阴道镜操作流程及注意事项
一、材料及镜头的养护
1、3~5%醋酸：
纯冰醋酸3~5毫升+ 蒸馏水97~95毫升；储存于封闭良好的棕色玻璃瓶内备用，因挥发性，一般4天需重新配制。
2、3~5%复方碘：碘3~5克+ 碘化钾6~10克+ 蒸馏水100毫升；待碘、碘化钾溶解后保存于棕色瓶中，防止见光变质，一般4~6周后需重新配制。
3、0.9%生理盐水100毫升以上，每日更换。一次性塑料扩阴器，长短棉签，一次性塑料膜手套。
4、镜头的养护：使用完后要及时盖上镜头盖，定期检查镜头是否清洁。若发现被污染及时用镜头纸沾镜头液（可用眼镜片清洗液）擦洗镜头，并用干棉纱布（或镜头纸）把镜头擦干。若有灰尘，用软刷或吹气球清除尘埃。
二、操作流程及要点
1、阴道镜检查前注意事项：24小时内勿行阴道操作；有炎症者需控制炎症后再查；经净3~7天内检查效果最佳。
2、怎样采集清晰图像：
* 镜头、阴道、宫颈保持在一条直线上；
*镜头与宫颈的调焦距离在20~30厘米；
* 放大倍数为7~28倍时，在焦距22~30厘米内移动镜头至图像清晰； * 采图前要利用扩阴器位置、棉签辅助充分暴露完整宫颈及宫颈口； * 采图时病人和操作者一定不能晃动；
* 用生理盐水轻轻擦去宫颈表面分泌物及阴道内分泌物，湿润宫颈上皮；尽量不用干棉签去除宫颈表面及阴道内分泌物，若需用，动作一定要轻柔，避免宫颈上皮的损伤和细胞丢失。
3、充分暴露宫颈→生理盐水轻拭去宫颈、阴道分泌物→调焦放大呈现清晰宫颈图→采图→开始用饱满的醋酸棉球淋宫颈并同时按下计时，涂淋30秒→采图→以后没间隔30秒采图一张，在其过程中根据需要放大、缩小、加用绿光→采完2分30秒的图后→涂3~5%复方碘，30秒后消去计时后采图→完毕。
4、注意：阴道镜不仅仅是用来检查宫颈的，在检查时，我们要从外阴、阴道壁按序检查！必要时，外阴、阴道壁仍需做醋酸试验以明确诊断。
三、清楚以下概念和试验
1、转化区又称“移行区”，在原始鳞柱交界和新生鳞柱交界之间的区域， 1
宫颈癌的好发区；化生上皮与其内侧的柱状上皮形成新的鳞柱交界，而原始鳞柱交界则成为转化区的外界。
2、醋酸试验用3~5%醋酸棉球由上而下淋宫颈，并保持30秒之内不间断，观察宫颈白色上皮出现的时间，30秒后移去棉球：如果宫颈上皮变白称为“醋白上皮”——醋酸试验阳性；如果宫颈上皮未变色，称为“无醋白上皮”——醋酸试验阴性。醋酸后颜色的变化需待1~2分钟后完全出现，观察时间太短会漏颜色的改变，甚至误诊！醋酸反应在3分钟后消失。
3、碘试验用3~5%复方碘涂染宫颈，30秒后观察宫颈上皮的变化：
宫颈上皮着色为棕褐色、黑褐色为正常鳞状上皮——称“碘试验阳性”；宫颈上皮不着色为柱状上皮或有病变的鳞状上皮——称“碘试验阴性”。
4、化生上皮柱状上皮转化为鳞状上皮的过程，化生通常始自原始鳞柱交界处，初期呈深红色，成熟后呈粉红色，薄而透明，表面平滑，加醋酸后很快变为浅白色且消退也快，呈弥漫性，边界不清，加碘不着色（成熟化生）或浅着色（不成熟化生时）。
5、真性糜烂：严格指—上皮缺损，缺损很深时基质暴露称溃疡。生育期女性很少发生；绝经后的女性上皮萎缩易损伤而造成；CIN或浸润癌常表现为糜烂及出血。
6、假性糜烂：临床上肉眼看见的糜烂，大部分是假性糜烂，阴道镜下这些糜烂面实际上是移位的柱状上皮。
7、不满意阴道镜：指转化区的鳞柱交界看不见（如严重炎症，萎缩，创伤等情况时）。
