸后，理论上可使呼吸运动加深加快。因为乳酸改变了血液PH，提高了血中H+浓度。H+是化学感受器的有效刺激物H+可通过刺激外周化学感受器来调节呼吸运动，也可直接刺激中枢化学感受器，但因血中H+不容易透过血脑屏障直接作用于中枢化学感受器，因此，血中H+对中枢化学感受器的直接刺激作用不大，也较缓慢。但本次实验注射乳酸对循环、呼吸及泌尿的影响并不明显。注射乳酸时，可见家兔有强烈的抽搐，故可认为乳酸发挥效果较快，测量指标时应及时迅速。本次实验过程中可能并未掌控好测量时间，使各项指标均已接近正常后方进行测定，最终导致各项指标测量值变化不明显。
4.夹闭右颈总动脉对循环、呼吸及泌尿的影响
实验中夹闭右颈总动脉血后血压与对照组相比显著升高（P<0.01），呼吸、尿量与对照组相比差异不明显（P>0.05）。那是因为当夹闭右颈总动脉时，心室射出的血液不能流经该侧颈动脉窦，使窦内压力降低，压力感受器受到刺激减弱，经窦神经上传中枢的冲动减少，降压反射活动减弱，因而心率加快、心缩力加强、回心血量增加、心输出量增加，阻力血管收缩，外周阻力增加。导致动脉血压升高。
5. 刺激减压神经对循环、呼吸及泌尿的影响
实验中刺激减压神经后平均动脉血压明显下降（P<0.05），呼吸、尿量与对照组相比差异不明显（P>0.05）。这是因为减压神经是单纯的传入神经，具有稳定动脉血压的作用。当动脉血压升高或降低时，压力感受器的传入冲动也随之增多或减少，使减压反射相应地增加或减弱，以保持动脉血压相对稳定。当电刺激减压神经时，减压神经传入冲动增多，使心迷走中枢兴奋、心交感中枢抑制、缩血管中枢抑制，使迷走神经传出冲动增加，交感神经传出冲动减少，而至心率减慢、心缩力减弱、小静脉舒张回心血量减少，心输出量减少，小动脉舒张，外周阻力降低，最终导致血压下降。
6. 刺激迷走神经对循环、呼吸及泌尿的影响
实验中刺激迷走神经后平均动脉血压明显下降（P<0.05），呼吸、尿量与对照组相比差异不明显（P>0.05）。迷走神经含有感觉、运动和副交感神经纤维。这些纤维末梢释放的递质是乙酰胆碱(ACh)，ACh与心肌细胞膜上的M胆碱受体结合，可导致心率减慢，心房肌收缩力减弱，心房肌不应期缩短，房室传导速度减慢，甚至出现房室传导阻滞，即负性变时、变力和变传导效应。一般说，右侧迷走神经以支配窦房结为主，而左侧迷走神经则主要支配房室传导系统。在实验中，刺激外右侧迷走神经，其末梢释放的ACh，一方面使窦房结细胞在复极过程中K+外流增加，结果使最大复极电位绝对值增大；另一方面，使自动去极速度减慢。这两种因素均使窦房结自律性降低，心率因而减慢，血压降低。刺激强度加大时，甚至可出现窦性停搏，使血压迅速下降的情况。
7. 注射NE对循环、呼吸及泌尿的影响
实验中注射NE后血压、呼吸及尿量与对照组相比均无明显差异（P>0.05）。理论上去甲肾上腺素对α受体具有强大激动作用，对心脏β1受体作用较弱，对β2受体无作用。首先，它可以激动血管的α1受体，使血管收缩。皮肤粘膜血管收缩最明显，其次是肾脏血管。此外，脑、肝、肠系膜，甚至骨骼肌的血管也都呈收缩反应，从而增大外周血管阻力，使舒张压增大。另外，它可以激动心脏的β1受体，使心肌收缩性加强，心率加快，传导加速，心排出量增加，导致收缩压增大。实验中未出现此现象可能与测量方法误差较大有关。
8.注射ACh对循环、呼吸及泌尿的影响
实验中注射ACh后血压、呼吸及尿量与对照组相比均无明显差异（P>0.05）。理论上乙酰胆碱主要与心脏的M受体结合，产生负性变时，变力，变传导作用，使心输出量明显减少，故血压下降，继而使肾小球毛细血管血压降低，有效滤过压降低，肾小球滤过率减小，尿的生成减少，尿量减少。实验中未出现此现象可能与测量方法误差较大有关。
