动 物 病 理 学 实 验 指 导
唐海蓉 银 梅 王选年 李敬玺编
河南科技学院动物科学学院
20##年3月
编 写 说 明
家畜病理学是一门实践性很强的、重要的专业基础理论课。为了保证教学质量，使学生不仅能学好基本理论知识，而且能扎实掌握有关的基本技能和实验操作技术，做到理论和实践的有机结合，进而应用于实践中，必须注意加强实验教学。为此，我们依据教学大纲要求，结合我院实际，在认真总结我院和其他农业高校本课程实验教学经验的基础上，编写了本实验指导。
本实验指导内容包括十一个实验、尸体剖检技术和石蜡切片技术。
由于作者水平有限，我们真诚希望本书的使用者和读者能提出合理的批评和建议，我们先表示衷心的感谢。
20##年3月4日
目 录
前言 …………………………………………………………………………………3
实验一 淋巴结的屏障机能观察…… ……………………………………………6
实验二 局部血液循环障碍标本和切片观察 ……………………………………7
实验三 细胞与组织的损伤标本和切片观察 ……………………………………8
实验四 炎症的渗出现象 …………………………………………………………9
实验五 肿瘤标本和切片的观察 …………………………………………………10
实验六 心血管、造血、呼吸系统病理标本和切片观察 ………………………11
实验七 消化、泌尿和神经系统病病理标本和切片观察 ………………………12
实验八 细菌性疾病病理标本和切片观察 ………………………………………13
实验九 病毒性疾病病理标本和切片观察 ………………………………………14
实验十 寄生虫病和霉菌病的标本和切片观察 …………………………………15
实验十一 鸡的尸体剖检 …………………………………………………………16
附录一 尸体剖检技术 ……………………………………………………………17
一、尸体剖检的准备及注意事项 ……………………………………………17
二、几种动物的尸体剖检技术 ………………………………………………18
附录二 石蜡切片技术 ……………………………………………………………27
前 言
家畜病理学是兽医学科中一门实践性很强的专业基础理论课程，其任务是以辩证唯物主义哲学思想为指导，通过研究疾病的原因、发病机理和患病机体内所呈现的代谢、机能和形态结构的变化来阐明疾病发生、发展及转归的基本规律，为疾病的诊断和防治提供科学的理论基础。家畜病理学教学中，实验课占有重要地位，它是学好本门学科基础理论、认识典型病理变化和了解病理学研究基本方法的重要途径。家畜病理学实验课是理论教学的延续和发展，它的目的不仅是验证理论、加深理解，更重要的是培养学生的观察分析问题能力和独立操作技能。家畜病理学实验包括病理生理学和病理解剖学实验，前者是通过急性或慢性动物实验、观察、记录实验动物的生理、生化指标的变化，从而分析疾病的原因、发生、发展和转归的一般规律；后者则是通过对大体标本和组织切片的观察、探讨疾病时形态结构的改变，从而揭示疾病的本质。两者相辅相成，从不同侧面阐明疾病的本质和规律。
一、病理生理学实验课目的和要求
病理生理学实验课目的在于验证理论，加深理解。同时培养学生研究实验性疾病的技能，为今后的教学和临床医学研究奠定基础。此外，还可以为人类疾病提供动物模型。因此，要求学生具有严谨的科学态度，认真细致的工作作风。具体要求如下：
（一）实验前
1 .认真预习实验指导，了解实验目的、方法和操作步骤。
2. 复习实验部分有关理论。
3 .检查实验器材和药品是否齐全。
4 .小组成员应有明确分工，但同时应重视合作，使每人都能得应有的技能训练。
（二）实验时
1 .应确立严谨、诚实的科学态度，运用正规和准确的技术操作，耐心、细致的观察实验中出现的每个现象，而且要准确、及时、客观记录。整个实验过程都不得敷衍、马虎和主观臆测。
2.须伴随整个实验过程进行科学思维，力求了解每个步骤每个现象的意义。
3.要注意尽量减少对实验动物的不必要损伤。
4.应注意爱护实验器材，节约使用药品。
（三）实验后
1.认真整理和分析实验结果。
2.仪器和药品用完后要清点，并放回原处。应清洗的器材必须及时清洗干净。每个实验组，应保持自己桌面的清洁，课后打扫，整理实验室。
3.按时完成上交实验报告。
实验报告书写格式如下：
(1)姓名、学号、班级、组别、日期。
(2)实验题目
(3)实验目的
(4)实验材料和器械
(5)实验动物 包括种类、数量、性别、体重。
(6)实验方法
简要写出实验目的将原始记录系统化、条理化，表达方式一般有三种。
① 叙述式 用文字将观察到的与实验目的有关的现象客观地加以描述，描述时需要有时间概念与顺序。
② 表格式 能够较为清楚地反映观察内容，有利于相互对比。每一图表应说明一定的中心问题。图表应由学生自己设计。表内的项目及计算单位应说明。
③ 曲线式 实验中描记的血压、呼吸等曲线应绘制于实验报告中。书写时，须根据原始的描记图，取其明显变化的有关各段连接而成。
（7）实验结果分析和讨论
实验指导中的每个实验，都是已进行了实验工作的结果。学生所做实验，次数虽少，若与这结果一致，即可作为分析的依据。
讨论包括，以实验结果为依据，论证实验目的；实验结果提示了哪些新问题，如果出现“异常现象”，应加以分析。
二、病理解剖学实验课的目的和要求
病理解剖学实验是通过尸体剖检、标本观察和镜检标本观察，或借助于幻灯片、录像带的观看识别，掌握各种病理变化，为今后诊断疾病或研究疾病奠定基础，同时加深对理论的理解。由于观察标本或切片时所见到的变化只是整个疾病过程中的某个阶段，因此，在实验观察时必须用运动发展的观点，这样就会使思想活跃，不会只是看到一些干燥的僵死的烂肉。
病理解剖学实验使用的器材主要是显微镜、电视、标本、切片和幻灯片等，因此，要求学生：
（一）实验前
1．清点分发给的切片和标本。
2．检查显微镜。如发现故障及时报告教师检修或调换，不允许自行拆修。
（二）实验时
认真、细致观察标本和切片，描述病变要点或绘图。
（三）实验后
1．清点切片、标本，整理好放在指定位置，如有损坏应填写登记表说明原因。
2．擦拭显微镜，放入镜箱、填写使用卡片。
3．及时上交实验报告。
病理解剖实验报告格式如下：
（1）姓名、学号、班级、日期
（2）实验题目
（3）标本病变要点描述或绘图
标本描述：编号、脏器名称、病变名、病变要点
1、…………。
2、…………。
3、…………。
………………
切片描述：编号、组织名称、病变名、病变要点
