一例犬免疫性溶血性贫血的诊治报告
摘要：免疫介导性溶血性贫血（IMHA）是指自身抗体、补体或两者同时附着于红细胞膜，引起红细胞免疫破坏，最终导致溶血[1]。引起自体免疫性溶血的病例，常无法找到潜在的病因，只能归结为原发性或特发性。常见的病因包括感染（病毒、细菌、寄生虫等），药物（磺胺类、头孢类、青霉素、疫苗、普鲁卡因胺等），肿瘤（淋巴瘤、白血病），免疫性疾病（系统性红斑狼疮、甲状腺机能减退、免疫缺陷等）[2]。
关键字：犬 免疫介导性溶血 贫血 输血
正文：20xx年2月20日芭比堂动物医院来了一只贵妇犬，主述情况是：该犬近两天精神差，不吃东西，不吐，没劲，不愿活动，平时以狗粮为主，免疫正常，为生产。体重5.35千克，心率160次/分，体温38.5度，可视粘膜苍白，沉郁，触诊腹部空虚。检查血常规和生化全项。结果：红细胞1.64*10/L（5.5~8.5）、红细胞比容是0.14L/L（0.37~0.55）、血红蛋白是38g/L（120~180）、白细胞是108*10/L（6~17），TBIL=34umol/L(0~15)，其他结果均在正常范围内。但是，标本有溶血的现象。根据检查结果初步诊断为免疫介导性溶血性贫血。根129据结果必须马上输血，配血完成后，开始输血加输液。
处方如下：1. 0.9%生理盐水 50ml iv
2. 3. 4. 5. 犬全血 140ml iv 0.9%生理盐水 50ml iv 泼尼松龙 10mg sc 头孢曲松 1.0g*1/0.2 sc
6. 苯海拉明 10mg*1/10mg sc
第二天主述：排便正常，排尿两次，黄色，不吃，不喝，精神一般，不愿意运动。检查：T：38.5度，心率：110次/分，体重5.25千克。可视粘膜仍发白，舌色比昨天红润。
免疫介导溶血性贫血是一种与自身红细胞抗体有关的溶血性贫血。患犬高度贫血和溶血,死亡率高达40%以上,多为再生性贫血.可采取支持疗法,缓解贫血、脱水和继发并发症。同时结合药物治疗抑制免疫系统,使红细胞免受攻击并促使骨髓产生新的红细胞。
处方如下：1 泼尼松龙 10mg sc
2 头孢曲松 1.0g*1/0.2 sc
3 乳酸林格 90ml
5%GS 80ml iv
4 科特壮 0.6ml sc
5 养血维他 一瓶
6 维克营养膏 一支
第三天主诉：无食欲，排尿桔色，很黄。在家体温T：39.6度。检查：T：39.1度，体重：
5.15kg。口腔黏膜颜色苍白。检查血常规、电解质8+。结果：红细胞1.64*10/L（5.5~8.5）、红细胞比容是0.14L/L（0.37~0.55）、血红蛋白是38g/L（120~180）、白细胞是111*10/L129（6~17）。根据结果主人决定再次配血、输血。
处方如下：1 0.9%生理盐水 60ml
地米 5mg*2/10mg iv
2 安痛定 2ml/0.5ml sc
3 犬全血 150ml iv
4 速诺 0.5ml sc
第四天主诉：开始进食，尿色由血样变为桔色，颜色逐渐变浅，而且主动喝水，精神有所好转，输血后体温一直正常。检查：腹部稍紧张，T：38.2度、心率：120次/分、体重：5.25kg。 处方如下：1 0.9%生理盐水 30ml
头孢曲松 1g*1/0.2g iv bid
2 5%GS 50ml
VC 2ml*2/4ml iv
3 迈微舒 5mg*10片 2片/天 po
4 a/d 1听
5 养血维他 2瓶 1ml/2次/天
第五天主诉：食量相当于正常的1/10，精神有好转。检查：T：37.8度、心率：110次/分、体重：5.15kg，舌色有所恢复。
处方如下：1 0.9%生理盐水 30ml
头孢曲松 1g*1/0.2g iv bid
2 5%GS 50ml
VC 2ml*2/4ml iv
第六天主诉：适量进食罐头，喝水，排尿黄色，淡红，无大便，昨天精神好转，今天精神稍差，不吐。检查：T：37.7度、体重：5.45kg。主人要求再次输血。配血结果：主侧有缗钱样凝集。次侧无凝集。所以配血失败。
处方如下：1 0.9%生理盐水 40ml