9.注射呋塞米对循环、呼吸及泌尿的影响
注射呋塞米后尿量与对照组相比明显增多（P<0.05），血压、呼吸与对照组相比无明显差异（P>0.05）。呋塞米是高效利尿药，主要作用于肾脏的髓袢升支粗段，特异性抑制分布在髓袢升支管腔膜侧的Na-K-2Cl转运子，因而抑制NaCl的重吸收，降低肾的稀释与浓缩功能，排出大量接近于等渗的尿液。
2.实验中夹闭兔一侧颈总动脉，动物的血液心率有何变化？为什么？
答：血压升高，心率加快。
因为夹闭颈总动脉使血流阻断，对颈动脉窦压力感受器的刺激消失，由窦神经传入的冲动减小，对心血管交感神经中枢的抑制作用和对心迷走神经中枢的兴奋作用减弱，因此，心交感和交感缩血管神经紧张加强，心迷走神经紧张减弱，从而心率加快，心肌收缩增大，心输出量增加，同时，血管收缩外周阻力增大，血压升高。
3.给动物静脉注射去甲肾上腺素后，动物血压、心率有何变化，为什么？
答：血压升高，心率减慢。
去甲肾上腺素与血管平滑肌细胞膜上的α受体结合，产生强烈的缩血管作用，使血压升高，血压升高对颈动脉窦和主动脉弓的压力感受器的刺激增大，由主动脉神经和窦神经传入的冲动增多，对血管交感神经抑制作用和心迷走中枢的抑制作用加强，因此心交感和交感缩血管神经紧张减弱，心迷走神经紧张加强，从而心率减慢，心肌收缩减慢，心输出量减少，同时血管收缩外周阻力减小，血压减小。
5.在动物实验中切断夹住双侧迷走神经对呼吸有何影响？
答：夹住双侧迷走神经时，呼吸加深减慢，
是由于失去了牵张反射对吸气的抑制，牵张反射的感受器位于气管到细支气管的平滑肌中，吸气时，肺肺扩张牵拉呼吸道，使感受器兴奋，冲动沿迷走神经传入纤维到达延髓，使呼吸切断机制兴奋，切断吸气，转为呼气，这样使呼吸保持一定的深度和频率，所以，当切断迷走神经后，动物出现吸气吸气延长、加深，变为深而慢的呼吸。
9.家兔耳缘静脉大量输入生理盐水后尿量的变化及相关机理
答：大量输入生理盐水尿量增多。
大量输入生理盐水后使家兔血浆胶体渗透压下降，使肾小球滤过作用的有效滤过压增大，肾小球滤过率增大；再者大量输入生理盐水使循环血量增加，肾小球滤过率也增大。同时循环血量增加抑制下丘脑视上核和室旁核抗利尿激素的分泌，使远曲小管与集合管对水的重吸收减少，因而尿量增多
8.家兔耳缘静脉大量注入高渗葡萄糖或20%甘露醇后尿量的变化及相关机理
答：大量静脉注入高渗葡萄糖或20%的甘露醇后尿量增多。
大量静脉注入高渗葡萄糖后，家兔血糖浓度升高，当血糖浓度超过肾糖阈时，肾小球滤过后，肾小管不能完全重吸收，使肾小管溶质浓度增高，对抗水的重吸收，因此，尿量增多；
大量输入20%的甘露醇后，肾小球可滤过，但肾小管不能重吸收，使肾小管溶质浓度升高，水的重吸收减小，尿量也增多
、思考题
1. 刺激家兔心迷走神经外周端引起血压变化的机理是什么？
答：刺激迷走神经外周端使心迷走神经传出冲动增多，迷走神经末梢释放乙酰胆碱增多,提高细胞膜对钾离子的通透性并降低细胞膜对钙离子的通透性，乙酰胆碱与心脏M受体结合导致了心率减慢，房室传导速度减慢及心房肌收缩力减弱，导致了心输出量减少，最终导致了血压降低。
2. 静脉注射肾上腺素，血压常出现先升高，后降低，然后逐步恢复,其原因如何? 答：静脉注射肾上腺素，血压先升高后降低然后逐渐恢复。这是因为静脉注射肾上腺素后，开始浓度较高，对心脏和a受体占优势的血管发生作用，使心跳加快心肌收缩力加强，心输出量增多，皮肤、肾和胃肠等内脏血管收缩，外周阻力增大，所以血压升高。随着血中肾上腺素的代谢，其浓度逐渐降低，对a受体占优势的血管作用减弱，而对B受体占优势的骨骼肌、肝脏、冠脉血管发生作用，使之扩张，同时由于压力感受性反射，引起血压下降，心缩力减弱，最后逐渐恢复正常。
3. 静脉注射乙酰胆碱引起血压下降,其机理是什么?
