生物化学实验报告论文

班级:质量121

学号:20120844119

姓名:张瑶瑶

一、前言

生物化学是一门联系生物和化学的一门科学学科，学习生物化学可以提高我们严谨的科学分析以及熟练的实验操作，本文主要讲了金黄色葡萄球菌核糖核酸酶的分离实验，金黄色葡萄球菌是人类的一种重要病原菌，属于葡萄球菌属，可引起许多严重污染，本文主要通过 核酸酶活性的测定，考马斯亮蓝法测定蛋白质溶液浓度，DEAE-纤维素的处理及装柱，蛋白质亚基分子量测定SDS-PAGE凝胶电泳

二、实验材料准备

共分为四组，了解实验目的、方案 、原理 。

2.1、取已配制好的金黄色葡萄球菌于离心管内，8000 rpm离心除掉菌体，保留上清（留1-2ml,p1）,用作后续实验。

2.2 、将锥形瓶中的金黄色葡萄球菌液体放到沸水中煮30分钟，10000rpm 离心，保留上清液（留1-2ml,p2）,用作后续实验。

2.3、将离心好的上清液取60ml进行75%硫酸铵饱和度沉淀实验，放置离心管，配平后4度冰箱中放置24小时。将硫酸铵沉淀液10000rpm离心，去上清，保留沉淀，缓冲液洗涤，方法是在第一支离心管中加入2ml缓冲液混匀倒入第二支离心管中，再取2ml于第一支离心管中洗一次，再倒入第二支离心管中，最后在第二支离心管中再加入2ml缓冲液。终体积为6ml（留0.5ml,p3）。

2.4、DEAE-纤维素的处理及装柱

2.4.1、处理

本实验采用的是DEAE-纤维素DE52是弱酸型阴离子交换剂，具体处理方法为:先将DE52阴离子交换剂干粉浸泡于蒸馏水中，去除杂质；再在0.5N的Hcl溶液中浸泡1h,再用无离子水或蒸馏水洗至pH4以上，并将其在抽滤中抽干；将抽干的离子交换剂浸在0.5N的

NaOH溶液中1h,再用无离子水或蒸馏水将其洗至中性。

2.4.2、装柱

将层析柱清洗干净垂直固定到层析架上，加1/3体积的无离子水，打开下出液口，水流畅通，即刻将小烧杯中装有适宜浓度的柱才，轻轻倒入层析柱中，凝胶自然慢慢沉降在层析柱底部；凝胶沉积至高度10cm处，停止装柱；夹上止液夹。

2.4.3、平衡

在柱层析上样前必须对层析柱进行平衡，将平衡缓冲液泵入到层析柱内，打开层析柱下端的出口，当下出口流出液的PH值与平衡缓冲液的PH值一致时（大于50ml平衡液），层析柱达到了平衡。在本实验中，用0.001M Tris-HCl缓冲液PH9.0（内含0.0001M EDTA）,预先将DE-52柱进行平衡。

2.5、上样

平衡液50ml用于收集，收集30-40ml即可。然后装入透析袋，PEG2包埋，浓缩。收集浓缩液p4-x；

2.6、透析袋预处理

新的透析袋在沸水中煮沸10min.即可进行透析。

三、核酸酶活性的测定

将甲苯胺蓝核酸琼脂溶化后，倒入平板中，凝固后，用直径为2mm的打孔器打孔，将琼脂取出，将待检酶液10ul,滴入孔中，置于加有湿棉纱的湿盒内，在37℃培养4h,阳性反应在孔的周围会出现1mm以上的粉红圈，测量粉红圈的直径。

四、 考马斯亮蓝法测定蛋白质浓度

4.1、实验原理

考马斯亮蓝能与蛋白质的疏水微区相结合，这种结合具有高度敏感性。考马斯亮蓝G250的磷酸溶液呈棕红色，最大吸收峰在465nm。当它与蛋白质结合形成复合物时呈蓝色，其最大吸收峰改变为595nm,考马斯亮G250-蛋白质复合物的高消光效应导致了蛋白质定量测定的高度敏感度。在一定范围内，考马斯亮蓝 G250-蛋白质复合物呈色后，在595nm下，吸光度与蛋白质含量呈线性关系，故可用于蛋白质浓度的测定。

