邻菲罗啉分光光度法 测微量铁

本方法采用GB/T 3049的规定

4.5.2.1原理

试样经水提取后,用抗坏血酸将三价铁还原成二价铁,在pH值2—9范围内，二价铁与邻菲罗啉反应生成橙红色的配合物，在510nm波长处,测定溶液的吸光度。

4.5.2.2试剂和溶液

4.5.2.2.1盐酸：1+1溶液

4.5.2.2.2氨水：1+9溶液

4.5.2.2.3乙酸-乙酸钠缓冲溶液：pH值为4.4

4.5.2.2.4硫酸

4.5.2.2.5抗坏血酸：2%溶液，使用时配制。

4.5.2.2.6邻菲罗啉显色剂：0.2%溶液.该溶液应避光保存,仅能使用无色溶液。

4.5.2.2.7铁标准储备液：0.100mg/mL。准确称取0.863g硫酸铁铵[NH4Fe(SO4)2.12H2O],精确至0.001g,加水100 mL硫酸(4.5.2.2.4),加热溶解,定量转移到1000 mL容量瓶中,用水稀释至刻度,混匀,贮存于塑料瓶中.此溶液1 mL含0.100mg铁。

4.5.2.2.8铁标准溶液：0.010mg/ mL.准确吸取10 mL铁标准储备液(4.5.2.2.7)于100 mL容量瓶中,用水稀释至刻度,混匀,贮存于塑料瓶中.使用时配制。

4.5.2.3 仪器设备

常用实验室仪器、设备和

a. 分光光度计：带有3cm光路长度的吸收池；

b. pH试纸或pH计。

4.5.2.4 分析步骤

4.5.2.4.1标准溶液系列配制及标准曲线绘制

分别吸取0.010mg/mL铁标准溶液（4.5.2.2.8）0.0，2.0，4.0，6.0，8.0，10.0 mL，于6个100 mL烧杯中，加水至约60 mL中。用盐酸（4.5.2.2.1）或氨水(4.5.2.2.2)调节溶液pH约为2(用精密pH试纸或pH计检验)，加2.5 mL抗坏血酸溶液（4.5.2.2.5），10 mL乙酸-乙酸钠缓冲溶液（4.5.2.2.3）5 mL邻菲罗啉显色剂(4.5.2.2.6)，混匀，用水定容，半小时后在分光光度计上，用1cm吸收池于波长510nm处，以零标准溶液为参比溶液，依次测定标准溶液系列的吸光度，以标准溶液中铁的质量（ug）为横坐标，相应的吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。

4.5.2.4.2试样溶液测定

移取试样溶液(4.5.1.4.1)2.0—10.0 mL(预计试样中铁的含量在10—100ug之间)置于100 mL烧杯中,接着按4.5.2.4.1中“加水至约60 mL??”开始到“以零标准溶液为参比”为止，测定试样溶液的吸光度。

同时按4.5.2.4.2规定的步骤进行空白试验

4.5.2.5 分析结果的表述

铁(Fe)的含量X8，以质量百分数（%）表示，按式（8）计算：

????????（8）

注：选择零标准溶液定量加入盐酸（4.5.2.2.1）使pH值在3—5之间,记录盐酸用量,在标准溶液系列加入等量盐酸(4.5.2.2.1)

式中：m1——从标准曲线查得试样溶液铁质量，ug；

m0——从标准曲线查得空白溶液铁质量，ug；

m——称取试样质量，g；

V——比色时所取试样体积，mL。

4.5.2.6允许差

取平行测定结果的算术平均值为测定结果；平行测定结果的绝对差值应符合表9要求。

表 9

铁含量，% 0.200—0.500 ＞0.500—1.00 ＞1.00—3.00 ＞3.00 绝对差值，% 0.050 0.100 0.200 0.300

第二篇：邻菲罗啉分光光度法测定铁

邻菲罗啉分光光度法测定铁

中文名称: 1,10-菲罗啉 [1]

