实验题目: 湖塘水体和沉积物中微生物的观察
姓 名： 学 号：
班 级： 组 别：
指导教师：
实验（1）湖塘水体和沉积物中微生物的观察和计数
1.实验概述
1.1实验目的及要求
水体和沉积物是水生生物繁衍生息的基本场所。本实验通过实地调查和实验室观察实验，对湖塘水体和沉积物中微生物观察和定性，初步了解湖塘水体和沉积物中微生物的种类和分类；了解其对水体净化的正面和负面的影响。
1.2实验原理
（1）显微镜的原理
（2）血球计数板的结构和计算方法。
血球计数板是一块比较厚的特制玻片。玻片中央刻有4条槽，中央两条槽之间的平面比其他平面略低，中央有一个小槽，槽两边的平面上刻有9个大方格，中间的一个大方格为计数室，其长和宽均为1mm，深度0.1mm，体积0.1m3。计数室的规格是把大方格分成16个中方格，每一个中方格有分成25个小方格，总共有400个小格。
血球计数板的计算方法是：先求得每个中方格中微生物的平均值，乘以中格数，即为一个大格中的总微生物数，再乘以10000，即为稀释后的溶液中的总微生物数。如要换成原液中的微生物总数，乘以稀释倍数即可。
为简化计，通常取4个角上的4个中格进行计数，取其平均值，作为每个中格中微生物的平均值。
计算公式：微生物数（mL）=（100个小格内的微生物数/100）*400*10000*稀释倍数
2.实验内容
2.1实验方案设计
选择一个池塘，对湖塘和水体和沉积物采样，观察其中微生物并计数。要求手绘观察图像，计算微生物数量。
2.1.1实验设备和材料
（1）实验设备
显微镜、血球计数板、载玻片、盖玻片、滴管、移液管
（2）实验材料
校园池塘的水体和沉积物
2.2实验过程（实验步骤、记录、数据、分析 ）
（1）用压滴法制作表本片
取一块洁净的载玻片置于实验平台上，用滴管吸取湖水或含有沉积物的混合液，滴加在载玻片中央，用干净的盖玻片覆盖在滴液上，不要有气泡，即制成标本片。
（2）用显微镜观察标本片上的微生物。
（3）加被测样品到血球计数板
取干净的血球计数板，用盖玻片盖住计数室，用细口滴管吸取少量已经充分摇匀的湖水和沉积物的混合液，滴于盖玻片边缘，微生物自行深入计数室，静止5-10min，待微生物自然沉降稳定后计数。
（4）计数
先用低倍镜寻找大方格网的位置（视野不要太亮），找到计数格后，换用40倍物镜观察计数。
2.3结论
手绘观察到的微生物的形状，相对大小(见附图)
计算样品微生物数量
2.4 建议（如果有）
实验（2）湖塘水体和沉积物中微生物的革兰氏染色和定性
1.实验概述
1.1实验目的及要求
水体和沉积物是水生生物繁衍生息的基本场所。本实验通过实地调查和实验室观察实验，对湖塘水体和沉积物中微生物观察和定性，初步了解湖塘水体和沉积物中微生物的种类和分类；了解其对水体净化的正面和负面的影响。
1.2实验原理
微生物细胞由蛋白质、核酸等两性电解质及其它成分组成，表现出两性电解质的性质。细菌的等电点pI在2-5之间，所以当pH>5时，细菌带负电荷，容易与带正电荷的碱性染料结合而被染色。微生物体内的不同结构和染料的结合能力不同，故可用不同染料对微生物的不同结构分别染色。
2.实验内容
2.1实验方案设计
对池塘水体和沉积物中得细菌进行革兰氏染色和定性，进行微生物形态图的绘制。
2.1.1实验设备和材料
（1） 实验设备
显微镜、接种环、载玻片、酒精灯。
（2） 试剂
草酸铵结晶紫染液、革兰氏碘液、95%乙醇、番红
（3） 实验材料
校园池塘的水体和沉积物
2.2实验过程（实验步骤、记录、数据、分析 ）
（1）涂片
取干净的载玻片于实验台上，在正面边角作记号，滴一滴无菌蒸馏水在玻片中央，灼烧接种环，冷却后取样品，与玻片上水滴混匀，在玻片上涂布成一层均匀的薄层，涂布面不宜过大。
（2）固定
即干燥，干燥过程最好在空气中晾干。为加速干燥，可在微小火焰上烘干，烘干后在火焰上方快速通过3-4次，使菌体完全固定在载玻片上。不宜长时间高温烘烤，易致急速失水使菌体变形。
（3）初染
滴加草酸铵结晶紫染色液染色1-2min，水洗。
（4）媒染
滴加革兰氏碘液，染1-2min，水洗。
（5）脱色