4.2、实验仪器及用品

实验试剂:（1）水；（2）标准蛋白液:牛血清蛋白（0.1mg/ml）;

（3）染液:考马斯亮蓝G250（0.01%）,称取0.1g考马斯亮蓝G250 溶于50ml95%乙醇，再加入100ml浓磷酸，加蒸馏水定容到1000ml;（4）样品液:取牛血清白蛋白（0.1mg/ml）溶液，用0.9%NaCL稀释至一定浓度。

测出未知液的吸光度后，在标准曲线上查出未知液的浓度。

五、蛋白质亚基分子量测定SDS-PAGE凝胶电泳

5.1目的

掌握SDS-PAGE凝胶电泳测定蛋白质亚基分子量的基本原理和操作方法

5. 2、 原理

SDS是一种阴离子去污剂，作为变性剂和助溶性试剂，能断裂分子内和分子间的氢键，使分子去折叠，破坏蛋白质分子的二级，三级结构；而强还原剂，如二硫苏糖醇，β-巯基乙醇能使半胱氨酸残基之间的二硫键断裂。因此，在样品和凝胶中加入SDS和还原剂后，蛋白质分子被解聚为组成它们的多肽链，解聚后的氨基酸侧链与SDS结合后，形成带负电的蛋白质-SDS胶束，所带电荷远远超过了蛋白质原有的电荷量，消除了不同分子间的电荷差异；同时，蛋白质-SDS聚合体的形状也基本相同，这就消除了在电泳过程中分子形状对迁移率的影响。

5. 3、试剂和器材

试剂：1低分子量标准蛋白质 2待测 蛋白质样品 3凝胶贮液：30克丙烯酰胺，0.8克甲叉双丙烯酰胺，溶于100ml蒸馏水中，过滤，于4℃暗处储藏，一个月内使用 4：1mol╱l，ph8.8tris-HCl缓冲液，tris12.1g溶于蒸馏水，用浓盐酸调至PH8.8，以蒸馏水定容至100ml 5：10%（w╱v）SDS 6：10%（w╱v）过硫酸铵溶液（当天配） 7：四甲基乙二胺（TEMED） 8：电极缓冲液

PH8.3：Tris30.3g，甘氨酸144.2g，SDS10g，溶于蒸馏水并定容至1000ml，使用时稀释十倍 9：样品稀释液：SDS500mg，巯基乙醇1ml，甘油3ml，溴酚蓝4mg，1mol╱lTris-HCL（pH6.8），用蒸馏水溶解并定容至10ml，按每份1ml分装，可在4℃存放数周，或在-20℃保存数月。以此液制备样品时，样品若为液体，则加入与阳平等体积的原液混合即可。10 固定液：500ml乙醇，100ml冰醋酸，用蒸馏水定容至1000ml 11脱色液：250ml乙醇，80ml冰醋酸，用蒸馏水定容至1000ml 12染色液：0.29g考马斯亮蓝R-250溶解在250ml脱色液中

器材：微量进样针，电泳仪，电泳

槽 5. 4操作步骤

5.4.1分离胶制备：

凝胶浓度12.5%，凝胶贮液12.5ml，Tris-HCLPH8.81mol╱L11.2ml，水8.7ml，10%SDS0.3ml，10%过硫酸胺0.1ml，TEMED20μL

将上述胶液配好，混匀后，迅速加入两块玻璃板间隙中，使胶液面与矮玻璃和高玻璃之间形成凹槽处处平齐，而后插入“加样梳”，在室温下放置1小时左右，分离胶即可完全凝集。凝聚后，慢慢取出“加样梳”，取出时应防止把加样孔弄破，取出“加样梳”后，在形成的加样孔中加入蒸馏水，冲洗未凝集的丙烯酰胺，倒出加样孔中的蒸馏水后，在加入已稀释的电极缓冲液。

