实验二、血液常规检验
（一）、红细胞沉降率测定-血沉测定
红细胞沉降率（erythrocyte sedimentation rate, ESR，简称血沉率）是指在室温下观察抗凝血中红细胞在一定时间内在血浆中的沉降速率。测定血沉率的方法很多，兽医临床上常用魏氏（Westergren）法。
1．原理 红细胞沉降速度（erythrocyte sedimentation rate ,ESR）与红细胞串钱状的形成、红细胞数目的多少、血浆蛋白的组成以及测定时室温的变化、血沉管倾斜的程度等因素有关。
2。器材与试剂
（1）魏氏血沉器、采血针头等
（2）抗凝剂：3.8％枸橼酸钠液
3．操作方法
魏（Westergren）氏法 魏氏血沉管长30cm，内径为2.5mm，管壁有200个刻度，每个刻度之间距离为1.0mm，附有特制的血沉架。测定方法如下：
（1）取3.8％枸橼酸钠液0.4ml置于小试管中。
（2）自颈静脉采血，沿管壁加入上述试管，轻轻混合。
（3）用血沉管吸取抗凝血至刻度0外，用棉花擦去管外血液，直立于血沉架上。
（4）经15、30、45、60 min，分别记录红细胞沉降的刻度数，用分数形式表示（分母代表时间，分子代表沉降mm数）。
4．注意事项
（1）血沉管必须垂直静立（牛、羊的血液，血沉速度很慢，可倾斜60°，以加速沉降。注意，其正常值也相应增加）；血液柱面上不应有气泡；抗凝剂的量要接规定加入，少了会产生血凝块，多了会使血液中的盐分过多，血沉变慢。
（2）报告结果时要注明测定方法。
5．参考值
动物因品种不同，血沉率有较大差异，一般马属动物血沉率最快，其次是水牛，而黄牛、双峰驼、绵羊、山羊、猪及鸡的血沉率较慢。为加速沉降率和便于观察，可将血沉管架倾斜60°放置。健康动物的血沉率参考值见表7-3。
表7-3 健康动物的血沉率参考值
6．临床意义
（1）血沉率加快：常见于各种贫血性疾病、炎症性疾病及组织损伤或坏死（如结核病、风湿热、全身性感染等）。随着疾病的好转，血沉率逐渐变慢并恢复正常。
（2）血沉率减慢：常见于机体严重的脱水，如胃扩张、肠阻塞、急性胃肠炎、瓣胃阻塞、发热性疾病、酸中毒等。
（二）、红细胞计数
红细胞计数（red blood cell count，RBC）是指计算每升血液内所含红细胞的数目。红细胞计数的方法有显微镜计数法、血沉管计数法、光电比色法、血细胞电子计数器计数法等。目前在兽医临床上使用最广泛的是显微镜计数法（计数板法）。
1．原理 血液经稀释后，充入血细胞计数板，用显微镜观察，计数一定容积内的红细胞数并换算成每μl内的数目。
2．器材
（1）改良式血细胞计数板：临床上最常用的是改良纽巴（Neubauer）氏计数板，它是由一块特制的玻璃板构成，玻璃板中间有横沟将其分为三个狭窄的平台，两边的平台较中间的平台高0.1mm。中央平台又有一纵沟相隔，其上各刻有一个计数室。每个计数室划分为9个大方格，每一大方格面积为1.0mm2，深度为0.1mm；四角每一大方格划分为16个中方格，为计数白细胞用。中央一大方格用双线划分为25个中方格，每个中方格又划分为16个小方格，共计400个小方格，此为红细胞计数之用（图7-6、7-7）。
（2）血盖片：专用于计数板的盖玻片呈长方形，厚度为0.4mm。
（3）沙利（shali）氏吸血管或红细胞稀释管，5ml吸管、中试管。
（4）显微镜，计数器等。
（5）稀释液：0.85％氯化钠溶液。
3．方法
