中药药理学实验讲义
成都中医药大学药学院药理
20##，12
中药药理学实验讲义
主编 曾 南
主审 沈映君
编委
曾南 王平 徐世军 谢宇环
王张 杨旋 熊静悦 杨莉娟
童妍 周桢昊 李佳川
第一章 中药药理实验基本知识
一、中药药理实验报告基本要求
1.实验前应仔细阅读实验指导，做到心中有数。结合实验内容，复习有理论知识。科研实验还应查阅有关文献资料，吸取他人经验。实验中应认真、仔细、耐心地观察所出现的各种现象，实事求是记录，切忌夹杂主观因素。应坚持一丝不苟，严谨的科学作风，决不允许抄袭别人的实验结果写报告。
2.教学实验往往每次是取一种动物,一种方法写实验报告。科研实验则应事先设计好实验动物数，随机分组。新药研制还应设空白与已知药物对照组。科研实验要说明的某一个作用，至少设2～3个以上计量组，要两种以上的实验方法等。
3.实验条件应详细、明确，如仪器型号、试剂的浓度、中药的品种、复方的组成、提取方法、浓度和剂量、给药途径、动物的来源、品种、体重、年龄、性别、如何分组等都应写出。
4.实验方法可简明扼要地叙述，但关键环节必须写清楚。科研报告还可以引用文献上的方法，以节省文字。
5.实验结果应根据实验获得的数据进行整理，对一个教学实验小组或全实验室的数据进行整理、归纳、分析和对比，尽量总结出各种图表，进行统计学处理。
6.讨论部分包括实验结果的分析、思考题的探讨、实验设计、实验方法及实验中出现异常现象的分析、认识、体会和建议等。讨论应注意结合中医药理论。科研报告还可对比前人的实验进行分析，阐明从本实验获得的新发现或尚存在 问题。
7.实验结束应及时地整理和总结实验结果，写出报告。实验报告内容应包括实验名称、目的、原理、材料（包括仪器、药品、动物）、方法、结果、讨论及结论。科研实验报告还应有前言，说明课题来源及本实验要解决的问题；报告后应附有参考文献。
二、中药药理实验样品注意事项
在进行单味中药或复方中药药理实验时，由于中药不同于西药，多数不是单一化学成分，而是多种成分的综合作用或多种中药的综合作用。因此，在有效成分不明确的情况下，制备药理实验用的中药样品，应注意多种因素的干扰，影响实验结果。
1.药材选择：中药品种、产地、采收季节、炮制加工、霉变虫蛀等多种因素可以影响重要药理作用的实验结果，所以制备中药制剂应首先对中药样品经过鉴定，选择合格中药材进行制备。如果是研究中药新药，受试药物应是处方固定，生产工艺及质量稳定，与临床研究用药剂型相同，并应符合临床用药的质量标准。
2.口服制剂：整体动物实验口服或十二指肠给药，对药材加工的中成药制剂，如冲剂、浸膏、丸、丹、片剂等，可用蒸馏水或生理盐水配制成水溶液剂、混悬剂，必要时可加入增溶剂和助悬剂。糖衣片可先剥除包衣再配制。含挥发油的药材应先蒸馏取得挥发油，然后助溶或制成乳剂、混悬剂进行动物实验。若含有麝香、牛黄之类不便提取加工的药材，可直接和水煎液配制成混悬液给药。
药效学研究
3.离体实验和静脉注射：对于离体实验和注射给药的中药制剂，进行药效学研究时，用不含赋形剂的提取物，应注意药物中的杂质、不溶物质、无机离子及酸碱度对实验的干扰。如制剂中含钙离子进行心脏强心试验，含钾离子进行离体心脏和平滑肌试验，含糅质进行局部止血试验和抗菌试验，含胆碱、腺苷、鞣质、和无机离子静脉注射进行血压试验和血流动力学试验，获得阳性结果应持谨慎态度，常常不能反映药物的真实作用，可能为假阳性结果。因此，最好经过提取和处理。例如为防止阳离子干扰，提取物可通过阳离子树脂处理。必要时可提取有效部位或有效单体进行试验。血管内注射如用乳剂实验，乳剂为油/水型分散相粒子直径不能大于4μm。油性注射剂，混悬剂则不可静脉给药。脑室和脊椎腔（椎管）注射用注射剂必须以纯水为溶媒，不能加入任何助溶剂及抑菌剂。眼用混悬剂药物微粒不能大于50μm。一些药理实验为了除去供试药物中的鞣质、树脂、淀粉及其它杂质，水提取物加入高浓度的乙醇进行沉淀处理，注意这样同时也除去了多糖和蛋白质，如果进行免疫试验时，可能是该被试药物的有效成分。最好是根据中药含有不同的有效成分，采用不同的提取方法和处理方法，制备药理试验样品。
4.特殊成分处理：如果要研究某中药的多肽、蛋白质、酶、糖蛋白和其它不稳定成分的药理作用，则需要在低温下制成被试药物或制成冻干剂。临用时加注射用水或生理盐水进行实验。
中药样品制备和配制的具体方法，可参考陈奇主编的«中药药理研究方法学»（人民卫生出版社，1993年）以及其它中药化学、中药药剂学参考书。
三、中药药理实验制剂的浓度表示法
中药单味和复方制剂，一般以生药量浓度表示法。中药制剂名称在前，浓度在后，通常以g/ml表示液体制剂，以g/g 表示固体制剂。如生附子水煎液0.125 g/ml表示每毫升制剂中相当于喊生附子量为0.125g,人生总皂甙25mg/片表示每片中含人参总皂甙25mg。
四逆汤水煎液3g/ml（附子9g、干姜9g、甘草12g，煎成10ml），表示每毫升制剂含有四逆汤总量的3g。
对分子量已经明确的有效单体可用mol/L浓度表示。
四、常用实验动物的选择、捉持和给药方法
药理实验常用的动物有小白鼠、大白鼠、豚鼠、家兔、猫和犬，某些实验还可以用青蛙、蟾蜍以及鸽、鸡、猴等。由于各种试验的观察目的和内容不同，对动物的选择也有不同。下面介绍几种常用动物的选择、捉拿固定法和给药途径。
（一）小白鼠
小白鼠是药理实验常用的一种动物，常用于药物的筛选、LD50ED50的测定、中枢神经系统药试验、抗炎免疫药试验、避孕药、抗肿瘤以及抗衰老药试验等。常用体重18～22g。
1．捉拿方法 右手提起鼠尾，放在粗糙物（如鼠笼）上面，轻向后拉其尾，用左手拇指和食指捏住其头部皮肤及双耳，将小白鼠固定在掌中，使其腹部朝上，然后以第四指和小指夹住鼠尾。
2．给药途径：
（1）经口给药法：
口服（PO）：将受试药物放入饲料或溶于饮用水中，由动物自由提取的一种方法。缺点是摄入剂量不够准确。
灌胃(IG)：将小鼠固定后，右手持装有灌胃针头的注射器，自口角插入口腔，沿上腭插入食道。如遇阻力，可将针头抽出再另插，以免穿破食道或误入气管。灌注量为0.1~0.3ml/10g体重。
（2）皮下注射(SC)：常在背部皮下注射。一手固定动物，另一手注射，注射量为0.1~0.3ml/10g体重。
（3）肌内注射(IM)：多注射于后肢股部肌肉，每侧不超过0.1ml.
（4）腹腔注射（IP）：左手固定小鼠，右手持注射器，从下腹部外侧进针约3~5mm，呈450角刺入腹腔，注射量0.1~0.2ml/10g体重。
（5）静脉注射（IV）：将小鼠至于固定筒内，使尾巴露在外面，用70~75%酒精棉球擦尾部，或将鼠尾浸入45~50OC温水中。待尾部左右侧静脉扩张后，左手拉尾，右手进针。注射量不超过0.5ml/只。
（二）大白鼠
用途与小白鼠相似，常用作抗关节炎药物试验、血压测定、利胆药实验等。常用体重150~200g。
1．捉拿方法：基本上同小白鼠。将其放在粗糙物上，右手轻拉其尾，左手中指和拇指放在大鼠左右前肢腋下，食指放入颈部，使大鼠伸开两前肢，便能将其握住。
2．给药途径：灌胃、腹腔注射、皮下注射、静脉注射均同小白鼠，给药量为小白鼠的2~3倍。
（三）豚鼠
豚鼠对组胺很敏感，研究平喘药和抗组胺药时常选用。常用体重300~500g。
1.捉拿方法：豚鼠性温和，不咬人。捉拿是以拇指和中指从豚鼠背部伸入腋下，另一手放在臀部，托起即可。
2.给药途径：
（1）皮下、肌肉及腹腔注射。方法基本同小白鼠，给药量分别为0.5~1ml，0.3~0.5ml、2~4ml。
（2）静脉注射：可选用后腿掌外侧的静脉或外颈静脉进行注射。采用前法，可由一人抓持豚鼠并固定一条后腿，另一人剪去注射部位的毛，酒精棉球涂擦使血管扩张。以小儿头皮针头刺入血管推注药物。注射量通常为2~4ml。
（四）家兔
家兔常用作观察药物对呼吸、心脏、血管、肠肌运动的影响，或用作解热药试验及热源检查。雌兔常用作避孕药研究及观察药物对子宫的影响，以用于长期毒性试验。常用体重为1.5~2.5kg。
1.捉拿方法：一手抓住颈背部皮肤，轻轻将兔提起，另一手托其臀部，或将其置于固定箱内。
2.给药途径：
（1）灌胃：二人合作。一人坐好，将兔夹于两腿之间，左手紧握双耳、固定头部，右手抓住两前肢。另一人将开口器横放于兔口中，压在舌头上面，用一8号导尿管从开口器中央孔插入口内，再慢慢插入食道和胃。为避免误入气管，可将胃管外口端放入清水中，如无气泡出现，即证明在胃内。然后灌入药液，给药量通常为10ml/kg。
（2）耳缘静脉注射：用酒精棉球涂擦兔耳或手指弹兔耳，使局部血管扩张。以手指在耳根部压住静脉，然后注入药液。注射量为2ml/kg。
（3）皮下、肌肉、腹腔注射方法与鼠类基本相同，最大给药量分别为0.5ml，1.0ml和5.0ml/kg。
（五）犬
犬常用于慢性实验，如高血压试验治疗、胃瘘、肠瘘，用于观察药物对冠状血流的影响、利尿药实验以及长期毒性实验等。常用体重为5~15kg。
1.捉拿方法：一人用长柄钳式捕狗夹夹住犬颈，另一人将犬嘴绑住。绑嘴方法是将绳带从嘴下面绕上来，在鼻子上面打一结，再将绳带绕到最下面打一结，然后将绳带拉到耳后颈部打结固定。
2.给药途径：
（1）腹腔注射：将犬夹住，用力将头、颈部压在地上。一人提起一侧后肢并将药液注入腹腔。
（2）静脉注射：多从后肢外侧小隐静脉或前肢皮下头静脉注射。以手或橡皮管把静脉向心端扎紧，使血管充盈，剪毛，酒精消毒，针向近心端刺入静脉。回抽针栓，如见回血，表示针头在静脉内，即可推注药物。
五、中药药理实验研究设计的基本知识
实验设计是实验过程的依据，是实验数据处理的前提，也是提高实验研究质量的一个重要保证。严密而合理的实验设计，不但可以对实验结果和误差有比较准确的估计，最大限度地获得丰富而可靠的资料，而且还可以减少人力，节省物理和时间，提高工作效率。因此，实验设计，从实验的研究过程来看，具有非常重要的意义。
（一）实验设计的原则和内容
1.明确实验研究目的：实验设计，首先应考虑的就是明确实验研究目的。根
据实验的中心问题，进行实验内容设计，做到心中有数，有的放矢。
2.确定实验组和对照组：实验组和对照组之间除了处理不同，其他条件均应
相同，保持实验条件均衡或齐同条件对比的原则。
3.确定实验方法、项目和指标：在实验设计中要求观察的指标、项目和方法
等都要有明确的规定和说明。要注意选择能反映被研究问题的本质（药物作用及其机理）的关键指标；且能用客观方法，定性或定量地加以测量，取得准确可靠的数据。
4.确定实验对象数量：中药药理实验对象包括正常动物、麻醉动物及病理模
型；既有整体动物，又有离体器官、组织和细胞等。尽量研究各种接近中医临床的动物病理模型；按中医治疗原则，观察中药疗效。动物模型必须具备主要症状、体征，经化验和病理组织学等证实。但也不排除对正常动物或离体器官等的作用分析。由于动物实验和临床观察毕竟有差别，因此考虑用不同动物多种模型，往往也是必要的。要根据实验目的、方法和指标的要求决定实验动物、样本及数量。在教学实验中则可以将全实验各组结果合并统计处理，以保证样本数量上的要求。一般小动物（大、小鼠）每组8～12只，较大动物（兔、狗）每组5～8只，但总量应符合统计要求。
5.资料整理：将记录的资料进行必要的整理、分析，经过正确的统计处理，作出结论。
（二）实验设计的基本要求
实验设计的三大原则就是随机、重复和对照。
1.随机：就是使每一个体在实验中都有同等机会均衡地分配到各组或处理。
以减少主观因素的影响或避免影响或避免偏性误差，使样本的生物差异均衡地分配到各组中去。随机话的手段可采用编号抽签法，随机数字表和计算器的随机数字键。近年提出“均衡下的随机”，即将可控制的因素（如体重、性别等）先均衡地归类分档，然后在每一档中随机地取出等量动物分到各组，使难控制的因素（如活波、饥饱、疲劳程度及性周期等）得到随机化的分配。
2.重复：能在同样条件下，把实验结果重复出来，才算是可靠的实验。重复
除可增加可靠性外，也可知道实验变异情况。重复次数多少要根据实验要求和性质，主要药效指标稳定的实验，一般重复2～3次。
3.对照：比较研究是科学实验不可少的条件，任何实验都要求都不能缺少对
照组研究，只有对照菜油比较的基础。没有比较，就难以鉴别，也就缺乏科学性，所以实验设计必须设立对照组。对照组与实验组之间除用以实验的药物给予或不给予处理的区别之外，其他条件，如实验动物、实验方法、仪器、环境及时间等应一致。特别注意在动物实验中对照组与实验组要求挑选种属、性别、窝别、年龄、体重、健康状况等方面相同的动物，保证的出药物作用的准确结果。
根据实验研究的内容不同，可选用不同的对照形式，常用方法有以下4种：
(1)空白对照:是指在模拟实验组处理的“空白”条件下进行观察的对照。即
除不用被研究的药物外，对照组的动物要经过同样的处理，如给予生理盐水或不含药物的溶媒。这种对照又可称“阴性对照”。其优点是可比性较好。有时，也在不给任何处理的对象上取得观测值，例如各生理常数，称之为正常对照。
(2)标准对照：指以标准值或正常值作为对照，在标准条件下，将已知经典药
物与实验药进行对照。又称“阳性对照”，必要时可设两个作用机理不同的阳性对照药物。
(3)同因素不同水平的对照：系在实验组分若干剂量组互为对照进行对比，说
明量效关系或药效的剂量依赖性，一般设2～3个剂量组。
(4)自身前后对照：上述三种对照组都属于组间对照。有的实验可在对象自身
上进行给药前后的对照比较，其前提是前后条件一致，且指标对时间稳定。这在急性实验时易于满足，但慢性实验时，难以保证，故尚需作为组间对照来说明问题。
（三）常用的设计方法
1.单组比较设计：这种设计是以动物作为自身对照，即在同一个体上观察给药前后某中观测指标的变化，如药物对体重、血压、体温等的给药前后比较。本法优点是能消除个体生物差异。
2.配对比较设计：这种设计是以动物按性别、体重、年龄、窝别或其他有关因素加以配对，以基本相同的两个动物为一对，配成若干对，然后将每一对动物随机分配于两组中。两组的动物数、性别、体重等情况基本相同，取得均衡减少误差及动物的个体差异。
3.随机区组设计：是配对比较设计法的扩大。将全部动物按体重、性别及在其他条件等分为若干个组。每组中动物数目应与拟划分的组数相等或为其倍数；体质条件相似；再把每个区组中的每一只动物进行编号，利用随机数字表将其分配到各组。
如把小鼠24只，按随机区组分成A、B、C、D4组。先按小鼠的性别、年龄、体重等分成6个区组，每组有4只情况相似的小鼠。依次编号，第一区组4只小鼠编为1、2、3、4号，第二组编为5、6、7、8号，余类推。接着在随机数字表任意指定一个起点，如指定20行第一个数字为起点，从横的方向抄录数字，先抄三个数字31、16、93为随机分配第一区组小鼠之用。然后将这三个数字分别以4（组数）、3、2（3、2为余下组数）除之求余数，若能整除是，余数取除数。则第一个数31，除以4，余数为3，将1号鼠分到C组（第三组）；第二个数16，除以3，余数为1，将2号分到A、B、D、三个组的A组（第一组）；第三个数3，除以2，余数为1，将3号鼠分到剩余B、D组B组（第二组）；最后将4号鼠分到剩余D组（第四组）。第一区分配完后，再继续抄录随机数字，用相同方法将其余各区组小鼠分到各组中（第20行数字抄录完后继续抄第21行数字）。结果如表2-1。
A组动物号为：2、6、11、15、17、22；
B组动物号为：3、8、10、14、19、24；
C组动物号为：1、7、9、13、20、23；
D组动物号为：4、5、12、16、18、21；
4．完全随机设计：就是将每个实验对象随机分配在各组，并从个组实验结果的比较中得出结论。通常用随机数进行完全随机化分组的方法。此法的优点是设计和统计的处理都较简单，但隶书较少时，往往不能保证组间的一致性。
设有小鼠14只，用随机数字表将其分成两组。先将小鼠编为1、2、3……14号，然后任意指定随机数字表的某一行某一数字开始。如自第6行第一个数开始，按横的方向抄录，得16……23第14个数。令单数代表A组，结果列入A组的小鼠有8只，列入B组的小鼠有6只，如表2-2所示。
按上表分配，两组鼠数不相等，如要使其相等，需将A组小鼠减少1只，分进B组。应将哪1只鼠分进B组，可用随机数字表，从表中第6行里继续抄录一个数字78。因为归A入组的小鼠有8只，故以8除之，得余数6。故把第六个A，即动物编号为2的小鼠分进B组。经过调整后两组小鼠的分配是：
A组动物编号为3、5、6、8、11、13、14；
B组动物编号为1、2、4、12、7、9、10；
如随机分成3组，设有动物15只，编号后应用随机数字表分配。如果从第十一行第1个数字开始，按斜角线抄下15个数字，每个数均以3除之，用余数1、2、3代表A、B、C组结果分入A组的动物6只，分入B组的动物4只，分入C组的动物5只。结果如表2-3。
如3组动物数相等，则需将原归A组的6只动物中的1只改分入B组。可以随机数字表继续按斜角线抄录一个数字，得60，以6除之，余数为零，视，就可以将第六个A，即编号为12的动物改为B组。
A组动物编号为3、4、6、9、10；
B组动物编号为2、7、8、11、12；
C组动物编号为1、5、13、14、15；
按照完全随机设计所得资料，如为两组对比的测量资料，可用成组比较的测验。如果两组以上的资料，可以用相应的方差分析处理。
5.拉丁方设计：指由拉丁字母所组成的正方形排列，在同一横行与同一直列中都没有重复的字母，适用于多因素的均衡随机。在药效统计分析中拉丁方是一种效率很高的设计方法，可以用较少例数实验获得较多的信息。如测定某药的作用，要求用4种剂量，1、2、3、4号动物均各注射1次，而且在第一、二、三、四周每次注射时都必须有这4种剂量，并要避免给药时间先后带来的影响。一般先将4种剂量编成A、B、C、D四个号码，再按4×4拉丁方进行。每个动物（纵列）没有重复使用的剂量，同一日期（横行）也没有重复使用的剂量。这样既可控制动物间的个体差异，也可避免了注射日期先后带来的实验误差。若样本是5，6……个，则可采用5×5或6×6拉丁方等。同一拉丁方可方便的转化成种形式，如：
6.正交设计：正交设计是用“正交表”作为因素分析的一种高效设计法，在中药复方研究中颇为重要，可分析其中组分的主次，各药间的交互作用，找出最佳组合和最优剂量。例如，某中药付方有甲、乙、丙、丁4药组成，每药可选用大、中、小3个剂量。欲分析各药对付方疗效的影响，可使用“L9（34）正交表”。L表示“正交表”，9表示作为9次实验，34表示4种因素（甲、乙、丙、丁4味中药）各3个水平（大、中、小3个剂量）。按理有81种组合（34），应进行81次实验，但哟奶奶感正交设计作9次实验即可解决问题，可称高效率的实验设计。
