实验六 放线菌、霉菌形态观察
一、 实验目的
? 学习并掌握观察放线菌、霉菌形态的基本方法。
? 初步了解放线菌和四类常见霉菌的基本形态特征。
二、基本原理
放线菌（原核微生物）：
由不同长短的纤细的菌丝所形成的单细胞菌丝体。菌丝体分为两部分，即潜入培养基中的营养菌丝（或称基内菌丝）和生长在培养基以上的气生菌丝。有些气生菌丝分化成孢子丝，呈螺旋形、波浪形或分枝状等。孢子常呈圆形、椭圆形或杆状。气生菌丝及孢子的形状和颜色常作为分类的重要依据。
培养和观察方法
扦片法：在放线菌平板上扦上盖玻片后培养，使放线菌菌丝沿着培养基表面与盖玻片的交接处生长而附着在盖玻片上。观察时直接取出盖玻片置于载玻片上镜检。
镜检：用镊子拔出盖玻片，擦去背面培养物，将有菌的一面朝上置于载玻片上，直接镜检。
宜用略暗光线观察，低倍镜—高倍镜；染色后观察效果更好。
玻璃纸法：将玻璃纸覆盖在平板表面，接种放线菌、培养，放线菌在玻璃纸上形成菌苔。观察时取下玻璃纸固定在载玻片上镜检。 镜检：先在载玻片上滴一小滴水，取下玻璃纸，使菌面朝上，使玻璃纸平贴于载玻片上。
优点：可观察到放线菌自然生长状态下的特征，和不同生长期的形态。
注意:整过程勿触动菌面培养物。
印片法：将要观察的放线菌的菌落或菌苔直接印在载玻片上，经染色后观察。
? 用接种铲或解剖刀将平板上的菌苔连同培养基一起切下，菌面朝上。另取一载玻片，微热后，轻轻按压菌苔，固定，染色后镜检。
? 主要用于观察孢子丝的形态，孢子的排列及其形状等，但形态特征可能有所改变。
霉菌（真核微生物）：
霉菌是一类可产生复什分枝的菌丝体的真核微生物的统称。分基内菌丝和气生菌丝，气生菌丝生长到一定阶段分化产生繁殖菌丝，由繁殖菌丝产生孢子。霉菌菌丝和孢子的宽度通常比放线菌粗的多。
培养和观察方法
载玻片法：将培养基薄层置于载玻片上，接种后盖上盖玻片培养，霉菌即在其间的有限空间内沿盖玻片横向生长。观察时直接将载玻片镜检。
玻璃纸法：与放线菌相似。
直接制片观察法：用解剖针挑取少量培养物置于预先滴加乳酸石炭酸棉蓝染色液中，制成霉菌制片镜检。
? 50％乙醇用于洗去孢子；尽可能保持霉菌生长状态；避免产生气泡。
? 特点：细胞不变形；不易干燥，易保存；防止孢子飞散；增强反差。
三、实验器材
1、菌种 放线菌划线平板28℃,7天后培养物，曲霉、根霉、青霉和毛霉划线平板28℃,4天后培养物。
2、仪器 显微镜；
3、其他材料 平皿，载玻片，解剖针，香柏油，二甲苯，擦镜纸，吸水纸，染色缸等。
四、操作步骤
观察放线菌气生菌丝和基内菌丝的区别
取插片一片，直接在显微镜下进行观察，注意分界面两侧菌丝形态的差异
观察黑根霉菌丝情况和子囊孢子情况（着重辨认孢子囊、包囊梗、假根）：
观察毛霉菌丝和分生孢子着生情况：
观察黑曲霉菌丝分隔情况和分生孢子着生情况（着重辨认分生孢子梗、足细胞和分生孢子）：
分生孢子梗顶端膨大成圆形或椭圆形的顶囊，由顶囊向外辐射长出一层或两层小梗，最上层小梗呈瓶状，在其顶端生成成串的分生孢子。
观察青霉菌丝和分生孢子着生情况：
五、实验报告
? 记录所观察到的放线菌基内菌丝和气生菌丝的差别
? 绘图表示曲霉、根霉、青霉和毛霉的形态特征
? 思考题：
（1）镜检时，如何区分放线菌的基内菌丝和气生菌丝？
（2）你注意根据哪些形态特征来区分上述四种霉菌？
第二篇：实验六 放线菌形态观察
实验六----放线菌的形态观察
山东大学生命科学学院09级四班
张行润
200900140177
摘要
放线菌的菌丝分化为两部分，即长入培养基内的营养菌丝（又称基内菌丝）和生长于培养基表面的气生菌丝（又称繁殖菌丝）。有些放线菌的气生菌丝分化成各种孢子丝，其形状和分支都不同，孢子形状也不相同。这些特征是识别放线菌和分类的重要依据，对于我们研究放线菌具有相当重要的作用。 关键词
放线菌（Actinomycetes） 基内菌丝（Substrate mycelium） 气生菌丝（Aerial mycelium）
前言
? Actinomycetes是一类具有丝状分枝的单细胞,主要以外生孢子的形式繁殖,革兰氏阳性,与细菌同属原核微生物.放线菌菌菌落中的菌丝常从一个中心向四周辐射状呈放射状生长,并因此而得名.放线菌有特殊的土霉味. ? 分布:含水量较低,有机物丰富,呈微碱性的土壤中.估计每克土壤中约含放线菌孢子107个.
