实验7菠菜色素的提取和色素分离 (6学时)

一、实验目的

了解薄层层析和柱层析的原理和操作 二、反应原理

绿色植物如菠菜含有多种天然色素，其中胡萝卜素、叶黄素、叶绿素a和b等以极性逐渐增加：

CH3

CH3

CH3

CH3

CH3

H

H

3

3

?-胡萝卜素

3

CH3

CH3

CH3

CH3

CH3

CH3

HO

3

叶黄素

2R

33

CH33

CH3

CH3

CH2CH3

叶绿素a (R=CH3)

叶绿素H

CH3

22

3

CH3

O

CH3

CH3

CH3

CH3

在薄层层析时，上述化合物的展开速度不同；

在柱层析时，流出速度有差异，可被极性不同的溶剂洗脱。

三、主要试剂与仪器 甲醇、石油醚(60~90?C)、无水硫酸钠、丙酮、乙酸乙酯、滴管

剪刀、布氏漏斗、抽滤瓶、分液漏斗、量筒、三角瓶、圆底烧瓶、常压蒸馏装置、硅胶薄层层析板、薄层层析缸、150~160目中性氧化铝

四、实验步骤

1、菠菜色素的提取

用分液漏斗洗涤时，旋荡要轻，以防乳化。

2、薄层层析

点样于距离下边缘约1cm处；

点样要轻，以免刺破硅胶层；

薄层板在展开剂展开后，测量并记录溶剂前沿和每个斑点中心与原点中心的距离。

按公式

Rf?溶质的最高浓度中心至原点中心的距离 溶剂前沿至原点中心的距离

计算胡萝卜素、叶黄素、叶绿素的Rf值

3、柱层析

可用滴管代替滴液漏斗滴加洗脱剂

4、最好结果的薄层板、柱层析的所有单独接收组分上交。

第二篇：菠菜色素的提取与分离.doc

菠菜色素的分离与提取

作者：沈家欢

肇庆学院化学化工学院化学（现代分析与测试技术）

摘要：用抽滤法从菠菜中提取色素，使用薄层色谱、柱色谱谱对叶绿素、胡萝卜素、以及叶黄素进行分离，用石油醚—乙醇（3：2），抽滤法提取色素的效果较好，用3:2的石油醚—乙酸乙酯作展开剂进行展板分离色素，用3:1和3:2石油醚—乙酸乙酯洗脱叶绿素a和叶绿素b。用石油醚洗脱胡萝卜素。

关键词：菠菜色素，薄层层析，柱层析，叶绿素，胡萝卜素。

前言部分：绿色植物大多含有胡萝卜素，叶绿素a 叶绿素b等多种天然色素，这些色素是有机物，易溶于有机溶剂，如石油醚，乙酸乙酯等极性溶剂。

1  实验部分

1.1    试剂和仪器

试剂：石油醚，乙醇，乙酸乙酯，无水碳酸钠，硅胶G

仪器：研钵，分液漏斗，层析柱（20x10）,抽滤瓶，滴管。毛细管，层析板，布氏漏斗。

文献值

1.2    实验步骤

1.2.1    抽滤和浸泡提取菠菜色素^{【 1 】}

在研钵中放入15g新鲜的菠菜叶，用剪刀剪碎并加入20ml的乙醇搅拌，在研钵中研磨约5分钟，然后用布氏漏斗轻微抽滤，弃去滤液，将菠菜叶放回研钵，适当研磨，用15ml的3:2的石油醚—乙醇混合液萃取色素，然后轻微抽滤，重复3次，将每次的提取液用滴管转移到分液漏斗中，然后用10ml的水洗涤2次，以除去萃取液中的乙醇(轻微震振荡，以防止乳化)，弃去水—乙醇层，石油醚层用无水碳酸钠干燥。

1.2.2    薄层层析分离菠菜色素

取活化后的层析板，用毛细管蘸取已提取的菠菜色素进行点样。放入预先选定展开剂的广口瓶中。广口瓶内有3:2的石油醚—乙酸乙酯的展开剂，盖上瓶盖，待展开剂上升至规定高度时，取出层析板，晾干，用铅笔做出标记。并计算Rf值

Rf=

1.2.3    柱层析分离色素

裝柱：在20x10的层析柱中加适量的石油醚。在烧杯中加入30ml石油醚和10g硅胶G混合缓缓的加入层析柱中，必要时用装在玻璃棒上的橡皮塞轻轻地在层析柱的周围敲击使吸附剂装的平稳致密。柱中溶剂面高度要高于吸附剂表面1~2cm。

过柱：装完后上面在用一层圆形滤纸覆盖在硅胶表面，然后放出溶剂直至高出硅胶表面1cm为止，注意任何情况下硅胶表面都不能露出液面。将已提取的色素用滴管小心的滴加到层析柱顶部。加完后打开下端活塞让夜面下降到柱面一下1cm左右关闭活塞，加数滴石油醚，打开活塞是液面下降，经过几次使色素全部进入柱体。

洗脱：待色素全部进入柱体后，在顶端反复加入从下端流出的石油醚，洗脱胡萝卜素，并用锥形瓶收集。胡萝卜素收集完后，改用3:1的石油醚—乙酸乙酯洗脱，当叶绿素a和b快流出时，改用3:2的石油醚—乙酸乙酯洗脱，然后进行收集。

2            结果与讨论

A:  在提取色素的过程中，抽滤过程不好控制，石油醚易被抽走而损失一部分，所以在分液漏斗中分液时要加入适量的石油醚，使色素充分溶于石油醚中.而且使用3|：2的石油醚—乙醇通过浸泡的方法提取色素为此实验的优化条件

B：波层色谱是一种很好的分离、纯化、鉴定有机化合物的一种重要方法之一，尤其对微量分析，根据展开剂的不同，可以确定各色素极性的强弱。

C:   柱层色谱分离的关键是洗脱剂的选择，二洗脱剂的选择要根据色素的极性而定，胡萝卜素极性小，所以用石油醚洗脱，叶绿素分别用3:1和3:2的石油醚—乙酸乙酯洗脱。

D：  比较薄层层析法与柱层层析法，薄层层析法分离效率高，灵敏度高。快捷，适用于微量分析,而柱色谱法分离不彻底，适用于较多量的分离

E:  胡萝卜素 Rf==0.9   叶绿素a  Rf==0.7  叶绿素a  Rf==0.55     

3：结论： 

Rf值：   胡萝卜素 > 叶绿素a > 叶绿素b

参考文献

[ 1 ] 李好样，冯轶雪，菠菜色素提取与分离[ J ],太原师范学院学报（自然科学版），20##年，第3卷，第3期