《半枝莲生物碱超生波辅助半仿生法提 取工艺优化》实验设计方案

药品：

半枝莲、95%乙醇、盐酸小檗碱对照品、蒸馏水、盐酸溶液、氢氧化钠溶液、碘-碘化钾试剂

仪器：

722型紫外分光光度计、电子分析天平、电热恒温水浴锅、数据超声波清洗器、微型植物粉碎机、PH计、加热板、循环水式多用真空泵

实验方法：

超生波提取法、半仿生法、正交实验、生物碱的鉴定方法

实验步骤：

一、药品、仪器的准备

二、对照品溶液的制备、波长的测定、标准曲线的制作、推算出回归方程

三、样液的制备

四、用半仿生法提取半枝莲中生物碱

1、单因素实验

（1）温度对提取效果的影响

（2）酸度对提取效果的影响

（3）碱度对提取效果的影响

（4）料液比对提取效果的影响

2、因素、水平的确定及进行正交实验设计：

由单因素温度、酸度、碱度和料液比作为正交试验的四个水平 进行正交实验以确定半仿生法中最优的提取条件

五、超声波辅助半仿生法提取半枝莲生物碱：在上述半仿生法得到的最优提取条件下进行超声波提取

1、单因素实验

（1）温度对提取效果的影响

（2）提取次数对提取效果的影响

（3）酒精浓度对提取效果的影响

2、因素、水平的确定及进行正交实验设计：

由单因素温度、提取次数、酒精浓度作为正交试验的三个水平进行正交实验以确定在超声波辅助半仿生法提取中的最优条件

六、在超声波辅助半仿生法提取的最优条件下提取半枝莲中生物碱

七、利用紫外分光光度计测定上述提取到的生物碱的吸光度，与标准曲线进行比较，计算出生物碱的量及产率。

八、生物碱的鉴定：

生物碱沉淀反应

1、碘化铋钾试剂反应 取渗漉液1ml，加碘化铋钾试剂1滴～2滴，生成棕色至棕红色者为阳性反应在。

2、碘-碘化钾试剂反应 取渗漉液1ml，加碘-碘化钾试剂1滴～2

滴，生成棕黄色沉淀者为阳性反应。

3、硅钨酸试剂反应 取渗漉液1ml，加硅钨酸试剂数滴，生成淡黄色沉淀者为阳性反应。

第二篇：烟草甲毕业论文实验设计方案

烟草甲趋光性研究毕业论文实验设计方案

指导老师：刘光华

作者：王洁元 农学院 植保061班 2009-12-15

一、实验目的：本实验主要探讨烟草甲在可见光以及紫外光的条件下的光趋避性及其差异性是否存在，此外，若光趋避性差异显著，再对烟草甲雌雄在最具趋光条件下是否存在光趋避性差异进行实验探讨。在老师指导下，学会独立自主完成大学毕业论文实验，学会把所学知识运用到实践中，发现问题，解决问题，在原有基础上提高实验设计、创新能力，从而不断提升自己的综合能力。

二、试验设计方案的理由：

1、时间设置为24小时观察：因为烟草甲的假死性非常强，对外在的触碰刺激很敏感，一旦受到振动就会假死或者活动性明显减弱，而且本身活动性不是很强，在倒虫子时会对烟草甲造成一定的触碰振动刺激，需要一定时间恢复其正常活动性，经过多次的实验摸索以及查阅相关资料，总结得知实验结果的准确性与烟草甲的活动实验时间有较大关系，所以选择24小时或者12小时 后观察记录实验结果。

2、测试光波长选择：

紫外光被划分为A 射线、B 射线和C 射线(简称UVA、UVB 和UVC)，波长范围分别为400-315nm，315-280nm，280-190nm。

实验用的卤钨灯，固体炽热发光，发射连续光谱。卤钨灯发光波长范围350～2500nm。但最适宜使用波长360~760nm可见光区。又经查阅相关资料得知，烟草甲偏爱紫光或紫外光，不喜红光或绿光，经综合分析故决定测试波长如下： 380~620nm，每40nm一个间隔，即要测试的波长范围为：

380，420，460，500，540，580，620，660nm

3、测试趋光性装置设计：

经已做实验观察，试虫在原有装置中很易绕着玻璃管环形运动，个人认为若是圆筒口径太大不易观察其水平分布，而太短又容易造成误差，以从原有装置的两个开口掉下的虫子数为测试光趋避性的数据，缺乏科学性，因为虫子从开口处掉下存在很大的偶然性，我们尚无法证实其原因。故把实验改装成为如图所示装置，以试虫在各区段的分布情况来测试烟草甲的光趋避性，理由：

