叶绿素的提取实验改进调查报告
姚福广
一、传统的实验方法与改进
（一）实验目的
通过对叶绿素的提取方法的研究，找出最方便、最简单可行的实验方法。
（二）材料用具及仪器药品
1、层析液配方：①石油醚20ml+丙酮2 ml +苯1ml②93号汽油③9 ml95%乙醇+1ml苯
2、天平、研钵、烧杯、量筒、滤纸、脱脂棉、粉笔、表面皿、剪刀、漏斗、滴管、90- 95%乙醇
3、紫鸭趾草、菜心、韭菜、菠菜等叶子
（三）实验原理
叶绿体含有叶绿体色素，叶绿体色素主要包括有叶绿素a、叶绿素b、叶黄素和胡萝卜素，可用有机溶剂乙醇、丙酮等将它们提取出来（因为丙酮有毒，所以这里可以用酒精代替）。纸层析法是分离叶绿体色素最简单的方法。它的原理是利用混合色素中各个成分物理、化学性质的差别，分别以不同程度分布于两相中（即固定相和流动相）。由于它们以不同的速度移动，从而达到分离的目的。 叶绿体色素容易受光的破坏，变成褐色。叶绿体色素具有荧光现象。
（四）实验方法
1、纸层析法分离叶绿体色素（方法1）
（1）称取新鲜叶片（紫鸭趾草、菜心、菠菜对比效果）1克，剪碎，放在研钵中，加乙醇5m1，加入少许碳酸钙，共研磨成匀浆。
（2）提取叶绿素：①用滤纸过滤。②静置匀浆5分钟，用滴管直接吸取上面的色素提取液4～5滴。③用脱脂棉过滤。
（3）取一块预先干燥处理过的定性滤纸，将它剪成长约10cm ，宽约1cm的滤纸条。用毛细管吸取色素提取液。在滤纸条的一端（约距这一端的1cm处）划出一条滤液细线，等滤液干燥后，再重复划4～5次。
（4）将滤纸条的另一端（约距这一端1cm处）拆成“V”字形，并将它挂在放有层析液的烧杯壁上（注意：色素线要略高于层析液面，且滤纸条下端最好不要碰到烧杯壁），盖上培养皿。
（5）经几分钟后，观察色素带的分布，最上端为胡萝卜素，其次是叶黄素，再次是叶绿素a，最后是叶绿素b。把色素提取液一滴一滴地滴在滤纸的中央（滤纸要平放在表面皿或培养皿上）。待色素点风干后，向该色素点上慢慢滴加层析液，使四种色素（叶绿素a、叶绿素b、叶黄素、胡萝卜素）在滤纸上分离出来，形成4个圆圈。四种色素在滤纸上的移动速度是胡萝卜素（橙黄色）>叶黄素（黄色）>叶绿素a(蓝绿色)>叶绿素b（黄绿色）。
2、纸层析法分离叶绿体色素（方法2）
（1）提取色素的步骤。（同前）
（2）把色素提取液一滴一滴地滴在滤纸的中央（滤纸要平放在表面皿或培养皿上）。待色素点风干后，向该色素点上慢慢滴加层析液，使四种色素（叶绿素a、叶绿素b、叶黄素、胡萝卜素）在滤纸上分离出来，形成4个圆圈。四种色素在滤纸上的移动速度是胡萝卜素（橙黄色）>叶黄素（黄色）>叶绿素a(蓝绿色)>叶绿素b（黄绿色）。
3、层析法分离叶绿素（方法3）
（1）提取叶绿素的步骤。前同。
（2）可用粉笔代替滤纸条。同样画滤液细线，等滤液干燥后，再重复划4～5次。
（3）将粉笔放入放有层析液的烧杯中。（注意：色素线要略高于层析液面）
（4）同样的观察。
五、创新点：
1 、研磨加入少许碳酸钙，以及用乙醇代替丙酮提取。加入少许碳酸钙的目的是为了防止在研磨过程中，叶绿素受到破坏。因为叶绿素是一种含镁的化合物，其中的镁易被H+、Cu2+、Zn2+等取代。当被H+取代后，就形成去镁叶绿素，呈黄褐色。