答：静脉注射乙酰胆碱，引起血压下降。因为乙酰胆碱作用于心脏的M受体，引起心率减慢至停搏，心肌收缩力减弱，房室传导减慢甚至阻滞，心输出量明显减少，血压下降。其次，乙酰胆碱还作用于血管内皮的M受体，使血管内皮细胞释放“松弛因子”，引起血管平滑肌舒张，外周阻力下降，这也血压下降的机制之一。最后，ACH激活交感神经的突触前M-R，产生突触前调制效应，导致交感神经末梢释放去甲肾上腺素减少，从而减少交感缩血管紧张效应。这不但可降低外周阻力，减少心输出量，还可扩张容量血管而减少循环血量。因而血压下降。
4. 刺激家兔完整的减压神经或其中枢端均可引起血压下降,而刺激该神经外周端血压基本不变，为什么？
答：家兔减压神经是传入神经，其作用是将主动脉弓感受器发出的冲动传入延髓心血管中枢，反射性引起血压降低。因此，刺激完整的减压神经或其中枢端，使传入中枢的冲动增加，致血压明显下降，而刺激其外周端虽有冲动传向外周，但不会引起血压变化。
5、切断一侧迷走神经，呼吸加深变慢，一段时间后恢复正常。
肺扩张牵拉呼吸道，使呼吸道扩张，刺激牵张感受器，通过迷走神经传到延髓呼吸中枢，使得吸气中断转化为呼气。切断一侧迷走神经以后，吸气不能及时转换为呼气会出现呼吸变深变慢，但由于另一侧迷走神经的代偿作用，又恢复正常节律了。
6、切断双侧迷走神经，呼吸变得深而慢。
肺扩张牵拉呼吸道，使呼吸道扩张，刺激牵张感受器，通过迷走神经传到延髓呼吸中枢，使得吸气中断转化为呼气。因为切断两侧迷走神经后，吸气过程延长，吸气加深，仅偶尔为短暂的呼气所中断，出现长吸式呼吸。
1、 静脉注射生理盐水
血液被稀释，血浆胶体渗透压下降，肾小球有效滤过压增加，肾小球率过滤增加，尿量增加。血容量升高，对刺激心肺感受器额刺激增强，通过迷走神经传入下丘脑的信号增多，对ADH释放的抑制作用增加，血管升压素释放减少，肾小管和集合管对水的重吸收减少，尿量增加。
2、 静脉注射速尿（呋塞米）
速尿可以抑制髄袢升支粗段na-k-2cl同向转运体，降低肾髓质小管周围的渗透压梯度，水冲吸收减少，尿量增加。
3、 去甲肾上腺素
NE作用于肾脏血管平滑肌的α受体，引起肾血管而减少血流量，肾小球毛细血管血压下降，肾小球率过滤增加下降，尿量减少。 NE作用于β受体，使近球小体释放肾素，引起血液中的血管紧张素2和醛固酮浓度升高，冲吸收na和水，尿量减少。 NE还可以直接作用于近端小管促进对Na、K、水的重吸收，减少尿量。
4、 注射葡萄糖
血糖升高，肾小球滤过的葡萄糖超过了近端小管对糖的最大转运率，造成小管液渗透压浓度升高，阻碍了对水和NaCl的重吸收，使得尿量增加。
5、 垂体后叶素
与远端小管和集合管上皮细胞的V2型受体结合，通过Gs蛋白-AC途径，使得细胞内环磷酸腺苷的浓度水平升高,PKA活性增大，使得含水孔蛋白的小泡嵌在上皮细胞的官腔膜上，形成水通道，增加了管腔膜对水的重吸收。
6、 刺激迷走神经外周部
（迷走神经末梢释放Ach,作用于心肌细胞上的M受体，通过Gi蛋白-AC途径，使细胞内环磷酸腺甘水平下降，PKA活性降低，导致负性变时、变传导、变力作用，即心率减慢，心输出量减少，血压下降。）
血压下降，使得肾小球毛细血管血压下降，肾小球率过滤降低，尿量减少。
第二篇：生理学实验讲义
一、生理学实习的目的
生理学实习是通过参加生理学实验课的方式而进行的。生理学实习的目的（即实验课的目的）主要是培养学生独立操作（即动手）的技能，能主发现问题、分析问题和解决问题的能力。同时培养学生实事求是，严谨、科学的态度和作风。通过生理学实习，也起到了验证、复习和巩固，以及加深理解大课理论知识的作用，使学习懂得生理学知识来源于生理科学实验，即生理学作为一门实验科学的重要意义：并为后继课程的实习打下良好的实践基础。
二、生理学实习的任务
