槐米中芦丁的提取与分离（欢迎转载）
一、题目：槐米中芦丁的提取与分离
二、作者：
三、摘要：从槐米中提取芦丁的实验研究。芦丁亦称芸香甙,是由槲皮素C3位上的羟基和芸香糖结合而形成的双糖甙，产品为黄绿色或淡黄色针状晶。芦丁在沸水中溶解度相当大（1:200），所以本实验采用水提法提取。芦丁与其他水溶性化合物可借助聚酰胺柱色谱予以分离，用乙醇作洗脱剂回流。
关键词：槐米；芦丁;水提法；色谱；乙醇
四、引言：随着人们生活水平及质量的不断提高，心脑血管疾病的发病率也呈上升趋势，而且死亡率居各种疾病之首。因此对治疗和预防心脑血管疾病的药品与保健品的开发研究就显得尤为重要。黄酮类化合在心脑血管疾病的治疗上起到了举足轻重的作用。芦丁存在于槐花米和荞麦叶中,槐花米中芦丁含量高达12 %～16 %。,芦丁有维生素P类药物的作用,能调节毛细血管的渗透性,保持和恢复血管的正常弹性,临床上主要用于治疗高血压及毛细血管出血。此外，对放射性伤害所以起的出血也有一定的治疗作用。
芦丁分子式: C27H30 O16;相对分子质量: 610. 52，为淡黄色粉末或极细的淡黄色针状结晶,无臭无味;可溶于乙醇、吡啶、甲酰胺、甘油、丙酮、冰乙酸、乙酸乙酯中,而不溶于苯、乙醚、石油醚中;易溶于甲醇,微溶于水。芦丁的溶解度在冷水中为1 g /1 000mL;沸水中达1 g/200 mL;沸乙醇中为1 g/60 mL;沸甲醇中1 g /7mL。熔点: 176~ 178℃。
五、实验部分
1、仪器与试剂
紫外灯，蒸馏装置一套，500mL烧瓶（2只），100mL三角瓶（6只） 色谱柱：（Φ1.5*30cm）玻璃板（Φ2.5*7.5cm 6片）
硅胶G；层析用聚酰胺（60~100目）；甲醇；70%工业乙醇；槐米；芦丁标准样
2、实验步骤
1）芦丁的提取：将粉碎好的槐米14g倒入500ml烧杯中，加沸水150ml，煮沸1（在煮的过程中，可补加水），趁热用纱布过滤（2层），残渣中加入100ml水，再煮沸30min，共进行两次，将两次滤液
合并，放置冷却，既有大量黄色沉淀生成，抽滤。
2）芦丁的提纯：将以上得到的粗芦丁产品约1.5g，加甲醇3~4ml，使之溶解，在加柱层析用硅胶（60~100目）1g，用刮刀轻轻搅拌，在水浴上赶去甲醇（通风橱内进行），待用。
将色谱柱垂直夹在铁架台上。关闭柱塞，加蒸馏水约至色谱柱一半高。将4.5g（60~100目）倒在烧杯中，加蒸馏水50g，轻轻摇动烧杯使之均匀，再打开柱塞使柱内水不断流出的同时，把烧杯内聚酰胺缓缓加入，使填料装填均匀，无气泡。当色谱柱顶部下降到距聚酰胺层高约1.5cm时，关闭柱塞。将上述拌好硅胶的粗芦丁样品倒入柱内，用刮刀轻轻铺平，勿有气泡，再盖上剪好的圆形滤纸。
用70%工业乙醇洗脱，当有淡黄色的液体从柱下流出时开始收集洗脱液，每次约25ml，共6瓶，依次编好接收瓶号。
取2.5*7.5cm的硅胶G板，每板上点芦丁标准样与接收瓶中的溶液，放入层析缸中，加盖，进行展开（展开剂为：乙酸乙酯：丁酮：甲酸：水=5:3:1:1，当展开剂前沿距板端约1cm时，取出，晾干。