从表2-4可以看出：甲药用大剂量较大为好，是主药，大小剂量间药效之比（E3/E1=2.15/1.15=1.87）最大,乙药大剂量为好；丙药小剂量（水平2）为宜，丁药不用更好。因此，可选择“甲、乙大剂量，丙小量而不用丁”的组合（尽管这一组合在实验室中并未显现）来安排复试，加以验证作为可能的最佳方案。
7.序贯设计：序贯设计系循环逐个或逐对地进行实验，适用于能及时判断死活或在较短时间内作出反应的药物。可同时用作图法或查表法随时了解统计结果，一旦能做出统计结论即可停止实验，因此可节省实验动物和时间，一般20～30只动物即可测定LD50。具体例证请参阅本书实验16-1。
8.优选法设计：是一快速、简便的最优条件选择法。设计方法有多种，如单因素优选法、对分法等。前者是用于选择最佳剂量和浓度的常用法，对分法在中药复方拆方研究中广泛应用，可借此确定各组分的药理作用并找出其中的有效成分。
9.顺序均衡随机设计：主要用于中药临床研究。是先将对药效影响较大的因素（如病情、病程等）列在分组表左侧，使这些因素在各组中分布均衡，再按就诊顺序随机分组的设计法。
（四）中药药理实验研究设计的特殊性
中药药理实验设计应注意其特殊性。尤其是要以中医药的基本理论为指导，开创既保留中医药传统经验，又应有中西医药结合特色的方法。
中药研究的方法、内容及药理作用的阐明，与一般药物的研究不尽相同，通过长期的医疗实践，中药逐步积累和总结一套具有独特体系的药物作用规律，如药物的四气五味、归经、升降沉浮、补泻及配伍等。既要运用现代科学原理和方法对这些规律进一步加以论证和阐明，又应注意继承与发展传统医药的特点。中药药理实验设计需要考虑下列各点。
1.中药质量的标准化，避免各种影响因素：中药生药品种复杂，如不经过品种鉴定，其实验研究结果就很不可靠。还有不同的药用部位、产地、采集季节、贮藏以及加工炮制等可能会影响到其主要成分的含量和药理作用。因此，有时虽为同一名称的中药，其实验结果各地报导可能不同，甚至相反。除了考虑实验方法、实验对象的差异外，上述各因素也应重视。
2.结合中医药基本理论，注意中医药特色：中药药理的实验研究，目前尚未形成独立的系统方法，可以应用现代药理实验方法来进行。但若脱离了中医药理论与传统的经验，则往往丢失了中医药的特色。若只能强调提取中药的有效成分，采用分析的实验方法，就容易忽视中药复方与整体的综合性实验研究。中医的辨证论治与组成复方用药的特点，在中药药理实验设计中应予重视。目前比较成熟的方法创制类似临床各“证”的动物病理或生理模型来实验研究中药及复方的药理作用。例如肾阳虚表现为下丘脑-垂体-肾上腺皮质轴的功能下降，运用补补肾阳药治疗后上述功能可得到恢复，这样既论证了药理作用，又阐明了中医药理论，对中医肾阳虚与补肾阳药的实质有所了解，有利于保持与发展中医药特色。
3.加强多学科配合，理论密切联系实际：中药药理研究既验证中医药理论与经验，又要有所创新。对单味中药或复方进行初筛时，可从粗制着手，进一步可深入探讨其有效成分，发现新的药理作用与用途。改进制剂，降低毒性，丰富与提高中医药水平。这些应与临床使用结合，与多学科配合才能实现。
4.采用现代化的仪器设备与方法，不断提高实验研究的质量与水平：中药药理的实验研究除采用传统的一般药理等指标外，尚需要运用生化、免疫、分子生物、生物物理及临床等新方法，采用各种现代化的仪器设备，放射性同位素、高效液相分析仪、电子计算机等高新技术，观察指标从整体、组织器官、细胞、亚细胞和分子向纵向发展，有利于阐明中药作用的本质和规律。例如分析“证”的病理生理模型时，常测定各组组织器官cAMP、cGMP、前列腺素及各种递质的含量，体内或排泄物中肾上腺皮质类固醇的含量等，这些都必须借助现代化的手段，认识才能不断深化。
第二章 中药药理学总论实验
中药药理学是在中医药理论指导下运用现代科学方法研究中药和机体(包括病原体)相互作用及其作用规律的科学。中药药理学的研究内容主要包括两个方面[1]：①研究中药对机体的作用、作用机理以及产生作用的物质基础(化学成分)，即中药药效学的研究；②研究机体对中药的处理，包括中药的吸收、分布、转化和排泄，即中药药物动力学的研究。
一、 中药药效学的研究
中药药效学除了研究中药的基本作用和作用方式以外，一个重要研究方向是对影响中药发挥疗效的因素的探讨。影响中药药理作用的因素有诸多方面。药物因素包括药物的基原、产地、采收季节、贮藏、炮制、剂型、制剂、剂量等；机体因素包括年龄、性别、精神状态、遗传情况等生理因素和肝、肾功能障碍、病理状态等病理因素；同时环境因素也不容忽视。这些因素对中药药理作用都会产生明显的影响。[1],[2]
中药炮制是中药制药中不可或缺的传统工艺。中药在应用前或制成各种剂型前都要进行一般或特殊的炮炙，炮炙后其化学成分的质和量都会发生一定的改变，其药理作用的强弱和作用的方向亦随之有一定的改变。陈嘉谟《本草蒙筌》中提到“酒制升提；姜制发散；入盐走肾而软坚；用醋注肝而住痛……”炮制可从以下方面影响药理作用：
1． 消除或降低毒性 如附子中含有乌头碱，对心脏有毒性，可致心律失常甚至心室纤维颤动，经过浸漂、煎煮等炮制过程，使乌头碱分解破坏、毒性降低，但附子中的强心成分消旋去甲乌药碱耐热，故熟附子保留了强心作用，而毒性较生附子大大降低。
2． 增加药效 如延胡索的有效成分为生物碱，水煎液溶出量甚少，醋炒后，延胡索中生物碱与醋酸结合成易溶于水的醋酸盐，故水煎液溶出的总生物碱含量增加，故镇痛作用加强。
3． 加强或突出某一作用 如生大黄主要有泻下作用，炮制后的制大黄出现较强抗茵作用。因为生大黄泻下的主要成分为结合型蒽苷(如番泻苷A、B、C、D等)，其游离苷不具致泻作用，是抗菌成分(如大黄酸、大黄素、芦荟大黄素等)。酒大黄中结合型蒽苷损失1/4，熟大黄中结合蒽苷减少1/2，大黄炭中结合蒽苷减少4/5，故炮制品的泻下作用都比生大黄为弱，而抗茵作用等增强。
研究炮制对中药作用影响的思路大体如下：针对药物的作用选用相应的动物模型，分组，分别给以炮制前后或不同炮制方法的药物，观察并记录药物的作用，采用适当的统计学方法比较不同给药组之间药物作用的差异，最终得出相关结论。
二、 中药药物动力学的研究
中药药物动力学研究，其研究对象是中药，是指在中医药理论指导下，利用动力学的原则与数学处理方法，定量地描述中药有效成分、有效部位、单味中药和中药复方通过各种给药途径进入机体后的吸收、分布、代谢和排泄等过程的动态变化规律。一般而言，对中药的吸收、分布、代谢和排泄各有其相应的实验方法，但目前主要是通过对中药对数药物浓度-时间曲线（C-T曲线）的测定，来间接推算出药物的大略动力学特性。目前主要C-T曲线测定方法有如下几种：
1． 血药浓度法
以中药中的一种或几种成分为指标成分，测定其血药浓度，建立浓度－时间曲线，得到药动学参数，以此来代表整个中药的药动学规律。这种方法操作简单，测定快速，并且具有灵敏度较高、专一性强、重现性好，回收率高等优点。采用血药浓度法对中药药代动力学进行研究的关键问题是，一要解决如何选定中药中的指标成分（一个或多个），用于表示整个中药的药物动力学指标；二是如何利用先进的科学仪器和检测手段，对指标成分（包括代谢产物）迸行定性定量测定。常用测定已知成分在血液中的分析方法有分光光度法、原子吸收光谱法、薄层层析法、薄层扫描法、高效液相色谱法、气相色谱法、核磁共振、放射性同位素法、放射性免疫法、酶联免疫法和多种联用技术等。该方法需要注意以下两个方面：①中药主要成分在复方和单味药中同化学纯品的药动学参数的差异；②中药中各个成分之间的相互作用，是否由于配伍了其它成分使其药动学参数发生改变等方面进行研究。
2． 生物效应法
70年代Smolen等提出了以药理效应指标测定药动学参数，以药物的效应为测定指标来间接反映药物服用后的体液浓度，并依照相应的转化原则来计算药物的动力学参数。目前此方法己广泛用于中药药动学研究中，主要包括药理效应法、药物累积法和微生物法。生物效应法研究中药的药代动力学更加符合中医中药基本理论，体现了中药的整体观。但是中药药理作用具有多样性，实验中如何选择最合理的考察指标是个关键问题，而且本方法由个体差异较大，灵敏度和重现性不如血药浓度法。
2.1 药理效应法
是以药效为指标测定药动学参数的方法。其基本思想是假定药物在体内呈线性配置，药物在作用部位的浓度与给药量成正比，而作用部位的浓度又与药物效应强度有对应的函数关系。给药后某一时刻作用部位药物浓度与药效强度的函数关系，可用给药量与药效强度的函数关系来表示，由此进行摸型分析和推算药动学参数。
2.2药物累积法
又称毒理效应法，观测指标为药物的毒性反应，认为血药浓度与药物蓄积性相关联，而药物蓄积性与动物急性死亡率相关联，即给多组动物按不同间隔时间给药，以不同时间体存百分率的动态变化来反映药物血药浓度的变化，依此推算药动学参数。主要适用有毒中药的安全性评价研究。
2.3微生物法
又称琼脂扩散法，其原理主要是有试验菌株的琼脂平板中抗菌扩散产生的抑菌环的直径大小与抗菌药物浓度的对数呈线性关系。具有抗菌活性的中药动物或人体服用后，在各个时间点采取体液样品，然后将各样品加入具有适宜试验菌株的琼脂培养板中，通过测定抑菌环的直径来反映体液中样品浓度，然后按照药代动力学原理确定房室模型，并计算有关的药动学参数[3]。微生物法方法简单，指标明确，操作容易，重复性较高。但是生物样品中的成分浓度较低，很难达到抑菌浓度，特异性不高；而且测定结果中包括具有抗菌作用的代谢产物。因此本法在中药药动学研究中，还处于摸索阶段。
国内目前对中药药代动力学研究大多数是采用血药浓度法，其核心为能准确、精密、可重复的测定或表达出药物的体液浓度。对药物体液浓度测定方法的评价主要包括了以下同个方面的内容[4]：
① 特异性 特异性即专一性，是评价方法优劣的关键，即所建立的方法必须特异地测定待测物质，不得被生物机体内源性化合物或非指标成分的药物成分所干扰。
② 精密度 精密度又称之为重复性，测得的结果应能够重复。精密度用相对标准差即变异系数(CV)来表示。对同一样品同一方法多次测定，得标准差和均值的百分比值即为CV。除了做日内精密度外，最好应做日间精密度。前各系指同一天内对同一样品多次测定，计算平均值、标准差及变异系数。后者系指连续数天，每天测定同一样品计算平均值、标准差和变异系数。最好同时做高中低三种以上浓度的样品。
③ 准确性 准确性用于衡量测定结果与真实值之间的符合程度，一个良好的方法所得结果应与真实值一致或十分接近。准确性多用回收率来表示。回收率系将待测定的中药指标成分纯品加入到生物样品中、以测得的含量与加入的量相比求出回收率。求回收率时应在线性范围内选择高中低三种不同浓度同时测定。回收率在90％-100％为好，但一般应大于75％。
④ 线性范围 在药物浓度测定和计算中，药物浓度一定范围内与测定信号具有线性关系，其相关系数一般应为0.99。同时方法的线性范围应至少为20倍，即通过实验测出的具有线性关系的浓度范围中最高浓度应为最低浓度的20倍以上。工作曲线应至少由5个浓度组成，并应覆盖整个待测定生物样品的浓度。
⑤ 检出限 检出限系指用该方法最低能测得的样品中药物的含量，它取决于测定技术的灵敏度以及样品制备过程中稀释或浓缩的程度。多数药物的有效血药浓度在每毫升毫微克或微克水平，测定方法的检出限必须在这一水平内。同时检测限还应满足至少能检测出3-5个半衰期或能检测出最大血药浓度1/10-1/20。
⑥ 取样量 系指为测出有效药物体液浓度所需的生物样品的量。它取决于方法的检出限及血药浓度。如检出极限高，血药浓度低，则取样量大，表明方法不可取。
实验2.1 延胡索和醋制延胡索镇痛作用的比较（热板法）
【目的】学习热板法镇痛实验方法；观察延胡索和醋制延胡索镇痛作用的差异。
【原理】将小鼠置于恒温的热板上，以热刺激小鼠足部产生疼痛反应（舔后爪），通过测定小鼠痛阈（出现疼痛反应即舔后爪时间），通过延胡索组与醋制延胡索小鼠痛阈的差异，判定药物有无镇痛作用。
【器材】1ml注射器、鼠笼、天平、小鼠热板仪。
【药品】延胡索水煎醇沉液4g/ml、醋制延胡索水煎醇沉液4g/ml、生理盐水。
【动物】小鼠，雌性，体重18 ～ 22 g。
【方法】
1、准备工作 调定热板仪温度使之恒定于55±0.5ºC。
2、小鼠的选择及正常痛阈的测定 取小鼠数只，依次热板仪上，按“开始”键记录时间。自放入热板仪至出现舔后足所需的时间（秒）作为该鼠的痛阈值。凡在30秒内不舔足或逃避者弃置不用。取筛选合格的小鼠15只，随机分为3组，各鼠编号后重复测其正常痛阈值一次，将所测两次正常痛阈平均值作为该鼠给药前痛阈值。
3、给药及给药后痛阈值测定 按0.2ml/10g腹腔注射给药，第1组给予延胡索水煎醇沉液，第2组给予醋制延胡索水煎醇沉液，第3组给予生理盐水作为对照。给药后10min、30min后各测小鼠痛阈值1次。若放入烧杯内60秒仍无反应，应将小鼠取出，痛阈值以60秒计。
4、实验完毕后，按下列公式计算不同时间的各鼠痛阈提高百分率：
【结果】
1、将延胡索水煎醇沉组与生理盐水组痛阈提高百分率进行组间t检验，并比较各组平均值，确定延胡索有无镇痛作用；
2、将醋制延胡索水煎醇沉组与生理盐水组痛阈提高百分率进行组间t检验，并比较各组平均值，确定延胡索有无镇痛作用；
3、将延胡索水煎醇沉组与醋制延胡索水煎醇沉组痛阈提高百分率进行组间t检验，并比较各组平均值，确定炮制前后药物镇痛作用的差异；
【注意事项】
1、小鼠以雌性为好，因雄性小鼠受热后阴囊易松弛触及热板；
2、室温对本实验有一定影响，以15 ～20ºC为宜，过低小鼠反应迟钝，过高则小鼠过于敏感易引起跳跃，影响结果准确性；
3、正常小鼠放入热板后易出现不安、举前肢、舔前足、踢后肢等现象，这些动作不能作为疼痛指标，只有舔后足才作为疼痛指标。
【思考题】
根据实验结果讨论炮制前后延胡索产生镇痛作用差异的原因。
实验2.2 附子炮制前后致小鼠中毒表现的影响
【目的】观察生附子和制附子致小白鼠的死亡数量，评价炮制对附子毒性的作用。。
【器材】1ml注射器、鼠笼、天平。
【药品】生附子水煎醇沉液0.5g/ml、制附子水煎醇沉液0.5g/ml。
【动物】小鼠，雌雄各半，体重18 ～ 22 g。
【方法】小鼠20只，雌雄各半，随机分为2组。按0.2ml/10g腹腔注射给药，一组给予生附子水煎醇沉液，第2组给予制附子水煎醇沉液。观察并记录30min内各组小鼠死亡情况。
【结果】将生附子水煎醇沉液组与制附子水煎醇沉液组动物死亡数进行组间t检验，并比较各组平均值，确定两者毒性的大小。
【注意事项】生附子和制附子水煎液制备时均应煎煮4小时以上。
【思考题】
根据实验结果讨论炮制前后附子毒性作用差异的原因。
实验2.3 黄芩苷健康家兔体内药物动力学的研究（高效液相色谱法）[5]
【目的】熟悉血药浓度法研究中药药物动力学的基本步骤；熟悉用高效液相色谱法测定血清中药物浓度的操作方法；掌握血清中药物的萃取、浓集等预处理基木技术。
【原理】黄芩苷口服给药生物利用度极低，为了改善单体化合物的治疗效果，常采用注射给药；其在血液中药物浓度的测定常使用高效液相色谱法进行。
【器材】高效液相色谱仪、涡旋混合器、氮吹仪、超声波振荡器、兔盒、天平、离心机、水浴锅、离心管、容量瓶。
【试剂】甲醇、乙酸乙酯。
【药品】黄芩苷水溶液20mg/ml。
【动物】家兔，雌雄不限，体重约2kg。
【方法】
1、家兔2只，随机分为给药组和空白组。空白组耳缘静脉采血20ml。给药组耳缘静脉给予黄芩苷水溶液3ml/kg后，于0、10、15、30、60、90、120min于对侧耳缘静脉采血1.5ml。
2、空白组血液和给药组血液于37+0.5℃水浴中温孵30min，4000rpm离心15min，分离各样本血清。
3、取给药组血清0.5ml，加入乙酸乙酯1m1，置涡旋混合器上萃取10分钟，4000rpm离心10min，吸取上清液0.5ml入尖底试管中，将试管通氮气吹干，残渣中加入50u1甲醇溶解，4000rpm离心10min，取上清液作为供试品溶液。
4、取黄芩苷对照品，加蒸馏水溶解并定容使成800μg/ml的贮备液；分别用蒸馏水将黄芩苷贮备液稀释成以下5种浓度稀释液：400μg/ml (a)、200μg/ml (b)、100μg/ml (c)、25μg/ml (d)、5μg/ml (e)。取干燥试管5支，编号分别为A、B、C、D和E，各管中均加入0.5ml空白血清，再于各管中分别加入对应编号的黄芩苷稀释液50μl，涡旋20s，混匀。照给药组供试品制备方法制备工作曲线供试品溶液。
5、精密吸取各供试品溶液20μl，注入液相色谱仪，照如下色谱方法测定：
色谱柱：C M烷基键合相柱(250×6mm，5μm)
检测器：紫外检测器254nm检测，灵敏度0.02AUFS
流动相：0.01mol/L NaH2PO4 (PH2.5)-甲醇(50：50)，用前经过滤并用超声波脱气处理，流速为1ml/min。
记录各样品中黄芩苷色谱峰的峰面积，进行计算。
【结果】绘制出工作曲线后，将给药组各时间点供试品峰面积代入工作曲线，求出各点的血药浓度，给制出C-T曲线，分别进行房室模型拟合的统计矩法式计算，求出黄芩苷静脉注射给药时的各药物动力学参数。
【注意事项】
1、取血时注意勿使血细胞破裂，以免干扰后续测定，正常取血后分离得到的血清应为淡黄色。
2、工作曲线可由教师制备后供学生使用；也可不制备工作曲线，以各供试品中黄芩苷峰面积作为C-T曲线中血药浓度的表征值。
【思考题】
根据实验结果设计合理的黄芩苷注射液给药方案。
参考文献
1. 沈映君主编. 中药药理学. 北京: 人民卫生出版社, 2000. p3
2. 王本祥主编. 现代中药药理学. 天津: 天津科学技术出版社, 1997. p15
3. 王晓红.苦参碱及氧化苦参碱的药代动力学与药效动力学.药学学报，1992,27(8):p572
4. 韩国柱主编. 中草药药代动力学. 北京: 中国医药科技出版社, 1997. p200
5. 阴健, 任天池. 黄芩苷及其在清开灵注射液中的药代动力学研究. 中国实验方剂学杂志, 1998, 4(4):31
第三章 解表药