? 应用:放线菌对人类最突出的贡献就是它能产生大量的,种类繁多的抗菌素.放线菌还是酶类,维生素的生产菌;有的放线菌有固氮能力;放线菌在自然界物质循环中也起着重要作用,由于它们具有较强的分解复杂有机物的能力,对于土壤肥力的提高也有重要作用.
? 危害:只有极少数放线菌对人类构成危害,某些Actinomyces(放线菌属)菌种引起动物放线菌病(皮肤,脑,肺和足部感染),某些Nocardia(诺卡氏菌属)引起人和动物的诺卡氏菌病;还有少数放线菌能引起植物病害.
一、 实验目的
1. 掌握放线菌形态观察的基本方法
2. 了解放线菌的形态
3. 巩固显微镜操作技术及无菌操作技术
二、 实验原理
插片法
放线菌菌丝体由基内菌丝、气生菌丝和孢子丝组成，制片时不采取涂片法，以免破坏细胞及菌丝体形态。通常采用插片法或玻璃纸法并结合菌丝体的简单染色进行观察。在插片法中，首先将灭菌的盖玻片插入接有放线菌的平板，使放线菌盖玻片和培养基交界处生长而附着在盖玻片上，取出盖玻片可直接在显微镜下观察放线菌在自然生长状态下的形态特征，而且有利于对不同生长时期的放线菌的形态进行观察。
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三、 仪器材料
A. 菌种
青色链霉菌、弗氏链霉菌
B. 仪器和其它用品
酒精灯、载玻片、盖玻片、显微镜、双层瓶（内装香柏油和二甲苯）、擦镜纸、接种针、高氏一号培养平板等
四、 试验方法
a) 倒平板
将配好的高氏一号培养基经灭菌锅灭菌后，经无菌操作倒平板； b) 冷却
放在桌面上冷却，注意勿动；
c) 划线接种
无菌操作分别将青色链霉菌和弗氏链霉菌挑取菌种在到高氏一号培养基平板上密集接种划线，注意划线要密集，一个菌种划三个平板； d) 插片
无菌操作用镊子取灭菌盖玻片以45°角插入平板琼脂接种线上 e) 培养
将平板倒置，于28℃恒温箱种培养5-7d
f) 镜检
用镊子小心取出盖玻片，用纸擦去背面培养物，有菌面朝上放置在载玻片上，通过显微镜直接用低倍镜和高倍镜观察
注意事项
培养放线菌中要注意，放线菌的生长速度较慢，培养期较长，在操作中应特别注意无菌操作，严防杂菌污染。
五、 实验结果及分析
1. 实验结果
2
10×100
10×
100
3
2. 实验分析
放线菌的菌丝分化为两部分，即长入培养基内的营养菌丝（又称基内菌丝）和生长于培养基表面的气生菌丝（又称繁殖菌丝），其中基内菌丝外观透明，而气生菌丝而外观较暗；在我们本次所选择的实验材料（青色链霉菌和弗氏链霉菌）中，青色链霉菌的孢子丝形态为螺旋状，弗氏链霉菌的孢子丝形态则比较直，比较容易区分。
六、 实验小结
通过本次试验，我学会了放线菌形态观察的方法，在实验的过程中不仅掌握了插片法等微生物实验操作技术，而且也了解一些关于放线菌的基本知识，如其菌丝形态、颜色等等，在实验的过程中叶遇到了一些操作上的问题，但我们最终顺利完成了本次实验，相信本次实验的认识和经验将会对以后的微生物学习大有裨益。
参考文献
? 詹火元 生物学通报 19xx年底30卷第2期 p34
? 沈萍，陈向东.微生物学.第二版.北京:高等教育出版社，2006
? 沈萍，陈向东.微生物学实验.第4 版.北京:高等教育出版社，2007
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