5.4.2 样品制备：

标准蛋白质制备，待测蛋白样品制备：

液体待测样品，可取500μL，加入等体积的“2×样品稀释液”，混匀，在沸水浴中加热5min，取出，冷却至室温备用。若液体待测样品蛋白质浓度太稀可经浓缩后再制备。

5.4.3，点样

用微量进样针吸取上述蛋白质样品20μl分别加入到各个加样孔中，为了获得准确的结果，每个样品应做两次重复。

5.4.4，电泳

将电泳槽与电泳仪连结，在电泳槽中加入已经稀释的电极缓冲液，打开电源，选择合适电压，保持恒电压300v，进行电泳，直至样品中燃料迁移至离下端1cm处，停止。

5.4.5，固定，染色，脱色

将凝胶浸入考马斯亮蓝染色液中，置摇床上缓慢震荡30min以上（染色时间需要根据凝胶厚度适当调整）。取出凝胶在水中漂洗数次，再加入考马斯亮蓝脱色液，震荡。凝胶脱色至大致看清条带约需1h，完全脱色则需要更换脱色液2-3次，震荡达24h以上。凝胶脱色后可经过扫描、摄录等方法进行蛋白质定量检测。

六、结果分析及讨论

6.1、核酸酶活性的测定的结果分析

P1:粉红圈内直径6.4mm ,外直径19.6mm

P2:粉红圈内直径6.6mm,外直径19.8mm

p3:粉红圈内直径6.8mm,外直径20.00mm

由上表可知0.8ml样液，即金黄色葡萄球菌核糖核酸酶的蛋白质的浓度为0.5712*0.299+0.0017=0.1725（ug每ml）。

6.3、讨论结果及注意事项

利用考马斯亮蓝法分析蛋白质必须要掌握好分光光度计的正确

使用，重复测定吸光度时，比色杯一定要冲洗干净，制作蛋白标准曲线的时候，蛋白标准品最好是从低浓度到高浓度，防止误差。

第二篇：生化论文2

1联系地址：郑州牧业工程高等专科学校生物工程系 450011 何金环（收）

E-mail： hejinhuan@tom.com

电话:

135xxxxxxxx 0371-65765972

“以鱼学渔，强化实践”，高职高专生物化学精品课程建设策略

何金环，李巧枝

( 郑州牧业工程高等专科学校生物工程系, 河南，郑州 450011 )

摘要：精品课程是高等学校教学质量一项重要内容，精品课程建设要体现教育教学改革的方向。笔者根据自身在精品课程建设和实践中的体会，提出了适合高职高专院校的 “以鱼学渔，强化实践” 的生物化学精品课程建设策略。

关键词：高职高专；生物化学；精品课程；建设；教学策略；

中图分类号：G642 文献标示码：A

生物化学教学理论体系繁杂，研究方法、技术手段不断推陈出新，日益显出高度综合化的发展趋势。所以怎样选择生物化学教学基本内容、适当加工并有效地传授给学生，即采用行之有效的教学策略是每一个生物化学教育工作者所要思考和研究的重要课题。

作为高职高专院校来说，无论从师资队伍、教学条件还是生源素质等方面与本科院校都有着较大的差距，因而怎样立足于客观的现实条件，构建适于高职高专学生特点的精品课程是我们每一位高职高专教师共同关注的问题。经过多年的探索和实践，20xx年我校生物化学课程被评为省级优质课程，20xx年我校的《生物化学》课程被国家教育部批准为国家级精品课程建设项目，为高职高专精品课程建设提供了有益的借鉴和探讨。

