毕业论文实验方案

题目：淀粉降解菌合成学校：上饶师范学院班级：12生科2班

专业：生物技术

一． 材料与方法

1.1 材料与仪器

1.1.1 筛选样品 实验用土壤污泥。

1.1.2 培养基

目的菌培养基：淀粉，牛肉浸膏0.1g/L；蛋白胨0.1g/L, NaH2PO4

3.5g/L； K2HPO4 2 g/L ‘MgSO4 0.2g/L CaCl2 0.1 g/L’MH4Cl 1g/L ‘琼脂1.5g/100mL；尼罗蓝染 色剂0.5μg/10g/l；各种生长因子及无机盐离子；尿素0.1g/l；pH值为7

合成培养基：淀粉 ；尿素 (不同含量)， pH值为7

1.1.3 实验仪器

烧瓶恒温摇床（ZHWY-2112B）培养皿 试管夹 烧瓶 移液管

1.2实验方法

1.2.1 目的菌富集、纯化 将5g样品（土壤污泥）加入装有150mL富集培 养基的500mL的三角瓶中， 30℃时，摇床培养24h后，吸取 1mL富集液后分别用培养基筛选稀释10-1、 10-2、 10-3、 10-4、 10-5， 分别进行涂布， 30℃恒温培养24h，反复摇床3次，挑取单个菌落于牛肉膏 蛋白胨斜面培养基上进行纯化培养， 30℃培养24h，对生长 菌进行镜检，获得单菌落。用0.5%的尼罗蓝染色剂进行染色 处理，10min后，用水洗净染色剂并用滤纸吸干水分。

1.2.2 产PHA菌株筛选

初筛:生物脂肪大多是以脂肪颗粒的形式存在的，可被苏丹黑 B 染成蓝黑色的脂肪粒，是筛选 产脂肪菌株较为理想的方法。将上述得到的纯培养菌株转接到发酵培养基中，37℃，150 r/min 振 荡培养 36 h 后，5000 r/min 离心 10 min，弃上清液。 ，将分离后得到的菌体用 0. 3% (m /v) 苏丹黑 B 染色 15 min，倾去染色液，二甲苯冲洗至 洗脱液无色，再用 0. 5% (m /v) 蕃红复染 10 s，去离 子水冲洗、吸干后镜检，定性检查有无蓝黑色的脂肪 颗粒为标准进行初筛。

复筛:分别取两环 Stoke 斜面培养基上活化 了的初筛获得的菌株，放入 80 mL 种子培养基中， 37℃，150 r/min 振荡培养 36 h。取此培养液 2 mL 转接于装有 80 mL 发酵培养基的三角瓶中，同上述 条件培养 36 h。从发酵液中提取 PHA 并测定其含量，进行复筛。

1.2.3 菌株个体形态观察、革兰氏染色

1.在显微镜下观察；

1.将细菌染色

2.将染色后的细菌至于载玻片上,盖上盖玻片,至于显微镜下,在低倍镜中找到细菌,并将其移到视野中央（此时看到的只是一块一块的,并非单个细菌,要想看到单个细菌形态需要增加放大倍数）

3.再换用高倍镜观察,用细准焦螺旋调节至视野清晰即可观察

2.革兰氏染色法：

原理：通过结晶紫初染和碘液媒染后,在细胞壁内形成了不溶于水的结晶紫与碘的复合物,革兰氏阳性菌由于其细胞壁较厚、肽聚糖网层次较多且交联致密,故遇乙醇脱色处理时,因失水反而使网孔缩小,再加上它不含类脂,故乙醇处理不会出现缝隙,因此能把结晶紫与碘复合物牢牢留在壁内,使其仍呈紫色；而革兰氏阴性菌因其细胞壁薄、外膜层类脂含量高、肽聚糖层薄且交联度差,在遇脱色剂后,以类脂为主的外膜迅速溶解,薄而松散的肽聚糖网不能阻挡结晶紫与碘复合物的溶出,因此通过乙醇脱色后仍呈无色,再经沙黄等红色染料复染,就使革兰氏阴性菌呈红色.