1、…………。
2、…………。
………………
切片绘图格式：
编号 ： 组织名称： 病变名：
病变要点：
1．……………。
2．……………。
3．……………。
…………………
染色： 放大倍数：
实验一 淋巴结的屏障机能观察
【实验目的】
通过本实验证明机体的内屏障机能防止疾病发生的作用。
【实验原理】
皮肤、粘膜是机体阻止微生物和病理性因素侵入机体的外部自然屏障。单核巨噬细胞系统，特别是淋巴结具有内屏障机能。如果病原体穿过皮肤、粘膜进入淋巴管，就可能被淋巴结的网状内皮细胞吞噬而阻留。本实验即证明这一点。
【实验器材与药品】
5ml注射器，1% 台盼蓝溶液。
【实验动物】
家兔（或大鼠）
【实验方法】
1．给家兔或大鼠在足部皮下注入1% 台盼蓝溶液（兔为2ml，大鼠为1ml）。过40分钟后，染料被阻留于腘淋巴结中，将这些部位的皮肤切开，可以看到淋巴结中蓝染料沉着。
2．向头前部的皮下注入染料2ml，40分钟后，在颌下淋巴结中见到蓝染料沉着。
以上两个实验可在同一动物体上进行。
【讨论】
内屏障机能在疾病发生发展中的意义是什么？
实验二 局部血液循环障碍标本和切片观察
【实验目的】
通过局部血液循环障碍标本和切片的观察，进一步了解局部血液循环障碍发生的原因和机理，并掌握常见局部血液循环障碍的病理变化。
【实验方法】
教师先对要观察的标本、切片和幻灯片进行扼要讲解，然后由学生观察、描述或绘图。
【实验内容】
组织切片
0002 肝淤血（猪）病变要点：
1．中央静脉、肝窦、叶下静脉和叶间静脉内充满大量红细胞。
2．肝细胞索因受压而变狭窄，肝窦扩张。
3．某些部位有大小不等的出血灶。
大体标本：0049 0142 0139 0152 0147 0062 0276
0151 0172 0194 0179 0334 0312 0161
【实验报告】
1．描述0002号切片的组织图像，用文字注明病变要点。
2．描述下列大体标本的病变要点。
0334 0276 0194 0049 0152
实验三 细胞和组织的损伤标本、切片观察
【实验目的】
了解萎缩、变性和坏死发生的原因、机理，掌握常见萎缩变性、坏死病理变化。
【实验方法】
同实验二
【实验内容】
组织切片：
0008 肝浊肿 病变要点
1．肝细胞肿胀，肝索增宽，肝窦狭窄。
2．肝细胞浆内有大小不等的蛋白质颗粒。
0009 肾浊肿 病变要点
1．肾小管上皮细胞肿胀，细胞浆内有细小的粉红色的蛋白质颗粒。
2．肾小管管腔不规则或变狭小，管腔内有溢出的蛋白质颗粒。
0010 肝脂变 病变要点
肝细胞内充满大小不等脂肪小滴（空泡），肝小叶的固有结构已不易辨认。
大体标本：0414 0273 0005 0155 0257 0459 0238 0447 0427 0003 0316 0004 0224 0132 0337 0299 0096
【实验报告】
1．绘制0010号切片的组织图像，用文字注明病变要点。
2．描述下列大体标本病变要点。
0005 0096 0257 0273 0299
3．画出细胞坏死时细胞核变化的示意图。
实验四 炎症的渗出现象
【实验目的】
通过观察兔耳炎症时血液内台盼蓝渗出现象，了解炎症时血管通透性增高，发生血浆成分渗出的变化。
【实验原理】
各种致炎刺激都可引起局部组织出现血管扩张，以致通透性增高，血浆成分渗出的变化。血浆内含台盼蓝色素时，即可使炎灶组织变成蓝色，而证明血浆成分的渗出。
【实验动物】
白色家兔
【实验器材与药品】
兔桶1个，5ml注射器1付，毛剪1靶，镊子1靶，脱脂棉少许，二甲苯（或20%石炭酸），1% 台盼蓝生理盐水溶液。
【实验方法】
1．取白色家兔，称重后用兔桶固定，使两耳自由露出，两耳剪毛。
2．用二甲苯（或20% 石炭酸）涂擦一侧耳壳皮肤（要稍用力反复涂擦），以引起炎症。
3．按2ml/kg的量，由对侧耳缘静脉注入1% 台盼蓝生理盐水溶液（注意不要注入皮下）。
4．立即对光观察，两耳血管有何不同。
5．40分钟后，观察两耳颜色有何变化。
【讨论】
1．涂擦二甲苯耳壳的颜色与未涂耳壳的颜色有何不同？为什么？
2．炎症渗出对炎灶局部有何意义？
实验五 肿瘤标本和切片的观察
【实验目的】
识别畜禽肿瘤的大体病变和组织学特征
【实验方法】
同实验二
【实验内容】
组织切片
0022 硬性纤维瘤 病变要点：
肿瘤细胞呈长梭形，分化良好。纤维成分多，细胞成分较少，肿瘤细胞呈编织状排列。
0023 软性纤维瘤 病变要点：
组织结构紊乱，呈编织状，纵横交错，间质毛细血管极度扩张、充血，瘤细胞分化程度较低，异型性较大。瘤细胞呈圆形或长棱形，细胞个体差异大，核染色质颗粒粗大，胞核深染。瘤细胞胶原纤维较少，可见分裂像，有较多的淋巴细胞浸润。
0026 黑色素瘤 病变要点：
低倍镜下，肿瘤细胞集团呈圆形或椭圆形团块，外有结缔组织包膜，该包膜充血、出血。
高倍镜下，瘤细胞集团呈棱形或多角形，瘤细胞内有大量的黑色素颗粒（呈黄褐色或黑褐色），其核被色素颗粒所掩盖，仅见黑色素细胞轮廓，其间质有瘤细胞溶解释放的色素颗粒，也有浆液渗出。
大体标本：0034 0347 0112 0107 0110 0157 0029 0087 0105
0035 0061 0055 0046 0037 0021 0101 0205
【实验报告】
1．描述下列大体标本的病变特征
0035 0109 0021
2．绘制0022号切片的组织图像，并加注说明。
实验五 心血管、造血、呼吸系统病理标本和切片观察
【实验目的】
掌握各系统病理变化和组织学变化。
【实验方法】
同实验二
【实验内容】
组织切片
0074 急性淋巴结炎 病变要点：
1．血管数目增多，扩张、充血、有轻微出血。
2．淋巴窦扩张，内有浆液性渗出物及脱落的网状细胞和中性粒细胞。
3．淋巴结中疏松组织水肿，有浆液性渗出物及大量嗜中性粒细胞浸润。
4．小梁有炎症细胞浸润（中性粒细胞）。
0077 纤维素性肺炎 病变要点：
1．肺泡腔内有大量纤维素性渗出物，也有数量不等的炎性细胞和红细胞。
2．肺小叶间质增宽，充满大量纤维素和数目不等的炎性细胞。
0112 间质性肺炎 病变要点：
支气管、血管周围有大量单核细胞、淋巴细胞浸润，形成支气管周围炎。肺泡内有较多的单核细胞、淋巴细胞，也有数量不等的中性粒细胞。
大体标本： 0191 0176 0233 0232 0230 0208 0234 0190 0119 0150 0129 0131 0149 0154 0158
【实验报告】