头孢曲松 1g*1/0.25g iv bid
2 5%GS 50ml
VC 0.5g*1 iv
3 钾宝 20ml/2ml po bid
之后连续输液四天与第六天相同，但是注射小针：维肝素：0.6ml，科特壮：0.6ml。口服钾宝和迈微舒。一周后来复查血常规，红细胞：红细胞2.27*10/L（5.5~8.5）、白细胞是64*10/L（6~17）。但是，该犬一切正常，但是要持续口服激素来控制自身的免疫。
讨论：免疫介导性溶血性贫血（IMHA）指自体抗体、补体或同时附着于红细胞膜，引起红129细胞免疫破坏，造成的溶血性贫血。在犬溶血性疾病中，IMHA是最常见也是最严重的疾病之一[3]。
病因：包括特发性、药物、传染病、肿瘤和免疫性疾病。特发性IMHA约占60～70%，这可能与当前诊断水平不足有关[4]。许多慢性感染如脓肿、子宫蓄脓和肾盂肾炎等也会引起继发性免疫性疾病，包括IMHA。IMHA还与疫苗注射有关，一调查报道表明26%IMHA犬在发病前1个月内注射过疫苗。
临床症状：此病的症状均与严重贫血和器官缺氧有关，如肝、肺、心脏、肾脏和小肠。其症状可为急性或慢性，包括厌食、嗜睡、虚弱、发烧、粘膜苍白或黄疸、毛细血管再充盈时间延长、肝脾肿大、呼吸困难、脉搏快速、腹部不适和红尿[5]。少数病例还有血小板减少的症状，包括鼻出血、血便、出血斑和瘀点。
发病机理：IMHA起源于体内产生了作用于红细胞膜的IgG、IgM抗体。这是一种Ⅱ型免疫反应，红细胞与抗体或补体结合后就发生溶解[6]。红细胞溶解的程度取决于细胞膜上抗体的类型和量，以及相关的补体。多数犬IMHA都是IgG和补体与红细胞结合的结果。IgG有两个抗原位点，大量存在时会引起红细胞自体凝集。IgM有5个抗原位点，可引起红细胞自
体凝集。一旦IgM与红细胞结合，就会激活补体系统。当红细胞与IgG或IgM分子结合后，会被存在于脾脏的巨噬细胞吞噬，并继发脾肿大。当红细胞与抗体结合的复合物较多时，肝脏也会开始吞噬红细胞并出现肝肿大。
活化的补体系统和补体蛋白与红细胞结合在IMHA中起着重要作用。补体系统活化可引起快速血管内溶血或增强血管外溶血并产生球形红细胞。补体C3b－膜复合物可被脾脏内的巨噬细胞清除（红细胞部分吞噬），形成球形红细胞。球形红细胞较“硬”，经过脾脏或肝脏时易被破坏[7]。
治疗：IMHA最重要的治疗药物是类固醇，泼尼松的剂量为1～2mg/kg，每天2次，连用2周，直至红细胞压积稳定或开始上升为止。一般稳定红细胞压积需要3～14天。剂量减量要慢，通常整个治疗需要3个月[8]。其它治疗药物包括硫唑嘌呤、达那唑和环孢素A等。近年来，许多研究表明环磷酰胺对IMHA的治疗有弊无益，类固醇和类固醇＋环磷酰胺的治疗试验表明环磷酰胺不能加速球形红细胞的消失，抑制红细胞的再生性反应，需要输血治疗的次数也较多。由于引起IMHA患犬死亡最常见的原因是DIC和血栓症，故应配合抗凝血药物治疗，如肝素、阿斯匹林和华法令[9]。
多数IMHA患犬都需要输血，一般为1～4次。由于IMHA会影响配血和血型的鉴定，输血时一定要用DEA1.1阴性的供血犬，否则易发生意外。
上述治疗均无效的患犬，最后可采取脾切除术。虽然本病不适合做手术，但一研究表明脾切除术是有益的。脾切除可断绝B细胞和活性巨噬细胞的来源及消除红细胞破坏的场所。 预后：一调查表明IMHA患犬治疗后30天和1年的存活率为58%和34%。影响预后的因素很多，包括再生性、血小板、胆红素、白细胞等。当白细胞中度或严重增多、核左移伴有中毒性粒细胞时，常暗示潜在中度至严重组织损伤，预后较差。这些损伤可能继发于贫血性缺氧、血栓或两者共同作用[10]。引起IMHA患犬死亡最常见的原因是DIC和血栓症，研究表明多数死亡的患犬都存在多器官血栓栓塞。
参考文献
[1] DAY M J.Antigen specificity in canine autoimmune haemolytic anaemia[J].Vet Immunol Immunopathol,1999,69:215-224.
