实验一、大鼠在体小肠吸收实验

一、   实验目的

1． 掌握大鼠在体小肠吸收的实验方法。

2． 掌握计算药物的吸收速度常数（Ka），以及每小时吸收率的计算方法。

二、   实验指导

大多数药物以被动扩散方式从生物膜的高浓度侧通过膜向低浓度侧转运。被动扩散可用Fick第一定律来描述。该定律指出，扩散速度（dC/dt）正比于膜两侧的浓度差（ΔC），因此有：

        （1）

式中C是消化道中药物浓度，C_b是血液中药物浓度，Ka是吸收速度常数，其值大小取决于药物的扩散常数，吸收膜的厚度与面积，及药物对膜的穿透性。胃肠道吸收的生物学过程包括这样一个系统，即药物从胃肠道屏障的一侧（吸收部位）向另一侧（血液）扩散。因为进入血液的药物很快分布到全身，故与吸收部位比较，血中药物浓度维持在很低的水平。几乎在所口服给药的情况下，对于胃肠道来说，血液（室）的作用尤如一个“水槽”（sink）。并且在整个吸收相保持很大的浓度梯度，C＞＞C_b，则ΔC≈C，于是（1）式可以简化为

                        （2）

此为一级速度方程式的标准形式。胃肠道按一级动力学从溶液中吸收大多数药物。用消化液中药物量的变化（dXa/dt）表示扩散速度，则：

                       (3)

将（3）式积分，并在方程两侧同取对数。

                (4)

式中Xa为消化液中药物量，Xa（0）为零时刻消化液中药物量，Ka为药物吸收速度常数。以lnXa对t作图得一条直线，其斜率为药物在小肠中的吸收速度常数（Ka）。

三、   实验内容与操作

1． 仪器

   蠕动泵；分光光度计；红外灯；手术剪；止血钳；乳胶管；烧杯；固定板；电热恒温水浴锅。

2． 试剂

（1） 0．1%NaNO₂液；（2）0.5%氨基磺酸铵（NH₂SO₃NH₄）溶液；（3）0.1%二盐酸萘乙二胺溶液（偶合试剂）；（以上置冰箱保存），(4)1 mol/L HCl;(5)0.2 mol/L NaOH; (6)生理盐水；（7）Krobs-Ringer试液（每1000ml内含NaCl7.8g，KCl0.35g，CaCl₂0.37g，NaHCO₃1.37g，NaH₂PO₄0.32g，MgCl₂0.02g，葡萄糖1.4g）；（8）戊巴比妥钠溶液（10mg/ml，大鼠每100g腹腔注射0.4ml麻醉。）；（9）磺胺嘧啶（Sulfadiazine，SD）。

3．操作

(1)取85ml供试液（100ml Krobs-Ringer试液含SD2mg、酚红2mg）加入循环装置的烧瓶中。

（2）将实验前禁食一夜，体重200g左右的雄性大鼠，称重，腹腔注射戊巴比妥钠（剂量为100g体重注射0.4ml），麻醉后并加以固定。

（3）沿腹中线打开腹腔（约3厘米长）。自十二指肠上部及回肠下部各剪开一个小口，各插入直径为0.5cm的玻璃管，用线扎紧，并用37℃的生理盐水将小肠内容物冲洗干净，然后将大鼠串联到循环装置中。

（4）开动蠕动泵，以5ml/分的流速循环10分钟后流速调至2.5ml/分。（5）自烧瓶中取样1.5ml（1ml、0.5ml各一份）为药物和酚红零时间样品，并补加2ml酚红溶液（每毫升Krobs-Ringer试液含酚红20μg）其后每15分钟取样（1ml、0.5ml各一份），同时补加酚红溶液。由于酚红不被小肠吸收，用以测定水被小肠吸收的量。

4．定量方法

（1）磺胺嘧啶的定量     

取样品1ml，加入1mol/L HCl 5ml，加入0.1%NaNO₂ 1ml，摇匀，放置3分钟，加入0.5%氨基磺酸铵1ml，摇匀，放置3分钟。加入0.1%萘乙胺2ml，摇匀，放置20分钟。在550nm处测定吸收度。

参比溶液的配制：取1ml供试液按磺胺嘧啶的定量方法但不加萘乙胺显色剂。

（2） 酚红定量

样品0.5ml，加入0.2mol/L NaOH 5ml，摇匀，在550nm测定吸收度。

参比溶液：酚红的比色空白液为0.2 mol/L NaOH。

5．标准曲线的制备

（1） 酚红的标准曲线

 精密称取酚红100mg，置1000ml容量瓶内，加1%Na₂CO₃溶液溶解并稀释至刻度，制成100μg/ml的标准溶液。取1，2，3，4，5，6ml的标准溶液于10ml容量瓶中，加蒸馏水至刻度。自上述各溶液中吸取0.5ml，按酚红的定量方法测定吸收度，并绘制标准曲线。

（2） SD的标准曲线

贮备液的配制：精密称取磺胺嘧啶标准品10mg，置100ml容量瓶中，以蒸馏水溶解并稀释至刻度，使成100μg/ml的标准溶液。

标准曲线制备：取上述贮备液适量，稀释至20μg/ml的工作液，分别吸取2，4，6，8，10ml于10ml容量瓶中，加蒸馏水至刻度。从上述溶液中各吸取1ml按SD 定量方法测定吸收度，并绘制标准曲线。

四、实验结果与讨论

    将实验数据按表1中公式进行计算，以剩余药量的对数对时间作图，求出吸收速度常数Ka，和每小时吸收率（%）。

每小时吸收率（%）=×100%

表1 大鼠在体小肠吸收量的计算式

五、思考题

1．作好本实验的关键是什么？

2．在操作中应该注意哪些问题？

第二篇：大鼠在体小肠吸收

小肠

宽1.1cm酚红

空白0.5h1h2h3h4h

法莫替丁

空白0.5h1h2h3h4h长重量14.5*4cm0.3832g557nm

0.2720.2250.2220.2340.210.199

265nm284nm

0.8450.3940.7750.3810.8510.510.770.4570.7470.4230.810.481

00.51234A284A2650.8510.3570.8450.3810.8100.3940.7750.4230.7130.4570.6700.51009.120.59.0218.8528.6838.3647.9319.1420.2521.9222.6923.7024.23

△A0.4940.4640.4160.3520.2560.160

1.9142.0252.1922.2692.372.423

时间t/h

法莫替丁浓度（ug/ml）

91.38

85.72

76.66

64.59

46.47

28.36酚红A(稀释10倍)酚红浓度（ug/ml）（原浓度）0.36619.140.38620.250.41721.920.43222.690.45023.700.46024.23

体积ml剩余药量（ug）

100.009137.7094.508237.3287.726990.2685.065874.2381.684273.1878.422771.08LN9.129137.79.028237.3228.856990.2568.685874.2328.364273.1787.932771.076