放线菌的培养与形态观察

一．实验目的

1．掌握配制合成高氏一号培养基的一般方法。

2．掌握放线菌形态的基本观察方法。

3．了解并掌握放线菌的形态。

二．实验原理

     1．高氏I号培养基

          高氏 I 号培养基是用来培养和观察放线菌形态特征的合成培养基。此合成培养基的主要特点是含有多种化学成分已知的无机盐，这些无机盐可能相互作用而产生沉淀。因此，在混合培养基成分时，一般是按配方的顺序依次溶解各成分，甚至有时还需要将二种或多种成分分别灭菌，使用时再按比例混合。此外，合成培养基有的还要补加微量元素，如Fe元素。

     2．放线菌

       放线菌是指能形成分枝丝状体或菌丝体的一类革兰氏阳性细菌。常见放线菌大多能形成菌丝体，紧贴培养基表面或深入培养基内生长的叫基内菌丝 ( 简称“基丝” ) ，基丝生长到一定阶段还能向空气中生长出气生菌丝 ( 简称“气丝” ) ，并进一步分化产生孢子丝及孢子。有的放线菌只产生基丝而无气丝。

在显微镜下直接观察时，气丝在上层、基丝在下层，气丝色暗，基丝较透明。孢子丝依种类的不同，有直、波曲、各种螺旋形或轮生。在油镜下观察，放线菌的孢子有球形、椭圆、杆状或柱状。能否产生菌丝体及由菌丝体分化产生的各种形态特征是放线菌分类鉴定的重要依据。

     3．插片法观察放线菌

          将放线菌接种在琼脂平板上，扦上灭菌盖玻片后培养，使放线菌菌丝沿着培养基表面与盖玻片的交接处生长而附着在盖玻上。观察时，轻轻取出盖玻片，置于载玻片上直接镜检。这种方法可观察到放线菌自然生长状态下的特征，而且便于观察不同生长期的形态。

三．实验器材

    1．菌种： 青色链霉菌 ( S glaucus ) ，弗氏链霉菌 ( S. fradiae ) 。

2．培养基：高氏 I号培养基（配方见后附）

3．仪器或其他用具：平皿、玻璃纸、盖玻片、玻璃涂棒，以及载玻片，接种环，接种铲，镊子，显微镜,双层瓶，马铃薯，酒精灯。

四．实验步骤

1．配置高氏I号培养基200ml。

1) 按配方先称取可溶性溶粉、放入小烧杯中，并用少量冷水将淀粉尽量溶解，再加 入沸水中，继续加热，使可溶性淀粉完全溶解。

2) 称取其他各成分依次溶解。由于条件限制，对于微量成分FeSO4·7H2O，直接用 分析天平称量，加入即可。

3) 待所有药品完全溶解后，补充水分到所需的总体积，进行pH 调节到7.2～7.4。 4) 材料灭菌：将所配溶液装在三角烧瓶中并加棉塞，棉塞外包一层牛皮纸，并用麻 绳捆好，用记号笔标记组号。取十个培养基，用牛皮纸包好，用记号笔标记大小面。同理盖玻片也用牛皮纸包好，再在盖玻片上加盖一层牛皮纸纸，用牛皮纸包好后，用记号笔标记，镊子也包好一起灭菌。将上述物品放入密封的加压灭菌锅中进行高压蒸汽灭菌121℃、20分钟。

2．倒平板  取融化并冷至大约 50 ℃ 的高氏 I 号琼脂约 20ml 倒平板，凝固待用

3．接种   用接种环无菌操作分别由青色链霉菌（或弗氏链霉菌）菌种斜面培养物挑取适量菌在琼脂平板上划线。

4．插片   以无菌操作用镊子将灭菌的盖玻片以大约45°插入琼脂内，每个琼脂片插两到到三片。

5．培养   将扦片平板倒置，于28℃培养3-5天。

6．镜检   用镊子小心拔出盖玻片，擦去背面培养物，然后将有菌的一面朝上放在载玻片上，直接镜检（用油镜观察）。

五．实验结果记录

1、培养基中菌落形态观察：弗氏链霉菌为圆形，暗黄色，表面略凸 。

2、镜检结果：

弗氏链霉菌孢子丝直或柔曲。孢子椭圆形，长圆形，表面光滑。

3.绘图: 

六．注意事项

1.倒平板要薄一些，接种时划线要密。

2.插片时要有一定角度并与划线垂直。

3.观察时，宜用略暗光线；先用低倍镜找到适当视野，更换高倍镜观察。  

4.如果用0.1%美蓝对培养后的盖玻片进行染色后观察，效果会更好。

七．思考题

1．镜检时如何区分放线菌基内菌丝、气生菌丝及孢子丝？

   答：在显微镜下直接观察时，气丝在上层、基丝在下层，气丝色暗，基丝较透明。孢子丝形态各异，末端有孢子脱落。

附：高氏I号培养基配方

配制时，先用少量冷水，将淀粉调成糊状，倒入煮沸的水中，在火上加热，边搅拌边加入其它成分，溶化后，补足水分至1000ml。

第二篇：实验六 放线菌形态观察

实验六----放线菌的形态观察

山东大学生命科学学院09级四班

张行润

200900140177

摘要

放线菌的菌丝分化为两部分，即长入培养基内的营养菌丝（又称基内菌丝）和生长于培养基表面的气生菌丝（又称繁殖菌丝）。有些放线菌的气生菌丝分化成各种孢子丝，其形状和分支都不同，孢子形状也不相同。这些特征是识别放线菌和分类的重要依据，对于我们研究放线菌具有相当重要的作用。 关键词