一、正确理解精品课程建设内涵

20xx年，教育部启动高等学校教学质量与教学改革工程精品课。旨在深化教学改革，促进现代信息技术在教学中的应用，共享优质教学资源，进一步促进教授上讲台，全面提高教育教学质量，1 河南省教学研究项目、河南省教育科学“十一五”规划课题（2006-JKGHAG-407）

作者简介：何金环（1974-），女，河南驻马店人，讲师，硕士，主要从事生理生化教学和科研工作。

造就数以千万计的专门人才和一大批拔尖创新人才，提升我国高等教育的综合实力和国际竞争能力。并指出“精品课程是具有一流教师队伍、一流教学内容、一流教学方法、一流教材、一流教学管理等特点的示范性课程。”这是建立在该课程所在学校的分类体系与所适用群体的平台之上，是符合学校的办学定位、教学理念、学生水平的一个示范性载体，目的是通过为学生提供优质教学资源来提高教育教学质量，即向课程要质量，向名师要质量。这就要求我们要立足于学校的客观实际用分类体系的理念构建精品课程模式。

精品课程建设要体现现代教育思想，符合科学性和教育教学的普遍规律，要正确处理以下几个关系：①在内容体系方面，要处理好经典与现代的关系。②在教学方法与教学手段方面，以先进的教学理念指导教学方法的改革；灵活运用多种教学方法，调动学生学习积极性，促进学生学习能力发展；协调传统教学手段和现代教育技术的应用，并做好与课程的整合。③坚持理论教学与实践教学并重，重视在实践教学中培养学生的实践能力和创新能力。

二、 “以鱼学渔、强化实践”的课程教学策略的确立

教学改革的实践使我们越来越明确，传统的单纯传授知识、积累知识，对满足学生的需求已远远不够了。学生在校期间，学习一定的知识固然是重要的，但知识并不是才能，才能是对知识作科学的加工和创造性应用的能力。我们面临的任务是要从培养知识型人才转变为培养开拓型人才。所以我们在生化精品课程建设中一个根本宗旨就是及时反映先进技术的发展，紧跟行业技能的需求，突出产学结合特色，充分挖掘学生的多种潜能，培养学生适应岗位适应社会的综合能力，同时注重网络资源的实用性与辐射性，给学生构建一个自主学习，个性化学习的广阔平台。

教学策略即是在一定条件下，为实现有效教学效果而采取的一系列教学措施所构成的综合性教学方案。根据专业培养目标和规格，我们确定了生物化学精品课程建设的基本思路：“以鱼学渔，强化实践”。“以鱼学渔论”，即喻知识为鱼，喻能力和素质为渔，强调以知识为媒介培养学生的能力和素质，依据能力和素质有效地获取知识。教师要不断予以学生点点滴滴的启迪，培养学生严密的思维方法和提出问题、分析问题、解决问题的能力，使学生的创新素质在潜移默化中得到提高，这是本课程应达到的效果。

（一）生物化学理论教学策略

1. 理解理论实质，整体把握教材内容

生物化学我们可以认为它是使用了化学概念来描述发生在生命有机体中的基本过程以及通过生命有机体作用发生的基本过程。事实上生物化学就是涵盖了上述内容，运用化学的理论和方法来揭示生命现象，以构成生物机体的主要有机物质如糖类、蛋白质、脂肪、核酸为主线，以构成生命有

机体的其它调节物质为副线，对这些大分子进行深入细致的结构分析，以说明这些物质的结构和生理功能之间的关系；同时研究这些物质在机体的氧化分解过程，在此基础上阐明各种生命现象，如生长、发育、运动、适应、遗传、变异的生物体的活动规律。这是生化理论的实质所在，是我们在教学中要重点把握的问题。教学中如果把握住教学重点，讲解过程中注重知识点的连贯性，问题将会变得明朗化，简单化。