1．绘制0077号组织切片的组织图象，并注明病变要点。
2．描述下列大体标本的病变要点： 0191 0176 0129 。
实验七 消化、泌尿和神经系统病病理标本和切片观察
【实验目的】
掌握各系统病理变化和组织学变化。
【实验方法】
同实验二
【实验内容】
组织切片
0070 病毒性肝炎 病变要点：
1．肝细胞变性，坏死甚至崩解，肝索结构紊乱，枯否氏细胞活化增生。
2．间质有大量的淋巴细胞增生，中央静脉壁增厚，大量的淋巴细胞浸润增生，肝实质也有淋巴细胞浸润。
3．由于溶血，肝组织内有大量的含铁血黄素颗粒。
0062 化脓性肾炎 病变要点：
肾间质内有大小不等的化脓灶，有些部位有充血现象。肾小管上皮细胞变性。肾小球无明显变化。
0109 非化脓性脑炎 病变要点：
灰质和白质有小胶质细胞性血管套。小胶质细胞弥漫性和局灶性增生，局灶性增生的胶质细胞形成胶质小结。神经细胞变性，出现噬神经现象和卫星现象。
大体标本： 0277 0278 0316 0375 0381 0373 0303 0384 0330 0481 0399
0133 0247 0284 0378
【实验报告】
1．绘制0109号组织切片的组织图象，并注明病变要点。
2．描述下列大体标本的病变要点。
0330 0316
实验八 细菌性疾病病理标本和切片观察
【实验目的】
掌握常见细菌性疾病的病理变化。
【实验方法】
同实验二
【实验内容】
组织切片
0097 鸡巴氏杆菌肝脏 病变要点：
肝细胞发生脂肪变性，肝窦和肝内血管扩张充血。肝组织内散在大小不等的坏死灶，坏死灶中肝细胞严重变性坏死。胞浆失去嗜碱性，细胞核破碎或溶解。坏死灶中有大量的嗜伊红细胞（中性粒细胞），并有大量的病原菌。
0068 结核 病变要点：
肺内有几个结核结节，结节中央是干酪样坏死物，外周是上皮样细胞和数量不等的郎罕氏细胞，再外周是淋巴细胞和成纤维细胞组成的包膜。
大体标本： 0400 0120 0342 0475 0325 0311 0270 0480
0391 0323 0445 0450 0314
【实验报告】
1．绘制结核结节的组织图像。
2．描述下列大体标本的病变要点。
0314 0475 0391 0480 0400
实验九 病毒性疾病病理标本和切片观察
【实验目的】
掌握常见病毒性疾病的病理变化。
【实验方法】
同实验二
【实验内容】
组织切片
0056 鸡马立克氏病肾脏 病变要点：
0051 鸡淋巴细胞性白血病肝 病变要点：
肝实质中有大量、大小不等的细胞团块。这些细胞团块是大小和形态比较一致的成淋巴细胞组成，细胞膜模糊不清，胞浆嗜碱性，核呈空泡状，染色质紧靠核膜并聚集成块。核内有伊红色着染的核仁。
大体标本： 0461 0469 0330 0393 0151 0207 0238 0392
0464 0114 0073 0110 0460 0425 0426 0428
0437 0276 0086 0092 0442 0034 0367 0269
【实验报告】
1．绘制0093号切片组织图像。
2．描述下列大体标本的病变要点。
0437 0469 0414 0238 0034
实验十 寄生虫病和霉菌病的标本和切片观察
【实验目的】
掌握常见寄生虫病和霉菌病的病变要点。
【实验方法】
同于实验二
【实验内容】
组织切片
0091 肌肉旋毛虫 病变要点：
1．肌纤维变性，横纹消失，出现嗜酸性粒细胞性肌炎。
2．肌纤维间有大量的旋毛虫寄生引起的包囊和虫体以及钙化过程的形态。
0114 鸡曲霉菌肺炎 病变要点：
肺脏组织学变化是由局灶性肺炎、肉芽肿性结节和坏死灶构成。肺组织充血并有浆液性至卡他性炎症有些部位发生坏死，间质中有单核细胞、淋巴细胞和假性嗜伊红细胞浸润。肉芽组织结节可密布肺组织中，结节的结构类似结核结节。具有一定的层次性，中心为干酪样坏死，其中有粗大分枝的菌丝体H.E染色菌丝呈淡红色，周围是核破裂的坏死物，再向外时上皮样细胞、多核巨细胞，巨噬细胞构成的霉菌性肉芽组织，最外层是淋巴细胞和成纤维细胞形成的普通肉芽组织。结节中有较多的假性嗜伊红细胞和不规则排列的纤维素。
大体标本： 0302 0304 0305 0307 0313 0314 0317
0321 0323 0326 0338 0339 0343
【实验报告】
1．绘制0091号切片的组织图像。
2．描记032、0340号标本的病变要点。
实验十一 鸡的尸体剖检
【实验目的】
掌握鸡的尸体剖检方法。
【实验器材】
病鸡、民用剪刀、白磁盘、消毒液、10%福尔马林、材料瓶、标签纸等。
【实验方法】
1、外部检查
观察个体大小、营养状况、羽毛、冠髯、口、鼻、眼、肛门、皮肤。然后触摸全身检查有无肿瘤、肿胀、溃烂等，打开口腔观察口腔、喉头粘膜色泽，分泌物以及有无坏死和渗出物等。
2、剥皮和皮下检查
将鸡颈部放血致死，浸泡在消毒液中5min，使羽毛湿润→将禽尸置于搪瓷盘中，腹部向上，由腹下剪开皮肤，用手向两侧撕剥，将两腿皮肤也剥至膝关节处，向背侧按压两腿使髋关节脱臼→检查皮下有无水肿、肌间有无出血、坏死和肿瘤形成；膝关节附近腱鞘、滑液囊有无肿胀、胸骨的形状和肌肉的肥瘦情况→检查颈部胸腺有无病理变化→沿口角一侧剪开食道检查口腔粘膜、食道粘膜和嗉囊内容物→剪开气管、观察喉头、气管粘膜和分泌物的情况→从眼角前方剪断上腭，观察鼻腔粘膜、鼻窦粘膜和分泌物情况。
3、剖开体腔，检查内脏器官
从腹下部剪开腹壁肌肉，沿剪开孔向前剪断两侧肋骨（注意不要剪破肠管、肝脏和肺脏），把胸骨向前掀起，压下，使体腔气管完全暴露→检查气囊→观察肝脏和心脏→从腺胃前端剪断胸部食管，向后牵拉，将腺胃、肌胃、肝脏、肠、脾脏等气管一同摘出在直肠处剪断，同时观察腹腔有无渗出物、破裂的卵黄→摘去肝脏、观察脾脏和胰腺→从腺胃前端剪开腺胃和肌胃，观察粘膜、角质层、肌层→检查肠浆膜→剪开肠壁，观察肠粘膜及盲肠扁桃体→检查肺、肾、卵巢、法氏囊→剥离脑部软组织，用剪刀从两眼之间作一切口，再在两侧眼角向耳孔部作切口，掀开颅骨，观察脑膜。
4、取材
取病变组织放入固定液，大小为长和宽各1.5cm左右，厚0.5–1cm。取材时注意既要有病变部，又要有正常部分。病变部位较大时，可从其不同区域切取组织块。
【实验报告】
记录观察到的病理变化
附1
尸体剖检技术
尸体剖检是运用病理学和其他有关学科的知识，以检查尸体的病理变化，来诊断疾病的一种方法，剖检时，必须对病尸的病理变化，做到全面观察，客观描述，详细记录，然后运用辩证唯物主义的观点，进行科学分析和推理判断，从中作出符合客观实际的病理学诊断。