①学习并掌握常用实验标本的制做技术；②熟悉常用普通生理仪器的使用方法及注意事项；③熟悉实验操作的步骤、方法和项目，并按要求做出完整的实验结果；④按要求完成书面实验报告。三、生理学实习的要求
1. 实验课前 认真预实实验指导，了解本次实验的目的、要求、操作步骤及方法。复习有关理论内容，理解实验原理，预测各项实验可能得出的结果。
2. 实验课中
（1）按时上课，衣帽整齐。
（2）按要求领取并清点本组实验器材、药品及动物。
（3）按每组3—4人进行分工，共同完成本次实验。
（4）按照实验指导的程序及方法要求，认真操作、仔细观察，随时并准确记录。对发现的问题，即时分析，即时解决。
（5）爱护实验仪器及动物、严格按仪器操作规程的要求使用仪器，不得进行与实验无关的活动。
3. 实验课后 妥善整理实验结果（包括文字记录），书写实验报告，按时送交老师评阅。清洗擦干所用实验器材。按要求交还部分器材。剩余仪器、物品必须按原样摆放整齐。动物尸体及其它废品应放置到指定地点。关好水电门窗，按时离开实验室。
实验报告书写的项目和内容要求
实验报告书写的内容要求
（1）实验题目
（2）一般项目：包括班级、姓名、同组者、日期（室温）
（3）实验原理及目的
（4）实验对象（或标本）
（5）实验结果（实验曲线、数据、表格及注释）
（6）结果讨论 描述结果、分析结果；或描述并分析结果。
（7）结论 应分条列出，力求概括、简明。
实验一 生理学实习及常用仪器介绍
兴奋与兴奋性的观察及分析
目的要求：
通过生理学实验及常用仪器介绍、了解生理学实验的基本任务、内容和方法，理解生理学既是一门理论科学、又是一门实验科学的重要意义。要求严格遵守实验课的程序、规则以及每个实验的具体操作方法和要求。初步熟悉和掌握常用实验仪器的使用方法和注意事项。
通过对组织兴奋和兴奋性的实验观察，加深对兴奋与兴奋性概念的理解。要求学会观察神经—肌肉标本的兴奋与兴奋性，会分析兴奋与兴奋性的区别及相关联系。
实验对象 蟾蜍或蛙
材料与方法
1. 材料 电刺激器、电动记纹鼓、肌动器（或标本台）、电磁标，（或二道生理记录仪、配用机械一电换能器），常用蛙类手术器械（包括粗剪刀、手术剪、镊子、杀蛙针、滴管、丝线、泡钉、10×5cm小玻璃片、锌——铜弓等）、铁支架、双凹夹、大盘子、培养皿、蛙板（木质）、任氐液。
2. 方法
（1）按要求制备蟾蜍或蛙坐骨神经——腓肠肌标本
操作顺序为：洗蛙、杀蛙、去头、胸腹内脏、剥皮（洗手及剪刀和杀蛙针），去尾骨，分离椎板及两腿，游离坐骨神经及腓肠肌，离断股骨及小腿，完成坐骨神经——腓肠肌标本
1．左手握蛙躯干及肢体，右手持探针沿枕骨大孔插入．破坏脑和脊髓。
2．在荐尾关节(荐骨与尾骨连接)水平上(前)1cm处用粗剪刀剪断脊柱．将前半躯干，皮肤和内脏一井拉剥弃之．仅保留一段腰背部脊柱及两后肢，並将其放入盛有任氏液的培养皿内．
3，洗净手和所用过的用具，以防沾污标本。
4．用镊子取出标本，放在蛙板上，用解剖剪沿脊柱正中线至耻骨联合中央将标本分为两半，再将左右两大腿放入干净任氏液中备用．
5。任取一条蛙腿首先腹面向上置于蛙板上，用玻璃分针游离坐骨神经腹腔段，然后换至背侧向上，用大头针固定标本两端，持玻璃分针沿坐骨神经沟(股二头肌及半瞙肌肌间沟)小心分离坐骨神经大腿段，用眼科剪剪去神经干上各细小分支（切忌拉扯）用解剖剪将坐骨神经中枢端连带一小块椎骨剪下．游离坐骨神经至膝关节处。
6．剪去大腿和膝关节周围的肌肉，用剪刀刮净股骨上的肌肉，保留膝关节端股骨长约lcm．剪去其余部分。
7．用棉线结扎小腿背侧的腓肠肌肌腱并在结扎处的后端剪断，游离腓肠肌至膝关节处，将膝关节以下部分全部剪去，至此所保留的即为制备完好的坐骨神经腓肠肌标本。（一般在30分钟内完成）。将制备完好的标本置于任氐液中数分钟．以稳定其兴奋性，
（2）连接及检查仪器线路，将仪器各旋钮的位置置于零位。固定标本于标本台，准备实验。
