重庆医科大学生物化学实验报告
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胰酶对蛋白质的消化和影响酶作用的因素
实验目的 :1、学习和掌握影响酶作用的因素。2、熟悉酶的催化作用。
实验原理 :蛋白质或者多种肽物质在蛋白水解酶的作用下,水解肽键,生成小分子肽或者氨基酸。蛋白水解酶对肽键具有一定的选择性,在消化道中,几种蛋白水解酶共同作用才能使蛋白质彻底水解为氨基酸。本实验随着白明胶的不断水解,以还原的银颗粒逐渐脱落下来,底片逐渐变透明,根据底片是否透明以及透明的程度来判断胰酶的活性的高低。酶是一种生物催化剂,酶的活性受到多种因素的影响,这些包括酶浓度,底物浓度、温度、pH、抑制剂和激活剂。
实验材料和器材:1、器材 曝光定影底片、试管与试管架、吸量管、恒温水浴箱、电热水浴锅、冰浴。2、试剂 胰酶溶液、0.1mol/L磷酸缓冲液(pH=5)、0.1mol/L磷酸缓冲液(pH=7)、0.1mol/L磷酸缓冲液(pH=10)、0.2mol/L HgCl2 溶液(剧毒)、0.2mol/L NaCl。
实验步骤 :1、酶浓度对酶活性的影响
放入相同大小曝光底片1张,记录时间,40℃水域加热。
2、温度对酶活性的影响
放入相同大小曝光底片1张,记录时间,40℃水浴,反应溶液应该完全浸没底片。
3、pH对酶活性的影响。
放入相同大小曝光底片1张,记录时间,40℃水浴。
4、抑制剂对酶活性的影响
放入相同大小曝光底片1张,记录时间,40℃水浴。
【实验结果】 :
1、酶浓度对酶活性的影响(表1)
2、温度对酶活性的影响(表2)
3、pH对酶活性的影响(表3)
4.、抑制剂对酶活性的影响(表4)
实验结论 :
在酶触反应系统中,当底物浓度远远超过酶浓度时,酶触反应速度与酶浓度成正比关系。酶触反应速度随着酶浓度的增加而加快,随着酶浓度的降低而减慢。温度对酶活性有显著影响。低温时酶反应速度缓慢。当温度逐渐回升时候,酶触反应速度加快。低温时酶活性虽然很低,但酶很稳定,不容易发生变形,温度回升后,酶可以恢复活性。达到某一温度时酶触反应速度最大,酶活性最高,此温度成为酶的最适温度,胰酶的最适温度在40摄氏度左右。胰酶的最适pH在7左右。Hg离子能抑制胰酶的活性。酶浓度,底物浓度、温度、pH、抑制剂和激活剂等多种因素,都影响酶的活性。
注意事项 :1、在研究一种因素对酶的活性的时,需要严格的控制反应中其他因素保持不变,只能改变要研究的某一种因素。2、掌握好水解程度是本实验的关键之一。3、HgCl2有毒,操作时要格外小心,严防中毒。
思考题:
1、除了本试验中观察的因素以外,影响酶活性的因素还有哪些?
答:底物浓度等。
2、酶反应的最适温度是一个常数吗?它和哪些因素有关?高温和低温对酶活性的影响有何不同?
答:酶的最适温度对于酶不是一个特征性常数,它与反应的条件(如作用时间的长短、底物浓度、酶浓度、pH等)有关。低温时酶活性降低,温度回升后,酶可以恢复活性,高温时酶活性降低,适当降低温度,酶可以恢复活性,温度过高时,酶变性,降低温度,不能恢复活性。
3、在抑制剂对酶活性的影响试验中设立的1、2、3号试管分别起什么作用?
答:试管1是做空白对照;试管2做对照,排除氯离子对酶活性的影响;试管3是实验组。
第二篇:影响酶促反应的因素
生物医药工程系《生物化学实验》预习报告
姓名 学号 专业生物科学 班级 日期
注:此表格若地方不够可自行调整。