解表药是一类能发散表邪，解除表证，治疗外感性疾病为主要作用的单味中药和复方的统称。根据外感六淫邪气和机体功能状态的不同，解表药有辛温解表、辛凉解表、扶正解表之分，临床常用的单味中药有麻黄、桂枝、羌活、防风、白芷、薄荷、银花、柴胡、桑叶等，常用复方有麻黄汤、桂枝汤、九味羌活汤、银翘散、桑菊饮、升麻葛根汤、人参败毒散、参苏饮、加减葳蕤汤等。现代药理研究结果证明，这类方药具有发汗、解热、抗炎、抗病原微生物、抗过敏、免疫调节等作用，尚有镇痛、镇静、抗氧化、抗衰老、抗癌、降血糖、降血脂，保肝利胆等作用。在研究解表药时，主要根据外感的主要症状（如汗出、发热、头痛、咳嗽等）和外感六淫邪气（病原微生物）设计实验指标，具体到某一味中药或某一个特定复方时，应紧密结合该药（处方）的功能主治设计其它研究指标。常用的实验方法如下：
1. 发汗作用 发汗是中医临床治疗表证的重要手段之一，《内经》云：“其在皮者，汗而发之”，指表证可通过发汗使外邪从汗而解。不少辛温解表方药能使汗腺兴奋，汗腺活动增加，表现为汗液分泌增多。其发汗机理可能与抑制汗腺导管对钠离子的重吸收或与兴奋外周α-受体等有关。这种发汗作用有利于祛寒散热。
（1） 目测法：小鼠是最常用实验动物。根据给药后机体发汗情况，按发汗范围分五级目测打分。该法操作简单，对实验仪器无特殊要求，易于实行，但存在着外界温度影响较大，主观性强，人为误差大等不足，可以作为药物发汗作用的初筛研究。
（2） 汗液着色法：大鼠、小鼠均可应用于实验。该法根据碘－淀粉接触汗液呈蓝色的反应原理，根据显色反应后汗点(深紫色着色点)出现的时间、颜色和数量判断药物的发汗强度，并可以粗略定量（汗点数）。该法操作简单易行,但受环境因素影响大,在控制环境条件下,使用该法无疑是解表发汗方药初筛的较好方法。
（3） 汗液定量法：大鼠是最常用的实验动物。该法是利用硅胶吸湿力强的特点,将大鼠双后肢足跖装入特制的集汗管内，按时用一定流量的干燥空气，将足跖部分泌的汗液吸入定量的干燥硅胶管内进行称重，比较给药前后干燥硅胶管的重量变化,即可求出发汗量的多少，即:汗量(ｍｇ)=干燥管湿重-干燥管原重。此法操作略为繁琐，需控制实验温度和湿度,但重复性好，具有较好的定量作用，可以更加直观的反应药物发汗作用的强度。
（4） 皮肤电生理技术法：该法的原理是在电流一致的条件下，汗腺分泌情况可以间接的通过皮肤电压反射的潜伏期及电位振幅的改变来反映，尤其是皮肤电反射可以作为观察汗腺分泌的一个灵敏指标。该法对实验仪器要求较高，但指标反应灵敏，客观，是一种值得推广的研究方法。
（5） 汗腺上皮组织形态学研究法：利用光镜和透射电镜技术观察汗腺上皮细胞的细胞形态和超微结构变化，可以在皮肤表层无明显可见的汗液情况下,分析汗腺细胞的分泌活动情况。尤其对发汗作用较弱的药物此法研究具有较大的优势，但本法实验相对而言，对实验设备和经费要求较高。
（6） 腋窝部皮肤汗腺导管内径测定法：根据发汗时皮肤汗腺导管就会扩张，其扩张的程度与发汗量之间存在一定的正相关的机制，通过测定腋窝部皮肤汗腺导管的内径可以反应药物的发汗作用和发汗强度。
2. 解热 发热是各型表证的常见症状，是由各种刺激因子影响机体产生内热源而引起体温调节中枢调定点上移所致。解表方药中多数具有散热功效。实验和临床实践证实，许多解表方药对异常升高的体温有明显的解热降温作用，显效快而维持时间较短是其解热特点。解热机理较复杂，可能与抑制发热的多个环节，如内生性致热源生成、释放、降低机体的产热过程有关。解热实验常用动物为大鼠、家兔，实验时首先在正常的动物皮下或静脉注入一定量的致热源（如伤寒、副伤寒菌苗；细菌培养液；内毒素；内生性致热源；啤酒酵母混悬液；松节油和二硝基苯酚等），造成动物发热模型，然后给予试药物治疗，观察受试药物有无解热作用，解热强度如何。大鼠发热模型主要用于药物解热作用的初筛，家兔模型发热反应典型而稳定，药物解热作用强度和机理研究应选择家兔模型。一般研究中往往采用两种发热模型相互验证，保证结果的科学性和可靠性。具体实验方法参考清热药。
3. 镇静、镇痛 头痛、身痛是表证的常见证候。解表药中出麻黄除中枢神经系统有明显的兴奋作用外，其余各药皆具有不同程度的镇静、镇痛作用，表现为自主活动减少，延长催眠药的睡眠时间，有的还有抗惊厥作用，并能提高痛阈值。镇静作用常采用活动计数法、延长睡眠时间法、抗惊厥法等，以观察药物对中枢神经系统的影响；镇痛作用常利用动物的不同部位，进行热刺激、光电刺激、机械刺激和化学刺激等方法引起疼痛反应，观察药物对痛觉的影响，了解药物有无镇痛效果，强度如何，常用的研究方法有小鼠热板法、小鼠扭体法、大鼠尾尖部压痛法等。具体实验方法参考安神药和祛风湿药。
4. 镇咳、祛痰、平喘 咳嗽是表证的常见症状，解表药大多数有镇咳祛痰的作用，有些药物还能扩张支气管。镇咳作用常用的实验方法有浓氨水喷雾法、二氧化硫刺激法、电刺激发等；化痰常用器官段酚红法、毛细玻管法、器官纤毛运动观察法等；平喘常用喷雾致喘法、肺溢流法等，通过实验观察药物的镇咳、祛痰和平喘作用的有无与强弱。具体实验方法参考止咳、化痰、平喘药。
5. 抗炎 呼吸道的炎症是引起咳、痰、喘症的重要原因，也是表证的基本临床表现。不少解表方药能抑制炎症早期毛细血管的通透性，并能抑制肉芽形成。其抗炎机理可能与兴奋垂体-肾上腺等有关。明显的抗炎效果有利于上呼吸道炎症的消除。非特异性炎症可分为三个阶段(早、中、晚)，各阶段都有多种实验方法，如急性关节肿胀法、毛细管通适性测定法和白细胞游走实验法、棉球肉芽肿法以及炎症介质测定法等；免疫性炎症模型有佐剂性关节炎、Ⅱ型胶原诱导的关节炎及抗原性关节炎等模型。通过实验，观察药物对炎症各期的影响，了解药物的抗炎强度、抗炎特点和抗炎机理或用以筛选炎症性疾病的有效药物和探讨作用机理。具体实验方法参考祛风湿药
6. 抗菌、抗病毒 表证是由外邪客表所致，细菌、毒素及病毒可视为外邪之一，解表方药对多种细菌如金葡菌、溶血链球菌、痢疾杆菌等有抑制作用；此外对流感病毒、单纯疱疹病毒等皆有较强的体内外抑制效果。
[1]抗菌研究方法：包括体外实验和体内实验(整体动物实验法)两种。
(1)体外实验：
①连续稀释试验(二倍稀释法)。实验在试管内进行，用肉汤将中药制剂稀释成各种浓度，然后在各管内接种等量的供试菌，置37℃孵箱培养18、24小时，观察各管内细菌生长情况，以判断该药的抑菌强度。本法是中药抗菌最常用的方法，能较难确地测得药物抗菌力的大小；
②扩散实验(平皿法)。将供试菌先接种在琼脂表面，再挖小孔或放置铜圈，并在孔内加入一定量的中药煎液，药液即向周围培养基扩散，置培养箱培养18~24小时，若有抗菌作用即在小孔周围形成抑菌圈，以抑菌圈直径的大小判断药物抗菌力的强弱。具体方法较多：有平皿打孔法、泡沫海绵栓子法、管碟法、贴纸片法、挖沟法、画线法等。本法操作简便，是常用的方法之一。此外，还有挥发性物质的熏蒸试验法和氯化三苯四氮唑(TTC)快速试验法等测定药物的抗菌效力。
(2)体内实验(实验治疗法)：本法是先在正常动物体内注入一定量的菌液或毒素造成一定的感染模型，然后实验洽疗，观察药物抗感染的效果。
[2]抗病毒研究方法：病毒只在活细胞内繁殖，且只对一定的细胞有亲和力。常用的方法有三种：组织培养法、鸡胚培养法和整体动物实验法。观察药物对体外、体内病毒感染的影响。
7. 抗过敏 支气管哮喘是肺部过敏性疾病，不少解表方药能抑制过敏介质的释放，抑制补体的活性和抗体的产生。常用的实验方法有肥大细胞脱颗粒实验、豚鼠过敏实验、迟发性超敏反应等等。
8. 对免疫功能的影响 大部分解表方药对机体的非特异性免疫功能有促进作用。表现为天然杀伤细胞（NK细胞）活性升高，巨噬细胞或白细胞的吞噬功能加强。免疫功能的提高，有利于机体抵御外邪的侵袭， “正气存内，邪不可干。”但对特异性免疫功能的影响规律性不强，有些能促进细胞免疫和体液免疫；有的能抑制细胞免疫和抗体的产生；还有些药物对免疫功能呈双向调节作用。本法以观察药物对免疫功能的影响，阐明解表药作用的综合效应。具体实验方法参考补益药。
9. 其他
用电生理法(中枢放电)、生化测定法(cAMP、DNA、血糖、血脂等测定)，了解解表
药的作用机理；同时根据不同的药物功效和特点设计其它实验，如降血糖、降血脂、保肝利胆等。
此外，由于解表方药在临床上主要用于外感表证或风水水肿、喘咳、痹症、疮疡、风疹等兼有表邪者，研究时应根据传统的中医药理论并结合现代医学对该病的病因、发病机制的认识，合理设计研究内容。现以感冒为例作一说明。
感冒即外感表证，是六淫外邪袭表所致，“温邪上受，首先犯肺”，因此外感证临床主要表现为卫阳被遏和肺系症状。现代医学研究表明，感冒是急性上呼吸道炎症为主的一组症状群，其中绝大多数由病毒感染引起（包括感冒和流感），极少数由变应原等非传染性因素引起。机体感受外邪是否发病，与机体的“正气”直接相关，此即“正气存内，邪不可干”。因此直接的抗病毒和增强机体免疫功能就是解表药的主要研究内容。一般而言，感冒具有自限性，其自然病程为1～2周，但临床主要症状往往是影响患者生活质量和导致并发症的主要原因，因此缓解或解除主要症状亦是解表药研究不可缺少的一个研究方面。故解表方药研究至少应该设计以下几个方面的实验：（1）抗病毒实验（体外和体内），针对引起感冒的主要病毒进行研究，如流感病毒、腺病毒、副流感病毒、冠状病毒等；其方法主要有细胞（组织）培养法、鸡胚法和整体动物保护实验；此外还可根据具体研究情况选用血细胞吸附抑制实验、干扰素诱生实验等；（2）免疫增强实验，主要从特异性免疫和非特异性免疫着手，如局部粘膜免疫功能测定（如鼻咽粘膜局部分泌性IgG测定）、干扰素诱生实验、T细胞转化率、NK细胞活性测定等；（3）减轻或缓解临床主要症状：恶寒、汗出异常、发热、头痛、烦躁等是感冒临床最常见症状，因此发热实验、解热实验、镇痛实验、镇静实验、抗炎实验、抗过敏实验等应根据研究方药的特点和研究具体目的选择进行研究。（4）对主要兼症的研究：感冒往往容易表现出肺系症状（肺失宣肃），如咳嗽、咯痰、胸闷气喘等，因此解表药可根据具体情况选用镇咳、祛痰、平喘等动物模型进行相关研究。
实验3.1 麻黄配桂枝对大白鼠足跖汗液分泌的影响（着色法）
[目的] 学习用定性的方法观察辛温解表药对汗液分泌的影响。掌握麻黄、麻黄配桂枝发汗作用的异同。
[原理] 该法于1986年由沈映君教授首创。大鼠足跖部肉垫上有汗腺分布，可利用碘与淀粉遇汗液产生紫色反应的机理，来观察和测定药物对大鼠汗液分泌的影响。
[器材] 大鼠固定器、大鼠灌胃器、固定架、医用胶布、注射器（2.5ml）、放大镜、秒表、棉签、针头。
[药品] 麻黄水煎液（1g/ml）、麻桂水煎液（1g/ml）、毛果芸香碱溶液（1mg/ml）、苦味酸液、蒸馏水、无水乙醇、和田－高垣氏液
[动物] 大鼠，体重180～200g
[方法]
1.药液的制备：
麻桂水煎液：取麻黄30g、桂枝20g，常规制备，浓缩成1g/ml溶液。
麻黄水煎液：取麻黄30～50g，常规制备，浓缩成1g/ml溶液。
和田－高垣氏液：A液：取碘2g溶于100ml无水乙醇，振荡混匀即可。
B液：取可溶性淀粉50g，蓖麻油100ml，两者混匀即成。
2.取健康大鼠12只，称重，用苦味酸液标记，随机分为4组，每组3只。
3.用棉签蘸无水乙醇擦干净大鼠足底部后，甲组大鼠灌服蒸馏水（1ml/100g）、乙组大鼠腹腔注射毛果芸香碱溶液（3.5mg/100g）、丙组大鼠灌服大黄水煎液（1ml/100g）、丁组大鼠灌服麻桂水煎液（1ml/100g），给药后分别将大鼠固定于大鼠固定器中，暴露双下肢，并用医用胶布轻轻缚住，防治大鼠活动时下肢回缩到固定器中。
4.给药后30min棉签拭干大鼠足跖部原有汗液，然后在大鼠足跖部皮肤涂上和田一高垣氏试剂A液，待干燥后，再薄薄涂上B液，然后用放大镜观察深紫色着色点(即汗点)出现时间、颜色和数量。待汗点出现后，连续观察30min，每5分钟观察记录一次。
[结果] 按表3－1记录
表3－1 麻黄、麻黄配桂枝水煎液对大鼠足跖部汗液分泌的影响
[注意]
1. 固定大鼠时，操作应轻柔，尽量避免大鼠挣扎出汗而影响药效评价。
2. 为避免影响实验结果的准确性，观察大鼠足跖部汗点出现时间，在同一批实验中务必一致。
3. 对于发汗作用不强的解表方药，可于第一次给药1h后适量加强给药一次。
4. 实验室温度控制在26±1℃左右，实验室湿度控制在65±5％。
[其它几种发汗方法简介]
汗液测定主要有直接测定和间接测定。直接测定除着色法外，尚有目测法、组织形态法、电生理法、汗液定量法、皮肤汗腺导管内径测定法几种；间接测定法有唾液测定法、泪液测定法。目测法主观因素影响较多，可以作为药物是否有发汗作用的初筛，着色法操作简单，不需特殊仪器，但对发汗作用较弱，如汗液分泌不足者则不易鉴别；汗液定量测定法装置虽简单,但要求较高且影响因素较多，不容易操作；组织形态观察法和皮肤汗腺导管内径测定法均是在显微镜下评价，或观察汗腺细胞的形态变化，或测定汗腺导管内经，虽能较为客观而准确地反映汗腺活动状态，但实验周期较长，成本较高，需要一些较为昂贵的仪器才能完成；至于间接测定法可以作为发汗作用的一个测定方法，但不仅直接测定法直观。具体试验中应根据研究的对象、目的等不同选用合适的实验方法。
[思考]
1. 麻黄、麻黄配桂枝发汗作用有何特点？
2. 麻黄配桂枝为何有协同发汗的作用？
第四章 清热药
清热药是指药性寒凉、以清泻里热为主要治疗作用的药物或方剂。根据药物功效和主治不同，清热药分为清热泻火、清热凉血、清热燥湿、清热解毒、清虚热药五类。临床常用的清热药有黄芩、黄连、石膏、知母、玄参、丹皮、银花、连翘、板蓝根等，常用的清热方剂有白虎汤、黄连解毒汤、清营汤、黄连解毒汤、茵陈蒿汤、当归六黄汤等。现代药理研究证明，里热证主要是多种病原体感染所致的急性传染性、感染性疾病，急性感染性疾病是清热药的主要适应症，这类药物多具有抗病原微生物、抗毒素、解热、抗炎等作用，此外尚有免疫调节、抗肿瘤、降压、保肝等作用。在研究清热药时，一般从抗病原微生物、解热、抗炎等方面设计实验指标，并结合药物的具体功效和临床应用选择其他项目和指标进行实验。常用的实验方法如下：
1.抗病原微生物实验方法
急性感染性疾病是清热药的主要适应症，病原微生物是引起感染的病因，可根据研究目的选用合适的病毒、细菌、真菌、螺旋体或原虫进行实验。用体外试验(含细胞培养)观察药物的抗病原体作用的敏感谱及最低有效浓度，用感染动物的保护作用试验观察药物的全身用药效果。
(1)抗菌试验：致病性细菌是引起急性感染的最主要病原微生物，应根据中药的临床功效选择合适的细菌，但因中药对急性感染的治疗往往具有“广谱”的特点，因而在进行清热药的抗菌试验时，宜选用较广泛的菌株进行体外抗菌试验，选用敏感菌株进行感染动物的保护试验。
①体外抗菌试验：体外试验仅用于测定药物对细菌固有的敏感性，它以最小量药物抑菌或杀菌浓度为终点，一般测定的是抑菌终点，而非杀菌终点。其优点在于方法简便、用药量少、实验条件易于控制，实验周期短，药物可以定量。试验条件应尽可能调整至类似体内的情况，使实验结果有参考价值。培养基应能使被测细菌生长良好，培养温度和pH应符合生理情况。细菌必须生长新鲜丰盛，细菌接种量必须定量标准化，培养时间应限制在18或24小时，为特殊目的可延长培养时间，但必须所试样品在培养时间内不致变质。但体外实验也有一定的局限性，易受多种因素的影响，尤其是中草药中杂质较多，一些非抗菌性成份（如鞣质）可通过物理原因或非特异性抗菌原理抑制细菌生长，因此体外筛选阳性的药物必须通过体内实验验证后方可肯定。
表1列出药物抗茵作用研究常规应用的细菌，可根据清热药临床效用增加其它种细菌。如果研究发现药物对细菌有较强抑制作用时，应进一步测定其对临床新分离同一种细菌的数株或更多菌株的抗菌效力。
表1 清热药体外抗菌试验初筛选用的细菌
需氧菌
革兰氏阳性细菌
金黄色葡萄球菌
肺炎球菌
化脓性链球菌
粪链球菌
革兰氏阴性细菌
大肠杆菌
肺炎杆菌
普通变形杆茵
绿脓杆菌
伤寒杆菌
痢疾杆菌
流感嗜血杆菌
淋球菌
庆氧茵
脆弱类杆菌
坏死梭形杆菌
溶组织梭状芽孢杆菌
试验用培养基应根据细菌营养需要，但一般细菌则可选用肉汤培养基。
体外抗菌试验方法最常用的方法大致分为纸片扩散法、琼脂稀泽法和肉汤稀释法三大类。此外尚有平皿打洞法、挖沟灌药法、杯管法(牛津小杯法)、滤纸条法等，基本原理、操作均同纸片扩散、琼脂稀释或内汤稀释法，属此三法的变法。纸片扩散法：方法简单、快速，可适于大量样本的初步研究，宜于测定药物对快速生长的病原菌，如肠杆菌、葡萄球菌、大多数非发酵的革兰氏阴性杆菌等的抗菌作用；纸片法一般以抑菌圈的大小表示抑菌效果的强弱。琼脂稀泽法和肉汤稀释法均可测定MIC而作为体外最重要的抗菌作用研究方法，前者具有同时实验较大数量菌珠、容易发现污染菌等优点，缺点在于不易作亚培养而确定杀菌活性；后者一般而言与琼脂稀泽法有较好的结果一致性，但常常较前者更敏感、MIC值低，而且可以微量化，采用自动微量稀释装置可以简化操作程序，结果具有精确性和可重复性。
②体内抗菌实验：主要是观察药物与宿主相互作用，不仅可以反应药物对细菌的固有直接作用，而且可以反应药物对机体反应性的影响，特别是非特异抗感染力的影响、药物到达感染部位的能力、机体对药物的灭活与代谢等，实验结果可以通过半数有效量、治疗指数等反应，是最重要的抗菌研究方法，是判定药物有无临床价值的抗菌作用的最主要指标。
（2）抗病毒实验
抗病毒实验主要有细胞（组织）培养法、鸡胚培养法和整体动物实验法三种。组织细胞培养法是观察药物对病毒感染组织细胞的代谢和病变的影响，主要检测药物对病毒的直接作用，适应于大规模的筛选行研究；常用研究方法有抑制病毒致细胞病变法、抑制病毒空斑形成试验法、血细胞吸附抑制试验法、荧光定量PCR病毒定量法等等。鸡胚培养法主要观察药物对接种致死性病毒的鸡胚存活率或延长寿命等指标的影响，从鸡胚死亡的程度或时间可以反应药物的抗病毒活性；但因鸡胚细胞与哺乳动物细胞特别是人体细胞有一定的差异，现除药物初选外已经较少应用。整体实验法较前两种方法相比与临床有较强的相关性，常通过观察感染动物的致死量病毒来评价药物对病变的抑制率及死亡保护率等来反应药物的抗病毒效果。
抗其它病原体如真菌、支原体、钩端螺旋体、阿米巴原虫等基本同抗细菌和抗病毒实验。
（3）抗内毒素试验
抗内毒素研究可于体外、半体内及体内进行，可根据研究目的而选择，但常需相互结合以说明问题。中药抗内毒素作用研究最常用方法是体外鲎试验、半体内中和内毒素试验及动物保护试验相结合，体外鲎试验试验操作简单、可用定性或定量 试剂进行，适应于大批样品初筛研究；半体外内试验是将药物与内毒素体外孵育一段时间后再注射到小鼠、家兔或鸡胚以检测内毒素毒性的变化。上述两种试验都可以测定药物的最低抗度浓度，研究药物对内毒素的直接解毒效果。体内试验是观察药物对内毒素休克所致死亡的影响，是检测抗内毒素作用最终效果的可靠方法。
2.解热研究方法