1.2.4 PHA提取

筛选得到的PHA合成菌接种于液体培养基，培养48h 后，培养液3500r/min离心处理30min，将离心沉淀物冷冻 干燥10h，然后沸水浴30min，反复冻融3次。将冻融破壁后 的沉淀物置于研钵中加入4℃冷丙酮研磨30min，过滤；滤 渣用50℃热氯仿浸提3次，每次8h；过滤后合并浸提液，旋 转蒸发浓缩至5mL，加入甲醇（-20℃）200mL，静置过夜得 PHA粗品，重复氯仿溶解甲醇沉淀2次，沉淀物50℃干燥， 得到PHA精制品。

2.实验结果与讨论

2.1 产PHA菌株的筛选 紫外灯下，由尼罗兰平板上挑取具有荧光的菌落，以 苏丹黑染色，初筛得到5株PHA合成能力的菌株。初选得

到 的5株菌进行摇瓶发酵，利用细胞干重或含荧光含量来测定各菌株产PHA含量。

2.2 PHA菌株生长特性研究

由上述测定5株菌PHA产量，选择最优菌株作为目的菌株进行进一 步研究。

2.2.1 培养温度对优菌株生长的影响

分别在不同温度（24℃、26℃、28℃、30℃、32℃、）条件下，三角瓶摇床振荡培养优菌种，pH值为7，装液 量100mL/500mL，摇床转速100r/min，培养时间24h后测定 PHA含量，记录结果。

2.2.2 初始pH值对优菌种生长的影响

分别在不同pH值（ 5、 6、 7、 8、 9）条件下， 28℃摇瓶振 荡培养24h，装液量100mL/500mL，摇床转速100r/min，测定PHA含量， 适宜生长pH值是指菌体分裂代时最短或生长率最高 时的pH值，此pH值条件下能获得最大的细胞量，同时此 条件下，生长的有关酶的活性最好。

2.2.3 培养基含量对菌种生长的影响

分别选用50ml.100ml.150mL.200ml的培养基含量来检测菌种生长的影响，并记录菌株数量，记录不同培养基含量的菌种生长情况。

3.分析结果得出结论。

第二篇：阅读行为文化实验方案

阅读行为文化实验方案

一、指导思想

以书香校园创建为依托，着力培养基础扎实、习惯良好、全面发展、学有特长的学生。落实“关心每一个学生，让每一个学生都有进步；关注每一位教师，让每一位教师都能成功”的理念，使整个校园成为师生共同阅读的家园，共同成长的乐园，全面提高教育教学质量。

二、实验内容

以经典阅读为切入点，倡导“晨诵、午读、暮省”回归朴素的阅读生活方式，积极营造“好读书，读好书，读书好”的书香校园阅读氛围，整合丰富的阅读资源，开展多彩的读书活动，让阅读成为最日常的生活方式，进而推动书香校园的形成。开展“书香班级”、“书香学生”的评比活动，提高阅读意识，能主动在读与悟、读与思、读与创中提升理念，优化内涵，采用积极评价，让书香溢满校园。

三、实验工作措施

（一）提高认识，落实阅读教育

1.巧安排，阅读时间有保证

一方面我们借助课程的经典诵读一课时，作为专门的阅读教育课；另一方面我们大力提倡“午读”，中午抽出半个小时的时间师生共读，晚上通过亲子阅读，让更多的学生能进行自由阅读。

2.定书目，图书漂流或跳蚤市场足书源

根据要求，精选古今中外名著作为阅读课程内容，并详细列出了各年级共读书目，然后通过图书漂流或跳蚤市场解决共读书目的来源。除此之外，班级内部，小组之间、学生之间都可以进行飘流，这样的方式极大的丰富和节省了资源。

3.早准备，阅读指导、摘录、交流保实效

学生不是没有可读的书，而是阅读的过程中如何对学生进行指导，组织学生交流，使学生感受到读书的乐趣这是教师阅读教育首要解决的问题。依托校本教研对阅读指导课进行专题研究，提高教师的阅读教育水平。

学期初形成阅读指导意见，上好阅读指导课。制定各年级的具体的阅读目标。借助校园文化墙壁教会学生读书的方法。组织学生上好批注摘录课和成果交流汇报课。

4.小喜报，激励学生乐读书

对于阅读的评价，为避免功利化，学校以激励学生的阅读兴趣为主。每读完一本书，教师颁发一张“小喜报”以示激励，获得三张“小喜报”可进入“阅读之星”侯选资格。学期结束学校评选“阅读之星”对学生进行激励。

5.让所有的教室都成为阅览室，教室里设置“读书角”，采取学生自筹与学校配备相结合的形式筹集图书，并将图书角取上“快乐书吧”、“书海拾贝”，“读书台”等生动的名字，各班专门配备两名学生作为班级图书管理员，负责班级图书的借阅、登记、归还等工作，鼓励班级之间、年级之间的“图书漂流”活动。

