实验三种子发芽测定

一、目的要求

要求掌握种子发芽测定的操作技术，并学会计算种子发芽的各种质量指标。

二、材料器具

1．材料 柠条种子。

2．器具及药品  恒温箱、培养皿、滤纸、镊子、温度计（0～100℃）、取样匙、直尺、量筒、烧杯、高锰酸钾、标签、蒸馏水、洗瓶、解剖刀、解剖针等。

三、方法步骤

1．测定样品的提取  发芽测定所需样品从净度测定选出的纯净种子中提取。用四分法将种子分成4份，从每份中随机提取25粒种子组成100粒。共取4个100粒，即成为4次重复。种粒大的可以50粒或25粒为一次重复，样品数量有限或设备条件不足时，也可以采用3次重复，但应在检验证中注明。

2．消毒灭菌  为了预防霉菌感染，干扰检验结果，检验所使用的种子和各种物件一般都要经过消毒灭菌处理。

①  检验用具的消毒灭茵：培养皿、纱布、小镊子仔细洗净，并用沸水煮5～10min。

②  种子的消毒灭菌：目前常用的有福尔马林、高锰酸钾、升汞、过氧化氢等。药剂种类不同，处理的方法和时间也不一致。种子用0.2～0.5%的高锰酸钾溶液浸2h，取出用清水冲洗数次。

3．测定样品的预处理

刺槐种子可加入沸水不断搅拌至水凉或用锐利的解剖针或小刀等仔细地从胚根后面弄破种皮，然后用室温水浸种24h，浸种过程中更换1～2次水。

4．置床  将经过消毒灭菌、浸种的种子安放到发芽床上。视树种而不同，常用的发芽床有纱布、滤纸或细砂。一般中粒、小粒种可在培养皿中放上纱布或滤纸作床。本次实验均以滤纸为发芽床。

在每个培养皿床上整齐地安放100粒种子（种粒较大的可为50粒乃至25粒），种粒之同保持的距离大约相当于种粒本身的1～4倍，以减少霉菌蔓延感染，并避免发芽的幼根相互纠缠。种粒的排放应有一定规则，以便计数并减少错误。

在培养皿不易磨损的地方（例如底盘的外缘）贴上小标签，写明送检样品号、重复号、姓名和置床日，以免错乱。然后将培养皿盖好放入指定的恒温箱内。恒温箱定期进行臭氧消毒。根据树种的特性使用变温或恒温，柠条和胡枝子种子适宜的发芽温度为20～30℃。规定使用变温的，每昼夜应当保持低温16h，高温8h，温度的变换应在3h以内逐渐完成。湿度为60～70%。

5．发芽测定的管理

（1）经常检查发芽环境的温度，仪器的温度同预定的温度相差不能超过±1℃。

（2）保持发芽床的水分  水分不足时应及时加水。但水分也不能过多，用指尖轻压发芽床（指纸床），如指尖周围出现水膜，或者种粒四周出现水膜，都表示水分过多。

（3）通气  种子发芽需要足够的氧气，并会释放出大量的二气化碳。有盖的培养皿的缺点之一就是通气不良，应当经常揭开盖子充分换气。

（4）将轻微感染霉菌的种子取出（不要使它们触及健康的种粒），用清水冲洗数次，直到水无混浊再放回发芽床。发霉严重时整个滤纸，甚至整个培养皿都要更换。这些情况在发芽记录表中应有记录。

6．观察记载

（1）发芽测定的情况要定期观察并按表内容记载。为了更好地掌握发芽测定的全过程，本实验最好要求每天作一次观察记载。尤其是统计发芽势和发芽率的那一天，必须有记载。记载时拣出正常发芽粒、腐坏粒和异状发芽粒。

（2）发芽测定的持续时间  刺槐种子发芽测定的持续天数为14d，以置床之日为零起算，且不包括种子预处理的时间。如果确认某样品已经达到最高发芽率，也可在规定的时间以前结束测定。如到规定的结束时间仍有较多的种粒萌发，也可酌情延长测定时间。发芽测定所用的实际天数应在检验报告中填明。

