E花环实验
一.实验原理
人外周血T淋巴细胞表面具有绵羊红细胞(SRBC)受体，能够与SRBC结合形成花环样细胞团(即E花环)。已证实E 受体是人类T 细胞所特有的表面标志。当T 细胞与SRBC 混合后，SRBC 便粘附于T 细胞表面，呈现花环状。通过花环形成检查T 细胞的方法，称为 E 花环形成试验。根据 花环形成的多少，可测知 T 细胞的数目，从而间接了解机体细胞免疫功能状态，判断疾病的预后，考核药物疗效等。由于T细胞的异质性，其对SRBC的亲和力亦不同，因而T细胞可形成不同类型的E花环，其中在4℃放置1 h以上，所形成的花环数代表T细胞总数，称为总花环(Et花环)，而淋巴细胞与SRBC混合后不经4℃作用立即反应形成的花环称为活性花环(Ea花环)。
二.实验结果（用图示法表示）
三.讨论 ①.有的细胞能形成玫瑰花环的原因：人T细胞膜上具有CD2分子，能够与SRBC上的LFA-3结合，从而形成以人T细胞为中心，SRBC环绕四周，形状如玫瑰花环的细胞集团，即E玫瑰花环。此外，NK细胞膜上也有CD2分子，也能形成玫瑰花环，但是NK细胞的量非常少，形成玫瑰花环的数量也少。
②. 有的细胞不能形成玫瑰花环的原因：a.人血液中含有单核巨噬细胞，其表面没有CD2分子，不能与SRBC表面的LFA-3结合，因此不能形成玫瑰花环。b.实验中所用血液不够新鲜，也可能导致不能够形成玫瑰花环。c. 时间不够长，导致T细胞表面的CD2分子不能够与SRBC上的LFA-3充分结合，因此只有一部分SRBC与人T细胞结合，其余SRBC没能够与人T细胞结合形成玫瑰花环。
2.SRBC与淋巴细胞混合后离心速度不能过高，在Et花环试验中，置4℃应至少1h以上或过夜。
3.绵羊红细胞以保存1周内最好，超过2周则与淋巴细胞结合力下降，超过5～6周则不能再用。实验室的绵羊红细胞保存的时间太长，导致其与淋巴细胞的结合能力下降，所以有的细胞可以形成E花环，而有的细胞不可以形成E花环。
4.Et花环试验SRBC与淋巴细胞混合比例以100∶1～200∶1为宜，Ea花环试验中以10∶1～20∶1为宜；淋巴细胞离体后不能超过6h，否则会影响花环形成率。
5.温度对实验结果影响较大，故实验温度条件应保持一致，从4℃取出后应立即计数。
6.计数前将沉淀细胞重悬时，使细胞团块松散均匀即可，不可强力吹打，以免SRBC从淋巴细胞上脱落。
第二篇：E花环
E花环形成试验
实验目的 ：1.掌握T淋巴细胞E花环试验的原理、正常值，了解其方法和用途。
2.熟悉光镜下E花环的形态和计数方法。
实验原理：人外周血T淋巴细胞表面具有绵羊红细胞（SRBC）的受体，可与SRBC结合形成花环样细胞团（即E花环）。由于T细胞的异质性，其中在4℃放置1h以上，所形成的花环数代表T细胞总数，称为总花环(Et花环)，而T细胞与SRBC混合后不经4℃作用立即反应形成的花环数称为活性花环（Ea花环）。
实验材料 ：
1.肝素抗凝静脉血、PBS缓冲液、淋巴细胞分离液、绵羊红细胞悬液、0.8% 戊二醛、瑞氏染液
2.吸管、玻片、试管、离心机、显微镜
步骤和方法：
1.淋巴细胞悬液的制备
①取肝素抗凝血4ml，后叠加于3ml分离液上，离心1500r/min，20min；用毛细吸管吸出位于血浆和分离液之间的乳白色单个核细胞层，加入5ml PBS 液洗2次（1500r/min，10min），弃上清液，用PBS液配制成1-2×106/ml细胞
②取肝素抗凝血4ml，加入2ml PBS洗2次（1500r/min，离心10min）弃上清，再加入红细胞裂解液3ml，室温裂解5min，然后离心（1000 r/min，离心10min），底部白色层为淋巴细胞。
2.绵羊红细胞悬液的配制
将保存于Alsever’s液中的绵羊红细胞，用5-10倍量生理盐水洗3次（1500r/min，离心10min）弃上清液，用生理盐水配制成0.5%的SRBC悬液（108个细胞/ml）
3.Et花环试验
(1) 取2ml 0.5%SRBC悬液和1ml含淋巴细胞的PBS加入离心管中，混匀，置37℃水浴5min
(2) 取出离心500r/min 5min,置4℃1-2h或过夜
(3) 沿管壁加入0.8%戊二醛2ml,置4℃ 20min
(4) 弃适量上清，约留2ml,轻轻吹吸混匀沉淀细胞
(5) 结果观察 ①湿片法观察：取1d细胞悬液滴加于载玻片上，加少许吉姆萨-瑞氏染液染色，加盖玻片后高倍镜下观察；②干片法观察：取细胞悬液涂片，自然干燥，用吉姆萨-瑞氏染液染10min，水洗，干燥，高倍镜或油镜下观察。
4.Ea花环试验
与Et花环试验基本相同，不同之处是SRBC悬液的浓度为0.1%，SRBC与T细胞混合之比为10:1～20:1，混合后立即离心500r/min 5min，加入0.8%戊二醛固定。
判定结果：
淋巴细胞呈蓝紫色或淡蓝色，SRBC不着色，凡结合3个SRBC或以上者为E花环形成细胞（ERFC）。
要求：计数200个淋巴细胞，求出E花环形成率（%）
E花环形成率（%）= 
×100%
注意事项：
1. SRBC与淋巴细胞混合后离心速度不能过高
2. 计数前将沉淀细胞重悬时，使细胞团块松散均匀即可，不可强力吹打，以免SRBC从淋巴细胞上脱落
3. 温度对实验结果影响较大，故实验条件温度应保持一致，从4℃取出后应立即计数
实验结果与分析：