待测样品中微生物的分离、培养和鉴定及菌落特征观察

一、实习目的

1、掌握待测样品中各种微生物的分离成纯种；

2、掌握真菌、细菌的菌落特征，细菌革兰氏染色法、真菌水玻片的制作方法。

二、实习原理

微生物具有个体微小的特征，对于微生物可以说是无处不在，同时微生物也是物种最丰富的生物类群。微生物广泛存在土壤、空气和各种自然状态的水中。我们可以从土壤、空气、水中分离得到各种各样的微生物，如细菌、真菌和放线菌，在不同的培养基额培养温度就可分离得到。真菌一般具有丰富的菌丝有的气生菌丝发达，有的气生菌丝和营养菌丝发达，真菌菌丝较粗而长，菌落表面干燥，如霉菌。细菌菌落一般呈现出湿润、较光滑、较透明、较粘稠、易挑取、菌落正反面颜色相近。

细菌的细胞壁有肽聚糖构成，有的细菌细胞壁的肽聚糖层多达50多层，用革兰氏染色法染色后菌体细胞呈现紫色，另外一些细菌则是仅有几层肽聚糖层，革兰氏染色法染色后菌体呈现红色。革兰氏染色法是细菌中常用的染色方法。其机制是：通过结晶紫初染和碘液媒染后，可在细菌的细胞壁内形成不溶于水的结晶紫碘复合物。革兰氏阳性细菌的细胞壁肽聚糖厚且交联程度高，在用乙醇脱色时复合物不会流出细胞壁，细胞始终保持紫色，而革兰氏阴性细菌的细胞壁肽聚糖层薄交联程度低，而且脂类物质含量高，在用乙醇脱色时，脂类物质会被溶解复合物流出，用番红染液染色后菌体细胞呈现出红色。因此用革兰氏染色法可将细菌分为革兰氏阳性细菌和革兰氏阴性细菌两类。

三、实习方法

1、实验材料

采取东二院的植被下的土壤。

2、培养基

马铃薯蔗糖琼脂培养基（PDA培养基）、牛肉膏蛋白胨培养基

3、实验过程

3.1 按照培养基配方配制培养基，配制好的培养基高温高压灭菌30min。

PDA培养基：去皮马铃薯200g，蔗糖或葡糖糖20g、琼脂15—20g，蒸馏水1000ml；

牛肉膏蛋白胨琼脂培养基：牛肉膏5.0g，蛋白胨10.0g，氯化钠5.0g，琼脂15—20g，蒸馏水1000ml，PH7.4。

3.2  土壤处理

将土壤放入洁净的研钵中轻慢磨细，再用细筛子滤去较大的颗粒。称取5g土壤置于45ml无菌水中摇匀静置片刻。将土壤磨细是为了使土壤中的微生物从土壤中尽量完全释放出来。

3.3 平板涂布

在无菌环境下向无菌试管中取9ml无菌水，从稀释好的样品中吸取1ml上清悬浮液放入9ml无菌水中再稀释。此时土样总共稀释了100倍。从试管中取200 ul样液于牛肉膏蛋白胨培养基和PDA培养基中。用三角涂布棒涂匀，置于30℃下培养一段时间。

3.4 细菌和真菌形态的观察

细菌形态采用革兰氏染色法对细菌染色，真菌制作水玻片观察其菌丝形态。制作细菌涂片。先在载玻片上滴上一滴无菌水用接种环挑适量的细菌在无菌水上，在酒精灯附近将玻片烤干（玻片不能太热否则烤死细菌），已到达固定的目的。固定好的玻片就可以进行革兰氏染色。先用结晶紫初染1min水洗，卢戈氏碘液媒染1min水洗，酒精脱色，番红复染1min水洗。盖上盖上盖玻片显微镜下观察染色结果。制作真菌水玻片。同样在载玻片上滴一滴无菌水，用接种环挑适量的真菌菌落在无菌水上，盖上盖玻片并轻压盖玻片。显微镜下镜检，观察真菌菌丝形态。

四、实习结果及讨论

1、牛肉膏蛋白胨培养基上的细菌菌落和PDA培养基上的真菌菌落；细菌菌落小而湿润，菌落几乎透明；真菌菌落四周有丝状结构。

牛肉膏蛋白胨培养基上的细菌

2、革兰氏染色后的细菌形态如下图

 

杆状的革兰氏阳性细菌

 

革兰氏阴性细菌

3、真菌菌丝的观察

     

4、细菌和真菌菌落

第二篇：实习报告

生物工程专业

生产实习报告

学院   

专业        

姓名        

学号            

成绩                      

一 实习企业：中国科学院成都生物研究所

   研究所简介：中国科学院成都生物研究所成立于1958年，是以一级学科建所的中国科学院直属科研事业单位，也是中国科学院知识创新工程首批试点单位之一。长期以来，研究所致力于生物多样性保护与生物资源可持续利用研究，为长江上游地区生态环境建设与生物多样性保护以及战略新兴生物产业的形成与升级提供科学基础、技术支撑与决策依据。

