流感嗜血杆菌的生物危害评估报告

一、细菌的传播与致病

嗜血杆菌是只有在含有血或血制品及其因子的营养条件下才能生长发育的一群细菌。目前发现的嗜血杆菌有16种，可致人类疾病的至少有8种，其中最具代表性的为Ｈｉ。根据荚膜成分的不同，Ｈｉ又分为ａ、ｂ、ｃ、ｄ、ｅ、ｆ6种菌型，其中又以ｂ型流感嗜血杆菌（Ｈｉｂ）最容易引起侵袭性疾病。

流感嗜血杆菌主要寄生于人的鼻、咽、眼及阴道黏膜中，常与正常菌群共生，人是唯一的传染源和带菌者，病人和鼻咽带菌者为传染源。健康人鼻咽部带菌率可高达60～80％。带菌可持续数日或数月。 Ｈｉｂ多寄居在鼻咽部黏膜，通过空气飞沫和密切接触在人与人之间传播，新生儿可通过母亲的产道感染。流感嗜血杆菌只引起人类感染，对动物无致病性。同样，寄居于禽类、猪、犬的嗜血杆菌也不感染人类。

有研究表明，人群对流感嗜血杆菌普遍易感。新生儿由母体抗体被动免疫，3个月～3岁儿童的抗体水平最低，对该菌最易感，Ｈｉ在健康学龄前儿童的带菌率为10.9％～37.9％，学龄儿童最高可达20.9％；Ｈｉｂ在学龄前儿童带菌率为5.4％～6.9％。成人可为无症状带菌者，其发病多有免疫缺陷。

Ｈｉ带菌率与季节有关，感染多散发，一年四季皆可发病，但多从秋季开始增加，冬季达高峰。Ｈｉｂ通过飞沫进入人的呼吸道，侵 1

入血液繁殖，可扩散至人体多个器官，引起组织、器官的侵袭性感染。流感嗜血杆菌是幼儿脑膜炎,菌血症,脓毒性关节炎,肺炎,气管支气管炎,中耳炎,结膜炎,鼻窦炎和急性会厌炎的主要病原菌，这些感染和心内膜炎也可发生于成人但比较少见。

国内的临床调查显示，儿童社区获得性肺炎中，Ｈｉ占29.0％。Ｈｉ所致的感染以呼吸道感染居多，其中肺炎多通过飞沫传播。流感病毒或葡萄球菌感染的患者易并发Ｈｉ肺炎，起病较慢，常有痉挛性咳嗽，全身症状重，中毒症状明显，白细胞明显增高，有时伴淋巴细胞的相对或绝对升高。小婴儿Ｈｉｂ肺炎常并发脓胸、脑膜炎及化脓性关节炎，易后遗支气管扩张症。Ｈｉｂ脑膜炎在儿童化脓性脑膜炎中占28.9％～51.7％。在欧美国家，Ｈｉｂ是儿童未使用疫苗前化脓性脑膜炎中居首位的病原菌。化脓性脑膜炎较常见，但危害大，其发病率仅次于流脑。多数患者具有明显的前驱症状，常见流涕、咳嗽等，经数日或1～2周方出现脑膜刺激征，以冬春两季多发。10％的儿童有单侧或双侧性耳聋。其他并发症如学习能力差、精神发育迟缓、颅神经麻痹、瘫痪等通常为暂时性的，有望治愈。Ｈｉｂ感染常致会厌炎，表现为会厌部红肿、吞咽不适，有时发生呼吸困难。在中国发病率较低，但病死率可高达7％～8％。化脓性中耳炎等在国内相对少见。

二、细菌的生物学特性

流感嗜血杆菌（Hemophilus influenzae，Ｈｉ）简称流感杆菌，又名费佛氏杆菌（Pfeiffer ' s bacillus），为革兰氏阴性短小杆 2

菌，大小为0.8～1.5ｍｍ×0.3～0.4ｍｍ，两端钝圆。从病灶中新分离的菌株多呈球杆状或双球状，有时可呈短链。在陈旧培养物中呈多形性，有长杆状或丝状体。本菌无动力、无芽孢，粘液型菌株有荚膜。