（3）用适当的刺激参数，分别刺激标本的神经部分和肌肉，观察和记录肌肉的收缩曲线。
结果：
（为所描记到的肌肉收缩曲线）
注：①、②刺激标本的神经部分 ③、④直接刺激肌肉
刺激强度： 刺激时间（波宽）：
实验二 骨骼肌的单收缩、复合收缩与强直收缩
目的要求：
通过实验，观察刺激频率与肌肉收缩形式的关系，加深理解骨骼肌完全强直收缩的形成机制与功能意义。要求每人作出一套完整实验曲线，写出实验报告。
实验对象 蟾蜍或蛙
材料与方法
1. 材料：同实验一
2. 方法
（1）按实验的步骤方法制备蛙坐骨神经——腓肠肌标本。
（2）连接及检查仪器线路，将仪器各施钮置于零位，固定标本于标本台，准备实验。
（3）寻找引起肌肉发生最大收缩的最小刺激强度（即最适刺激），分别作出单收缩、舒张期与收缩期复合收缩、不完全与完全强直收缩曲线。
结果
（为所描记到的肌肉收缩曲线）
上线：肌肉收缩曲线
下线：刺激标记。刺激参数：波宽 电压（电流）
附实验报告要求
（1）实验原理及目的
（2）实验对象
（3）实验结果 应为所描记到的原始实验曲线，并标注。
（4）结果讨论 根据实验操作及所记录到的结果（曲线），详细描述实验结果，并进行适当分析。
（5）结论 得出2至3条结论。
实验三 神经干动作电位的观察及
神经干兴奋传导速度测定
目的要求
通过实验学习用示波器观察神经干动作电位和神经兴奋传导速度的测量方法；会分析从刺激到动作电位波形表现的发生机理；能区分神经干动作电位与单根据神经纤维动作电位在特征上的不同；加深对动作电位概念、特征和生理意义的理解。要求观察到神经干双相和单相动作电位，以及Aα和Aβ两种神经纤维的动作电位；测量并计算出神经兴奋传导的速度。写出实验报告。
实验对象 蟾蜍或蛙
材料与方法
1. 材料：二线或多道示波器，电子刺激器，刺激隔离器，标本屏蔽盒，测量尺，常规蛙类手术器材（见实验一）
2. 方法
（1）按常规方法从洗蛙到游离坐骨神经——腓神经、制备出坐骨神经——腓神经干标本，置于任氐液中备用。
（2）连接并检查仪器线路，打开示波器电源，调整扫描线的各种参数于适宜档位，将神经干放置于屏蔽盒的刺激及记录电极上（一般将神经干的中枢端放置在刺激电极上），准备实验。
（3）给适当强度及频率的刺激，记出神经干双相动作电位，待调整使其波形显示稳定及清晰后，测量出传导距离（S1）和潜伏期（t1）；移动记录电极的位置，再测出S2及t2。
结果
（1）神经干双相和单相动作电位（将所观察到的神经干动作电位波形照样描绘出来）。
注：①刺激伪迹 ②双相动作电位 ③单相动作电位
示波器y轴放大倍数：my/cm X轴扫描速度ms/cm
附实验报告要求
（1）实验原理及目的
（2）实验对象
（3）实验结果 如上所示（包括结果注释）
（4）结果讨论：
描述并分析动作电位的潜伏期和神经兴奋的表现
实验4 血红蛋白含量的测定。
测定血红蛋白最常用最简单的方法是比色法。血红蛋白的颜色随着与氧结合量的多少而变化，影响比色．但稀盐酸可使血红蛋白转变为稳定的、棕色的高铁血红蛋白．而且颜色与血红蛋白(或高铁血红蛋白)的浓度成正比，与标准色对比，即可得出血红蛋白的含量：每升血液血液中含血红蛋白克数。
实验对象和用品
血红蛋白计，刺血针。酒精棉球、蒸馏水、o．1ml／I盐酸、95％乙醇，乙醚、1％氨水．
试验方法和步骤
1。在比色管中加0.1mol盐酸至“10”刻度处。
2．耳垂或指端采血。拭去第一滴血．待第二滴血自然流出后．用血红蛋白吸管吸血至“20”刻度处，并拭去吸管尖端粘附的血液。
3．将吸管插入比色管内盐酸中．置血液于管底．再吸上层清液2－3 次。洗净吸管中残存血液。用细玻棒轻轻搅动比色管内的血液．使之与盐酸混匀，