试管稀释法 用5ml吸管吸取红细胞稀释液3.98ml（或4ml亦可）置于试管中。用沙利氏吸血管吸取全血样品至20μl刻度处（或吸血至刻度10处，红细胞稀释液用2ml）。擦去吸管外壁多余的血液，将此血液吹入试管底部，再吸、吹数次，以洗出沙利氏管内粘附的血细胞，然后试管口加塞，颠倒混合数次，再用毛细吸管（或玻棒）吸取已稀释好的血液，放于计数室与盖玻片接触处，即可自然流入计数室中。注意充液不可过多或过少，过多则溢出而流入两侧槽内，过少则计数池中形成气泡，致使无法计数。计数时，先用低倍镜，光线要稍暗些，找到计数室的格后，把中央的大方格置于视野之中，然后转用高倍镜。在此中央大方格内选择四角与最中的五个中方格（或用对角线的方法数五个中方格），每个中方格有16个小方格，所以共计数80个小方格。计数时注意压在左边双线上的红细胞计在内，压在右边双线上的红细胞则不计数在内；同样，压在上线的计入，压在下线的不计入，此所谓“数左不数右，数上不数下”的计数法则（图7-8、7-9）。
4．计算
X/80×400×200×10=1mm3血液中红细胞个数。
X——5个中方格（即80个小方格）内的红细胞总数。
400——一个大方格，即1mm2面积内共有400个小方格。
200——稀释倍数。
10——血盖片与计数板的实际高度是1/10mm，乘10后则为1.0mm。
上式简化后为X×10，000=红细胞数/mm3
5．注意事项
（1）红细胞计数是一项细致的工作，稍有粗心大意，就会引起计数不准。关键是防凝、防溶、取样正确。取抗凝血时，抗凝剂的量要合适，不可过少使血液部分呈小块凝集；采血时应注意及时将抗凝剂与血液混匀。防溶是指防止过分振摇而使红细胞溶解，或是器材用水洗后未用生理盐水冲洗而发生溶血，使计数结果偏低。取样正确是指吸血10或20μl一定要准确，吸血管外的血液要擦去，吸血管内的血液要全部洗入稀释液中，稀释液的用量要准；充液量不可过多或过少，过多可使血盖片浮起，过少则计数室中形成小的空气泡，使计数结果偏低甚至无法计数。此外，显微镜台未保持水平，使计数室内的液体流向一侧，这些操作上的错误均可使计数结果不准确。
（2）器材清洗方法：沙利氏吸血管或试管，每次用完后，先用清水吸吹数次，然后用蒸馏水、酒精、乙醚，按次序分别吸吹数次，干后备下次使用。血细胞计数板用蒸馏水冲洗后，用绒布轻轻擦干即可，切不可用粗布擦试，也不可用酒精、乙醚等溶液冲洗。
6．正常值 健康家畜除山羊的红细胞数较多外，其他家畜的红细胞数约600～800万/μl。
7．临床意义 由于血红蛋白是红细胞的内含物，占红细胞重量的32%~36%，或红细胞干重的96%，因此红细胞数与血红蛋白含量的增多或减少通常是平行的相对关系。但在某些类型贫血时，如低色素贫血时，红细胞与血红蛋白降低的程度常不一致，血红蛋白的降低比红细胞明显。故同时测定红细胞数与血红蛋白量以作比较，对诊断更有实际意义。
（三）、白细胞计数
白细胞计数（white blood cell count，WBC）是指计算每升血液内所含白细胞的数目。白细胞计数的方法有显微镜计数法和血细胞电子计数器计数法等。
1．原理 用稀释液将红细胞破坏后，计算出每微升血中白细胞数。
2．器材 1.0ml或0.5ml刻度吸管，其他与红细胞计数同。
3．试剂 白细胞稀释液可用1～2％的冰醋酸液，内加1％结晶紫液1滴，以便与红细胞稀释液区别。
4．方法
试管稀释法 用1ml吸管吸取白细胞稀释液0.38ml（也可吸0.4ml）置一小试管中。用沙利氏管吸取被检血至20μl处，擦去管外粘附的血液，吹入小试管中，反复吸吹数次，以洗净管内所粘附的白细胞，充分振荡混合，再用毛细吸管或沙管吸取被稀释的血液，充入已盖好盖玻片的计数室内，静置1～2min，低倍镜检查。