解热作用是清热药的一个最重要的共性。发热是各种刺激因子影响机体产生内热原所引起中枢体温调定点上移所致，故解热实验常用生物刺激因子（如伤寒、副伤寒菌苗、细菌培养液、啤酒酵母混悬液等）或化学刺激因子（松节油、2，4－二硝基苯酚、蛋白胨等），采用皮下或静脉注射给予，引起动物（常用家兔、大鼠）机体发热，然后给予受试药物，观察有无退热作用。具体研究中应根据研究目的和条件选择致热方法。解热作用研究首推内毒素所致家兔的发热反应；机理分析或特殊研究目的，还可选用内生致热原生成及发热试验、微量PGE脑室内或下丘脑注射致热试验、Lipid A、IL-1、干扰素及TNF性发热试验等等。
3.抗炎试验
清热药主要对中、早期炎症有较好的疗效，部分药物对免疫性炎症有一定的治疗作用。炎症早期主要表现为毛细血管扩张、通透性亢进、渗出和水肿；中期主要是白细胞向炎灶聚集和血小板聚集；常用毛细血管通透性测定、鼠耳肿胀法、大鼠足肿胀法、胸膜炎试验及大鼠气囊滑膜炎等炎症模型，观察清热药物的抗炎作用。也可根据临床治疗疾病的不同选用其它炎症模型，如小鼠流感病毒性肺炎、大鼠大肠杆菌性腹膜炎、家兔肺炎球菌性角膜炎等。免疫性炎症可选用小鼠迟发行超敏反应、小鼠耳接触性皮炎、大鼠佐剂性关节炎、大鼠PCA试验等等。
4.免疫功能测定试验
机体免疫功能对感染过程有重要的影响，尤其在感染发病和转归上，免疫包括特异性免疫和非特异性免疫。用于筛选免疫药物常哟的试验方法有：
（1） 非特异性免疫功能测定：最常用的方法有免疫器官称重法和细胞吐噬功能测定法两种，前者是在给药一定时间后观察给药组和为给药组动物免疫器官（胸鲜、甲状腺、脾脏淋巴结等）重量的差异，后者主要是用药后计算吐噬鸡红细胞和羊红细胞胶体炭粒、刚果红染料炭粒、标记51Cr红细胞等数量来判断免疫功能是提高或抑制。
（2） 特异性细胞免疫功能测定：常用的试验方法有玫瑰花环形成试验、淋巴细胞转化试验、皮肤迟发型过敏反应试验等。
（3） 特异性体液免疫功能测定：常用试验方法有单向免疫扩散法、溶血空斑测定、血清溶血素测定、血清凝集素测定等。
5.其它
根据清热药个体性味、功效、主治的不同，可以进行其它相关实验的研究，如抗过氧化损伤、保护细胞器、抗肿瘤、降压、保肝等。
此外，由于清热方药在临床上主要用于里热证的治疗，研究时应根据传统的中医药理论并结合现代医学对该病的病因、发病机制的认识，合理设计研究内容。现以牙周炎（里实热证）为例作一说明。
牙周炎（实热型）属于里证、热证，其发病中医认为是胃肠积热，火热上冲所致，西医认为是菌斑细菌及其产物刺激所导致的牙周炎症反应，临床见牙龈出血、疼痛、甚至糜烂渗出等。牙周炎的发病不仅与牙周局部感染有关，亦与机体免疫功能有关。因此研究清热方药（清解胃肠积热）应该从以下几个方面着手：（1）驱邪：即抗病原体试验。牙周炎是一种感染性疾病，细菌感染是牙周炎的始动因素。细菌附着牙齿或软组织，形成菌斑，从而引起牙龈红肿、出血、牙槽骨破坏等，龈下菌斑的形成是牙周炎发生的基本条件，龈下菌斑主要是革兰氏阴性厌氧菌。因此研究药物对牙周炎是否有治疗作用首先要考虑药物是否有抗革兰氏阴性厌氧菌的作用，已经发现并确定与牙周炎有关的细菌如伴放线放线杆菌和牙龈卟啉单胞菌，可以采用体外和体内抗菌相结合的方法进行研究。（2）缓解症状：①抗炎：牙周炎是一种炎症，因此考虑设计抗炎试验，如渗出相炎症和增殖相炎症模型，特异性炎症模型，即牙周炎模型（如经口腔接种特异菌形成的牙周炎模型）；此外研究表明多种炎性细胞因子与牙周炎的发生、发展密切相关，如IL-1、IL-6、IL-8等，应该设计针对针对此类炎性因子的试验研究；②牙周炎伴有疼痛症状，对患者生活质量有较大的影响，故镇痛试验亦是考虑设计的内容之一；③牙周炎多伴有牙龈出血，针对出血可以设计止血试验，如凝血酶时间测定、出血时间测定、纤维蛋白溶解功能测定等。（3）扶正：“正气存内，邪不可干”，免疫功能，尤其是牙周局部粘膜免疫功能的正常与否，对牙周炎的发生发展有重要意义。尤其是现代研究发现牙周病原菌含有非特异引起B淋巴细胞大量增殖和分化的成分，因此针对牙周局部粘膜免疫和B细胞细胞的免疫功能测定也是必不可少的一个设计内容。
当然具体研究中，不同药物针对的重点不同，研究并不是要面面俱到，但根据研究方药的功能主治和现代药理研究成果进行合理设计是必须而且必要的。
实验4.1 鱼腥草对发热家兔的解热作用
[目的] 观察柴胡对家兔体温的影响；了解柴胡解热作用的特点
[原理] 本实验采用伤寒、副伤寒甲乙三联菌苗作为致热原，此三联菌苗注射家兔机体后很快诱生内生性致热原，内热原可能是发热的信息分子，把信息传递到视前区丘脑下部的前部体温调节中枢，使机体体温调节中枢对体温的调节功能失常，产热大于散热，体温调定点上移，导致家兔体温升高，从而造成家兔发热模型。实验以正常兔作为对照，观察鱼腥草的解热作用及其解热特点。
[器材] 数字显示测温计、磅秤、家兔固定架、注射器
[药品] 伤寒、副伤寒甲乙三联菌、鱼腥草注射液（2g/ml , 10ml/支, 雅安三九药业有限公司）、氨基比林注射液（2ml/支）、生理盐水，液体石蜡，苦味酸
[动物] 家兔
[方法]
- 取健康家兔4只，称重后用苦味酸标记，随机分为4组，每组1只，兔架上固定。
- 分别测肛温2次，以均值作为正常体温
- 甲、乙、丙3只家兔耳缘静脉注射伤寒、副伤寒甲乙三联菌0.7～0.8ml/kg体重，每隔30min测体温一次。待体温升高超过1℃后，分别按步骤4安排给药。
- 甲组兔（发热兔）：耳缘静脉注射生理盐水2ml/kg
乙组兔（发热兔）：耳缘静脉注射鱼腥草注射液2ml/kg
丙组兔（发热兔）：耳缘静脉注射氨基比林注射液60mg/kg
丁组兔（未发热兔）：耳缘静脉注射鱼腥草注射液2ml/kg
- 给药后30、60、90、120min分别测试肛温一次。结果记入表1。
表1 柴胡对家兔体温的影响(
±SD)
[注意]
1. 家兔健康，雌性未孕，体温正常（38.5～39.5℃）。
2. 每次测肛温前测温计前部涂少量液体石蜡，测温时操作尽量轻柔。
3. 测温计前部3～3.5cm处用胶布固定若干圈，保证每次测肛温的位置尽可能恒定。
4. 使用测温计时先按下开关，插入肛门深处。当显示器上的“℃”标志停止闪烁时（1min左右）取出。记录体温后关闭开关。注意勿使任何液体接触显示器和开关等部位，防治损坏。实验结束后用中性洗涤剂浸过的抹布拭净感温探头。待温度计干燥后在放回盒内保存。
5. 夏季作此实验时家兔的体温应再39.2℃以下。三连菌苗用量不要过大（一般用0.7ml/kg）；冬季时三连菌苗用量不宜过小（0.8～0.9ml/kg），菌苗混匀后才能使用，否则均会影响升温。
[思考]
1. 根据试验结果，试分析鱼腥草解热作用的特点？试分析其解热的作用机理？
2. 解表药和清热药解热各有什么特点，为什么？
3. 鱼腥草与氨基比林解热有何异同？
第五章 泻下药
凡能引起腹泻或滑利大肠，促进排便的药物称泻下药。祖国医学根据其作用和应用范围的不同，可分为泻下药、攻下药和峻下逐水药三类。现代医学按泻下作用机理，将它们分为刺激性泻药、容积性泻药(机械刺激性泻药)和滑润性泻药。泻下药主要研究药物的功效和导泻机理(作用方式)以及致泻作用成份，同时也应研究其毒性反应。实验动物，多采用小鼠，大鼠，亦可采用家兔或豚鼠。一般不宜用猫和狗，因猫易发生呕吐，狗对泻药反应迟钝。泻下药研究方法主要有以下几方面，可根据需要选用。泻下药主要药理作用为泻下、利尿、抗感染等。其研究方法主要有以下几方面：
（一）肠管运动在体实验法
1.炭末排出时间测定法和排便频度实验 观察泻下药对动物排便活动的影响。实验动物：多用小动物（尤其以小鼠为常用）。指示剂：炭末或墨汁。用含有指示剂的泻下药给动物灌服，观察泻下药起效时间（即排出含指示剂粪便的时间），粪便性状，排便数量，并与对照组相互比较，判断泻下药的药效。
2.肠推进运动实验 以色素为标志，用含有色素（炭末或墨汁）的泻下药给动物灌服或结肠给药，观察色素在肠道推进的距离，反映泻下药对肠道运动的影响判断其对小肠和大肠的作用。常用方法有：小肠推进实验、大肠推进实验和酚红排空定量测定实验。
3.在体肠道平滑肌实验记录整体动物不同部位肠管运动情况，观察泻下药对其运动的影响。通常有肠管悬吊法、肠内压测定法、压敏传感器贴壁法和肠生物电测定法。
（二）肠管运动离体实验法（离体肠管法）
记录肠平滑肌活动情况，观察泻下药对肠肌的作用。实验常采用豚鼠、大鼠、家兔的离体肠管作材料，其中，十二指肠兴奋性、自律性较高，对药物反应比较敏感；回肠（特别是豚鼠回肠）自发活动少，易获得稳定的基线。
此外，泻下方药攻里通下，在临床上有多方面应用，特别对于急腹症的治疗，如急性肠梗阻、急性梗阻性胆管炎、急性阑尾炎、急性胰腺炎等，只要用药得当，每获疗效。提示攻下方药不仅可明显增强肠蠕动，还可以改善肠缺血、抗病原微生物、抗炎解热等，可进一步加强其机理研究，更好地应用于临床治疗。
实验5.1 生大黄、制大黄和大承气汤对小白鼠排便时间和数量的影响（炭末法）
[目的] 观察生大黄、制大黄和大承气汤对小鼠肠道炭末推进时间、数量的影响。
[原理] 中药不同制剂和配伍，其作用往往有不同。生大黄可使肠蠕动加速，粪便排出快，成形差；制大黄因其致泻成分分解破坏，作用较弱，因而粪便排出慢、少而成形；大承气汤所含芒硝软坚润燥，枳实、厚朴行气散结，有助硝、黄加速积滞排泄之功效。运用色素流动法，以黑色炭末为指示剂，以排黑粪时间，粪便性状和数量为指标，即可直接反应不同大黄制剂和复发泻下作用的强弱。
[器材]小鼠灌胃针头，1ml注射器、钟罩，滤纸，鼠笼，台秤、棉签、记时钟、镊子。
[药品]生大黄水煎液1g/ml(含炭末0.1g/m1)， 制大黄水煎液1g/ml(含炭末0.1g/ml，大承气汤水初煎液1g/ml(含炭末0.1g/m1)，炭末生理盐水混悬液0.1g/m1，苦味酸。
[动物]小自鼠。
[方法] 取禁食20h体重相近的小白鼠12只(腹泻者剔去)， 随机分成4组．没组3只，苦味酸标记。各组分别灌服上述4种炭末混悬液0.3m1/10g。各鼠分置于铺有滤纸的钟罩内进行观察，记录小鼠排黑便的时间、性状和数目，以及粪便沾染肛门情况。连续观察6~8h，每组3只小白鼠取平均值，然后综台全实验室结果，进行比较。
[结果]按结果记录分析并填表。
表 生大黄、制大黄和大承气汤对小白鼠排便时间和数量的影响（X±SD）
[注意] （1）吸药液前，应将药液摇匀，以保证药量及炭末量准确。（2）排黑便的计数和计时，以开始排出黑便为准。（3）计数黑便时，应随时将小鼠排出的已计数的黑便清除，以免影响记数的准确性。 （4）实验小鼠在禁食与实验过程中应让其饮水，否则影响实验结果。
[附] （1）生大黄制剂的制备：取生大黄100g，砸成小块后，以水浸没。冷浸24h后．过滤，40℃水浴浓缩至1g/ml。（2）制大黄制剂的制备：取制大黄l00g，加水煎沸1.5h以上，过滤，药液水浴浓缩至1g/ml。（3）大承气汤制剂的制备：取枳实30g、厚朴30g，加水煎沸30min后，加入大黄24g，再煎沸10~15min，过滤，弃渣。滤液溶人芒硝18g，微沸，40℃水浴浓缩至102mI，即坨1g/ml。
[思考题] （1）为何不同制剂的大黄使小鼠排便时间和排便数不同？临床应用大黄致泻应注意什么？（2）比较大黄和大承气汤的泻下作用，并解释导致的结果。
实验5.2 生大黄、制大黄以及大黄、芒硝配伍对小白鼠小肠运动的影响（炭末法）
[目的]了解生大黄、制大黄对肠蠕动的影响以及大黄与芒硝配伍的药理意义。
[原理] 利用黑色炭末作为指示剂，观察炭末在肠道的推进距离。口服生大黄可刺激肠蠕动加速，有泻下作用，故对胃肠实热有“釜底抽薪”之功。大黄久煎或炮制之后，致泻成份分解，作用减弱，而芒硝在肠内不易被吸收，使肠内渗透压升高，大量水分保留在肠腔，机械性刺激肠壁而致泻。故生大黄与芒硝配伍有“增水行舟，润燥软坚”之功效，致泻作用增强。
[器材] 手术剪、眼科镊、直尺、注射器、灌胃针头、天平，烧杯．搪瓷盘或蛙板。
[药品] 炭末生理盐水混悬液0.1g/m（炭末为活性炭），生大黄水煎液1g/ml(含炭末0.1g/m1)， 制大黄水煎液1g/ml(含炭末0.1g/ml，生大黄水煎液加芒硝（生大黄1g/ml+芒硝0.5g/ml+炭末0.1g/m1)，苦味酸。
[动物] 小白鼠。
[方法]取禁食20~24h成年、体重相近的12只小白鼠，随机分为4组，每组3只，用苦味酸标记。分别用上述4种炭末液0.3ml/10g体重灌胃。给药30min后脱颈椎处死，打开腹腔分离肠系膜，剪取上端至幽门，下端至回盲部的肠管，置于托盘上。轻轻将小肠拉成直线，测量肠管长度作为“小肠总长度”。从幽门至炭末前沿的距离作为“炭末在肠内推进距离”。取各组3只小自鼠平均值，用公式汁算炭末推进百分率，并注意观察各组小肠容积是否增大。
炭末在肠内推进距离（cm）
炭末推进率= ×100%
小肠全长（cm）
[结果]按结果记录分析并填表。
表 生大黄、制大黄及大黄加芒硝对小白鼠肠蠕动的影响（X±SD）
[注意]（1）开始给药至处死动物的时间必须准确，以免时间不同造成实验误差。（2）实验动物体重越接近越好，平均体重最好用23~25g小鼠，肠管比较粗大，易于操作。（3）肠容积变化可以上下端接扎，称取重量，以定量化。
[思考题] （1）大黄致泻的主要成分及作用机理是什么？（2）大黄加芒硝为何致泻作用增强？有哪些主要方剂有大黄与芒硝配伍使用？
第六章 祛风湿药
祛风湿药是一类能祛除风湿、解除痹痛的药物。传统常用的祛风湿药有秦艽、清风藤、汉防己、独活、五加皮、木瓜、雷公藤等以及它们所组成的各种复方。现代药理学研究结果证明，这类药物多具有抗炎、镇痛、免疫调节作用，尚有镇静、降压、抗过敏及抗菌等作用。在研究祛风湿药时，一般从抗炎、镇痛、免疫调节、抗过敏等方面设计实验指标，并结合药物的具体功效和临床应用选择其他项目和指标进行实验。常用的实验方法如下：
1．非特异性炎症模型 包括急性和亚急性时相的实验和增殖时相的实验。
（1）急性和亚急性时相实验：常用毛细血管通透性测定、鼠耳肿胀法、大鼠足肿胀法、胸膜炎试验及大鼠气囊滑膜炎等炎症模型，观察药物对炎症反应中血管通透性增高、炎性渗出、肿胀、白细胞游走聚集的作用。
（2）增殖相的实验：常用大鼠巴豆油气囊法、小鼠或大鼠棉球、海绵植入法、玻璃棒肉芽肿、纸片法等，观察药物对炎症反应后期组织变性和纤维化的作用。
2．免疫性炎症模型 常采用大鼠佐剂性关节炎、Ⅱ型胶原诱导的关节炎及抗原性关节炎等模型，此类模型类似人类的类风湿性关节炎，用以筛选该类疾病的有效药物。
3．镇痛实验：常选用小鼠热板法、小鼠扭体法、大鼠尾尖部压痛法等，观察药物的镇痛作用。
4．免疫实验：常选用小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能、小鼠淋巴细胞增殖、小鼠血清溶血素抗体测定及二硝基氯苯所致小鼠迟发性皮肤过敏反应等实验，观察药物对非特异性免疫功能以及特异性免疫功能的作用。
5．其他：可根据祛风湿药的具体功效和应用的特点，安排其他相关实验，如镇静、降压、抗过敏、抗菌等。
此外，由于祛风湿药的单味或复方在临床上主要用于风湿性或类风湿性关节炎，目前结合传统中医药理论和现代医学对风湿性和类风湿性关节炎病因、发病机制的认识，在研究和开发治疗这类疾病的中药的药理学研究思路方面表现出多样性。针对治疗类风湿性关节炎的中药，可从药物抑制免疫性炎症，纠正免疫功能障碍、抑制炎症因子、抗氧化、抗炎、镇痛、影响RA动物模型等方面进行研究。针对风湿性关节炎，可从药物调节免疫功能、抗炎、缓解疼痛、解热、影响血液流变性和改善微循环等方面进行研究。
实验6.1 秦艽对蛋清致大白鼠足肿胀的影响
[目的] 学习用鸡蛋清引起大白鼠足急性炎性肿胀的方法，并观察药物的抗炎作用。
[原理] 以鸡蛋清异种蛋白质注入大鼠足内，可引起急性炎症，使局部组织肿胀。通过测量实验前、后大鼠足跖或踝关节的周长变化来观察秦艽的抗炎作用。秦艽的抗炎有效成分以秦艽碱甲等生物碱为主。
[器材] 天平、鼠笼、软塑料尺、注射器等。
[药品] 秦艽水煎醇沉液5g/ml、5mg/ml地塞米松注射液、生理盐水、10%新鲜鸡蛋清生理盐水溶液、苦味酸液。
[动物] 雄性大鼠，体重150-200g。
[方法] 取大鼠3只，称重，用苦味酸标记。将大鼠右后肢拉直，用软塑料尺量取足跖或踝关节的周长，连续两次，其平均值为致炎前的正常周长。
动物分别腹腔注射以下药物：甲鼠生理盐水0.1ml/100g，乙鼠秦艽水煎醇沉液0.2ml/100g(10g/kg)，丙鼠地塞米松注射液0.1ml/100g(5mg/kg)。30分钟后在每鼠右后肢足掌远端进针至踝关节附近，皮下注射10%新鲜蛋清溶液0.1ml。致炎后30、60、90和120分钟分别测量大鼠足跖或踝关节的周长。
综合全实验室的结果，按下列公式计算出各药在不同时间点的足肿抑制百分率：
给药后足跖或踝关节的周长-正常足跖或踝关节的周长
足肿百分率= ×100%
正常足跖或踝关节的周长
对照组足肿百分率-给药组足肿百分率
足肿抑制率 = ×100%
对照组足肿百分率
[结果] 按表6-1记录。
表6-1 秦艽水煎醇沉液和地塞米松对大鼠蛋清性足肿胀的影响（X±SD）
[注意] （1）塑料软尺不能有弹性，刻度以1/5mm左右为宜，测量应由专人来操作，每次均必须在同一位置上。（2）另可采用容积测量法，是目前较为常用的足跖测量法，其准确性高于皮尺周长测定法，并可应用于小鼠。具体装置可自制亦可购买（如成都泰盟生产的动物足容积测定仪）。
[思考题] （1）根据实验结果，试比较秦艽和地塞米松的抗炎作用有何不同。（2）秦艽的抗炎机理是什么？可用哪些方法证明。
实验6.2 豨签草对小鼠腹腔毛细血管通透性的影响
[目的] 学习测定腹腔染料通透量的的实验方法，观察药物对毛细血管通透性的影响，体现药物的抗炎作用。
[原理] 以低浓度醋酸作为致炎因子，腹腔注射入小鼠体内，可引起急性炎症反应，造成腹腔毛细血管的通透性升高。通过静脉注射染料伊文思兰，测定腹腔液染料的通透量，可以代表炎性渗出的多少，从而观察药物的抗炎作用。豨签草作为祛风湿药，具有抗炎作用，可以减少腹腔炎性渗出量，降低OD值。
[器材] 分光光度计、离心机、小鼠固定筒、注射器（1ml、2ml）、小鼠灌胃器、试管、解剖剪、眼科镊等。
[药品] 豨签草水煎液（1g/ml）、1%伊文思兰生理盐水溶液、0.6%醋酸溶液、生理盐水、苦味酸液。
[动物] 雄性小鼠，体重18-22g。
[方法] 取小鼠6只，称重，用苦味酸标记。按体重分层随机分为豨签草水煎液组和对照组，各组3只小鼠。豨签草水煎液组灌胃给予豨签草水煎液（1g/ml）0.2ml/10g，