一、尸体剖检的准备及注意事项
进行尸体剖检，尤其是剖检患传染病病的尸体时，剖检者即要注意防止病原的扩散，又要预防自身的感染。因此，必须做好如下工作：
（一）剖检场所的选择
为了便于消毒和防止病原扩散，一般在室内进行剖检为好；如果条件不许可，也可在室外进行。在室外剖检时，要选择距房舍、畜群、道路和水源较远，地势 较高而又比较干燥的偏僻地点，挖两米左右的深坑（或利用枯井、旧土坑），坑内撒一些生石灰；坑旁铺上破旧的帘子或其他代用品，将尸体放在帘子上进行剖检，剖检完毕，立即将尸体、垫帘和被污染的土层等一起放入坑内，撒些生石灰或喷洒消毒液，然后用土掩埋，顶上的土层应高出地面0.5米，坑周围的地面也应严密消毒。
在严寒季节不易挖坑时，可用木柴浇柴油将尸体烧掉，特别是患炭疽之类的尸体。
（二）尸体的运输
如用车辆搬运炭疽、传染性鼻疽等传染病之类的尸体时，在搬运前要用浸透消毒液的棉花堵塞尸体的天然孔，并用消毒液喷湿体表各部，以防病原扩散。运送车辆和绳索等，用后要严密消毒。
如病畜突然死亡而有炭疽可疑时，可切开掌部或跖部皮肤采血做涂片检查，也可切开腹壁局部，取脾组织做涂片或做炭疽沉淀反应检查。若确诊是炭疽，则严禁剖检，同时应将尸体与被污染的场地、器具等进行严格消毒与处理。
（三）剖检器械和药品的准备
最常用的器械有剥皮刀、检查刀、脑刀、肠剪、板锯（或弓锯）、锤子、尺、磨刀棒（或磨石）等。如果没有上述剖检器械，也可用一般刀剪代替。
剖检时常用的消毒液有0.1% 新洁尔灭溶液、0.05% 洗必泰溶液或3% 来苏尔溶液。常用的固定液（固定的病变组织用）为10% 的甲醛溶液或95% 酒精溶液。此外，为了预防剖检人员的感染，还应准备3% 碘酊、2% 硼酸水、70% 酒精和棉花、纱布等。
（四）剖检人员的自身准备
可根据具体条件穿着工作服、戴皮手套和穿胶靴等。条件不具备时，可在手臂上涂抹凡士林或是其他油类，以防感染，剖检中如不慎割伤手指或其他部位时，应立即消毒，妥为包扎。如血液或是其他渗出物喷入眼内时，应用2% 硼酸水洗眼。
（五）注意事项
在剖检过程中常用水或消毒液洗去剖检者手上和刀剪等器械上的血、脓汁和其他渗出物，在采取脏器或检查病变时，注意不要将血液、脓汁或其他渗出物污染地面过宽，以防止病原扩散。未经检查的脏器，不要用水冲洗，以免改变原来的色彩。在检查病变中，如需要送检，应随时将采取的病变组织投入固定液内，以便作病理组织学检查之用。
剖检患传染病的尸体后，应将器械和衣物上附着的脓、血用清水洗净后，用消毒液充分消毒，再用清水洗净，胶皮手套洗净，要用手套消毒后，要用清水冲洗，擦干，撒上滑石粉。
金属器械经消毒后要擦干，以免生锈。
二、几种动物的尸体剖检技术
一、马骡尸体剖检术式
（一）外部检查
外部检查 包括畜别、品种、年龄、性别、毛色、营养状况、皮肤、可视粘膜和尸体变化等
1．营养状况 根据肌肉发育和皮下脂肪的蓄积状态来判断。
2．可视粘膜 注意检查结膜。鼻腔、口腔、肛门和生殖等粘膜。着重注意有无贫血、淤血、出血、黄疸、溃疡和外伤等变化，各天然孔的开闭状态，有无分泌物，排泄物及其性状等。
3．体表一般检查 检查有无新旧外伤，骨折，皮下（尤其是腹部皮下）有无浮肿和脓肿等。
4．尸体变化 动物死后，尸体经一定时间即发生变化。常有的变化有：
（1）尸僵 动物死后，尸体发生僵硬的状态，称为尸僵。尸僵通常是从头部开始的，而后颈部，前肢，后躯依次逐渐发生。检查尸僵是否发生，可根据下歙骨可动性和四肢能否曲伸来判断。
（2）尸体腐败 尸体经一定时间，由于肠内腐败菌发育繁殖。即发生腐败分解。产生气体，故尸体的腹部膨大，肠管强度膨胀，血液带有泡沫；各组织、器官，特别是与肠管接触的器官呈污绿色，组织柔软，放出气味。
动物死后，应尽早地进行剖检，以免尸体腐败后影响检查结果。检查中，不要把死后腐败变化误认为是生前的病理变化。
（二）内部检查
包括剥皮，皮下检查，各体腔的剖开，内脏的采出及内脏器官的检查等；剖检时，通常采用尸体右侧卧位，这样便于采取脏器。同时应用水或消毒液将尸体淋湿，以免尘埃飞扬，扩散病原体。
1．剥皮
先由下颌部至腹中线切开皮肤，到脐部后把切线分为两条，绕开生殖器或乳房，最后会合于尾根部。然后沿四肢内面的正中线切开皮肤，到球节作环形切线。再从这些切线剥下，全身皮肤因传染而死亡的尸体，一般不剥皮，以防止病原体传播。
在剥皮过程中，应注意检查皮下脂肪的量和性状，皮下结缔组织干燥或湿润的程度，有无出血，水肿扩脓性浸润，肌肉的发育状态和色泽，血液凝固性状，体表淋巴的性状等，
2．切离前，后肢
前肢，沿肩骨前缘切断臂头肌和颈方肌，再在肩胛骨的后缘切断背阔肌，在肩胛软骨部切断胸方肌，最后前肢向上方牵引，由肩胛骨内侧切断胸肌，血管，神经，下钮肌，菱形肌等，取下前肢，在股骨大转子部切断臀肌及股后肌群，将后肢向背侧牵引，由内侧切断股内勤 侧肌群，髋关节的圆韧带和副韧带，即可取下后肢。（图24-02）
3．腹腔脏器的采出
（1）切开腹腔 先将睾丸或乳房从腹壁切离。从肷窝沿肋弓切开腹壁至剑状软骨，再从肷窝沿髂骨体切开腹壁至耻骨前缘
如肠管含有多量气体，腹壁特别膨胀时，可先于肷窝处用刀尖穿一小孔（注意不要刺破肠管），然后将食指与中指插入腹腔内，将刀尖夹与两指之间，刀刃向上，沿着上述切线向上前滑动切开腹壁，此外，也可用肠剪剪开腹壁，
切开腹壁后，立即检查腹腔液的量和性状；腹膜是否光滑，有无失血，淤血、出血、破裂、脓肿、粘连、肿瘤和寄生虫；腹腔内脏的位置是否正常，肠管有无变位、破裂、膈的紧张程度及有无破裂，大网膜脂肪的含量等。
（2）肠的采出
A 小肠的采取
第一步，用两手握住大结肠的骨盆曲部，往腹腔外前方引出大结肠。第二步，将小肠全部拿到腹腔外的背部，剥离十二指肠结肠韧带，在十二指肠与空肠之间结上两道结扎，从中间切断。第三步，用左手抓住空肠的断端，向自己身前牵引，使肠系膜保持紧张，右手将刀从空肠断端开始，靠近肠管切断系膜，直到回盲系膜出进行两道结扎，并从中间切断，取出小肠，在采出小肠的同时，要注意做到边切边检查肠系膜和淋巴结等有无变化。
B 小结肠的采出
先将小结肠拿回到腹腔内，再将直肠内的粪球向前方压挤，从直肠的起始部切断。抓住小结肠断端，切断后肠系膜，在十二指肠结肠韧带处，结扎小结肠，切断后取出。
C 大结肠和盲肠的采出