Ｈｉｂ为需氧菌，培养较困难，由于该菌氧化还原酶系统不完善，生长时需要“Ｘ”和“Ｖ”两种生长辅助因子。“Ｘ”因子存在于血红蛋白中，可耐高温。“Ｖ”因子存在血液中，耐热性较差。在血液中“Ｖ”因子处于被抑制状态，加热75～100℃，5～10min，抑制物被破坏后才被18～24小时，菌落微小，无色，透明似露珠，48小时后形成灰白色较大的菌落、圆形、透明。如以Ｈｉｂ和金黄色葡萄球菌在同一巧克力琼脂平皿上培养，由于葡萄球菌能合成较多的“Ｖ”因子，并弥散到培养基里，可促进Ｈｉｂ的生长，故在葡萄球菌菌落周围生长的Ｈｉｂ的菌落较大，距离葡萄球菌菌落越远的Ｈｉｂ的菌落越小。此称为“卫星现象”。这一特点有助于对此菌的鉴定。

由于有些标本如痰，有大量杂菌生长，对Ｈｉｂ的分离培养影响较大，在巧克力琼脂平皿内加入该菌可耐受的抗生素（每毫升巧克力琼脂内加万古霉素50ｍｇ，杆菌肽30ｍｇ，氯林可霉素1ｍｇ）可提高本菌的分离率。

根据荚膜多糖抗原成分的不同，应用型特异性免疫血清作荚膜肿胀试验或其它血清学试验，可以将Ｈｉｂ分成6个（ａ、ｂ、ｃ、ｄ、ｅ、ｆ）血清型。其中ｂ型对婴幼儿的致病性最强，且最多见，ｆ型次之。

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三、细菌的实验室检查及其它检查

虽然有些病例可根据病史和临床表现疑为流感嗜血杆菌感染，但必须通过实验检查方可确诊。

1.血常规 此杆菌感染时病人血液白细胞大多增高，通常为15×109/L～30×10９/L，重症患者的白细胞总数可减少。

2.细菌培养 可采取病人脑脊液、血液和穿刺抽取液进行细菌培养予以确诊。

3.采用对流免疫电泳，胶乳凝集，协同凝集和ELISA等方法检查脑脊液、血液和浓缩的尿液中Ｈｉｂ的特异抗原磷酸聚核糖基核糖醇（Polyribosyl ribitol phosphate，PRP），均可辅助临床诊断。

四、细菌的防治

由于人群对流感嗜血杆菌普遍易感，特别是２个月至２岁的婴幼儿，一家中同时有两个小儿患病者，在文献中屡有报道，所以在兄弟姐妹或在托儿机构中出现

首例病人后有时亦可再出现新病例，对病人密切接触者可采取化学药物预防，口服利福平可清除带菌，20ｍｇ/Kg，每日一次，服４日为一疗程。每日最大剂量为600ｍg～900ｍg，孕妇不宜用。

对Ｈｉｂ感染最有效的预防措施是肌肉注射Ｈｉｂ偶联菌苗。芬兰赫尔辛基于70年代后期在0～4岁儿童中Ｈｉｂ脑膜炎的发病率为43／10万。注射上述菌苗后到19xx年发病率降为0。Ｈｉｂ的特异抗原磷酸聚核糖基核糖醇（PRP）可与４种蛋白载体（变异性白喉杆菌蛋白－Oligosaccharide－CRM197 protein，HbOC、白喉杆菌类毒 4