对照组灌胃给予生理盐水0.2ml/10g。给药后45分钟，小鼠尾静脉注射1%伊文思兰生理盐水溶液0.1ml/10g体重，并立即腹腔注射0.6%醋酸溶液0.2ml/只，20min后处死小鼠，腹腔注入5ml生理盐水，轻柔腹部，剪开腹膜收集腹腔洗液，离心（1000rpm）5分钟，于分光光度计590nm处测定光密度值（OD值）。
[结果] 按表6-2记录。
表6-2 豨签草对小鼠腹腔毛细血管通透性的影响（X±SD）
[注意] （1）每只小鼠注射的染料量、醋酸溶液的体积以及自注射醋酸至处死时间必须严格掌握，保证一致。（2）腹腔注射醋酸溶液以及腹腔注射生理盐水冲洗腹腔时，注意操作，针头以刚好进入腹腔为宜，避免进针过深，容易引起出血。腹腔内如有出血，样本应弃去不用。（3）收集腹腔洗液时应避免液体外溢，可用小漏斗帮助。
[思考题] （1）影响本实验结果的因素有哪些?（2）结合实验结果，分析说明与豨签草功效相关的药理作用。
第七章 利水渗湿药
利水渗湿药是指以通利水道、渗利水湿为主要功能的药物，其中部分药物尚具清利湿热的作用。中医理论认为，水湿之为病，或泛监于全身而为水肿；或侵犯脾胃而为湿阻，或同其他外邪相兼(如湿热)而侵犯人体某一部位或脏腑，如湿热熏蒸肝胆而成为的黄疸及湿热所致的淋浊、疮疡。利水渗湿药能通利水道，渗除水湿，主要用于治疗水肿、湿热、淋证，疮疡等病证。据现代药理研究，这类药物主要具有利尿、抗菌、利胆护肝、治疗胆结石等作用。此外尚有降血压、降血脂、降血糖、影响免疫、抗肿瘤和解热镇痛等效果。利水渗湿药的研究方法包括：
（一）利尿实验方法 包括称重法，输尿管集尿法，家兔到尿管集尿法，代谢笼法，尿液中钠、钾和氢离子的含量测定法，截流分析实验法等。
（二）对泌尿道结石防治作用的方法 包括乙二醇性泌尿系统结石模型，异物性泌尿道结石模型，对输尿管动作电位的影响等。
（三）胆汁的分泌排出实验法 包括胆汁的流量及其测定，胆道感染，胆结石病理实验模型制备等。
（四）其他病理模型实验方法 包括肾小球肾炎模型、肾病模型、肾功能衰竭模型、内淋巴积水模型等。
临床方面，利水渗湿方药除能抗病毒﹑利胆﹑消炎﹑镇痛用以治疗肝胆疾病外，对妇科疾病术后后遗症﹑母婴血型不和﹑肺炎﹑遗传损伤、口腔溃疡等也收到良好的治疗效果。 因此采用现代科学技术研究该类药物治疗作用的物质基础和作用机制，尤其是对其有效成分单体及组方中药物协同作用的研究具有一定应用前景。
实验7.1 茵陈蒿汤对家兔胆汁分泌的影响
[目的]学习家兔胆管插管和胆汁引流的方法，观察茵陈蒿汤对家兔胆汁分泌的影响。
[原理] 肝脏分泌的胆汁经胆总管流入十二指肠，胆汁是一种重要的消化液，含有多种化学成分，主要有胆酸、胆固醇、及胆红素等。胆汁的分泌排泄与黄疸的形成有密切关系。从胆总管收集胆汁可以反映胆汁的分泌与排出。茵陈蒿汤具有清湿热，退黄疸功效，使胆汁流出增加。本实验可动态观察药物对肝分泌胆汁的影响。
[器材]兔解剖台，总胆管引流用塑料管 (长20~30cm)，剪毛刀、血管钳、眼科镊，注射器， 5号针头，纱布、药棉．丝线、台秤。
[药品] 茵陈蒿汤水煎醇沉液2g/ml(茵陈60g、栀子9g、大黄9g水煎成36ml) ，生理盐水，盐酸山莨菪碱（654-2）注射液5mg/ml，甲基硫酸新斯的明注射液0.5mg/ml，乌拉坦溶液0.25g/ml。
[动物] 家兔。
[方法] 取禁食8~12h家兔1只，用乌拉坦1g/kg腹腔注射麻醉后．仰
位固定于兔解剖台上。上腹部剪毛，从剑突下腹部正中线切开皮肤约
图1 家兔胆道系统及十二指肠位置
1-胆囊 2-十二指肠 3-十二指肠乳头 4-胆囊管 5-肝管 6-肝总管 7-胆总管 8-胰腺管 9-乏特氏壶腹 10-Oddi氏括约肌
6~10cm。沿正中腹白线切开腹壁，找到胃幽门部及其相连的十二指肠：用手指轻轻翻转幽门及其相连的十二指肠上部，可见开口于十二指肠的胆总管壶腹部，并可向右上方追踪到胆总管。用眼科镊分离出胆总管一小段，在胆总管下穿二根丝线。先在胆总管离十二指肠壁1．5cm处结扎一根丝线，不剪断，用作牵引胆总管用。提起牵引丝线，由于胆总管已被结扎阻断，可见上段胆总管内充满绿色胆汁。在牵引丝线上方0.2~0.3mm处剪开胆总管一小口， 插入内径为l~2mm的胆汁引流用塑料导管深2~3mm，结扎固定，通过此引流导管将胆总管内胆汁引流出体外， 用量杯可计数流出的滴数或毫升数。每药均观察给药前10min及给药后胆汁流量（每分钟滴数或每10分钟毫升数）。
图2 胆汁引流导管，胆总管结扎牵引线位置
1-胆总管 2-胆汁引流导管 3-乏特氏壶腹 4-十二指肠 5-接扎牵引线
（1）生理盐水2.5ml/kg；
（2）茵陈蒿汤水煎醇沉液2.5ml/kg；
（3）山莨菪碱注射液0.2mg/kg；
（4）新斯的明注射液0.1mg/kg
[结果] 记录并比较不同药物给药前后对家兔胆汁流量的影响。
[注意] （1）胆总管引流胆汁的塑料管可用头皮针上的半透明塑料管制成。管的尖端剪成斜口，离管口2~3mm处加热拉成稍细的颈部，以便接扎胆总管而固定之。（2）开腹手术中遇有出血点，用丝线接扎止血。（3）胆总管比较细，切勿用力拉牵引线而拉断，故操作必须细心轻巧。（4）胆总管切口应一次成功，正好剪断胆总管的1/3~1/2。注意一定要剪断内膜，使胆汁引流管插入内腔，见有胆汁流出便易插入导管。
[思考题] 茵陈蒿汤、山莨菪碱注射液、新斯的明对家兔胆汁流量的影响有何不同？分析中药的利湿退黄作用。
第七章 温里药
凡能温里助阳、散寒通脉，治疗里寒证为主要功能主治的药物称为温里药。本类药物药性温热，多具辛味。温里药能温中祛寒，具有健运脾胃、散寒止痛的功效；有的药物兼有助阳、回阳的功效。传统常用的温里药有附子、干姜、肉桂、吴茱萸、丁香、花椒、荜茇等药物，常用的复方有四逆汤、黄芪健中汤、吴茱萸汤等。现代药理学研究表明，温里药常作用于心血管系统、消化系统、血液系统和神经系统，此外，这一类药物还具有抗炎、抗菌、局麻等作用。根据温里药的作用特点及临床应用，实验时宜制作“里寒” 、“心阳衰微”及“亡阳证”等动物病理模型以验证温里药的温里散寒、回阳救逆的作用，一般从温里药对心脏、血流动力学、消化道平滑肌等方面的影响设计实验指标。常用的实验方法有：
1. 对心脏的作用：可用离体和在体动物的心脏。
（1）离体心脏：蛙心可用斯氏（Straub）法或八木氏法灌流，家兔、大白鼠和豚鼠心脏则用Langendorff法灌流，以观察温里药对心肌收缩、心输出量、冠脉流量及心率的影响。另外，可用豚鼠、兔、猫的乳头肌及兔、大白鼠和豚鼠的心房来观察温里药对心肌的兴奋性、收缩性、不应期及自律性的影响。
（2）在体心脏：用蛙、兔、狗、猫的在体心脏，以心肌杠杆描记法或位移换能器描记于记录仪上，同时记录血压和心电图，观察温里药对在体心脏和冠脉流量的影响。用兔冠状动脉条可观察温里药对冠状动脉的作用。
2.对循环系统的影响：可观察温里药对大白鼠、兔、狗、猫等动物正常血压和低血压状态的影响，以及对失血性休克、感染性休克、心源性休克的治疗作用。
观察温里药对血管的作用，可用狗肢体灌流法或兔耳灌流法以及大白鼠后肢灌流法等。
此类药物对消化道、神经系统作用的实验方法将分别在相关章节进行介绍。
实验8.1 四逆汤对大白鼠低血压状态的升压作用
【目的】观察四逆汤对大白鼠低血压状态的影响。
【原理】四逆汤为回阳救逆之代表方，主治四肢厥冷、脉微欲绝等亡阳厥逆证。本实验以麻醉大鼠的低血压状态为模型，观察四逆汤的强心升压作用。
【器材】手术剪、眼科镊、止血钳、聚乙烯管（内径1mm），玻璃气管插管、二道生理记录仪。
【药品】生理盐水、肝素钠50mg/ml、乌拉坦0.25g/ml、四逆汤水煎液2g/ml。
【动物】SD大鼠，雌雄各半，250－300g。
【方法】取大鼠，乌拉坦100mg/100g腹腔注射麻醉背位固定，做气管分离，气管插管，分离一侧颈总动脉，插入动脉导管，以三通活塞连接二道生理记录仪上的压力传感器。一侧股动脉插入一根PE50聚乙烯管用于放血，另一侧股静脉插管用于注入0.5mg/100g肝素以防血凝并用于输血。给药前后作肢体Ⅱ导联心电图描记。
腹部手术，在幽门下找出十二指肠，插入聚乙烯管于肠管中并固定之，供给药物。
描记正常颈动脉血压曲线后，股动脉放血，使颈动脉血压持续稳定在6.67kPa30min左右，肠道给药5g/100g，观察血压的变化。
【结果】实验结果按表1记录。
表1 四逆汤对大白鼠低血压状态的作用
【注意事项】（1）大鼠在实验前需禁食24h，以免食物影响药物的吸收。（2）大鼠不宜过小，至少在250g左右。（3）股动脉放血不宜过快，如血压低于6.67kPa，可由股静脉缓慢输回少量血液，如血压降至6.67kPa，由于自身调节作用，可能会回升，此时，由股动脉放出少量血液，使血压持续稳定在6.67kPa左右。（4）血压不宜放得过低，否则易引起失血性休克并死亡。
【思考题】试用本实验结果，结合现有关四逆汤的研究文献来分析四逆汤回阳救逆的功效。
第九章 理气药
理气药是一类具有疏通气机，调整脏腑功能，治疗气滞、气郁和气逆等症的药物。传统常用的理气药有枳实与枳壳、青皮、陈皮、香附、木香等。
中医认为气是脏腑组织功能的体现，因“肺主气”，“肝主疏泄”，“脾主运化”，“胃主受纳”，故气机不畅常表现这些脏腑功能的失调。理气药能理气止痛、行气导滞、疏肝解郁、降气平喘及降逆止呕，临床用于治疗脾胃气滞，肝郁气滞以及肺气壅滞等症。在肠胃疾病（如急慢性胃肠炎，溃疡病等），肝胆疾病，胰腺炎，支气管哮喘以及月经不调，乳房肿块，疝气等疾病中多有这些症候，因此理气药的药理作用与其对消化系统功能的调节，如对消化液分泌，胃肠平滑肌运动及支气管平滑肌、子宫平滑肌、血管平滑肌舒缩功能的影响有密切的关系。
理气药在临床应用较广泛，主要用于治疗消化，呼吸，生殖等系统的疾病，近年来对于心血管药理作用的研究较多。理气药的研究应在中医辨正论治的基础上，根据药物的主治，功效以及各种不同的证型来设计各种试验方案。目前理气药主要用于治疗消化系统的疾病，因此着重介绍几种治疗消化道疾病药物的试验设计要点：
1．治疗肝胃不和证药物的试验设计要点 肝胃不和的治疗应以舒肝理气、升清降浊为原则。肝胃不和常因植物神经功能失调，导致胃肠功能紊乱，出现脘胁胀闷、疼痛等证，因此试验设计应包括胃肠功能试验、镇痛解痉试验，若见于慢性胃炎胆囊炎等疾病，应进行抗炎试验。
（1）胃功能试验：主要是胃运动试验、胃排空试验以及胃液分析等。
（2）肠功能试验：在体肠运动试验、小肠推进运动试验等。
（3）镇痛解痉试验：小鼠扭体试验、平滑肌解痉试验。
（4）抗炎试验：足趾肿胀或棉球肉芽肿等急慢性炎症模型。
（5）其他：根据病因、病机结合受试药物功能主治和作用的特点，也可选作一些有针对性的试验，如对神经性呕吐及胃肠型神经官能症等疾病，可进行神经系统方面的试验。
2．治疗脾胃气滞等证药物的试验设计要点 脾胃气滞是由于脾胃机能不足，升降出入功能失衡，主要表现为消化系统功能的减退。治疗应以运化水谷，行气导滞为主。
（1）胃功能试验：胃运动试验。胃排空试验。胃液分析：胃液量和胃液酸度测定；游离酸及总酸度测定；胃蛋白酶活性测定。胃肠电：通过胃肠电生理的检测，了解胃肠运动的机能状态。
（2）肠功能试验：木糖吸收试验：大鼠或小鼠木糖吸收试验或3H－葡萄糖吸收试验。在体肠运动试验：家兔肠管悬吊法或内压测定法。离体肠运动试验。小肠推进试验。
3．治疗消化行溃疡药物的试验设计要点 消化性溃疡多由脾胃虚弱气滞血瘀，致使胃内损伤，故常以益胃健脾活血化瘀理气止痛等法治之。
（1）抗消化性溃疡试验：主要进行急性胃溃疡试验，慢性胃溃疡试验，药物诱发胃溃疡或粘膜损伤。选择试验性胃溃疡模型应根据受试药物的作用特性，选择相应的动物模型，才能正确反应药物的作用。急性胃溃疡试验：主要包括大鼠（或小鼠）应激性胃溃疡动物模型，幽门结扎型胃溃疡动物模型。慢性胃溃疡试验：大鼠乙酸烧灼型胃溃疡动物模型；热烙型胃溃疡动物模型。药物诱发胃溃疡或粘膜损伤：主要是大鼠或小鼠皮下注射利血平的方法，制造利血平型的胃溃疡动物模型，也可用乙醇和阿司匹林，消炎痛等药物诱发。
（2）生化药理学试验：包括胃液量和胃液酸度测定，游离酸及总酸度测定，胃蛋白酶活性测定，胃粘液测定，胃粘膜血流量测定等。
4．治疗肝炎药物的试验设计要点 病毒性肝炎属于“胁痛”，“黄疸”，多由“肝郁气滞”，“肝胆湿热”所致，应以“舒肝理气”，“清热解毒”等为治疗原则。
（1）抗肝炎病毒试验：体外抗乙型肝炎病毒试验目前多采用2215细胞株体外培养方法；体内抗乙型肝炎病毒试验则通过动物模型进行，国内常用于评价抗乙肝病毒药的动物模型有鸭肝炎模型。
（2）保肝降酶试验：主要通过各种肝损伤模型来观察药物对损伤肝的保护作用。包括四氯化炭急性或慢性肝损伤模型，D－半乳糖胺盐急性肝损伤模型。评价的指标主要是测定血清谷丙转氨酶（SGPT）,谷草转氨酶（SGOT）以及动物肝脏病理损伤程度的比较，慢性肝损伤应做总蛋白、白蛋白、白蛋白/球蛋白比值及羟脯氨酸测定。
（3）免疫功能试验：慢性肝炎常与自身免疫有关，可用免疫性肝损伤进行保护试验，测定巨噬细胞吞噬功能和血清溶血素；另外，还可观察对Cona诱导小鼠脾淋巴细胞增殖的影响，循环免疫复合物（CIC）总补体及 C3，以及对肝特异性脂蛋白（LSP）和肝细胞膜抗原（LMAg）的自身免疫性反应等有关试验。
（4）利胆试验：用大鼠或家兔进行胆汁流量的测定。
（5）退黄试验：可用小鼠或大鼠，以异硫氢酸－1－萘酯50～70mg/kg口服，造成黄疸模型，观察药物的退黄作用。
此外近年对理气药的研究有一些新的方向，例如：理气药对慢性缺氧小鼠能量代谢具有影响；能提高荷瘤机体的免疫功能及抑制其血小板聚集性增高改善其高凝状态从而达到抗肿瘤的效果。根据现代药理研究，有的理气药尚有一些新的作用和用途，如青皮，枳实、青木香对血压的作用等。
实验9.1 黄芪建中汤抗大白鼠实验性胃溃疡的作用（幽门结扎法）
【目的】 观察黄芪建中汤抗大鼠实验性胃溃疡的作用并理解其功效。
【原理】 以幽门结扎法造成动物胃溃疡模型后，观察药物抗胃溃疡的疗效。黄芪建中汤具有温中、补虚、益气之功，可抑制胃液分泌，减少游离酸和总酸度，对幽门结扎法所致动物溃疡的形成具有保护作用。
【器材】 大鼠笼、大鼠固定板、钟罩、手术剪、手术刀、镊子、缝针、持针器、缝合线、注射器、放大镜。
【药品】 黄芪建中汤水煎醇沉液1g/ml（黄芪30g、白芍30g、桂枝15、灸甘草15g、饴糖20g、生姜3片、大枣8枚共煎成100ml）、乙醚、生理盐水。
【方法】 实验前，将10只大鼠分笼禁食48h，禁食期间可以自由饮水。实验前，将大鼠置钟罩内，用乙醚麻醉后，固定在鼠板上。自胸骨剑突下沿腹中线切开腹壁，切口约2～3cm。在左侧肋缘部位，用手指轻轻往上一推，胃即暴露于切口。于胃幽门下穿一线（勿伤及血管），将幽门结扎（不能将临近的其它血管结扎），然后缝合腹壁切口），用生理盐水清洗，用纱布包扎切口。手术后将大鼠随机分为2组，每组5只。实验组经皮下或腹腔，按照1.2ml/100g体重注入黄芪建中汤水煎醇沉液；对照组按同法给予等量生理盐水。
幽门结扎后，禁食禁水18h，然后，处死大鼠，打开腹腔，在近膈肌处结扎食道，将胃摘出。沿胃大弯切开胃壁，洗清胃内容物，将胃壁展开，用大头针固定在蜡板上。用肉眼或放大镜检查胃粘膜面。记录每组产生溃疡的鼠数、溃疡个数、溃疡程度、溃疡面积（或溃疡指数）及病变情况。
（1） 溃疡程度：按病变情况，分为4级：
一级（糜烂）：d（溃疡直径）＜1mm。
二级（小溃疡）1mm＜d＜3mm。
三级（大溃疡）d＞3mm。
四级（有穿孔）。
（2） 溃疡面积：通过溃疡中心量取最大纵径和横径，用公式S＝Л（d1/2）×（d2/2）计算。式中S为溃疡面积，Л为圆周率，d1为通过溃疡中心量取的最大纵径，d2为通过溃疡中心量取的最大横径。
（3） 溃疡指数：由溃疡面积对照溃疡指数标准便可查出。
表9.1-A 溃疡指数标准（mm2）
【结果】 实验结果参照表9.1-B填写。
表9.1-B 黄芪建中汤抗大鼠实验性溃疡的作用
【注意】
（1） 所用大鼠如体重超过180g，则禁食时间要延长为72h。
（2） 整个实验过程中，每只大鼠要单笼饲养，笼底丝网眼大小以使粪便容易排出为宜，以防止因动物互相咬伤或吞食粪便等而影响溃疡的形成。
（3） 在手术操作中，勿伤及胃壁血管，勿牵扯幽门和用器械钳夹胃壁。因器械对胃的刺激易形成溃疡，干扰实验。
（4） 大鼠的胃分为瘤胃、胃体和胃窦3部分。实验中也可以只观察瘤胃部分的溃疡作指标。
【附】 实验药品亦可用延胡索水煎醇沉液2g/ml。延胡索能行气活血止痛，可抑制胃液分泌，降低胃液酸度，抑制胃蛋白酶活性，防止幽门结扎所致胃溃疡的发生。
【思考题】
（1） 黄芪建中汤及延胡索抗大鼠幽门结扎法所致胃溃疡的机理是什么？
（2） 本实验系采用讲药物经腹腔注射发给药，若将药物直接注入大鼠肠管内，其抗实验性胃溃疡的作用如何？
（3） 试分析以应激反应法和幽门结扎法所制造的动物胃溃疡模型各有和优缺点？
实验9.2 青皮和四逆散对家兔离体肠平滑肌的影响
【目的】 掌握离体肠平滑肌的制备方法；观察药物对离体肠平滑肌的影响。
【原理】 多种动物的离体肠道在具有合适的存活环境就可以保持其自发性运动
。青皮有疏肝破气，消积化滞之功；四逆散能疏肝理气、调和肝脾。三者对家兔肠平滑肌有明显解痉作用。
【器材】 麦氏浴槽（或离体器官恒温浴槽）、生物机能实验系统、张力换能器、注射器等。
【药品】 青皮水煎液1g/ml，四逆散水煎液1g/ml（枳壳、芍药、柴胡、灸甘草各5g，共煎成20ml），PH均为6左右，氯化乙酰胆碱1μmol/L、组织胺1μmol/L、氯化钡10mg/ml，台氏液等。
【动物】 家兔（或豚鼠、大鼠）。
【方法】
2. 调节恒温浴槽装置，使泵出的水通过麦式浴槽周围保持恒温，麦氏浴槽内的台氏液保持36.5±0.5℃。
3. 调节生物信号系统：调零、定标（5～10克）、将张力换能器与生物机能实验系统连接选择通道并调节张力换能器。
4. 离体肠平滑肌的制备。取2kg左右家兔一只，用木槌击枕骨致死，立即剖开腹腔，取空肠和回肠上段，置入盛有充氧（5%CO2）的冷台氏液中。沿肠壁分离肠系膜，用台氏液将肠内容物冲洗干净，将肠管剪成2～2.5cm的肠段，肠管两端穿线结扎，一端系于通气钩上，然后轻轻放入恒温麦氏浴槽中，另一端系于张力换能器上，加0.5～1克负荷，连接记录仪。通氧气调节速度为1～2s出现一个气泡，不能影响肠肌的自主舒缩运动。