先用手触摸前肠系膜动脉根，检查有无寄生虫性动脉瘤。然后将结肠上的两条动脉和盲肠上的两条动脉从肠壁上剥离，距前肠系膜动脉根约30厘米处切断，并将其断端交由助手牵引，这时剖检者用左手握住小结肠断端，向自身的方向牵引，用右手剥离附在大结肠胃状膨大部和盲肠底部的胰脏，然后将胃状膨大部、盲肠底部和背部联结的结缔组织充分剥离，即可将大结肠、盲肠全部取出。盲肠壁比较薄，在剥离时容易弄破，要加以注意。
D 脾、胃和十二指肠的采出
左手抓住脾头向外牵引，使其各部韧带呈紧张状态，并切断之，然后将脾同大网膜一起拿出。胃和十二指肠的采出，先从膈的食管孔切开膈肌，抓住食管用力牵引并切断。然后再切断胃和十二指肠周围的韧带，便可采出。
E胰腺、肝脏、肾脏和肾上腺的采出
胰脏可由左叶开始逐渐切下，或将胰脏附于肝门部和肝脏一同取出，也可随腔动脉、肠系膜一并采出。
采出肝脏时，先切断左叶周围的韧带及后腔静脉；然后切断右叶周围的韧带、门静脉和肝动脉（不要损伤右肾），便可取出。
采出肾脏和肾上腺时，首先检查输尿管的状态，热闹后先取左肾，即沿腰肌剥离其周围的脂囊。并切断肾门处的血管和输尿管，便可取出，右肾用同样的方法采出。肾上腺与肾脏同时采出，也可单独采出。
4．胸腔脏器的采出
（1）锯开胸腔
锯开胸腔之前，先检查肋骨的高低与肋软骨结合部的状态。然后将膈的左半部从季肋部切下，用锯把左侧肋骨上端从靠脊柱处和下端与胸骨联接出锯断，只留第一肋骨，这样即可将左胸腔全部暴露。
打开胸腔后，要注意检查左侧胸腔液的量和性状，胸膜的色泽，有无充血、出血或粘连等。
（2）心脏的采出
①在心包左侧中央作十字切口 ，将手洗净，把食指与中指插入心包腔，提起心尖，检查心包液的量和性状，②沿心脏的左纵沟左右个1厘米处，切开左、右心室，检查血量及性状，③将左手拇指与食指伸入心室的切口内，轻轻牵引，然后切断心基部的血管，取出心脏。
（3）肺脏的采出 ① 切断纵隔膜的背侧检查右侧胸腔液的量和性状；②切断纵隔膜的后部，③切断胸腔前部的纵隔膜、气管、食管和前腔动脉，并在气管轮上做一小切口，将左手指和中食指伸入切口牵引气管，即可将肺脏采出。
（4）腔动脉的采出 从前腔动脉至后腔动脉的最后分支部，沿胸椎、采腰椎的下面切断肋间动脉，即可将腔动脉和肠系膜一并采出。
5．骨盆腔脏器的采出
首先锯断髂骨体，然后锯断耻骨和坐骨的髋臼支，除去锯断的骨体，用刀切离直肠与盆腔上壁结缔组织。母马还要切离子宫与卵巢，再由骨盆腔下壁切膀胱颈，阴道及生殖腺等。最后切断附着于直肠的肌肉，将肛门，阴门作圆形切离，即可取出骨盆腔脏器。
6．口腔及颈部器官采出
（1）切断咬肌；
（2）在下颌的第一臼齿前，锯断左侧下颌骨支：
（3）切断下颌骨支内面的肌肉和后缘的腮腺；下颌关节韧带及冠状突周围的肌肉，将左侧下颌支取取下。
（4）用左手握住舌头，切断舌骨支及其周围组织。再将喉，气管的周围组织切离，直至胸腔入口一并取出。
7．颅腔的打开与脑的采出
切断头部 沿环枕关节横断颈部，使头与颈分离，然后再除去下颌骨体及右侧下颌骨支，切除颅顶部附着的肌肉。
取脑：
（1） 将头骨平放，沿两颞窝前缘横锯额骨，
（2） 距前锯z线往后二或三厘米再均居一平行线，
（3） 然后从颞窝前线联线中点至两颧弓上缘各锯一线，
（4） 再由颧弓至枕骨大孔，左右各锯一线。
锯完上述的锯线后，再用锤和凿子撬去额部两条锯线间的骨片，将凿子伸入锯口内，力揭开颅顶，即可使脑露出。然后用外科刀切离硬脑膜，并切断脑底部的神经，细心地取出大脑，小脑，延脑和垂体。
8．鼻腔的锯开
先沿两眼的前缘用锯横行锯断，然后第一臼齿前缘锯断上颌骨，最后用锯纵行狮子大开口断鼻骨和硬腭，打开鼻腔，取出鼻中隔。
9．脊髓的采出
先锯下一段胸骨（约5～15厘米），而后取一段肋软骨，插入椎管内，顶出脊髓；或沿椎弓的肉侧与椎管平行锯开椎管，取出脊髓。
上述各腔的打开和内脏的采出，是进行系统检查的程序，但程序的规定和选择，首先应服从检查的目的，而不应把它年历成功之路一成不变的。实践中，应该按照实际情况的需要，适当地改变或取舍某些剖检程序，例如；马患疑似脑炎时，也可先打开颅腔取出脑检查，然后再根据需要，检查其他部分。
10．脏器的检查
脏器的检查是剖检的重要一环，也是病理学诊断的重要依据，在检查中，对各脏器作认真细致的检查，客观的描述各种病理变化，并及时记录下来。要检查病变时，为了描述各器官或病变大小，色泽，硬度等。
（1）常用的方法是：
① 用尺量器官的体积，长度（沿器官的最长度测量），宽度（与长度垂直量最宽部）和厚度（测量其最厚度）；
② 用实物形容病变的大小与形状，一般表示圆形体积时，常用小米粒大、核桃大、拳头大、篮球大等，表示椭圆形时常用小豆、蚕豆大、鸡蛋大等；表示面积时，常用一、五分硬币大、手掌大，表示形状时，常用圆形、线状、椭圆形、树枝状等；
③ 描述器官或是病变的色泽时，如是混合色，应分清主色和次色，一般次色在前，主色在后，如黄白色、紫红色；描述色泽还可用实物或某些液体的色彩来形容，如肠管黏膜呈青黑色时，可形容为青石板色；淡红色的腹水可形容为葡萄酒样；出血的肠内容物可形容为红豆汤样。有时各种色泽交错在一起时，常用斑驳状、大理石样和槟榔样等来比拟
④ 描述硬度时，常用坚硬、坚实、脆弱柔软等形容，也有时用致密、疏松来描述；
⑤ 描述弹性时，常用橡皮样、面团样等来表示。
（2）腹腔器官的检查
A胃的检查
首先检查胃的大小，胃浆膜面的色泽，有无粘连、胃壁有无破裂（生前胃破裂的特点：裂缘肿胀，附有暗红色血液凝块，腹腔内有较多的胃内容物，死后破裂的特点：裂缘不肿胀，无血液凝块附着，从裂口可见有胃内容物流出）及穿孔等，然后用肠剪有贲门沿大弯剪至幽门，检查胃内容物的量、性状（含水量、有哪些饲料、异物、有无引起中毒物质）臭味、寄生虫（如马蝇蛆）等。最后检查胃黏膜的色泽，有无水肿，出血、炎症和溃疡等
B大肠和小肠的检查
打开肠管之前，应先检查肠管浆膜的色泽，有无粘连、肿瘤、寄生虫结节；同时检查淋巴结的性状等。打开肠管；小肠有十二指肠开始，沿肠系膜附着部向后剪开；盲肠沿纵带由盲肠底剪至盲肠尖；大结肠由盲肠结口开始，沿大结肠纵带剪开；小结肠沿肠系膜附着部剪开，各部肠管剪开时，要做到边剪开边检查肠内容物的量、性状、臭味、有无血液，异物寄生虫等。去掉肠内容物后，检查肠黏膜的性状，看不清时，可用水轻轻冲洗后检查。注意黏膜的色泽、厚度、淋巴结（淋巴小结）的性状以及有无炎症等。
C脾脏的检查
先检查脾脏大小、硬度、边缘的厚薄以及脾淋巴结的性状。然后检查脾脏被膜的性状（肥厚、绒毛增生、破裂等）和色泽。最后做切面检查，从脾头切至脾尾，切面要平整，检查脾髓的色泽，脾小体和脾小梁的性状，并用刀背或刀刃轻轻刮脾髓，检查血量的多少。
