南昌大学实验报告

学生姓名：                   学    号：                   专业班级：                  

实验类型：√ 验证 □ 综合 □ 设计 □ 创新   实验日期：            实验成绩：            

实验七培养基的配制和灭菌

一、实验目的：                                                                                           

1 、学习玻璃器皿的洗涤和灭菌前的准备工作；

2、 了解配制微生物培养基的基本原理，本实验通过学习常用细菌培养基的配制来了解并掌握常规培养基配制和无菌水的制备方法；

3、 学习各类物品的包装及灭菌技术；

二、实验基本原理：                                                                 

培养基是应科研、生产需要，根据微生物对营养的需求按一定比例人工配置的适合微生物生长繁殖或产生代谢产物的混合营养物，任何培养基都应具备微生物生长所需要的六大类营养要素。培养基配制好后应立即灭菌后备用。

由于微生物的种类及代谢的多样性，因而培养基的种类也很多，它们的配方及配制方法也各有差异，除一些特殊培养基外，一般培养基的配制过程大致相同。一款成熟的培养基配方都会在其配方后面附上配制方法及pH值、灭菌温度等其他配制要求。

三、主要仪器设备及耗材：

1、 药品及试剂：

可溶性淀粉、营养琼脂（或牛肉膏、蛋白胨、氯化钠、琼脂粉、10%NaOH，10%HCl）

2 、仪器及其它

高压蒸汽灭菌锅、干燥箱 、试管、 三角瓶、 烧杯、 量筒、 玻棒、 天平、 药匙、 pH试纸(1-14)、 棉花、 牛皮纸 、记号笔 、麻绳 、纱布 、培养皿 、吸管、玻璃珠等

四、实验步骤：

（一）培养基的制备与分装

1 称量：按培养基配方比例依次准确地称取药品。（可溶性淀粉先用少量冷水溶化后再加入）

2 熔化：在沸水浴锅中加热熔化。

3 调pH：10%NaOH，10%HCl调pH至7.4-7.6。

4 过滤：趁热用多层纱布过滤（本实验勿需过滤）

5 分装：将溶化的固体培养基趁热加至漏斗上，装试管时，装量不超过试管的1/4，注意管口不要沾上培养基。

6 加塞：试管应先捆成一捆，然后再于棉塞外包扎牛皮纸，贴上标签，注明培养基名称、日期、组别。

（二）无菌水的制备

用量筒量取150ml自来水于带玻璃珠三角瓶中，塞上棉塞，包扎牛皮纸。

（三）器皿的准备

1、 培养皿的包装 每6～10个一包，用旧报纸包扎（或放在特制铁皮圆筒里加盖扣严）。

2、 吸管的包装 首先在吸管的上端塞上一小段棉花，用长纸条包扎、打结。

（四）培养基、无菌水、器皿的灭菌

1、 将培养基、无菌水放入高压蒸汽灭菌锅内，湿热灭菌。

2、 培养基灭菌完毕，将试管培养基搁成斜面。

3、 器皿放入干热灭菌箱内干热灭菌。

（注：详情请同学参考教材实验五培养基的配制和灭菌）

五、思考讨论题

1、培养基是根据什么原理配制的？

2、营养琼脂中含有些什么成分？

3、为什么湿热灭菌比干热灭菌优越？

六、实验体会及对实验改进的建议

第二篇：老师整理的实验报告 水处理微生物学标准实验报告10 实验十 细菌菌落总数(CFU)的测定

南昌大学实验报告

学生姓名：学号：专业班级：

实验类型：√验证□综合□设计□创新实验日期：实验成绩：

实验十细菌菌落总数（CFU）的测定

一、实验目的：                                                                                           

1．学习水样的采取方法和水样细菌总数测定的方法。

2．了解培养基平板菌落计数原则

二、实验基本原理：                                                                 

细菌菌落总数（CFU）是指1ml水样在营养琼脂培养基中，于37℃培养24h后所生长的腐生性细菌菌落总数。它是有机污染程度的指标，也是卫生指标。在饮用水中所测得的细菌菌落总数除说明水有机污染的程度外，还指示该饮用水能否饮用。但还应当指出的是，水源水中的细菌菌落总数不能说明污染的来源。因此，结合大肠菌群数以判断水的污染的安全程度就更全面。

我国现行生活饮用水的卫生标准（GB5749－2006）规定：细菌菌落总数在1ml自来水中不得超过80个。

细菌种类很多，有各自的生理特性，必须用适合它们的培养基才能将它们培养出来。然而在实验工作中不易做到，通常用一种适合大多数细菌生长的培养基培养腐生性细菌，以它的菌落总数表明有机污染程度。