在紫外灯下观察斑点，将只含芦丁的接受瓶溶液合并入一圆底烧瓶中，蒸馏，蒸去大部分溶剂后（约留25ml溶液），趁热倾入一只100ml的三角瓶内，冷却摩擦即有芦丁析出，抽滤，晾干，计算收率。
六、结果与讨论
M=
槐米m=14g
收率η=M/m*100%
七、问题与讨论
1、为什么从槐米中提取芦丁时开始不能加冷水慢慢煮沸，而要直接加沸水提取？
答：避免在提取过程中黄酮苷类化合物发生分解，故用沸水事先破坏其酶的活性
2、芦丁和其甙元槲皮素在聚酰胺柱色谱上用70%工业乙醇洗脱时，哪个先被洗脱下来？
答：聚酰胺是一种常用的吸附剂，其分子中存在许多酰胺键，可与酚类酸类醌类硝基类化合物形成氢键缔合而产生吸附作用；又由于不同结构的化合物与聚酰胺形成氢键的能力不同因而产生的吸附力大小也不相同，所以聚酰胺特别适合用来分离上述化合物。芦丁和槲皮素均属于黄酮类化合物，前者为黄酮苷，后者是其苷元，芦丁分子中有4个
酚羟基能与聚酰胺形成氢键，二槲皮素分子中则有5个羟基能与聚酰胺形成请柬，因此后者比前者吸附更牢固。选用乙醇进行洗脱，芦丁先出柱，槲皮素后出柱，从而达到分离的目的。
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第二篇：槐米中芦丁的提取
槐米中芦丁的提取、提纯和鉴定
一、实验目的
1．掌握芦丁提取和提纯的基本原理和方法。
2．掌握重结晶及过滤等基本操作。
3．学习芦丁及槲（hū）皮素的鉴定方法。
二、实验原理
芦丁（Rutin）亦称芸香苷，广泛存在于植物组织中，其中以槐花米和荞麦叶含量较高，槐米中含量高达12~16％，是提取芦丁的最佳原料。芦丁有减少毛细血管通透性的作用，临床上用作毛细血管止血药和高血压病的辅助治疗药物。近年来，芦丁及槲皮素作为抗癌药物的研究，取得了大量成果。芦丁属黄酮苷，其结构如下：
芦丁为淡黄色针状结晶，含有三分子结晶水（C27H36O16· 3 H2O）， 熔点为177～178 ℃，无水物熔点为190~192 ℃，难溶于冷水，微溶于冷乙醇，可溶于热水和热乙醇中。此外，还难溶于乙酸乙酯、丙酮，不溶于苯、氯仿、乙醚及石油醚等溶剂。易溶于碱性溶液中呈黄色，酸化后又析出。本实验利用芦丁在冷热水和冷热乙醇中溶解度的差异进行提取与精制。
芦丁在不同溶剂中的溶液度：
芦丁的紫外吸收波长（CH3OH溶液）：λmax = 259mm，266nm sh，299nm sh，359nm。
槲皮素（Quercetin）是芦丁水解得到的黄酮苷元，是芦丁药用功能的主要部分，大多数黄酮类物质都具有较高的药用价值。
槲皮素为黄色结晶，含两分子结晶水（C15H10O7·2 H2O），熔点313~314 ℃，无水物熔点为316 ℃。可溶于甲醇、乙酸、吡啶、丙酮、乙酸乙酯等溶剂，不溶于水、乙醚、苯、氯仿、石油醚。在沸腾的无水乙醇中溶解度为4.4 ，在室温下乙醇中的溶解度为0.35 。可利用槲皮素在冷热乙醇中的溶解度差进行提纯。槲皮素的结构式如下：
槲皮素的紫外吸收波长（CH 3OH溶液）： λ max = 259nm，266nm，299nm ，359nm。
三、实验步骤
（一）芦丁的提取