D肝脏的检查
先检查肝脏的大小、被膜的性状，被膜的性状，边缘的厚薄，实质的硬度和色泽以及肝淋巴结、血管、肝管的性状。然后作切面的血量、色泽、切面是否隆突，肝小叶的结构是否清晰，有无脓肿、肝砂粒症及坏死灶等变化
E胰脏的检查
检查胰脏的色泽和硬度，沿硬度的长径作切面，检查有无出血和寄生虫。
F肾脏的检查
检查肾脏大小、硬度，切开后检查被膜是否容易剥离，肾表面的色泽、平滑度，有无疤痕、出血等变化。然后检查切面皮质和髓质的色泽，有无淤血、出血、化脓和坏死，切面是否隆突，以及肾盂、输尿管、肾淋巴结的性状
G肾上腺检查
检查其外形、大小、色泽和硬度，然后作纵切或横切，检查皮质、髓质的色泽及有无出血。
（3）胸腔器官的检查
A心脏检查 首先检查心脏纵沟、冠状沟的脂肪量和性状以及有无出血。然后检查心脏的大小、色泽及心外膜有无出血和炎性渗出物
检查心外膜后，沿左纵沟左侧的切口切至肺动脉的起始部，再沿左纵沟右侧的切口，切至主动脉的起始部。然后将心脏翻转过来，沿右纵沟的左右侧各1厘米处作平行切口，切至心尖与左侧切口相连接，通过房室口切至左心房及右心房。
打开心腔后，检查心内膜色泽和有无出血，瓣膜是否肥厚，心肌的色泽、硬度、有无出血和变性等。
B 肺脏检查 检查肺脏的大小，肺胸膜的色泽，以及有无出血和炎性渗出物等。然后用手触摸各肺叶，检查有无硬块，结节和气肿，并检查肺淋巴结的性状，而后用剪刀剪开气管和支气管，检查黏膜的性状、有无出血和渗出物等。最后将左右肺叶横切，检查切面的色泽和血液量的多少，有无炎性病变，鼻疽结节和寄生虫结节等。此外，还应注意支气管和间质的变化。
（4）口腔、鼻腔及颈部器官的检查
A口腔的检查 检查牙齿的变化，口腔黏膜的变化，口腔黏膜的色泽，有无外伤，溃疡和烂斑，舌黏膜有无出血与外伤。
B 咽喉检查 检查黏膜的色泽、淋巴结的性状及吼囊有无蓄脓。
C 鼻腔检查 检查鼻黏膜的色泽、有无出血、炎性水肿、结节、糜烂、溃疡、穿孔及疤痕等。
D下颌及颈部淋巴结检查 检查下颌及颈部淋巴结的的大小、硬度、有无出血和化脓等。
（5）脑的检查
打开颅腔后，检查硬脑膜和软脑膜，有无充血、淤血、出血。切开大脑，检查脉络从的性状及脑室有无积水。然后横切脑组织，检查有无出血及液化性坏死等。
（五）骨盆腔器官的检查：
（1）膀胱的检查：检查膀胱的大小、尿量、色泽以及黏膜有无出血和炎症等。
（2）子宫的检查：沿子宫体背侧剪开左右子宫角。检查子宫内膜的色泽、有无充血、出血及炎性变化等
（六）肌肉的检查 检查肌肉的色泽，有无出血、变性及脓肿等。
二、反刍兽尸体剖检术式
作牛的尸体剖检时，通常采取左侧卧位，这样便于取出约占四分之三的瘤胃。羊由于体躯小，故以背卧位（仰卧）更便于采取脏器。
（一）剥皮与断肢 反刍兽的剥皮、断肢、打开口腔取舌及割离颈部组织的的方法与剖检马的方法相同。
（二）切开腹腔 与切开马腹腔基本相同，唯一不同之点是右侧切开腹壁。切开右侧腹壁后，首先检查腹膜和网膜的性状，然后将网膜提起，切离其十二指肠S状弯曲部、皱胃大弯，瘤胃左右沟等处的附着部，将网膜取下，露出胃和肠管的小肠部分，此时应检查腹腔脏器的位置和有无异物。
脏器采出和先由胃开始，即先找到位于皱胃上面的十二指肠做两道结扎，在中间切断肠管，然后在右肾附近的S状弯曲部后端10---12厘米处做两道结扎，从中间切断，这样十二指肠即可取出，随后在膈的食管孔结扎食管，于结扎的前方切断食管，并将胃与膈、肝等处的联结组织切离，两手握住瘤胃壁用力牵引，即可采出胃脏。若胃壁光滑不易牵引，可戴线手套或于胃壁覆盖一布片后在再牵引，最后于骨盆腔内找出直肠，做双重结扎后切断，再切离肠系膜和前肠系膜动脉根部的组织，将全部肠管采出，其余旰、肾等器官和骨盆内膀胱、子宫和卵巢的采出方法与马相同
为了便于取出腹腔中的脏器，可于取脏器先将胸壁肋骨锯断除去，锯法与马相同。
（三）切开胸腔 切开牛的胸腔方法与马相同，而羊体小，尸体又采取背卧位，故切开的方法是：先用刀或骨剪切断肋软骨和胸骨的联结部，再用刀伸入胸腔，划断脊柱左右侧胸壁肋骨与胸椎连接的关节，敞开胸腔，这样便于将胸腔内的心脏、肺脏和气管一并采出。
（四）脑的采出 除和马同样做横、纵锯线外，并于两角的中间纵锯一正中线，然后两手握住左右两角，用力向外分开，使颅顶骨分成左右两半，然后除去，这样脑即露出。取脑的方法和马相同。
三、家禽尸体剖检术式
剖检前，应将羽毛用水或消毒液浸湿，以防绒毛飞起。尸体取背卧位，将头部、两翅、两肢固定于木板上。
剪开胸腹部皮肤，打开腹腔，把肝脏，脾脏、腺胃、肌胃、肠管一同取出，方法与中小动物相同，然后切去胸部肌肉及组织，用骨剪剪断胸骨与肋骨的连接部，去胸骨，打开胸腔。
再用骨剪剪开喙角，打开口腔，将舌、食管、嗉囊从颈部剥离下来，再用外科手术刀的刀柄钝性分离肺脏，将肺脏、心脏、血管一同取出，位于脊椎深凹处的肾脏也应用钝性剥离取出。
鼻腔可用剪刀剪开，并轻轻压迫鼻部，检查鼻腔及其内容物。
禽脑的采出需将头部皮肤剥开，用骨剪环形剪去颅顶骨，这样大、小脑很容易采出。
1．体表的观察 特别是发育状况，羽毛状态、冠、肉髯、耳垂、角质喙、脚部识别鳞片，距和爪等的观察等。
2、尸体处理 将病死或放血致死的鸡尸体用水或消毒液把羽毛浸湿，取背卧位，将头、两翅、两肢适当固定或摆正，准备剖检。
3、体腔的剖开及胸肌的观察 将鸡尸体仰卧固定，由喙的腹侧沿正中线向后至肛门检开皮肤，并向两侧剥离。观察发达的胸肌，并沿龙骨两侧切开胸大肌和其深层的胸小肌。自龙骨后端至肛门剖开腹壁；再小心用骨剪沿胸骨两侧向前剪至锁骨，注意勿伤气囊。揭开胸骨后端，小心分开其与心肝之间的连结，并翻转胸骨向前方，即暴露胸腹腔内的器官。
4、呼吸器官的观察 轻轻压迫鼻部，检查鼻及内容物，从一侧口角处剪开口腔，观察口腔顶壁的腭裂和鼻后孔，沿喉门剪开喉头和气管，观察喉门和气管，观察喉门、喉头和气管环的状态。在心脏基部的背侧观察气管分叉处的鸣管，剖开可见鸣骨和鸣膜，在胸腔背侧部观察深陷于肋间隙的肺脏。
5、消化器官的观察 在剖开的口腔内观察角质状的舌和唾液腺的开口。剪开食管，观察食管和嗉囊的情况，幼禽尚需注意颈部两侧呈串珠状分布的胸腺。肝脏在胸骨背侧，腹腔的前下部，分左、右两叶，右叶有一绿色胆囊，两叶之间的背侧为纺缍形的腺胃，右侧为椭圆形的脾脏，和腺胃相连的为扁椭圆形的肌胃，十二指肠从肌胃右侧前端发出，沿肌胃右侧和腹壁之间形成一较长的“U”形袢；长条分叶状的胰腺散于袢内；空肠形成花环状的肠袢，以肠系膜悬吊于腹腔右侧。回肠两侧以回盲韧带与左右盲肠相连。结肠直肠很短，向后延续为泄殖腔。在靠近腺胃前方切断食管；于泄殖腔前方切断直肠；小心分离肠系膜等。摘除胃、肠、肝、胰和脾，进一步观察各器官的形状，纵向剖开胃腺，观察其壁内丰富的胃腺及黏膜面的腺胃乳头；沿肌胃的凸缘切开胃壁，注意其肌层的厚度，黏膜面的类角质膜及角质膜下的状态等。顺序切开各级肠管和盲肠，观察肠内容物，肠黏膜和肠壁的状态。