三、主要仪器设备及耗材：

电热干燥箱，高压蒸汽灭菌锅，电热培养箱，恒温水浴，冰箱，菌落计数器，放大镜，肉膏蛋白胨脂培养基，灭菌水，灭菌三角烧瓶，灭菌的带玻璃塞瓶，灭菌培养皿，灭菌吸管，灭菌试管等。

四、实验步骤：

1．水样的采取

供细菌学检验用的水样，必须按无菌操作的基本要求进行采样，并保证在运送，贮存过程中不受污染。为了要正确反映水质在采样时的真实情况，水样在采取后应立即送检，一般从取样到检验不应超过4小时。条件不允许立即检验时，应存于冰箱，但也不应超过24小时，并应在检验报告单上注明。

（1）生活饮用水（自来水）先将自来水龙头用火焰烧灼3分钟灭菌，再开放水龙头使水流5分钟后，用灭菌三角烧瓶接取水样，以待分析。

（2）池水、河水或湖水应取距水面10—15㎝的深层水样，先将灭菌的带玻璃塞瓶，瓶口向下浸入水中，然后翻转过来，除去玻璃塞，水即流入瓶中，盛满后，将瓶塞盖好，再从水中取出，立即返回实验室检查，否则需放入冰箱中保存。

2．细菌总数测定

（1）自来水

(a)用灭菌吸管吸取1ml水样，注入灭菌培养皿中。共做三个平皿。

(b)分别倾注约15ml已溶化并冷却到45℃左右的肉膏蛋白胨琼脂培养基，并立即在桌上作平面旋摇，使水样与培养基充分混匀。

(c)另取三空的灭菌培养皿，倾注肉膏蛋白胨琼脂培养基15ml，作空白对照。

(d)培养基凝固后，倒置于37℃温箱中，培养24小时，进行菌落计数。

三个平板的平均菌落数即为1ml水样的细菌总数。

（2）池水、河水或湖水等

(a)稀释水样取3个灭菌空试管，分别加入9ml灭菌水。取1ml水样注入第一管9ml灭菌水内，摇匀，再从第一管取1ml至下一管灭菌水内，如此稀释到第三管，稀释度分别为10^-1、10^-2与10^-3。稀释倍数看水样污浊程度而定，以培养后平板的菌落数在30—300个之间的稀释度最为合适，若三个稀释度的菌数均多到无法计数或少到无法计数，则需继续稀释或减小稀释倍数。一般中等污秽水样，取10^-1、10^-2与10^-3三个连续稀释度，污秽严重的取10^-2、10^-3、10^-4三个连续稀释度。

(b)自最后三个稀释度的试管中各取1ml稀释水加入空的灭菌培养皿中，每一稀释度做三个培养皿。

(c)各倾注15ml已溶化并冷却至45℃左右的肉膏蛋白胨琼脂培养基，立即放在桌上摇匀。

(d)凝固后倒置于37℃培养箱中培养24小时。

3．菌落计数

用肉眼观察，计平板上的细菌菌落总数，也可用放大镜和菌落计数器计数，记下同一浓度的三个平板的菌落总数。各种不同情况的计算方法如下：

（1）先计算相同稀释度的平均菌落数。若其中一个培养皿有较大片状菌苔生长时，则不应采用，而应以无片状菌苔生长的培养皿作为该稀释度的平均菌落数。若片状菌苔的大小不到培养皿的一半，而其余的一半菌落分布又很均匀时，则可将此一半的菌落数乘2以代表全培养皿的菌落数，然后再计算该稀释度的平均菌落数。

（2）首先选择平均菌落数在30—300之间的，当只有一个稀释度的平均菌落数符合此范围时，则以该平均菌落数乘其稀释倍数即为该水样的细菌总数。

（3）若有两个稀释度的平均菌落数均在30—300之间，则按两者菌落总数之比值来决定。若其比值小于2，应采取两者的平均数。若大于2，则取其中较小的菌落总数。

（4）若所有稀释度的平均菌落数均大于300，则应按稀释度最高的平均菌落数乘以稀释倍数。

（5）若所有稀释度的平均菌落数均小于30，则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数。

（6）若所有稀释度的平均菌落数均不在30—300之间，则以最近300或30的平均菌落数乘以稀释倍数。

（7）菌落计数的报告，菌落数在100以内时按实有数报告，大于100时，采用两位有效数字，在两位有效数字后面的位数，以四舍五入方法计算。微了缩短数字后面的零数，可用科学计数法表示（见例表报告方式栏）。

计算菌落总数方法举例

五、实验数据及处理结果

湖水水样：

湖水水样菌落总数（报告方式）（个/ml）：

自来水样：

自来水菌落总数（个/ml）：

六、思考讨论题

1、测定水中菌落总数有什么实际意义？

2、根据我国水质标准，讨论你这次检验结果？

七、实验体会及对实验改进的建议