中文别名： 邻菲罗啉 又叫邻二氮菲

英文名称： 1,10-Phenanthroline monohydrate

英文别名： 1,10-Phenanthroline hydrate

CAS号： 5144-89-8

分子式： C12H8N2.H2O

分子量： 180.21

分子结构：

1,10-phenanthroline

危险品标志: T N 说明 风险术语： R25; R50/53; 说明 安全术语： S45; S60; S61

主要用途：邻菲罗啉与亚铁离子在PH2~9的条件下生成桔红色络合物，然后用分光光度法测定铁含量。 物理化学性质：一水合物为白色结晶性粉末。熔点93-94℃，无水物熔点为117℃，溶于300份水，70份苯，溶于醇和丙酮。

能与多种过渡金属形成配合物，由于形成的配合物为螯合物，所以较为稳定。与铜形成的配合物及其衍生物因为对DNA有一定的切割活性，可以用作非氧化性核酸切割酶，进而有一定的抗癌活性。

实验原理

2+2+邻二氮菲(phen)和Fe在pH3～9的溶液中，生成一种稳定的橙红色络合物Fe(phen) 其lgK=21.3，ε508=1.1 3，

4-1-1-1× 10L·mol·cm，铁含量在0.1～6μg·mL范围内遵守比尔定律。其吸收曲线如图所示。显色前需用盐

3+2+酸羟胺或抗坏血酸将Fe全部还原为Fe，然后再加入邻二氮菲，并调节溶液酸度至适宜的显色酸度范围。有

关反应如下：

－2Fe3+ + 2NH2OH·HC1＝2Fe2+ +N2↑+2H2O+4H++2C1

测定时，控制溶液酸度在pH=2～9较适宜，酸度过高，反应速度慢，酸度太低，则Fe水解，影响显色。 Bi、Ca、Hg、Ag、Zn离子与显色剂生成沉淀，Cu、Co、Ni离子则形成有色络合物，因此当这些离子共存时应注意它们的干扰作用。

3+2+2++2+2+2+2+2+

分光光度计---

试剂

1 盐酸溶液-（180克/L）

2 氨水溶液-（85克/L）

3乙酸-乙酸钠（HAc-NaAc）缓冲溶液（pH=4.5）：称取164g分析纯无水乙酸钠，500mL水溶溶解后，加入240mL冰乙酸，加水稀释至1000mL。

4 ?=1%的盐酸羟胺水溶液，因不稳定，需临用时配制。

抗坏血酸溶液，100克/L,一周内

5. 0.1%邻菲罗啉水溶液：1.0克/L先用少许乙醇溶解后，用水稀释至1000，新近配制，避光，使用无色溶液。

6、铁标准溶液（含铁 0.200g/1000mL）

方法1、准确称取1.727g分析纯硫酸铁铵[(NH4)Fe(SO4)2·12H2O]于200mL烧杯中，加入水200mL，完全溶解后，

移入1000mL容量瓶中，加20mL 稀释至刻度，摇匀。

方法2、

7、铁标准溶液（含铁 0.020g/1000mL）--临用时配制

试样中铁的含量测定

1称样，供试液制备

2空白试验

3、标准曲线

吸取铁盐标准溶液 mL于50mL烧杯中，加10mL 蒸馏水，

盐酸溶液-（180克/L）精密PH试纸

移入100mL容量瓶中，加入1 mL抗坏血酸溶液，

依次加入20mL HAc～NaAc缓冲液、10mL邻菲罗啉溶液，用蒸馏水稀释至刻度。

摇匀，

用 1cm比色皿以 为参比，在510nm测量吸光值。

分光光度计型号 编号: 波长 510nm

4、供试品液制备

供试品液， mL于于50mL烧杯中，加10mL 蒸馏水，

盐酸溶液-（180克/L）或氨水溶液-（85克/L），精密PH试纸 移入100mL容量瓶中，加入1 mL抗坏血酸溶液，

依次加入20mL HAc～NaAc缓冲液、10mL邻菲罗啉溶液，用蒸馏水稀释至刻度。

摇匀，

计算

标准曲线方程：