8、柱状上皮异位：宫颈管内的柱状上皮外移到宫颈鳞状上皮区；加醋酸后变得苍白而不透明，粒粒突出酷似一串串葡萄，持续1~2分钟后葡萄状结构变为红色透明，使柱状上皮极易辨认。
9、柱状上皮小岛：化生始自鳞状交界处呈舌形向内伸展，化生区的融合不是完全的，常遗留一些柱状上皮区，这些区域就被称为柱状上皮小岛。
10、异位岛：宫颈经物理治疗后遗留的未修复好的宫颈上皮
11、白斑：指位于宫颈表面的白色斑块，不加醋酸就可见，多表示角质生成失常，但角质下的上皮性质不能用阴道镜来预测，必须做活检才能做出正确诊断。
四、阴道镜图像
1、图像包含的内容：宫颈的颜色、表面构型、边界、血管。
2、正常上皮颜色：透明的粉红色。
不正常上皮：透明度下降，红色蒙上灰白或黄色的色调。
3、正常的表面构型：表面光滑，颗粒状，潴留囊肿使表面凸凹不平。 2
不正常的表面构型：毛糙不平，表面不规则突出或形成糜烂、溃疡。乳头状；结节状等。
4、边界：在不正常上皮中，特别是非典型上皮，边界非常清晰；炎症的边界不清楚。（加醋酸或碘后的分界）
5、正常血管：血管呈网状、蜘蛛状、树枝状。不正常血管：点状血管、镶嵌状血管及异型血管（特点是：管径粗大，数量不多，缺乏分枝，血管间距大，有不规则收缩、扩张或突然中断）等3种。
6、正常转化区内有：化生上皮，柱状上皮小岛，腺体开口，潴留囊肿及树枝状血管等表现。
正常转化区加碘后与原始鳞状上皮之间界限不清楚，无醋白上皮。
7、不正常转化区的基本图像：醋白上皮，白斑，点状血管，
镶嵌及异型血管。非典型转化区加碘后与原始鳞状上皮之间界限很清楚，其有边界特别清楚的醋白上皮。
8、正常宫颈图像
* 原始鳞状上皮为粉红色，比化生上皮颜色浅，与深红色的柱状上皮形成明显的对照。绝经后呈灰白色，可见极细的网状血管。加碘着色。
* 鳞状上皮加醋酸后不变色，加碘呈深棕色。化生上皮加醋酸后变为浅白色，期间有腺体开口、柱状上皮小岛、潴留囊肿。柱状上皮加醋酸后变得苍白、呈葡萄状结构，加碘不着色。像清晰；
* 采图前要利用扩阴器位置、棉签辅助充分暴露完整宫颈及宫颈口； * 采图时病人和操作者一定不能晃动；
* 用生理盐水轻轻擦去宫颈表面分泌物及阴道内分泌物，湿润宫颈上皮；尽量不用干棉签去除宫颈表面及阴道内分泌物，若需用，动作一定要轻柔，避免宫颈上皮的损伤和细胞丢失。
3、充分暴露宫颈→生理盐水轻拭去宫颈、阴道分泌物→调焦放大呈现清晰宫颈图→采图→开始用饱满的醋酸棉球淋宫颈并同时按下计时，涂淋30秒→采图→以后没间隔30秒采图一张，在其过程中根据需要放大、缩小、加用绿光→采完2分30秒的图后→涂3~5%复方碘，30秒后消去计时后采图→完毕。
4、注意：阴道镜不仅仅是用来检查宫颈的，在检查时，我们要从外阴、阴道壁按序检查！必要时，外阴、阴道壁仍需做醋酸试验以明确诊断。
三、清楚以下概念和试验
1、转化区又称“移行区”，在原始鳞柱交界和新生鳞柱交界之间的区域，宫颈癌的好发区；化生上皮与其内侧的柱状上皮形成新的鳞柱交界，而原始鳞柱交界则成为转化区的外界。
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2、醋酸试验用3~5%醋酸棉球由上而下淋宫颈，并保持30秒之内不间断，观察宫颈白色上皮出现的时间，30秒后移去棉球：如果宫颈上皮变白称为“醋白上皮”——醋酸试验阳性；如果宫颈上皮未变色，称为“无醋白上皮”——醋酸试验阴性。