滴加95%乙醇，洗约45s，接着水洗。或滴加95%乙醇，将玻片摇晃几次即倾倒乙醇，如此重复2-3次后水洗。
（6）复染
滴加番红，染2-3min，水洗并干燥。
（7）镜检
显微镜观察。
2.3结论
观察颜色，并判断是G（紫色）还是G（红色）。手绘观察到的微生物图像，标明颜色。
2.3.1注意事项：
（1）涂片所用载玻片要洁净无油渍。
（2）细菌不宜多，涂片不宜厚，宜薄而均匀。
（3）染色过程中勿使染色液干涸。用水洗后，应该甩去玻片上残水以免染色液被稀释而影响染色效果。
（4）革兰氏染色成败的关键是脱色时间是否合适。如脱色过度，G易被误认为G。而脱色时间过短，G易被误认为G。脱色时间长短还受涂片厚薄，脱色时玻片晃动程度影响。
2.4 建议（如果有）
2. 思考题
（1）涂片为何要固定？固定时要注意什么？
答：原因有三1、固定细菌，防止冲掉2、变形蛋白易染色3、杀死细菌，防止感染。实验中固定是用酒精灯烘干水样，应注意控制温度，控制时间，防止将菌体烧成灰烬，无法染色。固定时用载玻片背面靠近火源，而不是直接烘载玻片正面。
（2） 革兰氏染色如果只做1-4步，不用番红复染，能否分辨革兰氏染色结果？为什么？
答：能。在酒精脱色后，不被酒精脱色而保留紫色者为革兰氏阳性菌（G＋），被酒精脱色为革兰氏阴性菌。最后一步用番红染液复染，是为了让结果更清楚。
（3）革兰氏染色在微生物学中有何实践意义？
指导教师评语及成绩：
成绩： 指导教师签名
批阅日期
第二篇：微生物实习报告
林业与生物技术学院
实习报告
学生姓名： 娄钧翼
学 号： 20xx01220327
专业名称： 生物科学—微生物
班 级： 生物科学102班
指导教师： 张昕
20xx-6-26
一、实习目的意义
1、通过实习过程掌握酸奶中乳酸细菌的分离纯化
2、土壤中自生固N菌分离、纯化、生长曲线测定 ：通过实习过程，掌握土壤中微生物的分离、纯化和生长曲线测定的技术；
3、参观临安青山污水处理厂：参观污水处理厂，了解其运行模式，以及在污水处理过程中微生物发挥的作用和技术；
4、参观富阳海正药业有限公司：了解一个大公司大企业的运行情况，以及专业方面的一些技术和应用。
二、实习地概况
1、第一个和第二个实验是在学校学六实验室完成的；
2、第三个实验：临安市青山污水处理有限公司成立于20xx年x月x日，于20xx年x月x日投入试运行，是一个集污水收集、处理于一体的公益事业企业。公司坐落于浙江省临安市青山湖街道研口村发达畈，占地66亩，近期投资8082万元，建成处理能力2万吨/日，收集管网42公里，工艺采用MSBR法，具有脱氨除磷功能的污水处理设施。公司坚持内抓管理强素质，外创先进塑形象，通过规范化、制度化、精细化、科学化的管理来不断提高污水处理水平，努力提升科学管理层次，切实增强企业核心竞争力。公司设备、工艺先进，技术力量雄厚，现有职工21人，其中技术人员15人。公司先后通过了ISO9000和ISO14000质量环境管理体系认证及清洁生产认证。同时被评为浙江省公众满意单位杭州市环境保护模范企业、临安市花园式工厂、临安市安全声场先进单位、临安市卫生先进单位、临安市绿色企业等荣誉称号。
3、第四个实验：占地16000平方米，累计投资超过2.6亿元，设有60多个单元实验室，集小试、中试与研发支持为一体 。始创于19xx年的浙江海正药业股份有限公司秉承“执著药物创新，成就健康梦想”的使命和“成为广受尊重的全球化制药企业”的愿景，致力于整合药物研发与生产资源，为全球客户提供更好的产品和服务，通过美国FDA、欧盟EDQM、澳大利亚TGA、韩国KFDA等官方认证的品种达到40多个，销往全球30多个国家和地区。
20xx年，公司荣获“全国五一劳动奖状”，海正、HISUN及图形被认定为“中国驰名商标”，入选“中国万种微生物基因组计划”和“国家重大（磅）级药物品种产业化技术创新联盟”。因圆满完成“抗甲流药物中间体生产”的国家任务，受到省政府的通令嘉奖。
20xx年，公司入选浙江省医药工业“十强企业”，并荣获“国内最佳产品线十佳工业企业” 称
号，同时被誉为“金蜜蜂奖成长型企业”。
我们主要参观了海正药业在富阳的分公司。