2. 动静结合，融会贯通

教学中要注重把握好整体教学内容，而且注重知识讲解的连续性和全面性。传统的先静态后动态的授课方式，容易使教学抽象呆板，造成学生知识混乱，前后脱节，知识不连贯，不能灵活运用。动静态结合可以让学生清晰的把握生物机体中主要有机物质的结构、性质、功能，以及各自在机体中的来源（主要指合成代谢及转化途径）和去路（主要讲解氧化分解途径及其转化途径）。

讲解时要注重结合学生的接受能力和实际应用，把复杂的问题简单化、明朗化。如三大类物质的氧化分解既是重点内容也是难点内容，学生容易理不清思路，弄不明白在复杂的代谢网络中它们之间联系和交叉的地方，尤其是能量的计算，更是学生头痛的“难点”。教学中如果先把三羧酸循环讲透，位置关系讲清楚， 再以“糖类、脂类、蛋白质”为三大轴线，把静态的物质结构、性质和功能同动态的物质代谢和能量代谢联系起来，把三条主线进行平行讲解，再以“丙酮酸”和“乙酰辅酶A”为交叉点交叉讲解，把生物机体复杂的物质结构以及生物氧化主要方式很清晰的摆在学生面前，这样就把代谢部分的难点解决掉。

3. 教师注重知识不断更新、拓展教学内容

深化教学内容指教师在加强基本知识、基本技能教学的基础上适当地扩大教学内容的深度和广度，在较高水平上培养学生的能力；拓展学生的知识领域，则要求教师在教学中着眼未来，密切关注本专业、本学科发展的最新科学问题，以及与本专业、本学科发展密切相关的学科的科学问题和科研成果，并与生化实验教学密切结合，扩大学生的知识面，优化学生的知识结构，以适应时代发展和科学进步对人才培养的要求。

（二）生物化学实验教学策略

理论指导实践、分析实验共性和个性、注重强化实验技能，是生物化学实验教学的基本策略。因此，在生物化学实验教学中，引人科学研究的内容，对学生进行科学训练，培养学生分析问题、严谨治学、团结协作的科学态度，是生物化学实验教学的中心任务。

1. 理论指导实践，启发诱导，强化训练

实验教学的一个基本特征是“实践性”，学生只有通过实践，反复体验，才能掌握生化实验的基本技术和基本技能；另一方面，生化技术有着完整的理论体系，每一节实验课题都遵循着不同的实验技术原理。在实验教学中，必须重视实验的基本技术与技能，同时，还要重视实验的基本理论与原理，遵循理论指导实践的原则。只有这样，才能使学生从理论水平上理解和掌握生化实验技术，并把握实验的基本设计思想和方法，达到培养能力，发展思维的教学目的．

启发诱导是指在学生观察实验以及实验操作过程中，教师要尽可能为学生提供具体可信的例证。创设问题情景，使学生进入积极的智力活动状态，活跃学生思维。教授方法则要求教师把教学的重点放在指导学生学习和掌握生物化学科学的研究方法和思想方法方面。在实验操作过程中，教师要加强辅导，及时发现问题，解决问题，并不失时机地向学生提出问题．实验结束后，要求学生对实验原理、实验设计及实验操作技术进行全面的总结性思考，并写出书面报告．这样，引导学生把学习的重点从基本技术、基本技能的掌握逐渐延伸到基本方法、基本策略思想的学习上来，有利于培养学生分析问题和解决问题的能力，从而实现发展科学思维，培养能力，提高整体素质的教学目标．

在教学过程中，教师既要根据生物化学知识体系和实验技术，以及学生的认知发展水平，在有秩序、有步骤的教学过程中，使学生掌握生化基本知识与技能，形成严谨周密的思维方式，又要根据生物化学的基本特点和学生学习的进展情况，课堂教学中及时地进行实验技能的“回顾”。这一策略对于在教学过程中兼顾学生基本知识、基本技能的学习与提高有着十分重要的意义。另外，教师可以有目的地进行实验技术训练：一是独立进行实验设计和操作技术训练；二是实验知识与技能的强化提高．在此过程中给学生充分的时间与自由的空问，让学生独立思考，反复实践，进行创造性的学习，全面发展和提高他们的综合能力．