素－Diphtheria toxoids，D、脑膜炎双球菌外膜蛋白复合物－Outer membrane protein compound，OMPC和破伤风杆菌类毒素－Tetanus toxoid，T）偶联，分别构成４种类型的偶联菌苗：PRP-HbOC、PRP-D、PRP-OMPC和PRP-T。目前至少有２５个国家将Ｈｉｂ偶联菌苗列入儿童的免疫计划。具体的接种方法为：婴儿从２月龄开始接种，每间隔１～２个月１次，共３次；６～１２月龄的婴儿需注射２次，每次间隔１～２个月；１～５岁的儿童只需注射１次。鉴于Ｈｉｂ肺炎、脑膜炎在低龄组发病率更高，症状及并发症更严重，故应及早接种疫苗。接种Ｈｉｂ疫苗后，极少数儿童的接种部位会出现轻微红肿、疼痛或低热，一般２～３天内消失，只需休息或对症处理。婴幼儿在患急性发热性疾病或严重慢性疾病发病时，均应暂缓接种。对破伤风类毒素过敏者或曾对Ｈｉｂ疫苗过敏者应避免接种。

此外预防Ｈｉｂ感染的最重要方法是对５岁以下儿童进行大面积免疫接种；对2月龄婴儿进行常规接种并提倡母乳喂养；减少与无症状携带者或有侵袭性疾病患者的密切接触；规范抗生素使用；改善居住环境卫生等。

在对病患进行治疗时，由于目前国内普遍存在滥用抗生素和不规律使用抗生素现象，因此Ｈｉ对抗生素的耐药率逐年上升。所以抗生素的选择一定要根据感染部位而定,如脑膜炎和会厌炎.Hib型嗜血流感杆菌结合的疫苗可用于≥2个月的儿童,能有效地预防侵袭性感染如脑膜炎,会厌炎和菌血症等。

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对体重在20kg以下儿童可每天按100mg/kg静脉注射氨苄青霉素,20kg以上儿童和成年人用量为250mg~1g,每6小时1次。另一种办法是口服羟氨苄青霉素,20kg以下儿童20~40mg/kg,每日3次；20kg以上儿童和成年人250~500mg,每日3次；约30%的流感嗜血杆菌产生β-内酰胺酶且对氨苄西林耐药。因此,常用的治疗方案为：磺胺甲基异啰唑/甲氧苄氨嘧啶(SMX/TMP)儿童每日8mg/40mg/kg,口服或静脉注射,成人则为口服1~2片(每片为160mg/800mg),每日2次；头孢呋辛0.25~1g静脉注射,每6小时1次；头孢克罗儿童每日20~40mg/kg,分3次口服,成人500mg口服,每6小时1次；或强力霉素100mg口服,每日2次(8岁以下儿童忌用).对非耐药菌株,在小于20kg儿童可予氨苄青霉素每日100mg/kg,分4次静脉注射(最大剂量为每日2~3g),在大于20kg儿童及成人则为250mg~1g,每6小时1次静脉注射.尚可使用阿莫西林,对小于20kg儿童,可予20~40mg/kg口服,每日3次；对大于20kg儿童及成人,可予250~500mg,每日3次。氟喹诺酮和阿奇霉素对流感嗜血杆菌亦有抗菌活性。

五、细菌的生物安全防护

根据《病原微生物生物实验室生物安全管理条例》中的有关规定，人间传播的微生物名录（待颁布）流感嗜血杆菌属于三类，BSL-2。相关的防护事宜包括：

（1）操作要求

1、实验时，未经实验室主任同意，限制或禁止进入实验室。

2、所有的操作过程应尽量细心，避免产生和溅出气溶胶。 6

4、对于污染的锐器，必须时刻保持高度的警惕，包括针、注射器、玻片、加样器等。

5、打碎的器皿不能直接用手处理，必须用其它工具处理，如刷子和簸箕、夹子或镊子。盛污染的针头、锐器、碎玻璃的容器在倒掉前，应按照相关的规定进行消毒。

6、所有的培养物、储存物及其它规定的废物在释放前，均应使用可行的消毒方法进行消毒，如高压灭菌。转移到就近实验室消毒的物料应臵于耐用、防漏容器内，密封运出实验室。离开该系统进行消毒的物料，在转移前应包装，其包装应符合有关的法规。

7、溅出或偶然事件中，明显暴露于传染源时，要立即向实验室主任报告。进行适当的医学评估、观察、治疗，保留书面记录。

8、按日常程序、在有关传染源的工作结束后、尤其是传染源溅出或洒出后、或受到其他传染源污染后，实验室设备和工作台面应当使用有效的消毒剂消毒。污染的设备在送去修理、维护前，要按照相关的规定消毒；在离开设施转移前，要按照相关的规定打包运输。