6、泌尿生殖器官的观察 在腰荐骨两旁和髂骨肾窝内观察肾的形状、色泽和质度；输尿管从肾中部伸出向后行，，末端开口于泄殖腔。公禽在肾脏前端腹侧观察睾丸的形状，识别紧贴其背内侧缘的附睾，极度弯曲的输精管与输尿管并行，末端开口于泄殖腔。母禽在左肾的前部观察卵巢，注意其表面不同发育时期的卵泡，在腹腔背侧偏左，识别长而弯曲的输卵管，注意取分漏斗部、膨大部、峡部、子宫部、和阴道部，剪开观察各部位内容物和黏膜的状态；从肛门一侧剖开泄殖腔，注意识别输尿管开口、射精管乳头和输卵管开口，并观察黏膜的状态。同时注意观察位于泄殖腔背侧的腔上囊的变化。
四、中小动物的尸体剖检术式
剖检中小动物通常采取背卧位。其剥皮方法与马、牛等家畜大同小异。剖检患有传染病的猪、犬、兔等动物时，通常不剥皮。一般先切断肩胛骨内侧和髋关节周围肌肉，使四肢推开（仅以部分皮肤与躯体相连）然后沿腹壁正中线切开剑状软骨至肛门之间的腹壁，再沿左右最后肋骨纵切腹壁至脊柱部，这样腹腔脏器全部暴露，此时检查腹腔脏器位置和有无异物，然后由膈处切断食管，由骨盆腔切断直肠，将胃、肠、胰脏、脾脏一起采出，分别检查。也可按脾、胃、肠、肝、肾的次序分别采出。
打开胸腔和采取胸腔脏器的方法与羊相同。
口腔和颈部的组织器官的采出方法是：剥去下颌部和颈部皮肤后，用刀切断两下颌和气管一并采出。
骨盆腔和颅腔的剖检方法按马的方法施行。
附2 石蜡切片技术
为了详细查明病因，作出正确的诊断，需要在尸检的同时选取病理组织学材料，制作病理组织切片，在光学显微镜下观察组织学病变。制作病理组织切片技术有石蜡切片技术和冰冻切片技术。其中石蜡切片技术最为常用。制作石蜡切片方法如下：
一、取材
1．取材的时间
动物死亡后由于受外界腐败菌的作用和细胞溶酶体酶的作用极易发生腐败和自溶，自溶和腐败的组织失去原有形态结构不能在作组织学检验用。因此，组织学材料应在死亡后立即采取。最迟不能晚于死后24小时。
2．取材的部位
为了全面反映病变的面貌，所取材料应有代表性。既能要取病灶部位的组织，有需选取健康组织，同时也要在器官的不同位置选取材料。全身各器官系统都要选取有代表性的材料，以便了解各器官系统的组织学变化。
3．组织块的大小
为了便于固定，在保留病变的前提下，组织块要尽量小。一般以长宽1-1.5厘米，厚0.5厘米。必要时长宽可以适当放大，为了便于切成较薄的块，可先取较大的组织块，固定几个小时后再切成合适的薄片。
二、固定
固定是制作组织切片及得出正确诊断的关键。因此，所取的组织必须立即固定，在固定前所有材料且忌水洗。最常用的固定液是10% 的甲醛。
三、水洗
经过固定的材料从固定液中取出，切成合适的大小，置于冲洗瓶中流水冲洗6－12小时。冲洗时应细水长流，不可过大，冲洗的目的时除去组织中的固定液。在固定液不影响组织染色的情况下，如新配置的10％中性甲醛固定的组织可不经水洗而直接进行下一步，骨组织在水洗前应先进行脱钙。陈克氏固定液固定的组织应先脱汞，某些色素影响染色后的观察也应脱去。
四、脱水
组织水洗后应经过各种浓度的酒精脱去其中水分以便透明和浸腊，脱水的程序和时间如下：
75% 酒精 3－12小时
80% 酒精 3－12小时
85% 酒精 3－12小时
95% 酒精 2－4小时
100% 酒精 1－2小时
100% 酒精 1－2小时
各级酒精中取出后吸水纸吸干，80％以下酒精可以长期存放。95％和100％的酒精中不宜过久，否则组织变脆不易切片。
五、透明
脱水后的组织应立即投入透明剂中进行透明。透明的目的是使透明剂浸透组织置换出其中的脱水剂，为浸腊提供条件，透明剂的特点是能与脱水剂相互溶混又能溶解石蜡，常用的透明剂有二甲苯、苯、氯仿等。组织脱水后先经过一杯二甲苯和无水酒精的等量混合液，然后再投入纯二甲苯中直至组织块呈半透明状态为止。两杯的大致时间是：
酒精二甲苯 20－30分钟
二甲苯 20－25分钟
六、浸腊
组织透明之后，将其取出稍用吸水纸吸干即投入下列熔融的石蜡中：
石蜡溶液甲 1.5小时
石蜡溶液乙 1小时
整个浸腊过程应在58－60℃烘箱中进行，制作切片的石蜡是经过专门提炼调制的，品质细腻纯净，熔点恒定。一般有软腊和硬腊之分。50－54℃者为软腊，56℃以上为硬腊。夏季用硬腊，冬季用软腊。浸腊的温度不宜过高，以使石蜡熔化为度。温度过高会使组织硬脆难以切片。为了缩短浸腊时间，可以用减压浸腊法，将腊杯放入电热真空干燥箱中，调节好温度，开动抽气机使干燥箱中压力约为50㎜Hg，在这种情况下浸腊时间约为20－30分钟即可。若没有电热真空干燥箱可采用简易方法进行。将一250毫升的广口瓶，配以合适的打有两个孔的橡胶塞，孔中插进玻管，两玻管以乳胶关连接起来，此瓶中盛以熔融石蜡的组织块，加上塞予以100毫升注射器从胶管中抽气300毫升，去掉针头，然后置烘箱中25－30分钟即可。
七、包埋
浸腊结束后即可进行包埋，包埋是将组织块埋藏于石蜡中。方法是：事先准备好包埋筐（或其它可代用的器皿：小培养皿等），加热的镊子、凉水一盆，在包埋筐的内壁或平皿内壁涂抹少许10％的甘油。倾入适量的石蜡以加热的镊子取出组织块，将切面向下，迅速放入包埋筐或平皿中，稍加压力使组织紧贴底面。待有白色腊皮形成时迅速置水中急冷，使腊凝固。腊凝固后便可自行脱出。包埋筐呈L形，两个一组可对成长方形，下面配一铜板或玻璃均可。同一包埋筐和平皿中可以放入数块组织。但排放要有一定的间隔，要整齐以便将每块组织分切开。
八、切片
包埋好的腊块分切后按组织的大小整修。
将待切面向上粘固于台木上（持腊木块）上。方法是将一外科刀挑取少许碎腊在酒精灯上加热至熔。滴于木块上将腊块迅速压上，四周用热的外科刀熔焊牢固，同时将切片机、切片刀准备好，另外还需要毛笔两只，小镊子一把，载片盘数块。
上述设备和用具准备齐全后，即可将腊块夹于切片机的腊块钳上，装上切片刀，调整好腊块的角度使切片刀与腊块切面的夹角大致在15°为好。一切就绪后，先将厚度调节器调至10－20处，右手转动轮进行切削，以切去表层的腊。当切出组织时，即将厚度调节器旋至3－5之间的任一挡（通常用5），进行切削。左手持毛笔牵动切出的腊带，当切出一定数量后，截断腊带，整齐放于载片盘上。