4．置比色管于比色架中，室温放置10min．使血红蛋白转变为高铁血红蛋白。再滴加蒸馏水于比色管中。边加边搅拌．直至与标准色相同。读取比色管内液凹面的最低处刻度值乘10，即为每升血液中血红蛋白的克数。
注意事項：
1．吸取血液要准确，不得有气泡．
2．轻轻用玻棒搅动，以免损坏比色管．
3．比色时，应将玻棒拿出．
4．立即冲洗比色管．吸管的洗涤按此步骤：蒸馏水(3次)--95 乙醇(1—2次)一乙醚(1－2次)．
讨论題
试述影响血红蛋白含量的主要因素．
实验5 红细胞和白细胞计数
用特制的血红蛋白吸管或红细胞吸管和白细胞吸管准确吸取一定量的血液，用适当的溶液稀释后，于血细胞计数板计数室内计数—定容积的血液稀释液中血细胞个数，再将所得结果换算为每升血液中的血细胞个数。
实验对象和用品
人，血细胞计数板、红细胞吸管和白细胞吸管<或血红蛋白吸管、1ml和5ml移液管，小试管)、显微镜、刺血针、消毒棉球、干棉球、小吸管、白细胞稀释液、生理盐水、75酒精、95酒精、乙醚，1％氨水．
实验方法和步骤
1． 采血及稀释有两种方法
方法1，用5ml移液管吸取生理盐水3.98ml加入小试管内，加塞备用：用1ml移液管吸取白细胞稀释液o.38 m1，加入另一小试管内，加塞备用，用酒精棉球消毒耳垂或指尖皮肤，待酒精挥发后，用刺血针刺破皮肤，待血液自然流出，擦去第一滴血。然后用血红蛋白吸管两次分别吸取血液至20ul处，再分别伸入两支小试管的底部，吹出血液，并吸取上清液冲洗吸管内壁的血液．分别振动小试管，使血液和稀释液混匀。白细胞被稀释20倍，红细胞被稀释200倍． 将血红蛋白吸管立即按蒸馏水1—2次一95％酒精1—2次一乙醚1—2次顺序洗涤。如果吸管被血凝块堵住，则用1％氨水浸泡．
方法2：用红细胞吸管吸取血液至球部前端中部“o．5”刻度处，再吸取生理盐水至球部后端“101”刻度处。用拇指和中指堵住吸管两端．沿水平方向摇动2min，使红细胞与稀释液混匀后，先松开橡皮管端，再放开吸管尖端。此时红细胞被稀释200倍．用白细胞吸管吸取血液至球部前端中部“o.5”刻度处，再吸取白细胞稀释液至球部后“11”刻度处．同上法振摇，此时白细胞被稀释20倍． 红细胞吸管的球部有一红色玻璃珠；白细胞吸管的球部有一白色玻璃珠．用毕后其洗涤同血红蛋白吸管。
2．血细胞计数板的结构：计数板中央横沟的两边各有一计数室．结构完全相同。计数室如图，每一计数室用双线和粗单线划分为。9个大方格。每个大方格边长lmm。四角的每个大方格分为1 6个中方格。这四个大方格用来计数白细胞。中央的大方格用来计数红细胞，它又划分为25个中方格，各中方格边线为双线．边长为o．2mm，每—中方格又划分为16个小方格．盖上大盖玻片时，计数室与盖玻片之间的距离为o．1mm，此为计数室 的高度．
3．装片．用镜头纸或软绸布擦净计数室和盖玻片。并于低倍镜下检查。将盖玻片由计数板正中的一侧推向另一侧，使两者紧密接触。振荡稀释液后．将红细胞和白细胞吸管 球部前端的溶液分别弃去不用，仅用球部溶液装片取红细胞稀释液一小滴滴在一侧的盖玻片边缘与计数板之间，溶液呈毛细管现象自动流入一个计数室内，同法将白细胞稀释液装入另一个计数室内。溶液不可滴入过多，以免盖玻片浮起，造成体积误差，也不能太少而不能充满计数室。
4．计数：将计数板置于显微镜载物台上静置3－5min，细胞不再浮动后开始计数；计数在低倍镜下进行。计数红细胞时，数中央大方格中四角的中方格相中央的小方格的红细胞；计数白细胞时，数四角的四个大方格的白细胞。计数视野的移动路线如图所示，如果细胞压边线．则数上不数下，数左不数右。如果各中方格内红细胞数相差20个以上·各大格的白细胞相差个以上，则说明细胞分布不匀，需震荡稀释液，重新装片。
5．计算：
红细胞数（个／L）＝5个中方格红细胞总数＊1010
白细胞数（个／L）＝4个大方格白细胞总数＊5*107
6.计数完毕立即用清水洗涤计数板和盖玻片.