5. 观察正常肠肌运动，调整麦氏浴槽内肠肌张力，使舒缩稳定后，描记一段肠肌正常运动曲线，然后依次向浴槽中滴加各种药液。每次滴加药液前均应冲洗肠肌2～3次，待舒缩恢复到用药前水平后再加入下组药液，描记舒缩曲线。
6. 给药顺序为：
（1） 青皮水煎液0.2～0.5ml，观察并记录作用曲线后冲洗。
（2） 乙酰胆碱0.2～0.5ml（11～2.5×10¯²μmol/L），当肠肌收缩显著时即滴加青皮水煎液0.2～1ml。待明显抑制时再滴加与前同剂量的乙酰胆碱液。
（3） 加组织胺液0.2～0.6ml[（1～3）×10¯²μmol/L]，待收缩曲线明显后即滴加青皮水煎液0.5ml，待曲线稳定后再加入与前等剂量的组织胺液。
（4） 加氯化钡液0.2～0.5ml，待收缩曲线显著时即滴加青皮水煎液0.5～1ml。待曲线稳定后再加入与前等剂量的氯化钡液。
（5） 按以上（1）～（4）的顺序取另一段肠肌，观察四逆散水煎液对兔离体肠肌的作用。
【结果】 剪贴青皮及四逆散水煎液对家兔离体肠平滑肌的作用曲线，分析比较其作用。
【注意】 （1） 剪取兔肠管及冲洗、挂线等操作必须轻柔，肠腔内容物应洗净。
（2） 肠管两端穿线时应穿对角线并切勿将肠腔缝死。
（3） 暂时不用的肠管应浸泡在通氧气的冷台式液中。
（4） 浴温和肠肌的张力均可影响实验结果应注意调解。
【思考题】 利用离体肠平滑肌实验方法如何证实青皮、枳壳及它们复方制剂的理气作用？这些作用的机理如何？
第十一章 平喘、化痰、止咳药
慢性呼吸系统疾病的病因大多比较复杂，病因治疗往往比较困难，多数呼吸系统疾病的症状为咳嗽、咯痰和喘息，主要用于呼吸系统疾病的中药有平喘、化痰、止咳药。
平喘、化痰、止咳药是能祛痰、缓解或控制咳嗽、喘息的药物，如半夏、桔梗、川贝母、苦杏仁、款冬花、紫菀、前胡、天南星、远志、麻黄及小青龙汤、百合固金汤、川贝枇杷露等复方。现代药理学研究结果表明，这类药物具有平喘、祛痰、止咳以及抗炎、镇静、镇痛等功效。在研究方法上，一般从平喘、祛痰、止咳三个主要的方面设计实验指标，并结合药物的功能主治选择其他必要的方法和指标进行实验。
常用的实验方法如下：
1.平喘实验方法：至少要包括对气管平滑肌松弛作用的方法和抗过敏作用的方法，另外，还可再分为整体实验、在体实验和离体实验三类。
（1）整体哮喘模型：多选用豚鼠和大鼠，又可分为喷雾致喘法和卵蛋白引喘法。前者用恒压喷雾组胺和乙酰胆碱等致喘剂，引起动物出现“哮喘反应”，通过观察引起“哮喘反应”的潜伏期来判断药物的平喘作用。后者动物以卵蛋白、灭活百日咳杆菌疫苗和氢氧化铝干粉致敏，2星期后再次喷雾卵蛋白作抗原攻击致敏动物，引起“哮喘反应”。（2）肺在体溢流法：常用豚鼠进行实验，通过人工呼吸机给豚鼠输送一定量的空气，超过肺容量的空气将溢入另一装置，该装置可直接读出溢流的体积数，该法可间接反映豚鼠支气管平滑肌的舒缩状态。（3）离体气管哮喘模型：包括气管容积法、豚鼠气管片法、气管螺旋条法和豚鼠肺条法。先制成离体气管段、气管片、气管螺旋条和肺条，放入恒温盛有营养液的浴漕中，通过张力换能器，将致痉剂或受试药物对气管张力的作用变化转变为电信号，通过计算机系统中的有关分析软件显示为舒缩曲线，进而分析药物的作用。
由于平喘药在防治多种原因引起的喘息中具有较大的实用意义，所以对治疗哮喘的新药药效学研究时，根据情况还可以选择如下实验方法：大鼠腹腔肥大细胞脱颗粒实验、大鼠同种被动皮肤过敏实验、抗炎实验、镇咳实验、祛痰实验、抗菌实验、增强免疫功能实验。另外，机制研究还可以选择：哮喘动物肺组织中过敏介质释放实验及cAMP水平、溶血血小板激活因子的测定。
2. 祛痰实验方法：药物祛痰作用大多为增强呼吸道腺体的分泌，使痰液变稀，或裂解痰液中的粘液成分，使痰液的粘性下降，或增强粘膜上皮细胞的纤毛运动，使痰液易于排出。常用的实验方法有：（1）酚红气管排泄法：利用酚红至小鼠或家兔腹腔注射后可从气管排泄的特点，测定气管酚红的排泄量，以判断受试药物对气管分泌液量的影响。（2）毛细玻管排痰量法：常用麻醉大鼠。利用插入气管的玻璃毛细管吸取其中的痰液，以毛细管中痰液柱的长度来评价受试药物的效果。（3）气管纤毛粘液流动速度测定法：常用家鸽、家兔，以墨汁为标记物（也可用染料、炭粉、软木粒等），观察一定时间内墨汁在气管粘膜表面运动距离的长短，进而判断受试药物的排痰效果。
3.止咳实验方法：咳嗽反射是由感受器、传入神经、咳嗽中枢、传出神经四个环节组成，从咳嗽反射弧来看，目前采用的诱发咳嗽的方法主要是刺激感受器和传入神经。常用的实验方法有：（1）化学刺激法：将不麻醉动物置于恒定容积的密闭容器内，恒压喷入定量的刺激药物（氨水、硫酸、枸橼酸或二氧化硫等）诱发咳嗽。（2）电刺激法：用一定强度和频率的电流刺激动物（猫或豚鼠）的喉上神经，或动物（豚鼠或狗）的气管粘膜，均可引起咳嗽。（3）机械刺激法：通过猫、豚鼠等动物的气管插管，用猪毛、羽毛之类插入气管，并上下抽动，引发咳嗽。
实验11.1 小青龙汤对组胺和乙酰胆碱致豚鼠哮喘模型的影响
【目的】 ① 学习组胺和乙酰胆碱喷雾引喘法。② 观察小青龙汤的平喘作用。
【原理】 具有支气管收缩作用的药物如组胺、乙酰胆碱等，以喷雾法给予豚鼠吸入，可引起豚鼠呼吸急促、喘息，甚至窒息，从而导致豚鼠抽搐而跌倒。氨茶碱和小青龙汤有阻断腺苷受体的作用，进而松弛支气管平滑肌，发挥平喘作用。
【器材】 天平、注射器、喷雾装置（可用超声雾化器）、秒表。
【药品】 0.4g/100ml磷酸组胺溶液、2g/100ml氯化乙酰胆碱、12.5g/100ml氨茶碱溶液、100g/100ml小青龙汤（麻黄9g、芍药9g、细辛9g、干姜9g、甘草9g、桂枝9g、半夏9g、五味子9g）、0.85g/100ml生理盐水。
【动物】 英国种幼年豚鼠，体重150g左右。
【方法】 将前一天筛选合格的豚鼠称重，随机分为三组，即空白对照组、氨茶碱组（阳性药对照组）和小青龙汤组。空白对照组按1ml/kg腹腔注射生理盐水，氨茶碱组按0.125g/kg腹腔注射氨茶碱溶液（给药体积为1ml/kg），小青龙汤组按10g/kg灌胃给予小青龙汤（给药体积为10ml/kg），每组给药结束时计时。
30min后（小青龙汤组的豚鼠为灌胃后60min）分别放入密闭的喷雾装置内，随即喷入磷酸组胺和氯化乙酰胆碱1：2混合液15秒。豚鼠在吸入混合液后经过一段潜伏期即产生“哮喘反应”。“哮喘反应”可分为4级，Ⅰ级呈现呼吸加速，Ⅱ级呈现呼吸困难，Ⅲ级呈现痉挛，Ⅳ级呈现跌倒、翻滚。记录各组动物至给予混合液到出现跌倒（根据实验具体情况可以适当选择Ⅰ～Ⅲ级指标）的时间即哮喘潜伏期，并进行组间比较（方差分析）。
【结果】将结果填入下表中。
表1 小青龙汤对组胺和乙酰胆碱致豚鼠哮喘模型的影响
注：① 剂量（g/kg）= 给药体积（ml/kg）×药物浓度（g/ml）；② 
意为“平均值±标准差”。
【注意事项】 ① 豚鼠必须选用幼鼠，且体重不超过200g。② 实验前一天要对动物进行预选，150秒内出现哮喘的豚鼠为合格的敏感动物。③ 每鼠每日只能测定一次引喘潜伏期，同日多次测定会影响实验结果。
【思考题】 通过本次实验及参阅文献分析本实验方法的不足及影响因素。
实验11.2 远志对小鼠气管段酚红排泄量的影响
【目的】 ① 学习酚红气管排泄法。② 观察远志对小鼠的祛痰作用。
【原理】 于小鼠腹腔注射酚红后，后者可以部分地从气管分泌排除。远志能增强呼吸道的分泌功能，使粘液排泌的酚红量增加。将气管段放入定量的生理盐水中，加碳酸氢钠使其显色，用分光光度计测出酚红的排泌量，从而得知药物的化痰作用。
【器材】 手术剪、眼科镊、小鼠灌胃针头、注射器（1ml型）、小试管、试管架、离心机、分光光度计、蛙板、天平。
【药品】 3.33g/100ml氯化铵溶液、100g/100ml远志水煎液。
【试剂】 0.5g/100ml酚红溶液、5g/100ml（或1mol/L）碳酸氢钠溶液、0.85g/100ml生理盐水。
【动物】 昆明种小鼠，雌雄各半，体重20g左右。
【方法】 取禁食12小时的小鼠，称重，随机分为三组，即空白对照组、氯化铵组（阳性药对照组）和远志组。空白对照组按30ml/kg灌胃给予生理盐水，氯化铵组按0.999g /kg灌胃给予氯化铵溶液（给药体积为30ml/kg），远志组按30g /kg灌胃给予远志水煎液（给药体积为30ml/kg），每组灌胃结束时计时。
30min后，由腹腔注射酚红溶液0.5ml /只。30min后，颈椎脱臼处死小鼠，仰位固定于蛙板上，剪开颈前皮肤，分离气管，剥去气管周围组织，剪下自甲状软骨至气管分支处的一段气管，放进试管中，用注射器共吸取3ml生理盐水分次反复冲洗气管腔，并震摇；再加入碳酸氢钠溶液0.1 ml，并震摇，离心，取上清液2ml。
上清液用分光光度计（波长546nm）测定OD值，并进行组间比较（方差分析），最后计算祛痰指数[祛痰指数（％）＝（给药组OD平均值/空白组OD平均值）×100％]。
【结果】将结果填入下表中。
表2 远志对小鼠气管段酚红排泄量的影响
注：① 剂量（g/kg）= 给药体积（ml/kg）×药物浓度（g/ml）；② 意为“平均值±标准差”。
【注意事项】 ① 给药至处死动物的时间必须准确。② 解剖时，须将气管周围的组织去除干净，但要避免损伤血管，另外气管段周围如果附有血液应立即用滤纸吸净，以免干扰的OD值的准确性。
【思考题】 ①根据实验结果，比较中药远志与化学药物氯化铵作用强度。② 分析远志作用的机制可能是什么？
第十二章 安神药和平息肝风药
凡以安定神智为主要功效的药物称为安神药。传统常用药物有酸枣仁、灵芝，多用于心气虚、心血虚或心火盛以及其他原因所致的心神不宁，烦躁易怒，失眠多梦，头晕目眩等证。现代药理学研究证明，多数安神药及安神方剂具有中枢抑制作用，另外还具有镇静、催眠、抗惊厥等药理作用。
凡具有平肝息风或潜阳镇静作用的药物称为平肝息风药。传统常用羚羊角、钩藤、天麻、全蝎等药物及其复方制剂。这一类药物主要用于肝阳上亢、肝风内动所致内风诸病，如阳邪热盛所致高热神昏，四肢抽搐之证等。平息肝风药主要具有镇静、抗惊厥、降压等药理作用，另外还有抗炎、镇痛、解热，抗肿瘤、影响机体免疫功能，影响心血管系统功能以及调节消化系统功能等作用。由于平息肝风药可以作用于中枢神经系统及心血管系统，所以在研究这类药物时，一般从降压和对中枢神经系统方面的影响来设计实验动物模型和实验指标。常用的实验方法如下：
1．降压实验：先在麻醉动物身上观察急性降压作用，再用高血压动物模型进行慢性实验治疗，之后将筛选出来的有效药物进一步研究其降压机理。急性降压实验用来观察药物有无降压作用，多将犬、猫和大鼠等动物麻醉后直接颈动脉测压。也可用不麻醉动物间接测定血压的变化，如大鼠尾容积测压法、犬动脉皮桥测压法、大鼠测压仪测后肢血压等。或直接观察清醒大鼠的血压变化。判断一个药物有无降压作用，需要进行3-5次，实验结果一致时3次即可，倘不一致，则要进行5次或更多次。一般认为，降压数值应为原来水平的40％或更多，维持30min以上才能认为有降压效果，则可进行慢性实验治疗。慢性实验的高血压动物模型有肾型、神经原型和内分泌型等，其中以肾型高血压较为常用。对已形成的高血压动物，每天测压1次，测定时间一般为10d。如果血压不降可加大剂量，延长给药期10d。停药后测压，直至血压恢复到给药前水平为止。如果收缩压和舒张压下降2.66kPa（20mmHg）以上者，则可进行统计学处理，根据结果判断是否有效。如果下降不足1.33kPa（10mm Hg）则认为无效。
2．中枢神经抑制实验：包括镇静、催眠、抗惊厥实验以及镇痛和解热实验。一般常用小白鼠腹腔或灌胃给药后，观察是否出现安静、活动减少、群聚、嗜唾或睡眠等外观行为的改变，或用光电管法、吊笼法、踏轮法观察药物对小鼠自由活动的影响。以及与巴比妥类药物的协同作用。巴比妥类是典型的中枢抑制药，凡是对中枢神经有抑制作用的药物，一般都能增强其中枢抑制作用。对此，常用延长戊巴比妥所致睡眠时间及对巴比妥阈下催眠剂量的影响来进行研究。对抗中枢兴奋药的作用，是利用它们能减低兴奋药的过度自发活动来筛选．也可用其对抗中枢兴奋药毒性，以提高半数致死量来衡量；还可以利用其对抗某种兴奋药的效应来确定作用部位。抗惊厥实验，主要是利用电刺激和化学制剂引起动物惊厥发作，观察药物的影响。常用致惊剂有戊四唑、士的宁、苦味毒、氨基脲等。镇痛实验常用化学刺激法、热刺激法、电刺激法、机械刺激法等各种致痛方法引起疼痛，观察此类中药的致热物质有菌苗液、细菌内毒索、酵母混悬液等，使动物发热后观察此类中药的解热作用，多用家兔作实验动物。
实验12.1 天麻、钩藤对小白鼠的镇静作用(活动计数法)
【目的】通过天麻注射液及钩藤醇提物对小鼠自发活动的影响，了解它们的镇静作用。
【原理】利用小鼠在活动记录仪的实验箱中自发活动时阻断光束的次数，转换成光电脉冲讯号，经一系列电子技术处理后，将额定时间内的自发活动数、由数字显示管定量显示的原理，观察天麻及钩藤组的小鼠活动变化。天麻和钩藤均可使小鼠自发活动明显减少，从而认为平肝息风药功效的发挥似与它们的镇静作用有关。
【器材】小鼠自主活动记录仪、注射器、天平。
【药品】天麻注射液0.12g/ml、钩藤醇提物1g/m1、生理盐水、苦味酸溶液。
【动物】小白鼠。
【方法】取活动度近似的小鼠，按体重随机分为3组，用苦味酸标记。分别腹腔注射天麻注射液0.2ml/10g、钩藤醇提物0.2ml/10g及等容量生理盐水。给药30min后将各组小鼠分别放人自主活动箱中，每隔5min记录1次各组小鼠活动数。连续观察到20min比较给药组与对照组小鼠活动数，用公式计算各给药组小鼠20min累计自发活动抑制率：
对照组小鼠自发活动数－给药组小鼠自发活动数
自发活动抑制率＝ ×100％
对照组小鼠自发活动数
【结果】实验结果按表2记录。
表2 天麻、钩藤对小白鼠的镇静作用（活动计数法）
【注意事项】（1）在测小鼠自发活动时注意保持实验环境的安静及实验条件的一致，否则对实验结果的影响很大。（2）第一只小鼠测完自发活动后，把自发活动箱檫拭干净、尽量去除气味后再放入第二只小鼠，以减少小鼠之间的相互干扰。
【思考题】（1）天麻、钩藤对中枢神经系统的作用有何异同？（2）各举一例以天麻及钩藤为主的中药复方，用传统中医理论与现代药理知识互相印证，解释方义，分析功能。
第十三章 补益药
凡能补充物质，增强机能，提高机体抗病能力，消除虚弱征候的药物，称为补益药。补益药根据其作用和应用范围的不同分为补气药、补血药、补阴药和补阳药四类。传统常用的补益药有人参、黄芪、当归、熟地黄、麦冬、枸杞子、鹿茸、冬虫夏草等以及它们所组成的各种复方。现代药理学研究结果证明，这类药物的药理作用非常广泛，能提高机体免疫功能、神经内分泌功能及中枢神经系统功能，促进物质代谢，延缓衰老，增强某些重要器官和系统的功能，抗肿瘤等。在研究补益药时，一般从影响免疫功能，抗应激能力，益智，促进造血功能，促进物质代谢，影响内分泌功能，延长寿命，促进消化、吸收功能等方面设计实验指标，并结合药物的具体功效和临床应用选择其他项目和指标进行实验。常用的实验方法如下：
1、影响免疫功能实验
（1）影响非特异性免疫功能的实验方法：常选用小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能测定法，小鼠碳粒廓清法，小鼠免疫器官重量法等实验，观察药物对非特异性免疫功能的作用。
（2）影响体液免疫功能的实验方法（特异性免疫功能实验方法之一）：常选用小鼠血清溶血素抗体测定法，鸡红细胞作免疫原的溶血素测定法，单向免疫扩散法等实验，观察药物对体液免疫功能的作用。
（3）影响细胞免疫功能的实验方法（特异性免疫功能实验方法之二）：常选用二硝基氯苯（DNCB）所致小鼠迟发性皮肤过敏反应，小鼠外周血液中T淋巴细胞酶标记染色法等实验，观察药物对细胞免疫功能的作用。
2、抗应激能力实验：实验方法主要包括耐缺氧、耐疲劳、耐高温、耐寒冷、抗辐射等。常选用小鼠耐缺氧能力，小鼠游泳时间，小鼠耐寒能力，小鼠耐高温能力等实验，观察药物抗应激能力的作用。
3、益智实验：实验方法主要包括跳台、避暗、穿梭箱、爬杆、迷津、小鸡的一次性味觉、操作式条件反射和突触传递长时程增强（LTP）等。常选用药物对小鼠记忆获得障碍的影响（跳台法），药物对小鼠空间辨别能力的影响（迷路法）等实验，观察药物的益智作用。
4、促进造血功能实验：血虚动物模型的制备方法有：失血法、化学物质损伤法、辐射损伤法、营养法等。常选用药物对失血性血虚小鼠的补血作用观察，药物对乙酰苯肼所致小鼠血虚的补血作用等实验，观察药物促进造血功能的作用。
5、促进物质代谢实验：常选用药物对小鼠超氧化物歧化酶（SOD）活性的影响（邻苯三酚法），药物对小鼠血浆过氧化脂质（LPO）的影响等实验，观察药物促进物质代谢的作用。
6、其他：可根据补益药的具体功效和应用的特点，安排其他相关实验，如影响内分泌功能，延长寿命，促进消化、吸收功能等实验。
实验13.1人参对小白鼠游泳时间的影响
[目的] 观察人参对小鼠游泳时间的影响，掌握抗疲劳作用药物的常用筛选方法。
[原理] 人参能促进人体对糖原和三磷酸腺苷等能量物质的合理利用，并使剧烈运动时产生的乳酸转化为丙酮酸进入三羧酸循环，为机体提供更多的能量，减轻体力运动时的疲劳。本实验以小鼠游泳时间为指标观察人参的抗疲劳作用。
[器材] 天平、50cm×30cm×25cm的玻璃缸、负重物、温度计、小鼠灌胃器、秒表。
[药品] 人参水煎液2.5g/ml、生理盐水、苦味酸液。
[动物] 小鼠，体重18～22g。
[方法] 玻璃缸内加水，水深20cm，水温保持在20±0.5℃。取4只小鼠，雌雄不限，称重，用苦味酸标记，随机分为两组。给药组每只灌胃人参水煎液0.25ml/10g，对照组每只灌胃等容量的生理盐水，给药后30min在尾部束一2g的重物，并分别放入玻璃缸内游泳，立即计时并注意观察，当小鼠头部沉入水中10s不能浮出水面者即为体力耗竭，停止计时，记录小鼠游泳时间。与对照组比较并进行统计学处理。
综合全实验室的结果，分别算出两组的平均游泳时间
[结果] 按表记录
人参对小鼠游泳时间的影响
[注意]（1）小鼠应该单只游泳，如果两只以上同时游泳，会影响实验结果。（2）水温过高或小鼠负重物较轻均可使小鼠游泳时间明显延长。
[思考题]（1）人参耐疲劳的机制是什么？（2）影响小鼠游泳时间的因素有哪些？
实验13.2人参对小白鼠耐常压缺氧的影响
[目的] 观察人参对小鼠耐常压缺氧的作用，掌握小鼠耐常压缺氧实验方法。