[2]小动物临床手册[第四版]
[3] SCOTT MONCRIEFF J C,TREADWELL N G,MCCULLOUGH S M,et al.Hemostatic abnormalities in dogs with primary immune-mediated hemolytic anemia[J].Am Anim Hosp Assoc,2001,37:220-227.
[4] KLAG A,GIGER U,SHOFER FIdiopathic immune-mediated hemolytic anemia in dogs:42 cases (1986-1990)[J].Am Vet Med Assoc,1993,202:783-787.
[5]丁训杰。免疫性溶血性贫血。见： 邓家栋，杨崇礼，杨天楹，王振义，张之南，李家增。临床血液学。上海科学技术出版社，上海 第1版，2001，628-647
[6] Sheila McCullough：Immune-mediated hemolytic anemia：understanding the nemesis，Vet Clin Small Anim，33（6），1295-1315，2003
[7]浦权等。 免疫性溶血性贫血。 见：浦权主编。 实用血液病学。 科学出版社，北京 第二版，2009，404-413
[8]Douglas J. Weiss：Detection of activated platelets in dogs with primary immune-mediated hemolytic anemia，J Vet Intern Med，20，682-686，2006
[9]中国兽医杂志。20xx年11期
[10] /view/99834.htm
第二篇：溶血实验
溶血实验
1.浓度
2.溶液配制
D-PBS：Dulbecco’s Phosphate Buffered Saline
3.方法
⑴新鲜血液2ml至用抗凝剂肝素预处理的采血管中。
⑵加入4ml D-PBS，10000g离心5min。
⑶弃上清，补加D-PBS至10ml，混匀后10000g离心5min。
⑷重复⑶4次，至上清澄清透明。
⑸加入20ml D-PBS重悬红细胞。
⑹将0.2ml红细胞悬液与0.8ml材料工作液混合。以加0.8ml水作为阳性对照组，0.8ml D-PBS为阴性对照组。
⑺各组设4个平行，4h后，10016g离心5min，各取样品100ul至96孔板测定577nm吸光度，以655nm吸光度为参考。
溶血率% =[(OD样品-OD阴性)/(OD阳性–OD阴性)]×100%
取健康非吸烟男性志愿者静脉血3 ml。取2 ml血液，加入4 ml PBS，涡旋混匀。4 ℃，10020 g离心10 min。小心移除上清，补加PBS至10 ml，混匀后离心，PBS重复处理5次至上清澄清透明。最后将红细胞用PBS定容至20 ml重悬混匀。用PBS配制三种HAP纳米粒子的梯度工作液：100 µg/ml，50 µg/ml，25 µg/ml，12.5 µg/ml，6.25 µg/ml。用0.2 ml上述红细胞重悬液与0.8 ml纳米粒子工作液混合，得到纳米粒子的终浓度为80 µg/ml，40 µg/ml，20 µg/ml，10 µg/ml，5 µg/ml。0.2 ml红细胞悬液与0.8 ml PBS混匀为阴性对照，0.2 ml红细胞悬液与0.8 ml无菌三次水混匀为阳性对照，各组设3个平行。涡旋混匀后，于37 ℃孵育3 h，10020 g离心10 min，各样取100 µl上清，于570 nm处测吸光度值。溶血率计算方法如下：溶血率% = [(OD样品-OD阴性)/ (OD阳性 – OD阴性)] × 100%。