九、裱贴
裱贴是将切出的切片粘附于载玻片上的过程。制作切片用的载玻片事先要进行擦洗干净。浸泡于80％的酒精中，临用时取出擦干。
裱贴时事先在载玻片上滴少许甘油蛋白，用洗净擦干的小拇指肚将甘油蛋白抹均，并将腊带逐片用刀切开，小心用镊子或解剖针移于38－40℃的小水盘中，使切片展开。待切片完全展平后，把涂有甘油蛋白的玻片斜插入水中，用毛笔或镊子牵动切片，使一端接触片子，同时提出玻片，切片即被贴附于玻片上，纠正位置倾去过多的余水排放于载玻片盘上，置60℃烘箱中烘烤2－4小时切片即牢固贴附于玻片上。
十、染色（苏木紫—伊红（H.E）染色法）
染色是使生物的组织细胞染上颜色以便观察，染色的方法很多，由于目的不同可以选用不同的染色法。苏木紫—伊红是最常用的一种对比染色法，它可以使胞核和胞浆染上不同的颜色。
经苏木紫-伊红染色的切片细胞核呈蓝紫色，细胞浆呈红色，红细胞呈桔红色，胶原纤维呈红色。
苏木紫-伊红染色的程序如下
二甲苯（Ⅰ） 15分钟
二甲苯（Ⅱ） 5分钟
100% 酒精 2分钟
100% 酒精 2分钟
95% 酒精 2分钟
80% 酒精 1分钟
70% 酒精 1分钟
水洗 3-5分钟
苏木精染色 5-15分钟
自来水洗（在显微镜下检查细胞核的颜色是否合适，若太浅，可经蒸馏水洗后放回重染，若过深则进行适当分化）。
1%盐酸、酒精分化数秒钟在显微镜下检查核，退至浅红色，胞质及结缔组织近无色。
蒸馏水 1分钟
0.5%氨水 蓝化 0.5分钟
自来水冲洗 5－10分钟（如不加氨水可是当加长）
1％伊红溶液 1分钟
85％酒精 1－2分钟
95％酒精 1－2分钟
100％酒精 1－2分钟
100％酒精 1－2分钟
二甲苯 2－5分钟
封固
上述程序可以分为几个步骤：
1．切片脱腊 由于多数染色液都是水溶性的，所以必须先脱片经烤烘干燥后贮存于烘箱中。染色时，取置腊浸水方可进行染色。脱腊是在二甲苯中进行的、切于盛有二甲苯的染色缸中2－5分钟即可使腊熔去，组织切片呈透明状态。如果切片不干燥而含有水分，则腊难以脱去，组织切片不透明即表示干燥不够，此时可将切片投入无水酒精中1－2分钟后再置二甲苯中便可脱去石蜡。
2．浸水 脱腊后将切片淋去二甲苯，依次入各级酒精中浸水，各级酒精1－2分钟即可，然后浸于水中洗去酒精。
3．胞核染色 将切片从水中取出，吸干，浸于苏木紫溶液中，浸染时间因染色液的种类不同而已，大致在5－15分钟左右。
4．区别染色 又称分化，是将切片从苏木紫染液中取出经水洗后盐酸酒精中速浸的过程，其目的在于使胞浆中附着的染料脱去，使胞核更加清晰。分化是切片染色关键的一步，分化不好核浆不清，分化过度则核色偏淡，一般分化的时间在书，秒之内，至切片呈淡紫色，即迅速水洗。
5．返蓝 将切片分化后入水洗30分钟后，组织即由淡紫色逐渐变成天蓝色，这一过程叫做返蓝，返蓝也可以将切片入0.5％的氨水中0.5－1分钟，然后水洗即可。
6．胞浆染色 经返蓝水洗后，切片入1％的伊红液中1分钟即可使胞浆着染成红色。
7．脱水 染过胞浆后将切片依次浸入各级酒精中进行脱水，每级1－2分钟。
8．透明 脱水后吸干酒精，浸于二甲苯中使切片透明。
9．封固 从二甲苯中取出切片，待二甲苯将干未干之际滴一滴光学树脂胶或加拿大香胶，用眼科镊子夹一洗净擦干的盖玻片，使盖玻片一端先接触树胶后轻轻放下，随着盖玻片的落下树脂即平铺于整个盖片之下，至此全部制片过程结束。
但是应该提醒的是，由于裱贴在载玻片上涂抹甘油蛋白，在染色时使切片上的蛋白也染上颜色。为了保持切片的整洁美观，在胞核染色分化水洗中和胞浆染色后脱水之前要对每张切片进行擦拭，擦去污染的颜色，脱水后则已不易擦掉。
切片制出后还应放60－70℃烘箱中烤干。然后加贴标签。染色结果：细胞核蓝紫色，细胞质、胶原纤维、肌纤维粉红色。
注 意 事 项
所谓一张优质的H.E染色片，绝非仅指染色而言，它包括很多方面。就“染色”而论，其中染色剂的质量或染色着色力，以及分化程度等，均为重要条件，忽视任意条件，皆达不到预期效果。
制作一张优质的H.E染色切片，首先应重视“固定”这一环节。能否及时固定、固定是否完全，直接影响染色切片的优劣。固定充足及时，组织、细胞便能尽量保持生活时的状况；相反，组织自溶，影响制片。
其次，应注意脱水。组织脱水方法较多，一般均以酒精脱水。酒精脱水应注意两个方面：其一是酒精需保持所要求的浓度；其二是掌握脱水时间，须视组织块大小而定，例如尸检材料、外检材料及动物实验材料脱水时间各不相同。外检材料脱水，酒精每步约需一个小时，纯酒精约需半个小时；动物实验材料则需时稍短，酒精每步需45－60分钟，纯酒精20－30分钟；尸检材料脱水时间则要大大延长，酒精每步3－24小时，纯酒精亦需2小时左右。另外，使用脱水剂要纯，以保证透明、浸腊的顺利进行。
组织浸腊要掌握以下两点：一是适当的腊温，最好能使热源自上而下将腊加热溶解，使组织块在腊液中处于凝固层的表面上（相当腊的熔点），包埋用腊的温度亦切忌过热。二要注意浸腊时间，应视组织块的大小、厚薄而定。组织块在3×2×0.2厘米以上者，浸腊不得低于3小时（指尸检材料），一般外检材料浸腊，亦不低于1小时。
切片是很重要的一步，优质量切片的要求是组织片比较薄，平坦，整齐，所谓制片欠佳，不外乎刀太厚、皱褶、横裂、折叠、切片不全、破碎、组织松散、组织片太厚，或组织片呈波浪状薄厚不匀等。这些都属于制片过程中发生的问题。解决上述各细节问题的方法，由于涉及固定切片等，这里不再详述，请参阅有关专业书。此外奥，还有一些问题亦必须注意：
1．脱蜡用二甲苯液应经常过滤，且应定期更换新液。
2．苏木素染液使用一段时间表面易出现亮晶状漂浮物，这可能是液体表面的过氧化物，必须勤过滤，否则沾于组织上的异物不易去掉。
3．还原液不宜过浓，若碱性强，易使组织脱落，故以淡为宜。
4．苏木素液一般染过三、四百片后，着色力即减弱，着色不鲜艳，呈灰蓝色时，染液应更换新液。
5．“分化”十分重要，分化不够清晰着色不佳，而呈现黑蓝色，细胞呈淡白色，若不清晰需再次分化，不然，一旦复染后组织即呈紫蓝色。
6．苏木素染后一定要将组织四周的蛋清遗痕擦掉，缺少此步组织片明显污秽，影响表现。
7．透明亦很重要，透明欠佳，组织表面似有一层薄雾样膜。若呈这一现象，应即更换纯酒精脱水，再次透明。在潮湿季节更应注意纯酒精浓度。
8．伊红宜淡染，复染过深，胞核不清晰，影响镜检。
9．其他，如封固剂要适量，盖片要放正，标签四角要贴牢，号码要清楚等等。