三、材料方法
1、材料：乳酸细菌培养基、酸奶
原理：当乳酸菌生长代谢出乳酸后，会是PH下降而使颜色由绿变为黄绿，也由于PH
值降低，再加上抗生素及厌氧培养的作用，所以一般的微生物不容易在此培养基
上生长。因此十分容易鉴别乳酸菌。
方法 ：1.1 (6月x日)配备乳酸细菌培养基(蛋白胨10.0G,牛肉膏10.0G,酵母膏5.0G,
柠檬酸氢二铵2.0G,葡萄糖20.0G,吐温80 1.0ML,乙酸钠5.0G,磷酸氢二钾2.0G,
硫酸镁0.58G,硫酸锰0.25G,琼脂18.0G,蒸馏水1000ML,PH 6.2—6.6)
1.2 (6月x日)培养基灭菌
1.3 (6月x日)用灭菌后冷却至50摄示度左右的培养基到成平板
1.4 (6月x日)用灭菌过的接种环挑取酸奶在平板上划线纯化培养4天左右
1.5 (6月x日)挑取平板上菌落制成临时装片观察
2、材料：阿须贝无氮培养基、土壤
方法：2.1 (6月x日)配备阿须贝无氮培养基(葡萄糖10.0G, 磷酸氢二钾0.2G, 硫酸
镁0.2G,氯化钠0.2G,CaSO4’2H2O;0.1G,碳酸钙5G,琼脂18G,蒸馏水
1000ML,PH7.2) 阿须贝无氮培养液(葡萄糖10.0G, 磷酸氢二钾0.2G, 硫酸镁
0.2G,氯化钠0.2G,CaSO4’2H2O;0.1G,碳酸钙5G,蒸馏水1000ML,PH7.2)
2.2 (6月x日)培养基,培养液灭菌
2.3 (6月x日)用灭菌后冷却至50摄示度左右的阿须贝无氮培养基到成平板
2.4 (6月x日)用灭菌过的镊子将黄豆大小的菜园土埋入已冷凝的平板培养基上
2.5 (6月x日)正面放置28度培养4天
2.6 (6月x日)用灭菌过的接种环挑取菌苔在新的阿须贝平板上划线纯化32度
培养
2.7 (6月x日)单菌落接入液体培养基中于12.24.36.48H后测吸光值.制备生长
曲线
四、结果分析
1. 平板上有一个个单菌落.在显微镜下观察单菌落就只有一种乳酸菌.酸奶中有保加利亚乳 菌与嗜热链球菌二种.
2.
五、实习感受
通过此次实习，我学到了很多课堂上学不到的东西：亲自动手配培养基，分离、纯化菌类，学会使用分光光度计制作生长曲线，同时参观了一些与微生物紧密相连的公司，了解其运行模式、实践技术和应用。这让我清楚地感到了自己肩上的重任，看清了自己的人生方向，也让我认识到了科研工作应支持仔细认真的工作态度，要有一种平和的心态和不耻下问的精神，不管遇到什么事都要去思考，多听别人的建议，不要太过急燥，要对自己所做的事去负责，不要轻易地去承诺，承诺了就要努力去兑现。实习也培养了我的实际动手能力，增加了实际的操作经验，对实际的科研工作的有了一个新的开始，更好地为我们今后的工作积累经验。
我知道科研工作是一项需要热情的事业，并且要持之以恒的精神和吃苦耐劳的品质。我觉得重要的是在这段实习期间里，我第一次真正地接触了实验，在实践中了解了一些科研技术，并且在此期间，我参观了一些公司，也与社会有所接触。利用这次难得的机会，也打开了视野，增长了见识，为我们以后进一步走向社会打下坚实的基础。
实习期间，我从末出现无故缺勤。我认真听取老师的指导，对于别人提出的实验建议虚心听取，并能够仔细观察、切身体验、独立思考、综合分析，并努力把学到的知道应用到实际实验操作中去，尽力做到理论和实际相结合的最佳状态，培养了我的耐心和素质。
为期两个多星期的实习结束了，我在两个多星期的实习中学到了很多在课堂上根本就学不到的知识，受益匪浅。回想自己在这期间的实习情况，也有不足之处。对此我思考过，学习经验自然是一个因素，然而更重要的是心态的转变没有做到位，有些实验步骤还是停留在应付的层面上。现在发现了这个不足之处，应该还算是及时吧，因为我明白了何谓工作何谓实际。在接下来的日子里，我会朝这个方向努力，在实验操作方面我会更加谨慎。
本次实习是我第一次亲身感受了所学知识与实际的应用，理论与实际的相结合，让我们大开 眼界，也算是对以前所学知识的一个初审吧!这次实习对于我们以后学习、找工作也真是受益匪浅。 我会把这此实习作为我人生的起点，在以后的工作学习中不断要求自己，完善自己，让自己做的更好。