注意事项
1．采血时操作要迅速，以免血液凝固．
2．吸取血液时，不能使吸管中有气泡，采样及稀释体积一定要精确．
3.计数时，显微镜应放稳，载物台应置水平位，不得倾斜．
4.吸管、计数板及盖玻片使用后，必须立即洗涤干净，并晾干．
讨论题
1．稀释液装入计数扳后，为什么要静止一段时间再开始计数?立即计数对准确性有什么影响?
2．显微镜载物台为什么应置水平位，而不能倾斜?
3．分析影响计数准确性的可能因素．
实验六 期前收缩与代偿间歇
目的要求
通过对蛙心脏施加额外电刺激的方法，观察和理解期前收缩与代偿间歇的产生，证明心肌兴奋性变化的特点。要求每人做出一套完整结果曲线，写出实验报告。
实验对象 蟾蜍或蛙
材料与方法
1. 材料：二道生理记录仪（或电动记纹鼓，配用肌动器，描述杠杆，电磁标），机械—电换能器，电刺激器，蛙类手术器械一套，杀蛙针，泡钉，蛙心增夹，蛙板，铁支架，双凹夹，任氐液。
2. 方法1，心脏插管：双毁髓，暴露心脏。在左主动脉干下穿线，打活结。 用眼科剪在左主动脉干上向心剪—斜口，让心脏里的血尽可能流出，并用任氏液将流出的血冲洗干净．将蛀心插管盛一定量任氏液，用食指堵住管口．将插管插入土动脉球．然后稍退出．再将插管沿动脉球后壁向心室中央方向插入，经主动脉瓣进入心室腔内，当插管内的液面随心搏上下波动时，说明插管已进入心室腔内。扎紧预先打好的活结．井固定到玻璃小勾上。继续用任氏液在插管内冲洗，直到无血液为止．
2．摘出心脏：结扎右主动脉干，再小心提起插管和心脏，在心脏下方绕一线．结扎左右肺静脉，前后腔静脉，在结扎处的下方剪断，摘出心脏。
3．固定蛙心插管于支架上，用蛙心夹在心脏舒张期夹住心尖部，悬垂描记蛙心脏搏动曲线。用较强的单一电脉冲在心脏收缩的早或中期、晚期或舒张早期、以及舒张早期以后给刺激，观察和记录蛙心跳曲线及其变化。
结果
（为所记录到的心搏曲线）
附实验报告要求：
（1）实验原理及目的
（2）实验对象
（3）实验结果（如上为所记录到的心搏曲线图形，实验者必须在结果位置贴上原始曲线，并进行适当标注）
（4）结果讨论：描述并分析结果
（5）结论：根据结果及其分析，得出1至2条结论。
实验七 蛙心灌流
目的要求
通过实验学习制备离体蛙心并进行灌流实验的方法，观察和理论某些体液因素对心脏活动的影响。要求每组至少做出一套完整的实验结果曲线，个人写出实验报告。
实验对象 蟾蜍或蛙
材料与方法
1. 材料：生理记录仪，机械—电换能器，，铁支架，双凹夹，试管夹，蛙心夹，蛙类手术器械，蛙心插管，杀蛙针，丝线，泡钉，滴管，蛙板，培养皿，大瓷盘，任氐液，0.65NaCl，3%CaCl2，1%KCl，0.5%盐酸，2.5%NaHCO3，0.1mg/ml去甲肾上腺素，0.01mg/ml乙酰胆硷。0.1mg/ml心得安，0.5mg/ml阿托品。
2. 方法：操作顺序
1，心脏插管：双毁髓，暴露心脏。在左主动脉干下穿线，打活结。 用眼科剪在左主动脉干上向心剪—斜口，让心脏里的血尽可能流出，并用任氏液将流出的血冲洗干净．将蛀心插管盛一定量任氏液，用食指堵住管口．将插管插入土动脉球．然后稍退出．再将插管沿动脉球后壁向心室中央方向插入，经主动脉瓣进入心室腔内，当插管内的液面随心搏上下波动时，说明插管已进入心室腔内。扎紧预先打好的活结．井固定到玻璃小勾上。继续用任氏液在插管内冲洗，直到无血液为止．
2．摘出心脏：结扎右主动脉干，再小心提起插管和心脏，在心脏下方绕一线．结扎左右肺静脉，前后腔静脉，在结扎处的下方剪断，摘出心脏。
3．固定蛙心插管于支架上，用蛙心夹夹住心尖。通过传动系统，用生理仪记录。
4，在蛙心插管的下1／3处作记号，每次更换任氏液的液面与此标记相平。
5，观察项目：每个项目前、后都应用室温，新鲜的任氏液进行对照记录，
(1)描记正常心搏曲线，包括观察频率．心室收缩强弱与舒张程度