放线菌（Actinomycetes） 基内菌丝（Substrate mycelium） 气生菌丝（Aerial mycelium）

前言

? Actinomycetes是一类具有丝状分枝的单细胞,主要以外生孢子的形式繁殖,革兰氏阳性,与细菌同属原核微生物.放线菌菌菌落中的菌丝常从一个中心向四周辐射状呈放射状生长,并因此而得名.放线菌有特殊的土霉味. ? 分布:含水量较低,有机物丰富,呈微碱性的土壤中.估计每克土壤中约含放线菌孢子107个.

? 应用:放线菌对人类最突出的贡献就是它能产生大量的,种类繁多的抗菌素.放线菌还是酶类,维生素的生产菌;有的放线菌有固氮能力;放线菌在自然界物质循环中也起着重要作用,由于它们具有较强的分解复杂有机物的能力,对于土壤肥力的提高也有重要作用.

? 危害:只有极少数放线菌对人类构成危害,某些Actinomyces(放线菌属)菌种引起动物放线菌病(皮肤,脑,肺和足部感染),某些Nocardia(诺卡氏菌属)引起人和动物的诺卡氏菌病;还有少数放线菌能引起植物病害.

一、 实验目的

1. 掌握放线菌形态观察的基本方法

2. 了解放线菌的形态

3. 巩固显微镜操作技术及无菌操作技术

二、 实验原理

插片法

放线菌菌丝体由基内菌丝、气生菌丝和孢子丝组成，制片时不采取涂片法，以免破坏细胞及菌丝体形态。通常采用插片法或玻璃纸法并结合菌丝体的简单染色进行观察。在插片法中，首先将灭菌的盖玻片插入接有放线菌的平板，使放线菌盖玻片和培养基交界处生长而附着在盖玻片上，取出盖玻片可直接在显微镜下观察放线菌在自然生长状态下的形态特征，而且有利于对不同生长时期的放线菌的形态进行观察。

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三、 仪器材料

A. 菌种

青色链霉菌、弗氏链霉菌

B. 仪器和其它用品

酒精灯、载玻片、盖玻片、显微镜、双层瓶（内装香柏油和二甲苯）、擦镜纸、接种针、高氏一号培养平板等

四、 试验方法

a) 倒平板

将配好的高氏一号培养基经灭菌锅灭菌后，经无菌操作倒平板； b) 冷却

放在桌面上冷却，注意勿动；

c) 划线接种

无菌操作分别将青色链霉菌和弗氏链霉菌挑取菌种在到高氏一号培养基平板上密集接种划线，注意划线要密集，一个菌种划三个平板； d) 插片

无菌操作用镊子取灭菌盖玻片以45°角插入平板琼脂接种线上 e) 培养

将平板倒置，于28℃恒温箱种培养5-7d

f) 镜检

用镊子小心取出盖玻片，用纸擦去背面培养物，有菌面朝上放置在载玻片上，通过显微镜直接用低倍镜和高倍镜观察

注意事项

培养放线菌中要注意，放线菌的生长速度较慢，培养期较长，在操作中应特别注意无菌操作，严防杂菌污染。

五、 实验结果及分析

1. 实验结果

2

10×100

10×

100

3

2. 实验分析

放线菌的菌丝分化为两部分，即长入培养基内的营养菌丝（又称基内菌丝）和生长于培养基表面的气生菌丝（又称繁殖菌丝），其中基内菌丝外观透明，而气生菌丝而外观较暗；在我们本次所选择的实验材料（青色链霉菌和弗氏链霉菌）中，青色链霉菌的孢子丝形态为螺旋状，弗氏链霉菌的孢子丝形态则比较直，比较容易区分。

六、 实验小结

通过本次试验，我学会了放线菌形态观察的方法，在实验的过程中不仅掌握了插片法等微生物实验操作技术，而且也了解一些关于放线菌的基本知识，如其菌丝形态、颜色等等，在实验的过程中叶遇到了一些操作上的问题，但我们最终顺利完成了本次实验，相信本次实验的认识和经验将会对以后的微生物学习大有裨益。

参考文献

? 詹火元 生物学通报 19xx年底30卷第2期 p34

? 沈萍，陈向东.微生物学.第二版.北京:高等教育出版社，2006

? 沈萍，陈向东.微生物学实验.第4 版.北京:高等教育出版社，2007

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