（2）安全设备

1、正确使用和保养生物安全柜、最好是二级生物安全柜、或其他合适的人员防护设施、或物理遏制装臵。

2、确定可能形成传染性气溶胶或溅出物的实验过程，如开启装有传染源的容器、采集感染标本等。

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3、涉及高浓度或大体积的传染源时，若选用密封转头或带安全罩的离心机，若转头或安全罩仅在生物安全柜中打开，则可在开放实验室内离心。

4、当必须在生物安全柜外处理标本时，需采取面部保护措施（跟镜、口罩、面罩、或其他防溅装臵），以免传染源或其他有害物溅或洒到面上。

5、在实验室内，必须使用专用的防护性外衣、大褂、罩衫或制服。人员到非实验室区域时，防护服必须留在实验室内。防护服可以在实验室内处理，也可以在洗衣房中洗涤，但不能带回家中。

6、可能接触潜在传染源、被污染的表面或设备时，要戴手套。一次性手套不用清洗、不能重复使用，不能用于接触“洁净”的表面（键盘、电话等），也不应当戴着到实验室外。要备有带滑石粉的乳胶手套。脱掉手套后，要洗手。

7、实验室人员应接受有关的疫苗接种或测试。

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第二篇：结核杆菌的生物危害评估报告

结核杆菌的生物危害评估报告

一、结核杆菌的传播与致病

结核杆菌通常指结核分枝杆菌和牛分枝杆菌，其中结核分枝杆菌（Mycobacterium tuberculosis）是引起人类结核病的主要病原体。

结核分枝杆菌的主要传染途径是经呼吸道传播，由排菌的肺结核病人在咳嗽、喷嚏或大声说话时随呼吸道分泌物排出到空气中，或排菌的肺结核病人随地吐痰通过再生气溶胶(尘埃)，携带结核杆菌，飞扬在空气中，被健康的人吸入后发生感染和发病，因此排菌的肺结核患者(尤其是痰涂片阳性未经治疗者)是结核病的主要传染源。一般结核病患者痰中结核杆菌越多，传播的危险性越大。患者排出的飞沫在1-10微米者，在空气中漂浮时间长，传染性越大。患者病变和症状越严重，传染性也越大。周围人群与患者接触越密切者，受感染的机会越多。与患者同处于空气不流通的室内的密切接触者，受感染的可能性增大。

未受结核感染的人是结核病易感人群，由于结核病是人畜共患病，哺乳类动物如牛、鹿、猴、猪、猫、狗等也都可以患结核病。

感染结核杆菌后，终身都有可能发病，发病时间因人而异，一般2个月～20年才发病。典型肺结核起病缓慢，病程较长，有低热、倦怠、食欲不振、咳嗽及少量咯血。但多数患者病灶轻微，无显著症状。（1）症状 ①全身症状 表现为午后低热、乏力、食欲不振、消瘦、盗汗等。②呼吸系统症状 通常为干咳或带少量黏液痰；继发感染时，痰呈粘液脓性。约1/3患者有不同程度咯血，咯血后常有低热。大咯血时可发生失血性休克，偶因血块阻塞大气道引起窒息。病灶炎症累及壁层胸膜时，相应胸壁有刺痛，一般多不剧烈，随呼吸及咳嗽而加重。若并发气胸或大量胸腔积液，呼吸困难症状尤为严重。（2）体征 早期病灶小或位于肺组织深部，多无异常体征。若病变范围较大，患侧肺部呼吸运动减弱，叩诊呈浊音，听诊时呼吸音减低，或为支气管肺泡呼吸音。因肺结核好发于肺上叶尖后段及下叶背段，故锁骨上下、肩胛区叩诊略浊，咳嗽后偶可闻及湿啰音，对诊断有参考意义。肺部病变发生广泛纤维化或胸膜粘连增厚时，患侧胸廓常呈下陷、肋间隙变窄、气管移位与叩浊，对侧可有代偿性肺气肿征。