2、过滤用了三种方法。色素分子比较大，不容易透过滤纸，滤纸有较强的吸附能力而使色素吸附在滤纸上，从而降低色素浓度,影响实验效果。因此可以把匀浆静置后直接用滴管吸取。但又考虑怕有其他杂质。又采用了脱脂棉过滤，叶绿素等色素分子是脂溶性,根据相似相溶原理,用脱脂棉可减少实验过程中色素的流失,增强实验效果。
3、3组层析方法的对比。可以找出最佳的层析方法。当采用滤纸条时，有好多学生对“不让滤液细线触及到层析液”这一点做的不是很好。所以后面又找到了两种方法。一种是直接用粉笔代替滤纸条，粉笔比较好固定。还有就是用圆形滤纸，把提取液点在中央，之后点层析液，这样操作也比较简单。
4、层析液的改进。丙酮是有毒物质，我们可以考虑用其他物品代替。层析液主要是需要脂溶性的有机物。我们可以用常见的酒精+苯或者93号汽油。
5、多种叶绿素提取材料的选择。可以通过实验选择出最易提取、提取效果最好的材料。
“叶绿素的提取”这个实验也是高中生物教材中的一个重要实验，教材要求用菠菜作实验材料。笔者想只要是绿叶不就可以了吗，为什么一定要去市场上买菠菜呢？笔者仔细观察了紫茎泽兰的叶，质地柔软，容易研磨，叶绿素含量高，资源特别丰富。据说紫茎泽兰还是外来物种，它的到来给生态环境造成了一定的破坏。笔者用它来作叶绿素的提取实验材料，不但可以得到无需成本的实验材料，还可以对学生进行“外来物种入侵，破坏生态环境”的教育。
第二篇：从菠菜中提取色素的实验报告
从菠菜中提取色素的实验报告
（菠菜浸泡时间的不同）
【实验目的】
1、通过绿色植物色素的提取和分离，了解天然物质的分离提纯与方法。
2、通过薄层色谱分离操作，加深了解微量有机物色谱分离鉴定的原理。
【实验原理】
叶绿色存在两种结构相似的形式即叶绿素a{C55H77O5N4Mg}和叶绿素b{ C55H70O6N4Mg }；胡萝卜素是具有长链结构的共轭多烯，有三种异构体；叶黄素C40H56O2是胡萝卜素的羟基衍生物。当提取时，从上到下颜色依次为：黄绿色，蓝绿色，黄色和橙色。
【实验仪器】
研钵，色谱柱，丙酮，乙醇，乙醚，中性氧化铝，菠菜叶，烧杯，漏斗，玻璃棒，滤纸，剪刀，脱脂棉，纱布。
【实验步骤】
1、称取30g洗净后用滤纸喜感的新鲜菠菜叶，用剪刀剪碎，放入研钵中研磨，研磨时放入少量碳酸钙，防止研磨过猛破坏叶绿素结构，研磨至烂。
2、将研磨碎的菠菜叶转入小烧杯中，加入30mL配好的乙醇乙醚溶液，盖上表面皿，防止有机溶剂蒸发。按小组成员分别浸泡10,15,20,25,30,35,40,45,50,55分钟。
3、浸泡期间，填充色谱柱，在最下面垫入脱脂棉，再盖上一个小滤纸片，装入氧化铝至4/5处，再盖上一层滤纸片。
4、将烧杯中的菠菜叶连带着有机溶剂用纱布挤入漏斗中，转入分液漏斗，加入10mL水洗涤，除去水层（下层），再用10mL水洗涤一次。
5、将分页漏斗中的溶液慢慢倒入色谱柱中，加几滴丙酮既可以看到颜色变化。
6、洗净仪器，收拾实验室，打扫卫生。
【实验记录】
虽然分层现象不是非常明显，但是还是可以看得见分层现象。
【结果与讨论】
1、做这个实验的时候，我觉得不应该用纱布挤干，因为个人感觉很多色素都被纱布吸走了，导致后来的实验现象没有很明显，经过对比，没用纱布直接过滤的同学做出的现象比用纱布做的现象要明显的多。
2、有机溶剂往往比较容易挥发，所以加入后要盖上表面皿。
3、此实验浸泡15分钟以后现象就可以很明显，因此以后在课堂上给学生演示的时候浸泡的时间不是越长越好的，15分钟足矣。
4、若最后颜色没有明显的分层，可以加入几滴丙酮帮助分层。