将计数室四角四个大方格内的全部白细胞依次数完，注意压在左线和上线的计入，压在右线和下线的不计入。
计算：
x/4×20×10=白细胞数/μl
x——四角四个大方格内的白细胞总数。
x/4——一个大方格（面积为1mm3）内的白细胞数。
20——稀释倍数
10——血盖片与计数板的实际高度是1/10mm，乘10后则为1mm。
上式简化后为x×50=白细胞数/μl
5．注意事项 防止把尘埃异物与白细胞混淆，可用高倍镜观察：白细胞有细胞核的结构，而尘埃异物的形状不规则，无细胞结构。
6．正常值 马、骡、驴、牛、绵羊白细胞的正常值约为8000～9000个/μl；山羊，猪约为1300～1400个/μl。
7．临床意义
（1）白细胞增多：当白细胞数高于参考值的上限时，称白细胞增多。见于大多数细菌性传染病和炎性疾病，如炭疽、腺疫、巴氏杆菌病、猪丹毒、纤维素性肺炎、小叶性肺炎、腹膜炎、肾炎、子宫炎、乳房炎、蜂窝织炎等疾病。此外，还见于白血病、恶性肿瘤、尿毒症、酸中毒等。
（2）白细胞减少：当白细胞数低于参考值的下限时，称白细胞减少。见于某些病毒性传染病，如猪瘟、马传染性行性感冒、鸡新城疫、鸭瘟等；见于各种疾病的濒死期和再生障碍性贫血。此外，还见于长期使用某些药物时，如磺胺类药物、青霉素、链霉素、氯霉素、氨基比林、水杨酸钠等。
（四）、血红蛋白测定-沙利氏管比色法
血红蛋白（hemoglobin，Hb）是红细胞的主要内含物，它是血红素和珠蛋白肽链联接而成的一种结合蛋白，属色素蛋白。每个正常红细胞内所含的血红蛋白约占红细胞重量的32%～36%，或红细胞干重的96%。血红蛋白测定是指测定并计算出每升血液中血红蛋白的克数。
1．原理 血液与盐酸作用后，释放出血红蛋白,并被酸化后变为褐色的盐酸高铁血红蛋白，与标准柱相比，求出每百毫升血液中血红蛋白的克数或百分数。
2。器材与试剂
（1）沙利氏血红蛋白计一套。在测定管上有两种刻度，一侧表示血红蛋白在每百毫升血液内的克数，另一侧表示百分数。国产的血红蛋白计是以每百毫升血液含14.5g血红蛋白做为100％而设制。
（2）0.1N盐酸或1％盐酸一小瓶。
3．方法
（1）向沙利氏比色管内加入N/10盐酸5滴。
（2）用沙利氏吸血管吸血至20μl刻度处，擦去管外沾附的血液。
（3）徐徐吹入沙利氏比色管内，不要产生气泡，再反复吸、吹数次，以洗出沙利氏吸血管中的血液。轻轻振动比色管，使血液与盐酸充分混合。
（4）静置10min，待血液变成褐色后，缓缓滴加蒸馏水，每加1滴，用细玻璃棒搅动一次，直到颜色与标准色柱完全相同为止。液柱凹面所指的刻度数，即为每百毫升血液中血红蛋白的克数，用g％表示。
4．注意事项
（1）吸取抗凝血时，应先将血样振荡混合后再吸取，吸血量要准确，吸血管中的血不应混有气泡，管外沾附的血液要擦去。
（2）血液加盐酸后，要求放置的时间不应少于10min,否则会使测定结果偏低。
5．正常值 各种家畜血红蛋白的正常值在9～12g％。
6．临床意义
（1）血红蛋白增多：主要是见于脱水，血红蛋白相对增加。也见于真性红细胞增多症，是一种原因不明的骨髓增生性疾病，目前认为是多能干细胞受累所致。其特点是红细胞持续性显著增多，全身总血量也增加，见于马、牛、犬和猫。
（2）血红蛋白量减少：主要见于各种贫血。
第二篇：实验七 血液标本的细菌学检验(二)