二、结核杆菌的生物学特性

从分类学上看结核杆菌属于裂殖菌纲、放线菌目、分枝杆菌科、分枝杆菌属。

结核分枝杆菌正常典型的形态是直或稍弯曲、两端钝圆的杆菌，菌体长1-4纳米，宽0.3-0.6纳米，无芽胞、无荚膜、无鞭毛，生长发育期间有分枝生长倾向。镜下常呈单个散在或呈“人、V、T、Y”形排列，菌体多时细菌扭集一起呈绳索状、束状或丛状。此外结核杆菌菌体还具有多形态特征，受不良生长条件的影响可分别表现为杆菌型 (基本形态)、滤过型、颗粒型和球菌型(L型)4种不同的类型。

分枝杆菌生长缓慢，在人工培养基内繁殖一代约需15-20小时，一般需2-4周或更长时间始见菌落生长，甚至有极少数生长极为缓慢者需8周以上才开始有菌落生长。它为专性需氧菌，生长的温度范围是35-40℃，pH 5.5-7.2。培养营养要求较高且特殊，培养基需含鸡蛋、血清、

氨基酸、甘油等营养丰富的复杂有机物及少量无机盐类。而且结核杆菌随着环境的改变易发生菌落形态、毒力、L型及药物耐药性变异，如在人工培养基上反复连续传代，可产生变异而致毒力降低，

三、结核杆菌的检测与诊断

（1）细菌的实验室检查及其它检查

① 结核菌检查 是确诊肺结核最特异性的方法，痰中找到结核菌为确诊肺结核的主要依据。涂片抗酸染色镜检快速简便。在我国非典型分枝杆菌尚属少见，故抗酸杆菌阳性，肺结核诊断基本即可成立。痰菌阳性表明其病灶是开放性的，具有传染性。培养法更为精确，尚可作药物敏感试验与菌型鉴定。但结核菌生长缓慢，培养较为费时，但精确可靠，特异性高。若涂片阴性或诊断有疑问时，培养尤其重要；而且，培养后可做药物敏感性测定，指导临床用药。PCR技术检测结核菌 DNA快速、简便，并可鉴定菌型，不足之处是可能出现假阳性或假阴性。

② 影像学检查 胸部X线检查可以发现肺内病变的部位、范围、有无空洞或空洞大小、洞壁厚薄等。X线对各类结核病的透过度不同，通过X线检查能大致估计结核病

灶的病理性质，并能早期发现肺结核，以及判断病情发展及治疗效果，有助于决定治疗方案。肺结核的常见X线表现包括：纤维钙化的硬结病灶、浸润性病灶以及干酪样病灶等。胸部CT检查对于发现微小或隐蔽性病变，了解病变范围及病变鉴别等方面均有帮助。

③ 结核菌素试验 是诊断结核感染的参考指标。使用的变应原有旧结核菌素（old tuberculin, OT）和结核菌素的纯化蛋白衍化物（purified protein derivative, PPD），现临床多用PPD。皮内注射0.1ml（5IU），硬结平均直径≥5mm为阳性反应。结核菌素试验有助于判断有无结核菌感染。若呈强阳性反应，常表示为活动性结核病。结核菌素试验阳性反应仅表示曾有结核感染，并不一定现在患病。结核菌素试验阴性反应除表示没有结核菌感染外，尚需考虑以下情况：结核菌在感染4～8周后才建立充分变态反应，在这之前，结核菌素试验可呈阴性；应用糖皮质激素等免疫抑制剂，或营养不良、麻疹、百日咳等患者，结核菌素反应亦可暂时消失。

④ 其它检查 结核病患者血像通常无改变，严重病例常有继发性贫血，急性粟粒型肺结核时白细胞总数减低或出现类白血病反应。血沉增快常见于活动性肺结核。用ELISA法检测患者血清中特异性抗体，可对无痰或痰菌阴性者和肺外结核的诊断提供参考。纤支镜检查对于发现气管内膜结核、了解有无肿瘤、吸取分泌物、解除阻塞或作病原菌及脱落细胞检查，以及取活组织作病理检查等，均有重要诊断价值。浅