1）能够观察到所有虫子的分布情况，数据较为全面准确，原装置只能观察到从开口处掉下的虫子数。

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2）烟草甲爬行速度虽不快，但在24小时还是可以运动相当距离的，故加长装置。 3）以试虫在各区段的分布情况来测试烟草甲的光趋避性，更加全面准确。这参考了前人做过的储粮害虫趋光性测定的实验。

三、实验材料：

1、实验装置设计

1）发光装置：光源、调节波长装置、调节光强装置

2）测试趋光性装置：长1.m或者0.8m、内直径为15mm的长圆筒玻璃装置 45~55cm中央处为一置虫开口，整个长圆筒按每10cm分共为10个等分或8等分，从来近光源处开始依次编号为：10~1。整个实验装置如图：

黑布是用来遮光的。

2、实验虫子：为羽化3~5天后的健壮活成虫，经试验观察以及查阅相关资料得知此时期的虫子活力强，有利于实验，从而减小误差。试虫用一次。在实验前进行30min以上的暗处理。

四、实验方法：

根据实验设计要求，每次将30头进行过暗处理的试虫从投虫口轻轻放入，盖好盖子，保持安静的外在环境，温度保持在27~30℃，24小时后观察记录各级烟草甲分布虫量，计算烟草甲的光趋避指数。每个处理重复3~5次。以具体情况而定具体次数。

光趋避指数I的计算：

I=〔Σ（各等级分布虫数×级数）÷（试虫总量×最高级）〕×100

对平均光趋避指数（%）进行反正弦变换后，采用Duncan's新复极差测验法，对

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平均相对光趋避指数C??131I?ICK?100,C的值越大，则说明烟草甲的光趋3ICK

避性越强，当C>0时，说明烟草甲有正趋避性，且C越大，说明正趋光性越强；当C<0时，说明烟草甲有负趋避性，且C越小，说明负趋光性越强，即避光性越强。

五、实验内容：

1、测定黑暗条件下烟草甲的活动性

把30头试虫投入，在黑暗条件下对烟草甲活动性进行测试，24小时后观察记录结果。把每一区段的虫子数记下，计算出黑暗条件下的趋光指数ICK，以作为对照。该处理重复3~5次。

2、光条件下烟草甲的趋避性测试

则根据以上结果在最趋光的可见光下测试雌雄是否具有光趋避性差异。若没有显著性差异，则不进行雌雄趋光性的差异性。

3、在最趋光的可见光下雌雄烟草甲的分布测试

注：雌雄烟草甲是在蛹期分辨出雌雄后培养而得到的羽化3~5后的健壮成虫。 此时的对照ICK为最趋光波长下的光趋避指数。

1）雌虫在最趋光的可见光下分布测试

把30头试虫投入，在最趋光的可见光波下对烟草甲活动性进行测试，24小时后观察记录结果。把每一区段的虫子数记下，计算出黑暗条件下的趋光指数I 。该处理该处理重复3~5次，并计算出平均相对光趋避性指数C 。

2）雄虫在最趋光的可见光下分布测试

把30头试虫投入，在最趋光的可见光波下对烟草甲活动性进行测试，24小时后观察记录结果。把每一区段的虫子数记下，计算出黑暗条件下的趋光指数I 。该处理该处理重复3~5次，并计算出平均相对光趋避性指数C 。

4、结果处理分析

对所有的实验数据进行处理分析，主要探讨烟草甲在可见光波下的光趋避性及其差异性是否存在，此外，在光趋避性差异显著时，再对烟草甲雌雄在最具趋光条件下是否存在光趋避性差异进行分析。

注：若时间允许再做最大趋光波长下不同光强烟草甲的趋光性实验。

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六、实验表格设计：

表一 黑暗条件下烟草甲的活动性记录表

实验时间： 年 月 日 观察时间：年 月 日

趋光指数ICK =〔Σ（各等级分布虫数×级数）÷（试虫总量×最高级）〕×100

平均趋光指数： CK=

1

ICK= ?15

5

表二 光条件下烟草甲的趋避性测试记录表

实验波长： nm

实验时间： 年 月 日 观察时间：年 月 日 5

1 平均光趋避指数： ??I?

15

相对平均光趋避指数： C??

1I?ICK

?100?

5ICK

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表三 最趋光的可见光下雌雄烟草甲的分布测试记录表

实验波长： nm 试虫性别：

实验时间： 年 月 日 观察时间：年 月 日

5

1 平均光趋避指数： ??I?

15

相对平均光趋避指数： C??

1I?ICK

?100?

5ICK

表四 光条件下烟草甲的趋避性差异显著性分析表

实验波长： nm

实验时间： 年 月 日 观察时间：年 月 日

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表五 最趋光的可见光下雌雄烟草甲的趋避性差异显著性分析表

实验时间： 年 月 日 观察时间：年 月 日

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