醋酸后颜色的变化需待1~2分钟后完全出现，观察时间太短会遗漏颜色的改变，甚至误诊！醋酸反应在3分钟后消失。
3、碘试验用3~5%复方碘涂染宫颈，30秒后观察宫颈上皮的变化：宫颈上皮着色为棕褐色、黑褐色为正常鳞状上皮——称“碘试验阳性”；宫颈上皮不着色为柱状上皮或有病变的鳞状上皮——称“碘试验阴性”。
4、化生上皮柱状上皮转化为鳞状上皮的过程，化生通常始自原始鳞柱交界处，初期呈深红色，成熟后呈粉红色，薄而透明，表面平滑，加醋酸后很快变为浅白色且消退也快，呈弥漫性，边界不清，加碘不着色（成熟化生）或浅着色（不成熟化生时）。
5、真性糜烂：严格指—上皮缺损，缺损很深时基质暴露称溃疡。生育期女性很少发生；绝经后的女性上皮萎缩易损伤而造成；CIN或浸润癌常表现为糜烂及出血。
6、假性糜烂：临床上肉眼看见的糜烂，大部分是假性糜烂，阴道镜下这些糜烂面实际上是移位的柱状上皮。
7、不满意阴道镜：指转化区的鳞柱交界看不见（如严重炎症，萎缩，创伤等情况时）。
8、柱状上皮异位：宫颈管内的柱状上皮外移到宫颈鳞状上皮区；加醋酸后变得苍白而不透明，粒粒突出酷似一串串葡萄，持续1~2分钟后葡萄状结构变为红色透明，使柱状上皮极易辨认。
9、柱状上皮小岛：化生始自鳞状交界处呈舌形向内伸展，化生区的融合不是完全的，常遗留一些柱状上皮区，这些区域就被称为柱状上皮小岛。
10、异位岛：宫颈经物理治疗后遗留的未修复好的宫颈上皮
11、白斑：指位于宫颈表面的白色斑块，不加醋酸就可见，多表示角质生成失常，但角质下的上皮性质不能用阴道镜来预测，必须做活检才能做出正确诊断。
四、阴道镜图像
1、图像包含的内容：宫颈的颜色、表面构型、边界、血管。
2、正常上皮颜色：透明的粉红色。不正常上皮：透明度下降，红色蒙上灰白或黄色的色调。
3、正常的表面构型：表面光滑，颗粒状，潴留囊肿使表面凸凹不平。不正常的表面构型：毛糙不平，表面不规则突出或形成糜烂、溃疡。乳头状；结节状 4
等。
4、边界：在不正常上皮中，特别是非典型上皮，边界非常清晰；炎症的边界不清楚。（加醋酸或碘后的分界）
5、正常血管：血管呈网状、蜘蛛状、树枝状。
不正常血管：点状血管、镶嵌状血管及异型血管（特点是：管径粗大，数量不多，缺乏分枝，血管间距大，有不规则收缩、扩张或突然中断）等3种。
6、正常转化区内有：化生上皮，柱状上皮小岛，腺体开口，潴留囊肿及树枝状血管等表现。正常转化区加碘后与原始鳞状上皮之间界限不清楚，无醋白上皮。
7、不正常转化区的基本图像：醋白上皮，白斑，点状血管，镶嵌及异型血管。非典型转化区加碘后与原始鳞状上皮之间界限很清楚，其有边界特别清楚的醋白上皮。
8、正常宫颈图像
* 原始鳞状上皮为粉红色，比化生上皮颜色浅，与深红色的柱状上皮形成明显的对照。绝经后呈灰白色，可见极细的网状血管，加碘着色。
* 鳞状上皮加醋酸后不变色，加碘呈深棕色。化生上皮加醋酸后变为浅白色，期间有腺体开口、柱状上皮小岛、潴留囊肿。柱状上皮加醋酸后变得苍白、呈葡萄状结构，加碘不着色。
9、不正常宫颈图像重要图像：厚的白色上皮，粗点状血管，粗镶嵌，厚白斑，异型血管及糜烂，有清楚的边界，表面不平或结节状，密集的腺白环及白色腺体。加碘呈芥末黄或不着色。醋白上皮出现越晚（在1分钟后表现出来），消失越慢，越白，面积越大，边界越清楚，则病变越重。次要图像：薄白上皮，细镶嵌，细点状血管，薄白斑，点彩。