表淋巴结活检，有助于结核的鉴别诊断。

（2）诊断和鉴别诊断

痰结核菌检查不仅是诊断肺结核的主要依据，亦是考核疗效、随访病情的重要指标。X线检查是诊断肺结核的必要手段，对早期诊断、确定病变部位、范围、性质、了解其演变及选择

治疗等均具有重要价值。在临床诊断中，我国现用的分类法包括四部分，即肺结核类型、病变范围及空洞部位、痰菌检查、活动性及转归。肺结核分为五型：Ⅰ型为原发型肺结核；Ⅱ型为血行播散型肺结核；Ⅲ型为浸润型肺结核；Ⅳ型为慢性纤维空洞型肺结核；Ⅴ型为结核性胸膜炎。还应注意将结核病与肺癌、肺炎、支气管扩张、慢性支气管哮喘和其它发热性疾病如伤寒、败血症、白血病、纵隔淋巴瘤及结节病等进行鉴别。

四、结核杆菌的防治及生物安全防护

细菌的防治

根据《中华人民共和国传染病防治法》和《实验室生物安全通用要求》中的有关规定，结核病属于乙类传染病，按照乙类传染病进行预防控制。

在结核病的预防方面要针对传染源、传播途径、易感人群三个环节，采取以管理和控制传染源为主的综合性防治措施，努力做到“早发现、早报告、早治疗”，以利于控制和管理传染源。临床上肺结核化学治疗的原则是早期、规律、全程、适量、联合。整个治疗方案分强化和巩固两个阶段。我国结核病防治规划指南规定采用统一标准的化学治疗方案。

表1 国家防痨规划的结核病化疗方案

疗程 化疗方案

6个月 2RHZ/4RH

2ERHZ/4RH或4R2H2

2SRHZ/4RH或4R2H2

8个月 2SRHZ/6TH或6EH

2SRHZ/6S2H2Z2

R代表利福平，H代表异烟肼，Z代表吡嗪酰胺，E代表乙胺丁醇，S代表链霉素，

T代表丙硫异烟胺。下标数字表示每日用药次数；其余数字表示用药月数，斜线前数字表示前2个月，斜线后字表示后几个月。

对复治病例，一般可用以下几种方案：① 2S(E)RHZ/4RH(E)，督促化疗，保证规律用药。② 初治规则治疗失败的患者，可用2S3H3Z3E3/6H3R3E3；③ 慢性排菌者可用敏感的一线药与二线药联用，应严密观察药物不良反应，疗程以6～12个月为宜。

对毒性症状严重者，可加用糖皮质激素，以减轻炎症及过敏反应，促进渗液吸收，减少纤维组织形成及胸膜粘连。对咯血患者，应对症治疗，包括休息、止咳、镇静以及应用止血药如安络血等。

五、细菌的实验室安全防护

根据《病原微生物生物实验室生物安全管理条例》中的有关规定，人间传播的微生物名录（待

颁布）结核杆菌属于二类，BSL-3。WHO将结核杆菌生物危害等级定为Ⅲ级。所有参与结核杆菌防治和研究的实验室和实验室人员都必须遵守《结核病实验室生物安全管理条例》和《结核病诊断实验室检验规程》。

（1）安全防护

大多数实验室获得性结核病是由于处理感染者标本引起——可从痰、尿、组织、大便和其它体液标本中分离到结核杆菌。处理标本或培养物时产生气溶胶是实验室获得性结核病的最重要危险因素，也可通过损伤的皮肤接触感染。

因此首先应树立全程防护的观念，全面加强从事结核杆菌科研、检测、试剂和疫苗生产机构的生物安全管理。严格限定有资质开展研究的实验室和研究者。建立健全传染病病原管理组织；制订和完善传染病实验室生物安全的技术操作规范；加强可能暴露于结核杆菌或潜在感染性材料的相关业务人员生物安全知识培训和风险

