基础生物学实验自主设计性实验

实 验 名 称： 方便面面饼液对蚕豆根尖微核率的影响

专 业 年 级：    20##级生物科学类

成      员:         

                           

                                        

                             

指 导 教 师：                            

起 止 时 间：   2010年10月-2010年12 月      

一、摘要

用蚕豆根尖细胞微核技术检测不同种类方便面面饼液微核的诱变效果。设置了阴性对照：自来水处理组，实验组：小浣熊、康师傅、统一、五谷道场、幸运五组饼液分别处理蚕豆根尖，阳性对照：用0.02g/L的醋酸铅溶液处理。发现方便面面饼液在诱导微核产生方面影响明显，醋酸铅溶液具有诱导微核产生的作用。

    关键字：蚕豆根尖，方便面面饼，微核千分率，污染指数

二、实验背景和目的

随着现代社会的发展，越来越多的化学物质运用到人们的日常生活之中，如种类繁多的食品添加剂。而其中有些物质具有较强的危害，如致畸，致癌，致突变性。为了检测已存在或潜在的危害，各种检测技术应运而生。微核试验是检测染色体或有丝分裂器损伤的一种遗传毒性试验方法。无着丝粒的染色体片段或因纺锤体受损而丢失的整个染色体，在细胞分裂后期仍留在子细胞的胞质内成为微核。用微核试验来评价药物、放射线、有毒物质等对人体细胞或体外培养细胞遗传学损伤仍是一个直观有效可行的方法,在遗传毒理、医学、食品、药物、环境等诸多方面得到了广泛的应用。微核计数经济,迅速,简便,不需要特殊技能,可以统计更多的细胞并实现计算机自动计数。我们采用蚕豆作为实验材料，采用植物微核技术来检测方便面面饼中添加剂对人体是否产生危害。

方便面是日常生活中经常接触到的食品，其市场占据快餐食品的大壁江山，在超市中油炸方便面与非油炸方便面占到快餐食品的60%到70%。另一方面，在各媒体的报道中，经常出现有关方便面的食用危害，而且很有争议，所以这也是我们进行本实验的一个原因。

三、实验原理

微核是间期细胞中在细胞核之外存在的一个或多个圆形或杏仁状结构，大小在主核的1/3以下，是有丝分裂后期丧失着丝粒的落后的染色体片段形成。20世纪70年代初，Matter和Schmid等首先用动物骨髓细胞微核率来测定怀疑具有诱变活力的化合物，并称之为微核。许多能引起染色体断裂的理化因素，如辐射、化学诱变剂等，均可作用于分裂细胞而产生微核。

在有丝分裂的后期，断裂的染色体片段或完整的染色体落后于其他染色体，当大部分染色体到达细胞两极并重新被核膜包裹时，这些落后的染色体或染色体片段不能进入主核，便形成了独立于主核之外的核质物团，并在间期时浓缩成小核。含微核的细胞数占观察细胞总数的比率称为微核细胞率，简称微核率，可以用来反映遗传物质受伤的程度。在一定范围内，微核率与环境因子的剂量呈正相关，因此，人们常用微核率来反映环境中有害物质的污染程度。

不同厂家生产的面饼化学成分不一，用微核作为面饼材料是否含有有害人体健康物质的手段之一。

四、实验用品

材料：蚕豆种子，小浣熊、康师傅、统一、五谷道场、幸运五个品种方便面

器材：镊子4把，解剖针4支，显微镜，水浴锅，大托盘、培养皿7套

载破片盖玻片若干、PE管若干、刀片、滤纸

试剂：卡诺固定液（95%乙醇：冰醋酸=3:1）、醋酸地衣红染液（即0.2%醋酸地衣红：取100ml冰醋酸加热至微开，关闭火源。缓缓加入地衣红0.2g，不断搅拌使其充分溶解，冷却后补加蒸馏水至100ml，过滤得滤液）

五、实验过程

浸种催芽：选取大小均匀、的蚕豆种子约60粒，直接放入盛有自来水的烧杯中，浸种24h，此间换水2次。种子吸胀后，将蚕豆种于放入培养皿中，用草纸覆盖并浇上自来水保持湿度，水淹没1/3,催芽48h。大部分初生根长至1-2cm时，根毛发育良好，准备用来进行检测。

制备待测液:我们选取小浣熊、康师傅、统一、幸运、五谷道场这五种常见方便面用来检测，各取面饼45克,分别放于5个1000ml大烧杯中各加加600毫升开水,加盖浸泡5分钟,取液体作为待测液并编号,分别存于5个烧杯待用.