   成都生物所现有在职职工350人，其中中国科学院院士1人，“百人计划”入选者14人，高级科研人员140余人。研究所拥有植物学、动物学、环境科学、药物化学4个博士学位授予点，动物学、植物学、生态学、药物化学、微生物学、环境科学、环境工程7个学术型硕士学位授予点，制药工程、药学、生物工程、环境工程4个专业型硕士学位授予点以及生物学博士后科研流动站。现有在学研究生300余人。　

   成都生物所设有天然产物研究中心、生态研究中心、两栖爬行动物研究室、应用与环境微生物研究中心、农业生物技术研究中心等5个研究机构，是国家天然药物工程技术研究中心、中国科学院山地生态恢复与生物资源利用重点实验室、生态保育与生物多样性保护四川重点实验室、中国科学院环境与应用微生物重点实验室、环境微生物四川省重点实验室、中国科学院四川转化医学研究医院的依托单位。

   成都生物所公共实验技术中心具有天然产物、生态学、分子生物学、微生物学等共用实验装备，拥有600MHz核磁、高分辨质谱、氨基酸自动分析仪、多功能显微镜等各类先进仪器设备。该所有茂县山地生态系统定位研究站（中国生态系统定位研究网络站）、若尔盖高寒湿地定位研究站等8个野外生态站（点）。该所标本馆馆藏两栖爬行动物标本10万余号，标本的种类和数量居同领域全国第一位，亚洲第二位；植物标本20万份。　

   建所以来，成都生物所已取得科技成果300多项，其中获省部级以上科技成果奖100多项。以“地奥心血康”为代表的众多科技成果成功实现产业化，为国家经济和社会发展作出了突出贡献。　

   成都生物所与美国、德国、英国、法国、俄罗斯等20多个国家和地区的大学和科研机构建立了良好的合作关系。与国内众多高校、研究所、企业建立了紧密的战略伙伴关系。　　

二 实习内容

1.实习时间：20##年7月15日—7月22日

2.实习部门和安排、实习各环节设计的工艺流程和情况内容（见活动时间安排一览表）

   7月16日，上午开班仪式和主题报告会，下午成都生物所“百人计划”入选者唐卓研究员作报告，国科图成都分馆江恩波研究员作报告。

   7月17日，上午成都有机所刘白玲研究员，成都生物所印开蒲研究员作报告，下午参观金沙遗址。

   7月18日，学术报告，与导师、研究生交流。

   7月19日，走进重点实验室、研究室、成果转化基地——大邑园区、什邡实验基地新园区、地奥集团。

   7月20日，分学科进行学科专业知识教育、学习等。

   7月21日，上午“科研精神”主题拓展教育，下午参观成都地区部分研究所，晚上结业仪式。

三 实习体会

   “相聚成功之都，走进科学殿堂”，在这个暑假，我很高兴也很荣幸地参加了中国科学院成都生物研究所举办的为期一直的夏令营活动。在此次活动中，我更加深入的了解了成都生物研究所这个大家庭，了解了科研工作者的科研环境，科研方向，感受和学习了他们的科研精神，使我更加明白和坚定了自己的学习动力，追求目标和人生方向。

仍记得活动第一天唐卓研究员所做的报告，他告诉我们，他选择研究生首先看重的方面—交流，他说：“交流不是简单的说话那么简单，而是能清楚地表达自己的思想和清楚地理解别人的思想。”这句话让我受益匪浅，当代的大学生大部分都享受在这高科技的数字时代，缺乏与人沟通交流的能力，不知道如何表达自己的思想和想法，更确切地说是不知道自己想要的是什么。在此次活动中，我发现了自己的不足和缺点，我的思维表达能力是不够好的，没有较好的条理逻辑思维能力，表达一个事情不能有条有理有据。我发现了它并会认真地去改正加强。同时，印开蒲研究员的报告和他的人生经历也让我敬佩尊敬不已，他的执着不放弃，坚持不屈服，勇敢和果毅，专研及探究都成就了他今日的成功与辉煌。他根据收集到的著名的自然学家、植物学家、探险家、作家威尔逊所拍摄的照片，逐一寻找威尔逊照片中的那些地方，并站在百年前威尔逊站过的地方，重新按下快门，记录下百年的沧桑巨变。通过照片的对比，见证了中国西部地貌、植物、社会与人文百年变迁。以此为基础，编写出版了《百年追寻——见证中国西部环境变迁》一书，在国内外引起了强烈反响，20##年在伦敦书展上举办了专题展览。听了印开蒲研究员的报告后，更觉得人生多的是选择，多的是道路，多的是挫折，所有的一切只要坚持，只要坚韧，最终都会向着美好的结局迈进，都会获得经验，体验，回忆及成功。

真的很高兴去到成都生物研究所参加此次的夏令营，不仅让我结识了很多来自全国各地的朋友，优秀的师哥师姐，受人尊敬的成功的老师，也让我明白了自己的人生方向，自己的缺点优点。我相信自己能够昂首挺胸接受风雨的洗礼，阳光的抚摸，乘风破浪，迎接灿烂美好的明天。

印开蒲研究员做报告

营员参加素质拓展活动