和意识教育；切实落实各项管理制度，预防和控制实验室等渠道造成结核杆菌感染和传播；加强部门间沟通与合作，加强对高暴露实验室工作人员的监测工作，并保证他们能及时被发现与治疗。当进行大量活菌实验时，所有操作应在BSL-3级实验室生物安全柜中进行。为防止实验过程产生的气溶胶导致的实验室感染，所有操作

应使用三级生物安全防护。

在具体的操作过程中包括标本留取、运送、处理以及废物处置等程序都应防止感染性气溶胶的产生。病人留取标本应在独立的房间，应定时作好房间消毒，保持通风。标本应留取在封闭的器皿内送检。检验人员应穿戴防护服、口罩、手套等防护装备，严格遵守实验操作规程，实验室空气、实验台面应定时消毒。痰、尿标本找抗酸杆菌，应先高压灭菌后，再涂片染色。尤其是痰标本进行涂片制作时，在打开标本容器、涂片、加热固定时容易产生气溶胶，为防止实验过程中产生的气溶胶

导致实验室感染，所有操作应在二级生物安全柜中进行，并使用二级生物安全防护。痰标本培养时，在标本进行前处理高速振荡混合和离心、培养液或上清液的倾倒、转移和接种等操作过程有产生气溶胶和意外溅洒的可能，为防止实验过程中产生的气溶胶等导致实验室感染，所有操作应在二级生物安全柜中进行，并使用二级生物安全防护。药物敏感性测定时，在磨菌、滴加菌液、接种培养物、烧灼接种环等操作过程有产生气溶胶和意外溅洒的可能，实验者有可能直接大剂量暴露细菌。因此该项操作一定在BSL-3级实验室完成，且最好实验室内要有负压。并且操作者着二级生物防护用品。

（2）意外事故的处理

结核杆菌的灭活方式有化学的和物理的方法。实验过程中：

1)如标本或标本的前消化处理液被打翻污染操作台或地面，应以吸满75%已乙醇溶液的卫生纸覆盖污染区，15分钟以后卫生纸方可移去；

2)如污染物溅落到身体表面，或有割伤、刺伤、烧伤、烫伤等情况发生，应立即停止实验工作进行紧急处理：更换被污染的实验服装，皮肤表面用消毒液清洗，伤口以碘酒及酒精消毒，眼睛用无菌生理盐水冲洗；

3)如果发生菌液溢出、带菌的培养管破碎等，造成中、小面积污染。可用比污染面积大25%以上的纱布覆盖污染区域，边缘用脱脂棉围住，向纱布倾倒5%苯酚溶液或75%的乙醇溶液，浸泡2小时以上(其间适量添加溶液防止干燥)，再经紫外灯近距离(1米内)照射2小时以上；被污染的器械、容器等立即浸泡于75%乙醇溶液中2小时以上，实验完成后再进行高压消毒处理；

4)如果发生气溶胶污染或大面积污染，应立即停止实验并关闭实验室，对实验区域和实验室进行紫外灯照射消毒过夜；第二天对污染区域进行24小时封闭空气熏蒸消毒(乙醛消毒法：5ml乙醛+2g高锰酸钾/平方米空间)，直接被污染的区域可参照第3)条进行处理。

（3）实验室人员的防护

从事结核杆菌检测、研究的实验室工作人员必须在身体状况良好的情况下，才能进入实验室工作，出现下列情况，不能进入：身体出现开放性损伤；患发热性疾病；感冒、上呼吸道感染、或其他导致抵抗力下降的情况；妊娠、已经在实验室控制区域内连续工作4h以上，或其他原因造成的疲劳状态。

从事结核杆菌检测工作人员可间隔数年接种卡介苗一次。若操作者或其所在实验室的工作人员在此期间出现与被操作病原微生物导致疾病类似的症状或者体征时，例如发热、盗汗、咳嗽、咳痰、咯血或痰中带血等症状，则应被视为可能发生实验室感染。应立即报告实验室负责人，采取早发现、早报告、早治疗以控制管理传染源为主的综合性防治措施。