[原理] 缺氧对机体是一种劣性刺激。人参可提高机体的血氧利用率，降低机体耗氧量。同时人参可扩张血管（尤其是冠脉和脑部血管），改善微循环，增加供氧量，改善机体缺氧状态。本实验以小鼠在常压缺氧条件下呼吸停止死亡为指标观察人参的耐缺氧作用。
[器材] 天平、200ml磨口广口瓶、小鼠灌胃器、秒表。
[药品] 人参水煎液2.5g/ml、生理盐水、苦味酸液、钠石灰（或等量氢氧化钠和碳酸钙）、凡士林。
[动物] 小鼠，体重18～22g。
[方法] 取4只小鼠，雌雄不限，称重，用苦味酸标记，随机分为两组。给药组每只灌胃人参水煎液0.25ml/10g，对照组每只灌胃等容量的生理盐水，给药后30min将小鼠放入盛有15g钠石灰的广口瓶内（每瓶只放1只小鼠），用凡士林涂抹瓶口盖严，是之不漏气，立即计时。以呼吸停止为判断死亡指标，记录小鼠因缺氧而死亡的时间。与对照组比较并进行统计学处理。
综合全实验室的结果，分别算出两组的平均存活时间
[结果] 按表记录
人参对小鼠耐常压缺氧的影响
[注意]（1）瓶盖应注意封以免漏气，否则会影响实验的结果。（2）每个广口瓶最好只放1只小鼠，以免互相扰动影响实验结果。（3）钠石灰吸水和二氧化碳变色以后应立即更换
[思考题]（1）人参对小鼠耐常压缺氧的影响及其机制是什么？（2）本实验的影响因素有哪些？
实验 13.3 四物汤对失血性“血虚”小白鼠的补血作用
[目的] 学习失血性血虚动物模型的制备方法，并观察四物汤的补血作用。
[原理] 血虚证多为失血过多，人为的放血可使红细胞计数及血红蛋白的含量显著降低，类似临床血虚症状。四物汤具有补血调血之功效，为补血调经的主方，对诸多血虚证均以本方为基础随证化裁。现代药理研究表明该方具有良好的抗贫血作用，能改善急性失血性贫血小鼠骨髓造血功能，增加RBC、HB和网织红细胞等有形成分。
[器材] 眼科镊、0.5ml弹头小塑料管、棉球、血细胞计数仪、灌胃针等。
[药品] 四物汤（SW）口服液（浓度为0.833g/ml）、生理盐水。
[动物] 小鼠，♂，体重18-22g。
[方法] 取小鼠，随机分为正常对照组、模型对照组、四物汤组，除正常对照组不放血外，其余两组小鼠眼眶放血0.5ml，同时各组测HB和RBC，24h后再次取血测HB和RBC，并随即灌胃给药0.2ml/10g（体重），正常对照组和模型对照组给予等量生理盐水，连续给药7日，于第八日取血测HB和RBC。
[结果] 按表11-1-1、11-1-2记录。
表11-1-1 四物汤对失血性血虚小鼠HB含量的影响（X±SD）
表11-1-2 四物汤对失血性血虚小鼠RBC数的影响（X±SD）
[注意] （1）眼眶取血应准确控制取血量。（2）注意用棉球止血。
[思考题] （1）分析、讨论实验结果，如与理论不符请说明原因。（2）四物汤补血作用的机理是什么？还可用哪些方法证明？
实验 13.4 复方党参对小白鼠记忆获得性障碍的影响（跳台法）
[目的] 学习记忆损伤动物模型的制备方法，并观察复方党参对小鼠记忆获得障碍的改善作用。
[原理] 跳台法又称一次性被动回避性反射法。将2～10个跳台小间并联起来，小间内放置一绝缘跳台，底部铺可以通电的铜栅。动物在训练中受到电击，可以跳上跳台逃避电击，获得记忆。模型组动物受到化学药品的损伤，在一定时间内记忆力下降，造成各种记忆障碍模型。如训练前给药可以造成学习和记忆获得障碍；训练后短时间内给药可产生记忆巩固和保持缺损；测验前给药可引起动物记忆再现障碍。在记忆障碍动物模型身上观察益智药物对动物学习记忆能力的影响。复方党参具有益智作用，可以有效的改善学习与记忆功能。
[器材] 跳台反射箱，箱内用不透明黑色塑料板，底部铺有粗铜丝，间隔0.5cm。每格内放一直径4.5cm，高4.5cm皮垫作为跳台。
[药品] 复方党参口服液（浓度为0.5g/ml）（党参0.42g，炙干草0.08g，茯苓、陈皮、苍术、木香、大枣各0.1g，炼蜜0.33g）、樟柳碱、生理盐水。
[动物] 小鼠，♂，体重18-22g。
[方法] 取健康小鼠，称重，标记，随机分为3组，第三组灌服复方党参口服液0.2ml/10g（体重），即10g/kg（体重）；第一、第二组灌服等容量生理盐水（NS），每日1次，连续10日，末次给药后1h，进行跳台训练。训练前10min第二、第三组腹腔注射樟柳碱（Ani）5.5mg/kg（体重），造成小鼠记忆障碍模型。第一组腹腔注射等容量生理盐水。
训练时将跳台仪与可调变压器相连，电压控制在36V。每组各有1只小鼠给药，平行操作，10min后再给第二只小鼠注射。将第一批5只小鼠分别放在跳台仪的5个格子内，适应环境3min，通电，小鼠受电击后跳上跳台，跳下时双足同时接触铜栅为触电，视为错误反应，训练5min，并记录触电次数。24h后测试记忆成绩（5min内跳下次数）。结果采用t检验法分析。
[结果] 按表11-2记录。
表11-2 复方党参对小鼠记忆获得性障碍的影响（X±SD）
[注意] （1）各组实验时条件尽量保持一致，室温应控制在20～25℃，保持环境安静，光线不宜过强。（2）对电刺激的反应小鼠之间差异较大，测量两前肢脚掌电阻在150～300kΩ之间作为合格，否则弃之不用。（3）采用记忆损伤模型进行实验时，为保证模型复制成功，每次实验要采用同一批动物进行预试验，找出樟柳碱的最适剂量。（4）实验过程中及时清理铜栅上的大小便，以免影响触电效果。（5）具有益智作用的药物多作用缓慢，给药时间不宜过短，通常不少于3～5日。
[思考题] （1）樟柳碱造成实验小鼠记忆障碍的机制是什么？（2）复方党参改善实验小鼠记忆障碍的机制是什么？（3）还有哪些常见的因素能导致记忆障碍？相应的还有哪些药物对记忆障碍有改善作用？
第十四章 设计性、综合性实验
一、实验设计的基本要素与方法
实验设计是科学研究计划中关于研究方法与步骤的一项内容，是实验研究所涉及的各项基本问题的合理安排。严密合理的实验设计是顺利进行研究工作的保证，同时也能最大限度地减少实验误差以获得精确可靠的实验结论，甚至可以使研究工作事半功倍。
无论是新药的创制还是药物的某项药效学验证，其药理学实验设计都包括最基本的三大要素，即处理因素、实验对象与实验效应。
一、处理因素
实验中根据研究目的确定的由实验者人为施加给受试对象的因素称为处理因素，如药物、某种手术等。在设置处理因素时，应注意以下几个问题：
(1) 确定实验中的处理因素及强度：由于因素不同及同一因素水平不同，造成因素的多样性，故在实验设计时，有单因素及多因素设计之分。所谓单因素设计是指给予一种处理因素，如观察药物处理前后的变化。多因素设计是指给予几种处理因素同时观察。
此外，处理因素的水平可以是单一水平也可以是多水平。单因素单水平的实验简单易行，但效率低，如观察普萘洛尔单一使用剂量对血压的影响；单因素多水平的实验效率较高，并且使用广泛，如“不同剂量前列腺素对血小板聚集的影响研究”；多因素单水平的实验效率也较高，如“锌、锰、钼对氟中毒大鼠的拮抗作用研究”；多因素多水平的实验研究效率高，但实验条件较难控制，如“A、B、C三种药物的药效学比较”，其中每种药物有3个水平，需比较出最佳药物及剂量。
一次实验涉及的因素不宜过多，否则会使分组增多，受试对象的例数增多，在实际工作中难以控制。但处理因素过少，又难以提高实验的广度和深度。
(2) 明确非处理因素：非处理因素虽然不是我们的研究因素，但其中有些因素可能会影响实验结果，产生混杂效应，所以这些非处理因素又称混杂因素。如进行两种降压药物的药效学比较时，非处理因素可能有年龄、性别等。若两组年龄、性别构成不同，则可能影响比较结果。设计时明确了这些非处理因素，才能设法消除它们的干扰作用。
(3) 处理因素的标准化：处理因素在整个实验过程中应做到标准化，即保持不变，否则会影响实验结果的评价。如实验设计中处理因素是药物时，则药物的剂型、给药途径、质量(成分、出厂批号等)必须保持不变。
二、实验对象
实验对象的选择十分重要，对实验结果有着极为重要的影响。药理学实验主要实验对象包括整体动物(正常动物、麻醉动物和病理模型)、离体器官、组织及细胞等。选择何种对象应根据实验目的、方法以及各种动物或标本的特点来决定。理想的病理模型对研究药物的治疗作用是非常有益的。
三、实验效应
实验效应是指受试对象在处理因素作用后呈现的反应或受到的影响，其具体表现形式是指标。这些指标包括计数指标(或定性指标)和计量指标(或定量指标)等。指标的选定需符合以下原则：
(1) 特异性：即选用能反映某一特定现象且不与其他现象相混淆的指标，如血压(尤其是舒张压)可作为高血压病的特异指标；尿生化检测中尿素氮和肌肝可作为肾功能衰竭的特异指标。
(2) 客观性：即选用易于量化的、经过仪器测量和检验而获得的客观指标，如心电图、血常规分析等化验室的检查结果，以及病理学的诊断意见、细菌学培养结果等，而少用易受研究人员心理状态、感官差异等影响的主观指标。
(3) 重复性：即在相同条件下，指标可以重复出现。为提高重现性，需注意仪器的稳定性，减少操作误差，控制动物机能状态和实验环境条件。在注意到上述条件的情况下，重现性仍然很小，说明该指标不稳定，不宜采用。
(4) 灵敏性：即能根据实验要求相应显示出微小的变化。它是由实验方法和仪器的灵敏度共同决定的。如果灵敏性差，对已经发生的变化不能及时检测出来或常常得到假阴性结果，这种指标应该放弃。
(5) 精确性：精确性包括准确度和精密度两层意思。准确度是指观察值与真值的接近程度，主要受系统误差的影响。精密度是指重复观察时，观察值与其均数的接近程度，其差值属随机误差。实验效应指标要求既准确又精密。
(6) 可行性：即指标既有文献依据或实验鉴定，又符合本实验室和研究者的技术设备和实际水平。
在选择指标时，还应注意以下关系及特点：①计量指标优于计数指标，将计数指标改为半定量指标也是一大进步；②动态指标优于静态指标，如体温、疗效、体内激素水平变化等，可按时、日、年龄等作动态观察；③所选指标要便于统计分析。
二、实验设计的方法与步骤
1. 查阅文献，确定选题和提出立题依据。
选题时一定要注意所选课题应具有科学性、创新性和可行性，特别应是创新性和可行性的辩证统一。
(1)科学性：是指选题应建立在前人的科学理论和实验研究基础之上，应符合科学规律，而不是毫无根据的胡思乱想。
(2)创造性：是指选题具有自己的独到之处，或提出新规律、新见解、新技术、新方法，或是对旧有的规律、技术、方法有所修改、补充。
(3)可行性：是指选题切合研究者的学术水平、技术水平和实验室条件，使实验能够顺利得以实施。
2. 明确实验目的，设计实验方法和实验步骤
一般根据实验目的和要求确定实验方法，实验设计方法包括有完全随机化设计、随机区组设计、析因实验设计、正交实验设计等等，其中应用极为广泛的设计方法主要是前两种。当处理因素只有一个(可为多个水平)时，可用完全随机设计。当受试对象按一定条件配成对或区组时，可用配对设计或区组设计。
完全随机化设计中只有一个处理因素，但有几个研究水平，每个受试对象随机分配到各个实验组。这种设计方法是其它设计方法的基础，体现了实验设计的随机化原则。随机区组设计是配对设计的扩大，它将多个条件相近的受试对象配成一组称为一个区组。例如某实验中有五个对比组，将五个条件相近的受试对象用随机方法分配到各组中，则此五个受试对象称为一个区组，该实验共有5个区组。随机区组设计使组间均衡可比性增强，减少了个体差异对实验结果的影响，并且提高了实验效率，可减少样本量。
实验设计内容应包括以下几项：
(1) 选择实验对象；
(2) 确定样本例数及分组方法；
(3) 确定给药途径、给药剂量和观察时间；
(4) 确定观察指标及测定方法；
(5) 拟定数据统计分析方法。
3. 进行预实验
预实验的目的在于检查各项准备工作是否完备，实验方法和步骤是否切实可行，测试指标是否稳定可靠。根据预试结果，调整或修改设计方案，并确定正式进行实验的条件。
对于探索性实验，在完成实验设计之后可从学生的实验设计中选择部分进行正式实验，收集、整理实验资料并进行统计分析，最后总结和完成论文，进行论文答辩。
三、实验设计与选题
范例 某味中药对蛋清致大白鼠足肿胀的影响
[目的] 通过采用鸡蛋清制备大白鼠足急性炎性肿胀模型，选择足容积变化值为观察指标，证实药物是否具有抗炎作用。
[器材] 天平、鼠笼、软塑料尺、注射器等。
[药品] 秦艽水煎醇沉液5g/ml、5mg/ml地塞米松注射液、生理盐水、10%新鲜鸡蛋清生理盐水溶液、苦味酸液。
[动物] 雄性大鼠，体重150-200g。
[方法] 取大鼠24只，称重，用苦味酸标记。将大鼠右后肢拉直，用软塑料尺量取足跖或踝关节的周长，连续两次，其平均值为致炎前的正常周长。
动物随机分为3组，分别腹腔注射以下药物：甲组生理盐水0.1ml/100g，乙组秦艽水煎醇沉液0.2ml/100g(10g/kg)，丙组地塞米松注射液0.1ml/100g(5mg/kg)。30分钟后在每鼠右后肢足掌远端进针至踝关节附近，皮下注射10%新鲜蛋清溶液0.1ml。致炎后30、60、90和120分钟分别测量各组大鼠足跖或踝关节的周长。
按下列公式计算出各药在不同时间点的足肿抑制百分率：
给药后足跖或踝关节的周长-正常足跖或踝关节的周长
足肿百分率= ×100%
正常足跖或踝关节的周长
对照组足肿百分率-给药组足肿百分率
足肿抑制率 = ×100%
对照组足肿百分率
[数据处理] 采用组间t检验。
表1 秦艽水煎醇沉液和地塞米松对大鼠蛋清性足肿胀的影响（X±SD）
[备注] （1）塑料软尺不能有弹性，刻度以1/5mm左右为宜，测量应由专人来操作，每次均必须在同一位置上。（2）另可采用容积测量法，是目前较为常用的足跖测量法，可适用于小鼠。
实验设计选题
【选题1】证实A药的祛痰作用。
【选题2】通过动物实验设计，证实B药的抗炎作用。
【选题3】通过动物实验设计，证实C药的细胞免疫抑制作用。
【选题4】通过动物实验设计，证实D药的保肝作用。
【选题5】通过动物实验设计，证实E药的抗高血压作用。
【选题6】已知某中成药具有活血化瘀，理气止痛之功效，临床用于胸中憋闷，心绞痛。设计实验方案，并通过实验证明该中成药的功效和应用。
四、综合性实验设计
将不同学科的实验内容有机结合，形成几个系统化的大型实验。
“柴胡解热作用的物质基础及机理研究”：
实验内容涉及到药鉴、药化和药理学科内容，主要内容：
① 药材的购买及品种的鉴定。（药鉴+药化）
② 柴胡不同提取组分解热作用的比较（药化+药理）
③ 进一步对有效组分的解热作用进行比较（药化+药理）
④ 确认之后的有效组分解热机理的研究（药化+药理）
附录：
常用实验仪器介绍
一、BL-420生物机能实验系统
BL-420生物机能实验系统是配置在微机上的4通道生物信号采集、放大、显示、记录与处理系统。它由以下三个主要部分构成：IBM兼容微机、BL-420系统硬件、BL-NewCentury生物信号显示与处理软件。
BL-420系统硬件是一台程序可控的，带4通道生物信号采集与放大功能，并集成程控刺激于一体的设备。其正面是由CH1、CH2、CH3、CH4组成的四个5芯生物信号输入接口（可连接引导电极、压力传感器、张力传感器等，4个输入通道的性能完全相同），、1个触发输入接口、1个刺激输出接口、1个记滴输入接口以及电源指示。BL-NewCentury生物信号显示与处理软件可同时显示4道从生物体内或离体器官中探测到的生物电信号或张力、压力等生物非电信号的波形，并可对实验数据进行存贮、分析及打印。其原理主要是将原始的生物机能信号，包括生物电信号和通过传感器引入的生物非电信号进行放大、滤波等处理，然后对处理的信号通过模数转换进行数字化并将数字化后的生物机能信号传输到计算机内部，计算机则通过专用的生物机能实验系统软件接收从生物信号放大、采集卡传入的数字信号，然后对这些收到的信号进行实时处理。
（一）仪器特点
1. 抗干扰能力强，工作稳定可靠，硬件的全部功能均由软件控制完成；
2. 增益：交、直流2~50,000倍，适应各种强弱不同的生物电信号；
3. 四个通道扫描速度独立可调，方便实现不同通道波形的同步或非同步显示。
（二）使用方法
首先将BL-420系统与计算机相连，打开电源，接着运行已经安装好的BL-NewCentury生物信号显示与处理软件，并将实验所需的生物机能传感器在BL-420系统硬件上与相应的通道接口相连，即可进行实验。下面以观察Ⅱ导联心电和动脉血压为例，介绍BL-420生物机能实验系统的使用方法。
1)标准Ⅱ导联心电的测定、观察（以家兔为例）
1. 实验开始前对BL-420生物机能实验系统进行调零、定标，原则上调零和定标操作在整个实验系统的使用过程中只需进行一次。点击顶级菜单条上的“设置”才单项，在下拉式菜单中选择“定标”目录下的“调零”选项，点击后按“确定”，会弹出“放大调零器”对话框，使用“增档”或“减档”按钮对四个通道进行调零。完毕后，按“确定”按钮存储调零结果并结束本次调零操作。完成后再选择“定标”目录下的“定标”选项，输入密码后，在定标对话框中的“定标值”输入“10”，在“信号选择”中，选择“张力g”。选择通道，在定标类型中选择“定零值”，将张力传感器插入到所选通道，不加配重，调节零点，使输入信号处于离通道基线最近的位置，按下“定标”按钮（仅在第一个通道定标时需以上步骤）；再选择“定标准信号”，在张力传感器上挂一10g砝码，使输入信号处于非饱和状态，信号稳定后，按下“定标”按钮，完成所选通道定标。
2. 将生物电信号引导电极的5芯插口与生物机能实验系统的1通道相连，在实验动物的右前肢、左后肢、右后肢各插入一注射用针头，然后将引导电极的白色、红色及黑色鳄鱼夹分别与上述针头连接。
3. 选择“输入信号”菜单中“1通道”的子菜单项的“动物心电”选项，再单击工具条上的“开始”命令按钮开始实验。
2)实验动物动脉血压的测定、观察（以家兔为例）
1. 在1通道的输入接口连上血压传感器。
2. 将动脉插管与血压传感器相连后，分离家兔股动脉（或颈动脉），结扎动脉远心端，在近心端插管并固定。
3. 选择“输入信号”菜单中的“1通道”菜单项选择“压力”选项，单击工具条上的“开始”命令按钮开始实验。
根据实验需要，还可依照以上试验步骤，换用压力传感器、张力传感器、呼吸传感器等，进行相关的实验。在实验中，如在1通道连上生物电引导电极、2、3通道分别连上血压传感器，还可选择“实验项目”下的“循环实验”子菜单中的“血流动力学”选项，可分别观测Ⅱ导联心电、左心室内压及动脉血压。同样方法还可应用于“减压神经放电”等实验。
（三）注意事项