10、原位癌的三联征：白色上皮，粗镶嵌，粗点状血管。
11、早期浸润癌：表面不规则、有裂隙或呈乳突状、息肉状或呈岩石状突出，呈黄红或灰红，胶冻状或熟肉样；边界清楚的厚醋白上皮，似“猪油状”；粗点状血管，粗镶嵌血管，异型血管；糜烂或溃疡或出血；碘阴性。
20xx年5月阴道镜临床培训资料
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第二篇：SCGE简要操作流程及注意事项
1.铺胶（第一层）
载玻片从酒精中拿出后用干净的纱布擦干，注意不要沾上纤维和灰尘。
将载玻片，玻璃棒预热，85μl正常溶点1％琼脂糖铺第一层。保持温度，快速。
铺好后室温晾干，转移至4℃保存。
第1层是紧贴玻片砂面的1%正常凝点(42±2)℃的琼脂糖凝胶，4℃存放约20分钟，如时间过短，不能得到“老化”的凝胶与玻片粘合不紧,容易在液体浸泡处理和电泳过程中自然脱落；反之，时间过长，凝胶极易干裂而脱落。
2.接种细胞
细胞浓度 5x105cells/ mL × 2 mL×6wells, 加药200uL，孵育30min。
预冷的PBS洗两遍，加AAPH uL，立即放入4℃，30min。
3. 收集样品
离心收集， 2500rpm x 10min收集，然后加原体积PBS重悬。
4. 铺胶（第二层）
制胶前先冻好冰，保证冰面水平。
配制凝胶细胞悬液：细胞液与LMA的比例为1：7.5(10μL细胞悬液和75μL 0.6%的低熔点琼脂糖(LMA) 37℃混匀)。制备的细胞悬液45-80μL铺展到载玻片上作为第二层, 盖盖玻片，立即放在冰袋上，使载玻片骤冷至凝固。
与细胞混合时琼脂糖液的温度30～37℃，温度过高可引起细胞损伤，此操作过程力求快速，以免加速细胞DNA 的修复。
5. 裂解
4℃凝固后去掉盖玻片，将载玻片浸入新配制的4℃预冷细胞裂解液中，放入4℃冰箱内裂解2h。裂解液最好当天配，一定要4℃预冷；从这一步开始，动作要尽量轻缓，以防脱胶；一定要避光。
6. 电泳
裂解后将玻片置于电泳槽中，缓冲液盖过胶面，静置20min解链。之后接通电源，25V，300mA，20-40min。通过调节液面来调电压。 (电压先调到最大，电流300mA，然后通过液面高低来调节电压)。电泳过程中电泳液的温度应不超过15℃(应在4℃条件下进行)，电泳时间多在20～40分钟。
（注意：电泳时电压、电流及时间的长短会直接影响DNA 迁移长度,造成假阳性或假阴性。文献报道为18～50 V ,200～300 mA ,20～40 min。我们采用25 V ,300 mA ,30min ,效果良好。电泳进行中应持续监测,吸出或加入电泳液,调节液面高度,保持电压与电流的恒定）
7． 染色
电泳结束后，将玻片浸入中和液中30min，进行中和（不避光）。
取出后每片滴加20μl 20-30μg／ml的EB染色15～20min，盖上盖玻片在荧光显微镜下观察。
样品应置4℃环境下进行，以抑制或降低核酸内切酶等活性，阻止DNA损伤的修复。 以上除中和及染色外，各步均应在暗处进行，以避免额外的DNA损伤。应尽快阅片，时间过长将导致荧光褪色。
PBS预冷
裂解液4℃预冷
冻冰
低溶点0.6％琼脂糖液37℃水浴锅中温育。
正常溶点0.6％琼脂糖液37℃水浴锅中温育。