第二篇：生化实验报告--DNA定量测定(二苯胺法)
DNA的定量测定-二苯胺法
一、实验目的
1.学习和掌握用浓盐法从动物肝脏中提取DNA的原理和方法；
2.学习和掌握用二苯胺法测定DNA含量的原理和方法。
二、实验原理
1． DNA分子中的脱氧核糖基，在酸性溶液中变成ω-羟基-γ-酮基戊醛，与二苯胺试剂作用生成蓝色化合物（λmax=595nm）。
2． 在DNA浓度为20-200μg/ml的范围内，吸光度与DNA浓度成正比，可用比色法测定。
三、实验仪器
¡ 试管
¡ 移液管
¡ 7220分光光度计
四、实验试剂
1、DNA标准液（200ug/ml）：称取10mgDNA钠盐溶于5mol/l氢氧化钠溶液并稀释至100ml。
2、二苯胺试剂：
A液：称取纯二苯胺1.50g，溶于100ml冰乙酸，再加浓硫酸1.5ml。贮于棕色瓶中。
B液：称取1.6ml乙醛溶于100ml蒸馏水中，临用时配制
临用时，将20mlA液和0.1mlB液混合即可
五、实验验步骤
1.标准曲线的绘制
取干燥的试管6支，编号，按下表加入试剂：
加毕，混匀，在60度水浴中保温45分钟，冷却后，在595nm波长下测吸光度，以吸光度对DNA浓度作标准曲线。
2.样品测定
吸取DNA样液1.0ml，加入蒸馏水1.0ml，混匀。然后加入二苯胺溶液4.0ml, 加毕，混匀，在60度水浴中保温45分钟，冷却后，在595nm波长下测吸光度，根据所测得的吸光度对照标准曲线求得DNA的质量。
六、实验结果
根据实验数据制得标准曲线如下：
由上表可知样液的吸光度y=0.115，则由标准曲线得出DNA样液的浓度x=18.49μg/ml。故样品中DNA的质量=18.49×6÷1.0=110.94μg
七、实验分析
1. 测定DNA含量的方法还有哪些原理?
荧光法，用Pico Green荧光染料，测定DNA浓度比较灵敏，并且适合测量低浓度和微量DNA，并且受其它杂质的影响不大，缺点要有专门的荧光检测仪器，试剂比较昂贵。
2. 实验中加入乙醛的目的?
甲醛引起DNA的断裂损伤,DNA在酸性条件下加热，在反应液中加入少量乙醛,可以提高反应灵敏度.