1.实验前的定零值和定标准值是必要步骤。为了获得精确的定标值，或者说测量结果，一般在一台生物机能实验系统上进行定标的传感器不要和在其他生物机能实验系统上定标的传感器混用。定标时的标准值也不要加得过大。
2.在使用BL-420生物机能实验系统工作的同时，最好不要使用其他的Windows应用软件，以免占用处理器的有效时间，使正处于数据采集的系统出现问题。在进行数据采样与处理时，不要用太长的时间去移动BL-NewCentury主界面中的其他对话窗口，也不要启动其他实时监控程序。
二、JH-2肌张力传感器
JH-2肌张力传感器是一种用途较广的微力测量传感器，它具有灵敏度高、线性度好、使用方便、测量可靠等特点，可以用于肌肉张力、呼吸率、液滴计数等生理指标测量中，亦用于某些物理测量过程中。
（一）使用方法：
1.根据测力的方向，将传感器的固定杆固定在合适的支架上，即要保证方向和力的敏感梁（弹簧片）的平面垂直，又要保证传感器的受拉方向正确。测力方向指向弹簧片引出口间隙较大的一方。
2.将传感器的固定杆的固定平面向下并使梁保持水平，传感器的电源和放大器或记录器按“电缆插头接线说明”接好、通电预热10分钟后，按等重量（满量程的五分之一）地加砝码至满量程，这时可在记录器上得到相应的等距离的标定线（注意：在正式标定前，先用满量程砝码预压两次）。标定结束后即可开始实验进行测量。
3.用毕后，从架上拆下传感器，清理干净。
（二）注意事项：
1. 测力时过负荷量不超过满量程的20%。
2. 传感器内不得灌入液体，否则将可能损坏。
3. 传感器避免打击和撞击，调零时不得太用力，否则电位器易损坏。
4. 使用时，应保持测力的方向正确。
5. 二次仪表或传感器电源变更时，应重新定标。
6. 传感器不得摔打或抛扔，以免损坏。
三、换能器
机体内的很多生物活动都能以非电能的机械形式表现出来，要把这些非电量信号用生理记录仪进行纪录，就必须将它们转换成电信号，并经过放大，才能在电生理仪上显示和记录。这种将生理活动的非电量信号转换成电信号的装置成为换能器，下面简单介绍常用的血压换能器。
血压换能器：本换能器能将血压变化的信号转变为电信号，再经血压放大器将此信号放大，可在记录仪上直接进行描记。此换能器精确度高，线性好，操作也方便。
血压换能器的测量范围因型号不同有差异，一般测量范围为－6.7~+40.0kPa（－50~+300mmHg）。使用时，应垂直安放，使其转换时零点变化小，排除气泡亦方便。实验开始前应先将换能器位置调整合适，固定后再与二导生理仪的血压放大器相连，以减少使用时校正平衡的麻烦。
四、心电图机
心电图机也是药理实验常用的仪器，用以检测药物对人或动物心脏的影响。
（一）使用方法：
1.取导线一段（长7~8cm），用中号针灸针或头皮输液针头一个焊接在导线的一端，另一端焊接鳄鱼夹一只即成，用以代替心电图机原配电极板，作为针形电极。使用时将针头刺入动物肢体皮下，以鳄鱼夹夹住心电图机的原配肢体电极。
2.接通电源前，导联选择置“0”位，衰减1，记录开关置“准备”位，零调节器和温调节器调于中间位置。接通地线与电源线，预热5~10min。将记录开关转至“观察”，走纸变速开关拨至25mm/s。此时试定标按钮，热笔应上下摆动。随即将记录开关拨至“记录”位，记录纸即可行走。重复按此定标按钮，即可在走纸上描记出10mm左右振幅的方波。调节增益细调，使1mV标准电位产生10mm的振幅；调节笔温调节器，使热笔描出的线条浓淡合适。
3.将电极线按规定连接自制的各针形电极，然后按红色——右前肢、黄色——左前肢、蓝（绿）色——左后肢、黑色——右后肢的顺序，将导联线上的针形电极刺入动物的四肢皮下。测胸导联时则另将白色导联线上的针形电极刺入胸前皮下。
4.将记录开关置“准备”位，导联选择拨至所需导联（如了解药物对心率的影响，用Ⅱ导联即可），再将记录开关转至“观察”位，即可看到描笔跳动。调节零点后，将记录开关转至“记录”位置，描记出该导联的心电图。以后如拨动导联选择器，尚可描记出其他导联的心电图。
5.向下按动装纸扳手，装纸架自动弹出；将其取出，将记录纸夹在装纸架中间有弹性的部分后将装纸架放下，按下即可。
正常心电图的波形见下：
6.心率的测量：有以下两种方法，但均按走纸25mm/s计算；如走纸50mm/s所得结果应乘以2。
（1）数30个大格（一格为0.2s）中的R波或P波的数目，乘以10即为心率（次/min）。
（2）测定两个P波或两个R波间的时间，代入下式：
（二）注意事项：
1.仪器必须良好接地，连续使用不要超过3h。
2.导联线必须接触良好，以减少交流干扰；针形电极不能刺入四肢肌肉，以免肌肉干扰。
3.若发现描笔阻尼过大或不足，应拆开机壳，调节阻尼电位器直至正常。
4.可根据实验需要，调节仪器灵敏度至5mm/mV或15mm/mV。描记小鼠或大鼠心电图示，可将纸速拨至50mm/s档。灵敏度和纸速都必须写在记录纸上，以便测量。
5.应定期更换定标电压的锌汞电池（约3个月1次）。
五、YLS-6A智能热板仪
热板法是镇痛药物筛选、检测中常用的一种方法,也是一种能确定区分中枢神经和末梢神经镇痛机理的方法，有较宽的实用范围。YLS-6A智能热板仪是我校教研室近年来较新置的仪器。该仪器使用方便，指标明确，对组织损伤小，动物可反复使用，痛反应的潜伏期较长，便于观察及测出药物之间的较小差异，以利于比较药物镇痛作用的强弱、快慢及持续时间。（附图1-1）
（一）仪器特点：
1.热板表面进行了镍磷合金处理，使表面光泽度完全符合热板法实验要求，动物足底与热板充分接触；
2.仪器温度自动控制，使热板表面温度控制在0.2℃之间,确保实验结果准确；
3.计时准确,精确到0.01秒确切地反映出药物对痛域的影响。
（二）使用方法：开机，设定温度，按动“升温”或“降温”按钮进行调整，当温度设定好后仪器自动进入调温阶段，达到设定值后，即可进行实验。此时拿掉热板仪上的有机玻璃罩，将被测动物其后足贴于热板上，在放上的同时按“计时”按钮开始计时，待动物添后足时再按一下“计时”按钮时间锁定，记录其痛阈值。
（三）注意事项：
1.该仪嚣的整板表面虽经过处理有一定硬度但也不可用过硬的物品刮擦，避免损坏；
2.清理动物粪尿时不要用大量水沖洗避免渗漏到仪器山内部造成损害；
3.仪器温度升至较高温度时使用中应注意避免烫伤；
4.仪器使用完后应及时关闭电源清理干净放到通风干燥处，避免砸碰等硬性损坏。
附图1-1 附图1-2
六、ZZ-6小鼠自主活动测试仪
研究镇静、催眠药物，可研究药物对小鼠自发活动的影响。ZZ-6小鼠自主活动测试仪是我校药理教研室最新引进的药理仪器之一，由可分离反应箱和微电脑控制箱组成，可同时对6只小鼠进行自主活动的测试实验。（附图1－2）
（一）仪器特点:
1.独具自主活动中小鼠站立计数功能；
2.双排反应箱设计，可同时进行6只小鼠实验；
3.高分辩率36个红外阵例探测点，大大提高灵敏度，数据更加准确可靠；
4.液晶显示实验数据，可同时显示6组小鼠活动和站立次数；
5.具备PC机数据通讯采集分析功能，自动完成数据采集和分析。
（二）使用方法：接通电源，开启开关，4s后仪器自动进入参数设置界面。设置参数，按“日期”键，用“+”、“-”号键改变表示年的数字，设定好年份后，再按“日期”设定月和日；按“定时”键，设定实验测试时间，在00分钟→05分钟→10分钟→20分钟→30分钟→60分钟→00分钟之间循环。待设置参数完成后，将实验用小鼠放入反应箱中，每格1只，盖好上盖，再将反应箱放入反应糟；按“启动”键，仪器便开始记录自主活动次数和站立次数，待测量时间达到设定的定时时间后，测量自动结束。
（三）使用注意：测量时应保持安静，不应有强光、震动、噪声等可能对小鼠自发活动形成干扰的刺激。
七、HW-400S 恒温平滑肌槽
HW-400S 恒温平滑肌槽主要用于平滑肌生理实验中，调节和维持实验环境（如实验环境温度），从而保证离体平滑肌的生理活性，使相关实验进行。
（一）仪器特点：
1.具自动加液功能，大大节约了实验用液，增加了整机的稳定性；
2.数字式温度传感器提高控温精度，温度调节分辨率达0.1℃；
3.双温度探头使控温和显示更加准确（显示实验药液内温度）；
4.内置式空气泵自动给药筒供气，且气量大小可调节，保证离体平滑肌的活性；
（二）使用方法：首先将平滑肌槽右侧的排液口和排水口均置于关闭状态；在恒温平滑肌槽内添加足够量的蒸馏水，水量达到建议水位线；接通电源，开启开关，此时数码管和加热指示灯快速闪烁，表明系统尚未处于加热状态；当确认水域内加水后，轻按温度设定旋钮，系统进入加热状态；设定实验温度；按下自动加液按钮，将营养液从预热筒加到实验筒；调节气量调节阀，保证在加热过程中有较大的气泡对药液进行搅拌；待温度达到设定温度后放入实验样本。
（三）使用注意：
1.水域内无水时严禁加热；
2.使用后请用清水冲洗放药液的小筒，防止放液筒被药液腐蚀或出气嘴被残留物堵塞；
3.设备每次使用后，请将水域内的水排放干净。
HW-400S 恒温平滑肌槽
BP-6动物无创血压测量系统
八、BP-6动物无创血压测量系统
BP-6动物无创血压测量系统采用目前国际上流行的尾袖法无创测量血压原理，用于慢性实验中动物动脉血压的观测，动物不需要麻醉，无创伤，使用方便，适用的动物包括大白鼠、小白鼠、猫、狗等。该系统由8道生物机能实验系统、鼠尾固定充气装置、脉搏记录传感器等组成。
该系统测量血压动物不需要麻醉，无创伤，使用方便；通过8道生物机能实验系统不仅可以完成无创血压测量功能，而且还可记录其他生物信号，如：张力、心电等，大大拓宽了适用范围；一次可同时测量6只大鼠血压，大大提高了工作效率；
自动充气进行血压阻断，平缓放气过程中保证测量数据的准确性。
九、PV-200足趾容积测量仪
PV-200足趾容积测量仪是我校最新购置的药理实验仪器之一，该仪器通过测量鼠类足趾致炎肿胀后的消肿过程中体积的改变来评价药物疗效，可用于解热抗炎类药物的研究以及药物产生致炎副作用的检测。
(一)仪器特点：
1.对使用介质无特殊要求，清水即可；
2.容积读出快捷，达到秒级标准；
3.配置可灵活摆放，使得反光观察镜方便观察；
4.计量准确，配置脚踏开关，无需动手，便于锁定读数。
(二)使用方法：
接通电源，仪器自检，待自检完成后即可开始实验。选择“新建实验项”，按“确定”键，设置本组实验动物数，设置完毕后按“确定”即可进入测量状态（每次测量前需按“清零”键清零）。测量开始时，将待测鼠的足趾浸入烧杯的清水中，当提示“按脚踏开关确认数据”时，立即踩脚踏开关，此时便得到测量数据。记录后，将本次测量鼠移走，踩下脚踏开关，准备下只测量，直至完成。
PV-200足趾容积测量仪
实验动物给药量的计算
实验动物的给药量常按g/kg（体重）、mg/kg（体重）、ml/kg（体重）或按体表面积来计算，一般是通过动物之间或动物与人之间的计量换算而得。换算方法大致有以下几种。
(1）按体型分数换算法：通常采用下列公式：
式中dB是欲求算的B种动物（包括人）的kg体重剂量，dA是已知A种动物（包括人）的kg体重剂量；WA、WB是已知动物A、B的体重；RA、RB是动物的体型系数见表2-3-1。
表2-3-1 动物与人的体型系数
例：已知家兔2kg，用药50mg/kg，求算家犬5kg体重的用药量。
dA=50、RB=0.104、RA=0.093、 WA=2、WB=5，代入上述公式：
(2）按动物与人体表比换算法：见表2-3-2，表2-3-3。
表2-3-2 实验动物与人体表面积比
例：已知体重12kg的犬，其每日服药剂量为10mg/kg（体重），每日总量为120mg，试求人的日服药量。
人日服总量=人日服总量*人与犬体表比
=120*3.1=372mg
例：某利尿中药大鼠给药的剂量为250mg/kg（体重），试粗略估计犬灌胃给药时可以试用的剂量。
解1：直接计算法
实验用大鼠的体重一般在200g左右，其体表面积（A鼠）为：
250mg/kg的剂量如改以mg/m2表示，即为：
表2-3-3 不同种类动物间用药剂量换算时的常用数据
解2：利用表2-3-3“mg/kg—mg/m2”计算法
将某动物按mg/kg计算的剂量乘以相应的转换因子，即为按mg/m2计算的剂量。
解3：利用附表2-3-3“每1kg体重占有体表面积相对比值”计算法
常用抗凝剂的配制、用法和选择
常用的抗凝剂大致分为三类，一类为化学药品，其作用为消除钙离子的作用，使血液中的钙变成可溶性的，但不离子化的络合物，药物如枸橼酸钠，草酸盐和二乙酸四乙胺四乙酸二钠等。另一类为生物制剂，如肝素，其作用是阻止凝血酶的生成，从而抗凝。第三类为离子交换剂，系采用物理性方法防止血液凝固。
1.枸橼酸钠（Sodium citrate）：溶于水，不溶于醇。可直接用本品粉末，每毫升血液加3-5mg，用于细胞沉降率测定。按30mg/ml的枸橼酸钠溶液一份，血液9份比例混合即可使血液不凝固。
因本品碱性较强，可用枸橼酸调整pH值接近7.0，所含成分为枸橼酸钠56mg/ml，枸橼酸5mg/ml和葡萄糖29mg/ml，称为复方枸橼酸钠抗凝剂，常用于各种动物连接血压计时的抗凝。现用的枸橼酸钠有两种：
（1）枸橼酸三钠（Trisodium citrate）：有两种结晶水含量不同的成品，一种是2Na3C6H5O7-11H2O，其与血浆成等渗浓度3.8%；另一种是Na3C6H5O9-2H2O，与血浆成等渗浓度为3.2%（2.5-4.0%），均为碱性，枸橼酸或其盐与钙的作用生成可溶性络合物，当制成2.5%溶液时，pH 值为7.5。最低抗凝浓度为0.2%，一般在血液中的最终浓度应为0.4-0.6%，是长久以来国际上通用的抗凝剂。
（2）枸橼酸二钠（Disodium citrate）：因其中含有大量枸橼酸离子，属于酸性的枸橼酸钠。3.5%溶液的pH为4.5，其优点是：简化了配制手续；防止高压消毒时葡萄糖的焦化现象，但在大量输血时，枸橼酸钠可能产生毒性反应。
1.草酸钾（Potassium oxalate）和草酸钠：草酸钾溶于水，微溶于醇，具有溶解度大，抗凝作用强的特点。体外抗凝时1ml血液用草酸钾1-2mg，微量检验用血较少时，可配成20mg/ml溶液。也可根据需要，用100mg/ml草酸钾溶液放入试管中摇动，使其分散浸湿管壁周围，置60℃烘箱内烤干。草酸钾溶液0.1ml（相当于固体10）可阻抗5ml血液凝固。烘烤温度若超过80℃，可使草酸钾分解成碳酸钾而失去抗凝作用。由于本品抗凝系血液内的钙离子结合形成不溶性草酸钙而阻止血凝，故含钾、钙的血样不能用其作抗凝剂。此外，草酸钾对乳酸脱氢酶、酸性磷酶及淀粉酶也有抑制作用。
草酸钠抗凝作用与草酸钾相似，常用于凝血因子测定；不适用于含钠、钙的血样检查。
2.乙二胺四乙酸二钠(Disodium ethylenediamine-tetra-acetate,EDTA-2Na):溶于水，微溶于醇。本品与钙结合比枸橼酸钠强10倍，是一种强力抗凝剂。其水溶液的pH约为5.3。体外抗凝用其1%的溶液。取EDTA-2Na1g，氯化钠0.7g，加蒸馏水100ml，过滤后即成。
3.三羟戊二酸钠（Sodium trihyroxy glutarate,C5H7O7Na2）:本品可代替枸橼酸钠，抗凝力弱。7%溶液的pH为4.3，抗凝力相当于2-3.5%枸橼酸盐溶液。本品不良反应较少，对红细胞基质能起加强作用。
4.肝素（Heparin）:是一种酸性粘性糖，常用其钠、钾、锂盐，易溶于水，不溶于多种有机溶媒。可接受110℃高压消毒30min；安瓿装溶液常置冰箱中保存。肝素作用是阻止凝血酶的生成，其作用很强，是常用的全身抗凝剂。纯肝素10mg能抗凝65-125ml血液（按市售的肝素钠溶液1mg等于125iu计算，则10-20iu可抗凝1ml的血液）。由于肝素制剂纯度及其保存时间长短不同，因而其抗凝效果不一。一般可配成10mg/ml肝素生理盐水溶液，用时取0.1ml于试管内，100℃下烘干，每管能抗凝5~10ml血液。也可用注射器吸取配好的肝素浸湿管壁，直接抽血于注射器内而使血液不凝。还可用其溶液分装于用过的洗净的小玻璃瓶内，在37-56 ℃温度下蒸发水份后成粉使用。动物实验作全身抗凝时，一般剂量为：大鼠2.5-3mg/200-300g体重，兔或猫10mg/kg，狗5-10mg/kg。如纯度不高，又是过期者，应用时剂量可增加2-3倍。
5.离子交换剂：除去血液中的钙离子，产生抗凝。因该血液内不含抗凝物质，故无中毒危险；但不能用于血液保存，多用于白细胞和血小板的分离。常用的离子交换剂有
(一)苯核磺酸（Dowex-50,苯乙烯）：每200-400ml血液使用25-30mg。
(二)羟酸型（Amberlite IRC-50,丙烯酸）：每200-400ml血液使用25-30mg。
(三)苯核磺酸（Permitite Q）:属于磺化碳氢化合物，每200-400ml血液使用25-30mg。
非挥发性麻醉药对实验动物的常用量
注：戊巴比妥钠和氯醛糖溶液要新鲜配制，久置低温下易析出晶体，用时需先加热。
常用营养液的组成和配制
蒸馏水加至1000ml0.5g
注:1.配制CaCl2溶液时，必须先将CaCl2溶解后，才能与其他成分配成的溶液相混合，否则会产生沉淀。
2.葡萄糖于临用前加入，以免细菌生长。
3.每种营养液下均列出每种成分在1000ml中所含的重量（g）毫摩尔（mmol）及相当于储备液的毫升（ml）数。
常用实验动物的生殖和生理常数
注：血压、红细胞、血红蛋白、血小板、白细胞总数和分类，它们的括号外数字为法定单位，括号内数字为旧制单位。
中药药理实验常用符号
一、度量衡及制剂符号
ppm，百万分之一（如1kg中药中含1mg某微量元素，即为1ppm）
二、中药量：
老称（16两为1市斤）1（市）斤=500g，1两=10钱=30g，1钱=3g
新称（10两为1市斤）1（市）斤=500g，1两=10钱=50g，1钱=5g
三、缩写
kPa，千帕
LD，致死量
LD50，半效致死量
ED50，半数有效量
MLD，最小致死量
MED，最小有效量
IU，iu，国际单位
U，u，单位
四、时间符号
五、电和放射强度
V，伏（特）
Ω，欧（姆） Hz，赫（芝）
μΩ，微欧
A，安（培）
mA，毫安
mV，毫伏
μV，微伏
Bq，贝可
Ci，居里
mci，毫居里
六、用药途径符号
七、化验符号
RBC，红细胞 WBC，白细胞 Hb，血红蛋白 NPN，非蛋白氮
UN，尿素氮 ALT，丙氨基酸基转换酶 （SGPT，血清谷-丙转氨酶）
八、其他
♂，雄性 ♀，雌性 
SD，标准差 SE，标准误 ±，加或减
＞，大于 ＜，小于 Bp，血压 ECG（EKG），心电图 OD，光密度
wt，体重 vol，容量