取15 g槐米研成粉状，置烧杯中，加水300 mL，煮沸30分钟（注意适量加水，补充蒸发损失），趁热过滤，滤渣再提取两次（每次用水250 mL，煮沸15分钟），过滤，合并滤液，放置24小时，使沉淀完全析出。过滤，粗产物用少量水洗涤，得芦丁粗品，烘干，称重，计算提取率。
（二）芦丁的精制
将芦丁粗品研细，倒入圆底烧瓶中，加入100 mL 95％ 乙醇，加热回流至芦丁完全溶解，再加少量活性炭回流10分钟，然后趁热过滤于另一圆底烧瓶中，得黄色澄清溶液。蒸馏滤液并回收乙醇，待溶液剩10～15 mL时停止加热，将浓缩液倒入小烧杯中，用少量乙醇洗涤烧瓶，将洗涤液合并于小烧杯中，放置使结晶完全析出。过滤（滤液回收），得芦丁精品，烘干，称重，计算产率，测其熔点。
（三）芦丁水解制取槲皮素
取芦丁精品1.0 g 于烧杯中，研细，加30％乙醇水溶液150 mL，再加浓盐酸4 mL，加热煮沸30分钟（注意观察）。放置冷却，过滤，水洗至滤液呈中性，烘干，称重，计算产率。测其熔点（如质量不合格，可用75％乙醇重结晶），计算产率。
（四）性质试验
取芦丁及槲皮素精品少许，用95％乙醇溶解，作为样品溶液，进行下列试验，并比较两者试验结果的差异。
1．Molish反应
取两试样各l mL，各加入10％α—萘酚溶液10滴，充分摇匀，将试管倾斜，沿管壁慢慢加入1 mL浓硫酸，勿摇，观察溶液界面的颜色变化。
2．盐酸锌粉（镁粉）反应
取两试样各10滴，分别加锌粉少许，滴加浓盐酸，观察颜色变化（在白瓷板上进行）。
3．FeCl3反应
取两试样各10滴，分别加入1％FeCl3 溶液1～2滴，观察颜色变化（在白瓷板上）。
4．A1C13反应
取两试样各10滴，分别加入1％AlCl3 乙醇溶液1～2滴，观察颜色变化并检查荧光反应（在白瓷板上）。
（五）芦丁及槲皮素的紫外光谱测定
取精制样品10 mg，溶于10 mL光谱纯甲醇中，进行紫外光谱分析，扫描波长为200～400 nm，将扫描所得谱图及最大吸收峰数据与标准数据对照。
（六）芦丁及槲皮素的红外光谱测定
取精制样品约l mg，用KBr压片法进行红外光谱分析，将所得谱图与标准谱图对照，并解释光谱图中的主要特征峰。
（七）芦丁及槲皮素的液相色谱测定
HPLC法测定芦丁的含量时，常用的流动相系统为甲醇－冰醋酸溶液，比例一般为：
①美国WATERS 600E 系统；流动相为甲醇－水－冰乙酸（40：57.5：2.5）；色谱柱为μBondapak C18柱（10μm ，3.90mm×300mm）；柱温为室温；检测波长为254nm。
②Waters高效液相色谱；流动相为甲醇－水－冰乙酸（45：53：2）；色谱柱为luna 5μ C18柱；检测波长为355nm；柱温为30℃。
五、思考题
1．重结晶的主要步骤是什么？每步的目的是什么？操作中应注意哪些问题？
2．如何确定重结晶溶剂的用量？
3．写出实验（一）、（二）、（三）中所需仪器的名称和规格。
4．本实验中，重结晶所用仪器是否需要干燥？为什么？
5．如何选择产品和仪器的干燥方法？
6．芦丁水解时，盐酸的作用是什么？乙醇的作用是什么？
7．为什么芦丁提取时用水作溶剂，而重结晶时用乙醇作溶剂？
8．述固液萃取的影响因素。