用待测液处理根尖：每组选取4粒初生根生长良好、根长一致的种子，放入待测培养液, 浸没根尖. 另外1组用蒸馏水做阴性对照,1组分别用200mg/L  Pb(NO3)2溶液作为阳性对照.

根尖细胞恢复培养：用蒸馏水浸洗3次，洗净后在置于培养皿用凉开水进行恢复培养8 h。

取材、制片:将恢复培养后的种子从根尖顶端切下1cm长的幼根。用卡诺氏液固定24h，再换入70%的乙醇保存。制片时，用蒸馏水浸洗三次，每次5min，吸干，加入6mol/L的盐酸浸没根尖60度酸解大约10min，待幼根软化。吸去盐酸，用蒸馏水浸洗三次，每次1-2min，最后浸入水中；取根置于载玻片上，截下1-2mm长的根尖，滴一滴醋酸洋红染液，染色10min，压片观察。

六、实验结果

2.1微核千分率（MCN‰）=检出的微核数/检测细胞总数*1000‰

在10‰以下时，无污染，为环境本底；

10-18‰时，有轻度污染；

18-30‰时，有中度污染；

＞30‰，有重度污染。

2.2污染指数(PI)=实测微核率/标准(蒸馏水)微核率

PI<1.5时，认为无污染

1.5<PI<2时，轻度污染

2<PI<3.5时，中度污染

PI> 3.5时，重度污染

蚕豆根尖微核率和污染指数的统计

七、试验结论

由不同品牌的方便面的微核率，可以看出康师傅牌的面饼最为健康、其次为小浣熊、统一、幸运，最差的是五谷道场。推测其原因，对于五谷道场和幸运面饼，五谷道场采用非油炸技术，反而造成比油炸面饼更高的微核率，幸运则是小厂制造卫生条件不如康师傅等大厂，因而微核率比康师傅等的微核率要高。小浣熊的微核率则出乎了我们的意料，相当低的微核率，由此可得出干脆面的微核率低于部分泡面的微核率，部分干脆面面饼中加有调料的不进入讨论范围。

误差分析：

经查资料可得不同长度的蚕豆根尖对于微核率有较大的影响，虽然在选材时选用了颗粒饱满、体积质量相近的蚕豆，但在同样时间的成长中却不可避免的造成根尖长度不可能绝对相同，因此对于微核率有相对的影响。

初生根长度与微核率的关系

心得体会和收获

实验时间要安排合理，每次制片的数目要量力而行。根尖制片后长时间放置容易干燥，无法观察，实验小组成员之间要学会交流沟通，妥善安排实验进度。第一轮实验的时候压片技术很差，做到后来大家的技能都有所提高，大家还需要磨练。从这次试验中我们也都体会到了团队和作能力和团队沟通能力的重要性。

八、参考文献

【1】:高雪，胡婧，金毅。EDTA对蚕豆根尖细胞微核的诱变作用——氨基酸和生物资源 2004,26（1）：35~37

【2】: 陶少武。初生根长度对蚕豆根尖细胞微核率影响的研究——广西植物 2005,25（5）：447~448

【3】：孙亦阳，陈荣。微核测试教学实验的两点改进——生物学通报 2004,39（3）

【4】：张莉，王友保。环境致突变物的蚕豆细胞微核检测——生物学通报 2002,37（9）

【5】：杜峰涛，李林。细胞微核形成机理探讨——现在医学杂志2007,22（4）

【6】：龚慧明。诱变物质微核测试实验的改进——生物学教学 2006,31（12）

【7】：张杰，王友保，刘登义。应用大蒜根尖细胞微核技术监测镜湖水质的研究——2003,26（2）

九、实验原始记录

10月29日,13:22，泡蚕豆60粒。

10月30日,12:40，给大烧杯里的蚕豆换水。

10月31日11：53，给大烧杯里的蚕豆换水。

11月1日，12:01，给大烧杯里的蚕豆换水。

11月2日，16:27，给大烧杯里的蚕豆换水。

11月3日，16:32—17:07，染毒。

11月4日，16:40，用冷白开水恢复培养。

11月5日，13:00—13:29，用卡诺氏固定液固定根尖。

11月7日，9:30，解离。

           9:45，染色。

           9:55，制片。

           10:00，观察，计数

十、实验照片

第二篇：微核试验报告

 

本科学生综合性实验报告

学号  074120267       姓 名   吴永文      

学院   生科院       专业、班级  07级应生B班

实验课程名称         遗传学实验               

教师及职称        曹  能  （副  教授）      

     开课学期    2008  至  20##  学年   下   学期

            填报时间    20##    年    6     月   5   日

云南师范大学教务处编印

一．实验设计方案

二．实验报告