2. 归纳共性，分析特性

归纳共性与分析特性即教师在揭示具体实验的个别特性的同时, 还要注意归纳不同相关实验的共性, 并引导学生加以观察和思考, 使学生掌握完整的生化实验技术、技能和理论，达到举一反三的目的。首先，分析每个实验的设计方法和策略思想。而后将相关实验归类，并从不同实验的特性中找出这类实验的共性来，加以归纳。 通过分析特性, 归纳共性, 使许多不同的、复杂的、独立但相关的实验显得条理清晰， 系统有序。 这样, 有利于学生掌握各类实验的基本技术和基本方法。 不同实验具有不同的特点， 因此，在归纳共性的同时, 一定要注意隐含于共性背后的特性，它往往是实验教学课堂目标所在，应加以重视，重点突破。

3. 精品课程网络教学平台的建设

课程网页建设是精品课程建设的重要组成部分。网络课程是传统课程在现代网络信息环境下的

重建，是教师、学习者、媒体教材和网络学习环境四方持续地相互作用的过程与内容的总和。它包括三个有机组成部分：既定教学目标、运用娴熟的教学策略组织起来的教学内容、教学互动和自主学习过程所需要的网络教学支撑环境。我们本着适用、科学的原则进行网页建设。（1）依托课程大纲或设定的教学要求，做到重点突出，难点明确，激发学习动机。（2）教学内容的“讲解”、“演示”环节得到加强和重视。借用计算机技术，尽可能将课程知识讲系统，且大部分教学内容皆按印刷课本章节顺序编排，方便学生自学安排。(3)网页设计在布局、风格、色彩、链接等诸方面清晰、醒目，但不夸张，学科特点突出。 目前我们网页内容主要有师资队伍概况、教学改革措施、考核方案、教学大纲、电子教案、理论和实验课件、教学理论实验录像、章节练习等资源。另外，学生们可以通过浏览"生物化学进展"、及"生物化学答疑"等栏目可进一步了解生物化学在生物技术中的应用、生物化学的发展现状，还可以通过答疑栏目与主讲教师对话"开展师生之间的交流，能够进一步拓宽学生的知识面，并解决学生在学习中遇到问题。网页内容尽量突出高职高专的技能性，充分方便学生自主化、个性化学习，尽可能实现精品课程的实用性和辐射性。

三、精品课程建设体会

总之，以“以鱼学渔，强化实践”为指导思想的课程建设策略能够很好的满足高职高专学生就业的需求，但这种课程教学方法对教师的能力要求极高，需要教师能够将传统的知识单参数认识上升为知识、能力、素质三参数认识，升华教育教学理念，要熟悉自己讲授的内容，深刻理解生物化学课程的理论实质和关键技能。从对死板的知识学习中，发掘潜在的能力，通过理解和掌握知识，使能力成为构筑知识大厦的向导。

在精品课程建设过程中，我们深深体会到精品课程建设是一项系统工程。打造一门精品课程，决不是一朝一夕就能完成的，其教学内容的锤炼优化，教学方法与手段的不断革新等，无不需要长时间的积累。当然，教学策略具有一定的灵活性，没有适用于一切情况的最优生物化学实验教学策略，最有效的教学策略是在一定条件下达到生物化学实验教学目标的策略。只有组建一支高水平的师资队伍，鼓励更多的教师走上讲台参与课程建设，才能真正发挥精品课程的主导和示范作用。 参考文献

[1] 曾家豫, 刘国安, 冯克宽.生物化学实验教学原则和教学策略初探.西北师范大学学报,2000，36

[2] 黄鹤，贾长虹，董晓燕. 改革生物化学教学内容与体系的实践.化学工业与工程,2005增刊，22

[3] 何金环，梁月丽，李存法.高等农业院校生物化学教学改革的研究与实践.高等农业教育,2004. 4