（二）活动推进，激发学生阅读热情

学生的阅读热情需要在活动的舞台上得以生长，学校要开展丰富多彩的读书活动，以促进学生养成爱读书的好习惯。活动分三个层面：

一是班级层面。开展我与经典对话五个一活动。

1、“我与经典对话”之一：古诗考核

时间：晨读

形式：学生读诗---理解诗意---背诵古诗---古诗考核

2、“我与经典对话”之二：朗读考核

时间：晨读、午读

形式：学生朗读---品读理解---感情投入---朗读考核

3、“我与经典对话”之三：阅读交流

时间；阅读课、午读、

形式：教师指导---学生品读---感悟体验---汇报交流

4、“我与经典对话”之四：亲子阅读

时间：晚读

形式：亲子共读---亲子交流---亲子辩论---求同存异

5、“我与经典对话”之五：师生共读

时间：教育教学

形式：师生同读---师生交流---师生检测---师生展演

二是年级层面。以年级为单位，开展了读书交流活动，向全年级展示，保证学生的参与广度，提高更多学生的积极性。

三是学校层面。组织学生每日一诗、每周一文、每月一书、每期一展、每期一评。组织“图书跳蚤市场活动”、“批注阅读展示会”、“小小朗诵家比赛” 、举行“经典诗文诵读竞赛”、“班级诵读比赛”、“诗词配画”、“古诗文知识竞答”、“师生对诗”、“演讲比赛”、“征文比赛”等活动，激发学生诵读的积极性。四月份组织“读书节”。借助六一节、教师节、元旦节，大力展示师生阅读成果。开展推荐“最感动我的一本书”和“我最感动的一篇文章”活动，组织阅读有经验的学生介绍读书的方法， 组织学生读书笔记的评比和展览、班级与班级之间进行“好书中转站”、读书主题班会等活动，鼓励学生向校刊或其他刊物投稿。

（三）教师阅读，丰厚底蕴

1.养成每天读书的好习惯，每天阅读教育类刊物、教育著作、或文学作品时间不少于半小时。教师每学期至少阅读一本教育教学专著，教师每年阅读2-3本文学名著。

2.拓宽阅读渠道，丰富阅读资源

鼓励老师做好“四个一”：要有一位自己崇拜的教育家，系统地学习他的教育思想；要有一本专家的教育专著，精心研读，做到常读常新；要有一份高质量的教育期刊，博采众长，努力形成自己的教育风格，如《人民教育》、《山东教育》、《教师博览》、《班主任》、《教学论坛》、《山东教育导报》、《中国教育报》等；要有一个经常浏览的教育网站，及时了解最新教育信息。

3.积极撰写随笔

通过教育日记、教育故事、教育案例分析等形式，记录反思教师的日常教育和学习生活，促进教师的专业发展和学生的自主成长，写教育随笔不仅是练笔，也不仅仅是“心灵的对话”，学会欣赏自己，肯定自我，反思自我，促进师生超越自我。在坚持写随笔的过程中，逐步养成“读书、实践、反思”的习惯。

四、实验研究过程

第一阶段：组织筹备阶段（20xx年x月——20xx年x月） 制定实验方案》，成立实验领导小组，做好实验的各项基础工作。开展各种培训活动，让师生了解实验，认识实验。

第二阶段：实验启动阶段（20xx年x月---20xx年x月）

1.组建实验工作小组。

2.工作室设在教研活动室。

3.组织召开工作小组会议，明确流程和岗位职责。

第三阶段：实验实施阶段（20xx年x月——20xx年x月）

1.开展实验研究，注重积累日常材料。

2.开展学生展评活动、经典诵读活动。

3.开展教师教学反思、教育随笔展评活动。

第四阶段：总结规范阶段（20xx年x月）

全面总结实验的实施情况，总结经验，查找问题，推进实验，形成特色。

五、预期研究成果

1.增加师生文化底蕴。

2.提高师生阅读效果。形成教师论文、案例、反思集录，形成学生作品集录。

3.大面积提高教育教学质量。

六、保障措施

1.组织机构保障，成立领导小组和工作小组。

2.管理制度保障，建立相应的日常检查制度、考核制度，使新教育实验工作管理走向规范化。

3、评价机制保障，学校把实验的实施成果作为教师考核的一个重要方面，对于做出突出贡献的教师要给予表彰、奖励，并组织推荐优秀教师外出学习培训。将师生获奖情况纳入教师绩效考核中。

日照市五莲县许孟镇中心小学