(2)温度影响：吸出插管内任氏液，换入4 度任氏液，在曲线上作换液标记，观察曲线变化。当效应明显后，立即换入室温任氏液． 曲线恢复正常后，同上法换入40度任氏液．观察变化。效应明显后，换入室温任氏液，
{3)离子的影响：
注：在每项实验的前后，均为灌流任氐液时的对照曲线
①灌入0.65%NaCl时的心跳曲线 ②在任氐液中加入3%CaCl21-2滴
③在任氐液中加入1%KCl1-2滴 ④在任氐液中加入0.1mg/ml去甲肾上腺素1-2滴
⑤在任氐液中加入阿托品0.5mg/ml1滴 ⑥在任氐液中加入0.5%盐酸1滴
⑦在任氐液中加入2.5%NaHCO22滴
注意事项
1，心肌插管时。勿戳穿心壁；摘出心脏时、勿损伤静脉窦，
2，每个观察项目的前，后用新鲜任氏液进行对照记录：
2． 插管的液面必须保持相同的高度。
结果：（为所记录到的心跳曲线）
附实验报告要求
（1）实验原理及目的
（2）实验对象
（3）实验结果 结果注释如上所示，实验者应附上原始结果曲线，无原始结果者，可照本组所做的原始实验曲线进行如实复制，并进行标注。
（4）结果讨论 按实验顺序逐项描述并分析实验结果。如实验所做结果与正常不符，应分析其可能原因。
实验8 离体小肠平滑肌的特性
胃肠平滑肌的兴奋性较低，收缩缓慢、仲展性较大，具有紧张性、自动节律性、对化学、温度和牵拉刺激敏感等生理特性，这些特性是与消化道的生理功能相适应的。利用生理溶液温育离体小肠段，可以观察记录小肠平滑肌的生理特性和理化因素对其生理活动的影响。
实验对象和用品 家兔，麦氏浴槽、烧杯，酒精灯(或平滑肌离体孵育恒温装置)、温度计、氧气袋(或球胆)、肌张力换能器、生理记录仪，铁支架、 氧气(或用打气筒给氧气袋充空气)、棉线、缝针、常用手术器械，培养皿、Tvrode's溶液、肾上腺素(o.1mg／ml)、 乙酰胆碱(0.01mg／ml)，阿托品(o．5mg／ml)，磷酸组织胺(o．1mg／ml)、NaOH(1mol／L)、HCl(1mol／L)、1％BaCl2、1％CaCl2、]％MgCI2。
实验方法和步骤
1．实验装置；按图安装好孵育及记录装置，孵育液的温度保持在37—38，并不断通气．通气速度以连续冒单个气泡，不冲动小肠段为宜．
2．抓住兔的后肢将动物倒悬，猛击后脑，致昏迷后，立即沿腹正中线切开腹部皮肤，沿腹白线剖开腹壁．打开腹腔，取出十二指肠至结肠间的肠段，剪成3-4cm 长的小段，放入4度的Tyrode’s溶液中轻轻漂洗，以除去肠内容物。剪去肠系膜和脂肪组织。换2－3次溶液。
3.用无创伤缝针将肠的两端穿线，结扎半边肠管。一端系于通气钩上，另一端系于杠杆或张力换能器上。肠段完全浸入Tvrode，s溶液中，调节通气量．调节杠杆描记的长短臂之比或记录仪的灵敏度，使描记曲线清晰以便于结果分析。让肠段稳定20min，便可描记其活动曲线。
4，逐渐降低Tyrode’s溶液温度至30'C，观察描记小肠运动的变化．
5．孵育液温度恢复正常(37- 38)．记录5min正常活动曲线后，依次加入下列各药物，观察记录肠段运动的变化。每加一种药物，反应明显后，即从侧管放出孵育液，更换 2- 3次新鲜溶液，肠段恢复正常节律性活动后，记录5min活动曲线．再加入另一种药物
(1)肾上腺素(o．1mg／mL)2滴。
（2）1％MgCl2 2—3滴．
(3)lmol／L HCl 1- 2滴．
(4)1％BaCI，1—2滴。
(5)lmol／L NaOH 1—2滴．
(6)1％CaCl2 2—3滴．
注意事项
1．动物先禁食24L在实验前1h喂食，取出的肠段运动情况轻好。
2．为避免麻醉剂对小肠运动的影响，动物不麻醉，猛击后脑而致昏迷或致死．
3．游离及取出肠段时，动作要快，但要避免过度牵拉或使组织干燥而影响其活性，
讨论题： 根据实验结果，分析各种因素对小肠运动的影响(运动频率、幅度和肠紧张性)．并说明其机制．