（3）记载项目  按发芽床的编号依次记载以下各项内容。

表3-1  发芽测定记录表

树种             样品号              样品情况               测试地点              

环境条件：室内温度       ℃  湿度         ％   测试仪器：名称         编号          

预处理                      置床日期                 测定条件                     

正常发芽粒——长出正常胚根。其长度大于该种粒一半的称为正常发芽粒。对杨、柳、桑、桉等细粒种子，胚根的长度应不少于该种粒的长度。竹类种子正常发芽粒的幼根应至少同该种粒等长且幼芽的长度超过该种粒长度的二分之一。苦楝、柚木等复粒种子，其中只要有一粒种子正常发芽即可作为正常发芽率。凡符合正常发芽粒种子用小镊子取出记数。

异状发芽粒——指胚根短而生长迟滞、胚根呈负向地性；胚根异常纤弱；胚根腐坏；胚根出自珠孔以外的部位；种壳暴烈或脱落；胚根卷曲；子叶先出；胚根联结。有时需将一时难于判断的发芽粒特别提出另行培养，以便确定是否为正常发芽。

腐烂粒——内含物腐败成胶状的无生命种子称腐烂粒。应及时提出并在表格中记述，但不能把感染霉菌的种子混同为腐烂粒。

未发芽粒——每次剔除发芽粒、异状发芽粒和腐烂粒之后将余下的未发芽粒重新排放整齐，并点数，以便及时核查，避免差错。到发芽终止日期后，分组用切开法对尚未发芽的种粒进行补充鉴定，分别归成新鲜健全粒、腐烂粒、空粒、涩粒（多见于杉木、柳杉）等几类并记入表中。

7．计算发芽结果

发芽测定结果，进行以下各项指标的计算。

（1）发芽率（实验室发芽率、技术发芽率）

发芽率（%）=

式中：n——正常发芽粒数

        N——供检种子总数

发芽率计算到小数点后一位，以下四舍五入。

发芽率按组计算，然后计算四组的算术平均值。其值不带小数。组间的容许误差见下表。如果没有超过容许误差，实验结果可以认为是正确的，即以四组的平均百分数作为本次试验的结果。发芽百分率的最大容许差距，用以决定是否要重做测定：只考虑随机取样的变异。

如果超过容许的误差范围，则测定结果认为不正确，需进行第二次测定。第二次测定（也可以与第一次测定同时做）和第一次测定的结果来计算两次的平均发芽率，以两次测定平均发芽率来查表3-3，如两次的结果相差不超过该表所规定的容许差距，则测定是符合要求的。如超过容许误差，则应再做测定。

表3－2发芽测定容许误差表

（2）绝对发芽率

把供检样品中的空粒和涩粒除去不计，只计算饱满种子的发芽率。

绝对发芽率（%）=

式中：n——正常发芽的种数

        N——供检种子总数

        a——空粒和（或）涩粒数

表3－3 重新发芽测定容许误差表

（3）发芽势

是指发芽种子数达到高峰时，正常发芽种子的粒数与供检种子总数的百分比。按分组计算，然后求四组的平均值。计算到小数点后一位。其容许误差为计算发芽率时容许误差的一倍半。判断两次测定是否符合的容许差距只考虑随机取样的变异。

发芽势%=  达高峰时正常发芽的种子粒数×100

                供检种子总数

（4）平均发芽速度

供检种子发芽所需的平均时间（天，偶有用小时的）。计算到小数点后第三位。

平均发芽速度=

式中：D——从种子置床起算的天数

         n——相应各日的发芽粒数

         Σ——总和

（5）采用重量发芽法时，测定结果用平均每克测定样品中的正常发芽粒数表示。单位为粒/克。

四、报告内容

1．填写种子发芽测定记录表，计算种子各项发芽指标。

2．说明测定种子发芽率在生产工作中的意义。

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